Tạo mô hình ĐTĐ trên chuột nhắt trắng bằng Streptozocin Định tính, định lượng thành phần các chất có trong nấm Hoàng chi: polysaccharide, triterpenoid, alkaloid, cellulose Thu dịch chiết nấm Hoàng chi Thử tác dụng hạ đường huyết của các dịch chiết từ nấm Hoàng chi trên chuột nhắt trắng
i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ MÔI TRƢỜNG == == ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP HUỲNH THỊ THÚY KIỀU TẠO MƠ HÌNH ĐÁI THÁO ĐƢỜNG TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG VÀ THỦ TÁC DỤNG HẠ ĐƢỜNG HUYẾT CỦA CÁC DỊCH CHIẾT TỪ NẤM HOÀNG CHI GANODERMA COLOSSUM Ngành học: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa: 2007-2011 GVHD: ThS NGUYỄN THỊ HẢI THANH Nha Trang, tháng 07 năm 2011 GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều ii LỜI CẢM ƠN Trước hết, xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Viện Công nghệ sinh học Môi trường, Trường Đại học Nha Trang ln quan tâm dẫn, góp ý giảng dạy nhiệt tình để tơi có kiến thức quý báu vững bước vào chặng đường phía trước Tôi xin dành lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới ThS Nguyễn Thị Hải Thanh, Bộ môn Công nghệ sinh học, Viện CNSH&MT, Trường Đại học Nha Trang tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức, kinh nghiệm quý báu, phương pháp nghiên cứu khoa học để tơi hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn thầy cô Viện chăn nuôi suối Dầu, thầy cô tổ nghiên cứu - Viện CNSH&MT tạo điều kiện thuận lợi giúp hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn đến em Quỳnh Châu, Thị Ngọc chị Minh Nhật quan tâm, nhiệt tình giúp đỡ để luận văn hồn thành Cuối cùng, tình cảm chân thành xin gửi lời cảm ơn đến người thân gia đình, bạn bè, bạn lớp 49 Công nghệ sinh học động viên giúp đỡ suốt thời gian học tập vừa qua Huỳnh Thị Thúy Kiều Lớp 49 CNSH – Viện CNSH&MT Trường Đại Học Nha Trang Nha Trang, tháng 07 năm 2011 GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều iii MỤC LỤC MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh đái tháo đƣờng (ĐTĐ) .3 1.1.1 Tình hình bệnh ĐTĐ giới Việt Nam 1.1.2 Phân loại chế bệnh sinh ĐTĐ 1.2 Đái tháo đƣờng với y học cổ truyền (YHCT) 1.2.1 Quan niệm y học cổ truyền ĐTĐ 1.2.2 Các thuốc đông y điều trị ĐTĐ 1.3 Phƣơng pháp gây mơ hình ĐTĐ động vật thực nghiệm 1.3.1 Một số mơ hình gây ĐTĐ mơ ĐTĐ type động vật thực nghiệm 1.3.2 Streptozocin ứng dụng mơ hình ĐTĐ type1 1.4 Nấm Hoàng chi (Ganoderma colossum) .9 1.4.1 Đặc điểm chung 1.4.2 Phân bố sinh thái 10 1.4.3 Thành phần hóa học [3] 10 1.4.4 Tác dụng dược lý[7] 13 1.4.5 Tình hình nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết nấm Hoàng chi Thế giới Việt Nam 16 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 18 2.1.1 Động vật nghiên cứu 18 2.1.2 Dược liệu nghiên cứu 18 2.2 Hóa chất thiết bị nghiên cứu .19 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 23 2.3.1 Tạo mơ hình ĐTĐ chuột nhắt trắng theo kiểu mô ĐTĐ typ 23 2.3.2 Phương pháp định lượng glucose huyết 24 2.3.3 Các phương pháp định tính, định lượng chất có hoạt tính sinh học nấm Hoàng chi25 2.3.4 Các phương pháp ngâm chiết 28 2.3.5 Phương pháp nghiên cứu khả hạ đường huyết dịch chiết chuột gây ĐTĐ 28 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 29 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết gây ĐTĐ mô ĐTĐ typ chuột nhắt trắng 31 3.1.1 Nồng độ glucose huyết 31 3.1.2 Khả dung nạp glucose 33 GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều iv 3.1.3 Khả dung nạp glucose sau uống phân đoạn dịch chiết 34 3.2 Khảo sát số thành phần hóa học thể nấm Hoàng chi Ganoderma colossum 37 3.2.1 Thành phần chất xơ cellulose 38 3.2.2 Thành phần polysacharide tổng số 40 3.2.3 Thành phần triterpenoid tổng số 43 3.2.4 Định tính alkaloid tổng số 45 3.3 Kết trình ngâm chiết 47 3.3.1 Chiết nước nóng 47 3.3.2 Chiết phân đoạn 48 3.3.3 Chiết polysacharide thô 51 3.4 Tác dụng hạ đƣờng huyết phân đoạn dịch chiết từ nấm Hồng chi Ganoderma colossum mơ hình chuột gây ĐTĐ 53 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 56 4.1 Kết luận 56 4.2 Đề xuất ý kiến 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 Tài liệu tiếng Việt .57 Tài liệu tiếng Anh .58 GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều v KÝ HIỆU CÁC CỤM TỪ VIẾT TẮT CNT Chuột nhắt trắng ĐTĐ Đái tháo đường STZ Streptozocin β Tế bào beta-đảo tụy Langerhans YHCT Y học cổ truyền WHO World Health Organization GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều vi DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Streptozocin hãng Santa Cruz Hình 2.1: Chuột nhắt trắng chủng Swiss 18 Hình 2.2: Nấm Hồng chi (Ganoderma colossum) 18 Hình 2.3: Máy đo đường huyết 19 Hình 2.4: Bộ kít thử 19 Hình 2.5: Máy nghiền mẫu 20 Hình 2.6: Bình hút chân không 20 Hình 2.7: Máy quay chân không 20 Hình 2.8: Bình chiết phân đoạn 20 Hình 2.9: Máy đo quang phổ nhiều bước sóng 21 Hình 2.10: Cân phân tích 21 Hình 2.11:Tủ sấy 21 Hình 2.12: Bể ổn nhiệt 22 Hình 2.13: Máy ly tâm 22 Hình 2.14: Sơ đồ nghiên cứu 23 Hình 2.15: Phương pháp lấy máu đo glucose huyết 25 Hình 3.1: Nồng độ glucose huyết lô chuột sau tiêm mức liều STZ 32 Hình 3.2: Gây mơ hình ĐTĐ typ STZ 33 Hình 3.3: Khả dung nạp glucose huyết lô chuột 34 Hình 3.4: Khả dung nạp glucose lô chuột sau uống dịch chiết 3h 36 Hình 3.5: Quy trình định lượng thành phần chất xơ cellulose 38 Hình 3.6: Hàm lượng (%) chất xơ cellulose nấm Hoàng chi 39 Hình 3.7: Quy trình định lượng polysacharide tổng số 40 Hình 3.8: Khảo sát khả loại protein liên kết polysaccharide thuốc thử Sevage 41 Hình 3.9: Phản ứng Molish 42 Hình 3.10 Quy trình tách chiết hợp chất triterpenoid tổng số 43 Hình 3.11: Phản ứng Liebermann – Burchard 44 Hình 3.12: Quy trình định tính alkaloid tổng số 45 Hình 3.13: Phản ứng Mayer 45 Hình 3.14: Sơ đồ quy trình thu dịch chiết Hồng chi dung mơi nước nóng 47 Hình 3.15: Dịch chiết nấm Hồng chi 48 Hình 3.16: Quy trình thu dịch chiết nấm Hồng chi dung mơi cồn 800 49 Hình 3.17: Quy trình thu dịch chiết phân đoạn 50 Hình 3.18: Quy trình thu polysacharide thơ 51 Hình 3.19: Hiệu suất điều chế dịch chiết từ nấm Hoàng chi 52 54 Hình 3.21: Cho chuột uống thuốc 55 GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều vii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ năm 1999 số quốc gia [11] 31 Bảng 3.2: Khả dung nạp glucose lô chuột sau 3h uống gucose 34 Bảng 3.3: Khả dung nạp glucose lô chuột sau uống dịch chiết 3h 35 Bảng 3.4: Hàm lượng (%) thành phần chất xơ cellulose có nấm Hồng chi 38 Bảng 3.5: Khảo sát khả loại protein liên kết polysaccharide thuốc thử Sevage 41 52 53 GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều MỞ ĐẦU Đái tháo đường (ĐTĐ) bệnh rối loạn chuyển hóa có mức tăng nhanh chóng thời gian gần số lượng chi phí điều trị, ngày trở thành gánh nặng kinh tế xã hội nhiều quốc gia giới Theo dự báo chuyên gia y tế từ năm 90 kỉ 20 “Thế kỉ 21 kỉ bệnh nội tiết rối loạn chuyển hóa” Theo WHO, năm 2025 có 300 330 triệu người mắc bệnh, chiếm tỷ lệ khoảng 5.4% dân số tồn cầu, ĐTĐ type chiếm 85-95% Với tốc độ phát triển nhanh chóng nay, bệnh ĐTĐ trở thành “đại dịch” toàn giới nguyên nhân gây tử vong hàng đầu nước phát triển Việt Nam nằm số quốc gia có số người mắc bệnh ĐTĐ tăng nhanh giới (PGS.TS Tạ Văn Bình) Số liệu điều tra quốc gia năm 2002-2003 tỷ lệ mắc bệnh nước 2.7% Hiệp hội ĐTĐ quốc tế WHO phân loại tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ Việt Nam nằm khu vực nước có tỷ lệ gia tăng ĐTĐ cộng đồng khoảng 2%-4.99% Với nhu cầu điều trị dự phòng ĐTĐ, hàng loạt thuốc tổng hợp tập đồn, cơng ty dược phẩm nghiên cứu phát triển sulfonylurea, biguanid, thiazolidindion dành cho ĐTĐ type insulin dành cho ĐTĐ type Tuy nhiên thuốc có nguồn gốc tổng hợp khơng phải giải pháp tối ưu nước phát triển Việt Nam, giá thành điều trị cao, đồng thời thuốc có phản ứng phụ tác dụng khơng mong muốn Thuốc có nguồn gốc thảo dược hướng ưu tiên phát triển với ưu điểm nguồn dược liệu sẵn có, dễ sử dụng, giá thành rẻ, tác dụng phụ, dễ cộng đồng chấp nhận, đặc biệt nước phát triển phát triển Một số dược thảo quan tâm nấm Linh chi hay gọi Lục bảo Linh chi Trong Lục bảo Linh chi phải kể đến nấm Hoàng chi với tính thần dược có tác dụng đặc biệt với triệu chứng suy giảm miễn dịch, căng thẳng thần kinh, suy sụp tinh thần Điều đáng ý nấm Hồng chi có tác dụng đặc biệt việc loại trừ chất cholesterol thành mạch lọc máu thúc đẩy q trình lưu thơng máu; khơi phục tế bào đảo tụy; cải thiện thiểu insulin nguyên nhân gây bệnh tiểu đường Nghiên cứu Lin JM GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều (1995) cho thấy nấm Hồng chi có tác dụng phục hồi chức gan bệnh tiểu đường làm chậm trình phát bệnh bệnh nhân mắc bệnh Xây dựng mơ hình bệnh lý để thử thuốc có ý nghĩa quan trọng nhằm đáp ứng tiêu chuẩn phát triển sản phẩm thuốc Y tế Việt Nam WHO Đã có số mơ hình ĐTĐ áp dụng Việt Nam, nhiên cần có bổ sung nhằm mục đích hồn thiện phong phú phương pháp đánh giá tác dụng hạ đường huyết thảo dược Xuất phát từ thực tế tiến hành đề tài “Tạo mơ hình đái tháo đường chuột nhắt trắng thử tác dụng hạ đường huyết dịch chiết từ nấm Hoàng chi Ganoderma colossum” với nội dung chính: - Tạo mơ hình ĐTĐ chuột nhắt trắng Streptozocin - Định tính, định lượng thành phần chất có nấm Hồng chi: polysaccharide, triterpenoid, alkaloid, cellulose - Thu dịch chiết nấm Hoàng chi - Thử tác dụng hạ đường huyết dịch chiết từ nấm Hoàng chi chuột nhắt trắng GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh đái tháo đƣờng (ĐTĐ) Theo WHO, ĐTĐ hội chứng có đặc tính biểu tăng glucose máu hậu việc thiếu hoàn toàn insulin có liên quan đến suy yếu tiết hoạt động insulin Các chuyên gia thuộc Uỷ ban chuẩn đoán phân loại bệnh đái tháo đường Hoa Kỳ đưa định nghĩa bệnh đái tháo đường sau: Đái tháo đường nhóm bệnh chuyển hóa có đặc điểm tăng glucose máu, hậu thiếu hụt tiết insulin, khiếm khuyết hoạt động insulin hai Tăng glucose máu mạn tính thường kết hợp với hủy hoại, tăng rối loạn chức suy yếu chức nhiều quan đặc biệt mắt, thận, thần kinh, tim mạch máu [11,26] 1.1.1 Tình hình bệnh ĐTĐ giới Việt Nam * Trên giới: ĐTĐ bệnh không lây nhiễm có tốc độ phát triển nhanh chóng giới chủ yếu nước phát triển Theo số liệu thống kê Tổ chức Y tế giới: năm 1995 giới có 135 triệu người mắc bệnh ĐTĐ chiếm 4% dân số giới, đến năm 2010 có 221 triệu người dự báo đến năm 2025 330 triệu người mắc bệnh này, chiếm 5.4% Cũng theo thống kê WHO, 30 giây lại có người mắc bệnh ĐTĐ bị cắt cụt chi; ngày có 5.000 người khả nhìn biến chứng mắt bệnh ĐTĐ; năm có khoảng 3.2 triệu người chết bệnh liên quan tới ĐTĐ Như vậy, ĐTĐ gánh nặng thực cho phát triển kinh tế, xã hội sức khỏe người toàn giới kỷ 21 Chính vậy, WHO nhận định rằng: “Thế kỷ XXI kỷ bệnh nội tiết rối loạn chuyển hóa mà điển hình bệnh ĐTĐ Những mà đại dịch HIV/AIDS hoành hành 20 năm cuối kỷ XX, ĐTĐ 20 năm đầu kỷ XXI” GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 44 có phải hợp chất triterpenoid tổng số hay không ta tiến hành định tính theo phản ứng Liebermann-Burchard Kết thí nghiệm nhận thấy cao thơ từ quy trình chiết có chứa hoạt chất triterpennoid (lớp mơi trường phía chuyển sang màu xanh lục sau cho H2SO4đđ vào từ từ) Qua ta nhận biết quy trình chiết giữ lại phần lớn triterpenoid tổng số Như thành phần triterpenoid tổng số nấm Hoàng chi trồng giá thể mùn cưa chiếm 0.9 % Tuy nhiên hàm lượng thu thấp so với hàm lượng triterpenoid tổng số nấm Hoàng chi trồng giá thể rong giấy (1.2%) theo báo cáo Hội nghị CNSH biển môi trường Điều chứng tỏ thành phần chất giá thể nuôi trồng ảnh hưởng tới hàm lượng chất nấm Theo kết nghiên cứu hợp chất triterpennoid có nấm Linh chi có tác dụng chống dị ứng, bảo vệ gan, ức chế tổng hợp cholesterol, giảm huyết áp B A Hình 3.11: Phản ứng Liebermann – Burchard + Ống đối chứng (A): nước +0.5ml anhydride acetic+0.5mlchloroform+ H2SO4đđ + Ống thí nghiệm(B): dịch chiết triterpennoid+0.5ml anhydride acetic+0.5ml chloroform + H2SO4đđ GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 45 3.2.4 Định tính alkaloid tổng số 10 g bột nấm Hoàng chi Ngâm nguội 24 dung dịch prollilus, nhiệt độ phịng Lọc Cơ quay chân khơng (235-80 mbar, 480C) Hịa tan cao HCl 1% Lọc Định tính với thuốc thử Mayer Hình 3.12: Quy trình định tính alkaloid tổng số A B Hình 3.13: Phản ứng Mayer + Ống đối chứng A: Nước + thuốc thử Mayer + Ống thí nghiệm B: Dịch chiết + thuốc thử Mayer GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 46 Từ hình 3.13 ta thấy ống thí nghiệm, dịch chiết nấm Hoàng chi đem thử nghiệm với thuốc thử Mayer thấy kết dương tính Dịch có màu vàng nhạt, xuất kết tủa trắng Bột nấm Hoàng chi trích với dung mơi hữu – kiềm trích ly tốt alkaloid dạng bazo tự có tính phân cực tính bazo yếu, alkaloid có cấu trúc đặc thù -C=C-N- Theo kết nghiên cứu alkaloid nấm Hồng chi có tác dụng lên hệ thần kinh, huyết áp ung thư GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 47 3.3 Kết trình ngâm chiết 3.3.1 Chiết nước nóng Nấm Hồng chi chiết tổng số với nước nóng nhằm mục đích chiết rút hoạt chất có khả phân cực nước 80 g bột nấm Hoàng chi Chiết nước nóng 1000C (1:9,w/v) Dịch lọc Cơ quay chân không (60-85 mbar, 480C) Sấy 480C Cao nước nóng Bã Chiết nước nóng 1000C ( 1:7, w/v) Dịch lọc Bã Chiết nước nóng 1000C (1:4,w/v ) Bã Dịch lọc Hình 3.14: Sơ đồ quy trình thu dịch chiết Hồng chi dung mơi nƣớc nóng GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 48 Hình 3.15: Dịch chiết nấm Hồng chi 3.3.2 Chiết phân đoạn Nấm h H tiếp tục -hexan, chloroform, et GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 49 200 g bột nấm Hoàng chi Ngâm cồn 800 (1:9, w/v) Dịch lọc Bã Ngâm cồn 800 (1:7, w/v) Dịch lọc Cô quay chân không (175-68 mbar, 480C) Bã Ngâm cồn 800 (1:4, w/v) Dịch lọc Sấy 480C Cao thơ Hình 3.16: Quy trình thu dịch chiết nấm Hồng chi dung mơi cồn 800 GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 50 Cao cồn 800 Nước nóng: n – hexan Chiết lần Cô quay chân không (335 mbar, 480C) Chiết phân đoạn Dịch n- hexan tổng số Dịch nước chloroform Cao n-hexan Cô quay chân không (235 mbar, 480C) Dịch chloroform tổng số Cao chloroform Dịch nước etyl acetat Dịch etyl acetat tổng số Dịch nước cuối Cao etyl acetat Cao nước cuối Cô quay chân không (240 mbar, 480C) Cơ quay chân khơng (8068mbar, 480C) Hình 3.17: Quy trình thu dịch chiết phân đoạn Dựa vào tính phân cực dung mơi nhóm hợp chất ta dự đốn có mặt chất phân đoạn chiết + Trong phân đoạn chiết dung mơi n-hexan có hợp chất không phân cực như: chất béo, caroten, sterol, chất màu thực vật, clorophyl, polysacharide không tan + Trong phân đoạn chiết dung môi chloroform có mặt hợp chất: sesquitacpea, ditecpen, cumarin, quinon, aglycon glycozit thủy phân tạo ra, số alkaloid bazo yếu GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 51 + Trong phân đoạn chiết dung mơi nước nóng có hợp chất: glucozit, tanin, polysacharide tan, hợp chất hydrat cacbon phân tử vừa pectin, protein muối vô + Trong phân đoạn chiết dung môi cồn có mặt hợp chất: glycozit, ankaloid, flavonoit, hợp chất phenol khác, axit hữu cơ, tanin, polysacharide 3.3.3 Chiết polysacharide thơ 200 g bột nấm Hồng chi Ngâm cồn 800 (1:5,w/v) Lắc 300C 24 Dịch chứa cồn Tách bỏ cồn Phơi khơ bã ngồi khơng khí Chiết lần với nước nóng 1000C (1:20, w/v) Dịch lọc Cô quay chân không (85-60 mbar, 480C) Sấy 480C Cao thơ Hình 3.18: Quy trình thu polysacharide thơ Bột nấm H GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 52 chiết phân đoạn H 3.6 3.6: Cao dịch chiết Cao dịch chiết su (%) (%) (DCEt) 9.09 (DCH) 4.4 - hexan (DCN) 2.1 (DCHt) 7.8 chlorofom (DCC) 1.1 etyl acetate (DCE) 0.2 10 polysacharide thô (DCP) 5.1 9.09 7.8 Hiệu suất (% ) 4.4 5.1 2.1 1.1 0.2 DCEt DCN DCC DCE DCH DCHt DCP Các dịch chiết nấm Hồng chi Hình 3.19: Hiệu suất điều chế dịch chiết từ nấm Hoàng chi Dựa vào hình 3.19 ta thấy dịch chiết chiết dung mơi cồn 800 có hiệu suất cao 9.09% (tương đương với 90.9 g cao/kg bột nấm Hoàng chi) Tiếp theo dịch chiết chiết dung môi nước nóng 7.8% (tương đương với 78 g cao/kg bột nấm Hồng chi) Chiết nước nóng hình thức chiết đơn giản, tốn sử dụng phổ biến chiết dược liệu nhiên hiệu suất thấp so với chiết dung mơi cồn Vì cồn xem dung mơi vạn năng, hồ tan hợp GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 53 chất không phân cực đồng thời có khả tạo dây nối hydro với nhóm phân cực khác Tiếp theo dịch chiết polysacharide thô đạt hiệu suất 5.1% (tương đương 51 g cao/kg nấm Hồng chi) Trong quy trình tách chiết polysacharide thơ bột nấm xử lý qua cồn sau tách chiết qua nước nóng xử lý cồn cồn mang theo hợp chất phân cực yếu alkaloid, flavonoid hợp chất phenol khác Vì tiếp tục tách chiết nước nóng thu polysacharise thơ với độ tinh khiết cao Các cao thô sau tách, sấy khơ đến khối lượng khơng đổi hịa với nước cất mang thử tác dụng hạ đường huyết 3.4 Tác dụng hạ đƣờng huyết phân đoạn dịch chiết từ nấm Hoàng chi Ganoderma colossum mơ hình chuột gây ĐTĐ Các lơ chuột sau 10 ngày liên tục uống dịch chiết, ảnh hưởng dịch chiết lên glucose huyết thể bảng 3.7 hình 3.20 3.7: Nồng độ glucose huyết lô chuột sau uống dịch chiết DC Glucose huyết trung bình (mmol/l) nấm Hồng chi X±SE 0h 3h 10 ngày 20.12± 0.05 16.45±0.18* 9.05±0.09* -18.24%** (DCHt) DC polysaccharide 20.5±0.31 -20.73%** (DCP) DC ethanol 800 20.7±0.2 20.4±0.22 20.8±0.33 18.25±0.1* -12.26%** (DCC) DC etylacetate 15.09±0.12* -26.02%** (DCN) DC chloroform 15.85±0.29* -23.42%** (DCEt) DC n- hexan 16.25±0.13* 20.1±0.22 18.78±0.15* -55.02%** 9.05±0.09* -55.85%** 8.26±0.06* -60.09%** 5.32±0.13* -73.92%** 12.41±0.15* -40.34%** 17.45±0.2* -6.57%** GVHD: ThS Nguyễn Thị Hải Thanh SVTH: Huỳnh Thị Thúy Kiều 54 (DCE) -13.18%** 20.5±0.19 18.24±0.13* 15.21±0.5* -11.02%** (DCH) 22.04±0.69 -25.80%** 21.85±0.73 22.01±0.69 -0.86%** (ĐC) 21.67±0.45 Insulin -0.14%** 10.05±0.13 21.34±0.4 -53.62%** -1.52%** * P0.05) Ở thời điểm 3h lô đối chứng giảm 0.86% sau 10 ngày giảm 0.14% Khi so sánh nhóm điều trị phân đoạn dịch chiết với nhóm đối chứng thời điểm: 3h sau uống thuốc nồng độ glucose giảm rõ rệt với P