Thu mẫu và ly trích tuyến trùng từ thực vật

Phương pháp trích tuyến trùng từ đất và thực vật • Tùy thuộc loại tuyến trùng - Cách gây hại (nội, bán nội, ngoại, di động, bất động) - Kích thước cơ thể - Di chuyển: nhanh, chậm, ít, … * Mỗi p

Trang 1

_ @e

se, i 21: Thu mau va ly A tuyén tring tu thuc

Trang 2

Objectives of sampling and

extracting nematodes

O Identify the nematode O Population estimation

O Diagnose a nematode disease CO Make management decisions

- Regulatory purposes - Research and surveys

Trang 9

Hand: never uproot plants or take soil samples SoIl sampling tuhe (15-20 cm)

SoIil auger (more than 20 cmn)

Spade or garden trowel (in rocky soil)

Trang 12

Fig1 «Sampling pattern : - Systematic at equally-spaced point according

to the grid pattern (Fig1)

- At equally-spaced points along a Ìine running

diagonally across a Íield (Hg2) pa es

- Sampple free crops in the drip line,

on alternate sides of the trunks and include

Trang 13

For annual crops, collect samples at 10-20 cm trom

the stem, in the root zone

Collect samples of weeds and volunteer crop plants

Collect sample from: soil, roots, leaves, stems,

buds, flowers, seeds

Number of samples: 10 for 5m? in size or less

Trang 14

« Sampling depth: 20 cm tor most crops, 20-100

cm for perennial crops according to type and age of crops, 30-45 cm in regions with hot and dry sumimers

Timing: prior to planting (relation of population

density with yield), between mid season, at

Trang 15

Sampling pattern for damaged area or

Trang 21

Thu mẫu đất ngồi đồng

° ĐỒ sâu

* 20 cm cho hầu hết các loại cây trồng

* 20-100 cm cho cây đa niên, tùy tuổi cây, loại cây,

* 30-45 cm Ở nhỮng vùng nĩng và mùa hè khơ

Trang 22

S6 luong mau can thu

* 10 mẫu cho 5m2 * 20 cho 5m2-100m2

Trang 23

Thời gian lấy mẫu

° Trước khi trồng

¢ GiUa mua VU

Trang 24

Dé phan tich cho chinh xac

Lấy mẫu đất + rễ: để cùng vào 1 túi

Nếu đất thu khơ, cần cho một ít nước để tạo am d6 cho dat

Can trich tuyén tring ngay sau khi thu mau, nếu khơng phải giữ mẫu ở 4-15°C, Tốt

nhất= 10°C

Khơng giỮ mẫu lâu, phân tích mẫu càng sớm

Trang 25

Phương pháp trích tuyển trùng từ đất và

thực vật

° Tùy thuộc loại tuyến trùng

Trang 26

Kỹ thuật trích tuyến trùng từ đất và thực vật

Đất và thực vật

°_ Baermann Eunnel (Quặng Baermamn)

- _ Phương pháp lắng cặn và lọc của Cobb

° _ Phương pháp lọc và ly tâm

Riêng cho thực vật

° Phương pháp Ủ (trong nước) và lọc

Trang 27

Baermann Funnel (Quang Baermann)

Nguyên tắc

*° - Dựa trên sự di chuyển tích cực của tuyến trùng

Trang 28

Baermann Funnel set up

Funnel

Soil sample over wire mesh Clamp to hold funnel

Rubber tubing

Clamp

Trang 29

The Baermann techniques (for soil and plant ” material) sampe 3) Hannel fechnique Z tissue paper : Sieve

Cut root pieces (1-0.5-1cm)

Advantages: sunple material, can be practiced everywhere

Disadvantage: not suitable for inactive or large nematodes

b) Modified technique we sièwe \

Trang 31

Kỹ thuật trích tuyên trùng từ đất và thực vật

Trang 32

* Cobb's decanting and sieving method (for soil and plant material) beaker L1 a meshed /sieve NB: blind plant material before sieving L _ 1000um

Advantages: does nof require mm |

sophisticated material, active and sluggish nematodes are extracted

)

L_* J :

ma

Disadvantage: large nematodes can ae

stay in some sieves ss

Trang 34

Soa A Noa ngay vago Soa B qua rây „ 0.5 kg naat 2 lit H,O — NGÀNBỸ |

Naat cou sa caau nắng, /

có nhiều hữu cơ Đất có sa cấu

nhei, cou it houd co

raay 100m Trich tuyean

Trang 35

Kỹ thuật trích tuyên trùng từ đất và thực vật

Trang 36

*«_ Sieving — cenfrifugafion — flotation (for soil and

plant material)

Sieve soil samples + nematodes

Cenfrifuge the suspension for 7 and then 3 mịn af 1750 rpm

NB: for plant material blend 1 cm pieces in a food blender

before sieving

Advantages: fast, active and sluggish species are extracted,

small and large nematodes are extracted

Trang 37

1000 Wirz mie > oe a a er wel §88ml 2001ml 8 mis_ tract Iftmi saul " §0Imi/8is xa” I1 SAR “ / gO % oe! a

Trang 38

150 al yl Sti ei / wis TTT “— “ => it \\ Í ƒ | { ¬ Mi ee j-O-j-O-

Trang 39

Kỹ thuật trích tuyên trùng từ đất và thực vật

Trang 40

Best method tor extracting heteroderid cyst nematodes The cysts are kept in suspension by a controlled upward CurrenÍ of wafer

Trang 41

Ky thuat ly trich tuyén tring don gian ° Soil samples Baermann funnel Modified Baermann funnel ° Root Samples

Jar incubation and sieving Blending and sieving

¢ Foliar samples

Punching and incubating

Trang 46

Ưu và giới hạn của phương pháp

Baermann

Uu

°_ Tuyến trùng khơng bị tổn thương

° _ Mẩu sạch, dễ quan sát

° _ Khơng cần phải lược qua rây ° ĐƠn giản, rễ tiền

Hạn chế

Trang 47

Phương pháp Baermann

Trang 51

Cho nước vào rây

Trang 52

Để ở nhiệt độ trong phịng trong 3

Trang 53

Sau 3 ngay, lay ray ra va giữ lại phần

Trang 56

Ưu điểm và giới hạn của Quặng

Baermann

Ưu

* Tuyén tring khơng bị tổn thương ° Mu sạch, dễ quan sát

¢ Khong can phải lược qua ray

¢ Don gian, ré tién

Gidi han

° Thiéu oxygene

Trang 58

Phương pháp ủ (trong nước) và lọc

(Dựa trên nguyên tắc: Tuyến trùng cĩ

khuynh hướng di chuyển ra khõi rề

Trang 59

Sample ready for processin

Trang 63

Place roots in jars, add water

en Se SA =

=

Trang 65

Store in the dark for 72 hours

Trang 66

Following incubation, remove from

Trang 69

Nematode samples ready for

Trang 70

Advantages and Limitations

Advantages

Extracts migratory endoparasitic nematodes © Few materials needed

© Simple procedure to follow

Limitations

O Not useful for ectoparasitic nematodes O Lack of aeration can be a problem

Trang 72

Wash roots well

Trang 76

Place roots into blender, cover roots with water

5 : —-——

Trang 77

5iend at low speed for 10-20

seconds

Trang 79

Set up a Baermann tray

Trang 80

Place filter paper on the Baermann

Trang 81

ee ee

Trang 82

Transfer the blended roots into the

Trang 84

Remove roots from the pan

Trang 88

Advantages and Limitations

Advantages

Trang 89

Preserving nematodes

Nematodes are preserved as:

slide mounts (Cobb double-coverslip aluminium slide), unmounted in

tixatives in vials, frozen and stored in liquid nitrogen, in a greenhouse as

live collections

Killing and fixing: nematodes are killed and fixed in hot fixatives

FA 4:1 = Formalin (10ml), Acetic acid (Imi), Glycerol (3ml), H2O (100ml)

FAA = Formalin (6ml), Acetic acid (Imlj, Ethanol 96% (20ml), H20 (40 ml)

TAF = Formalin (7ml)), Triethanolamine (Zml), H20 (91ml)