Luận văn tạo mô hình tiểu đường trên chuột nhắt trắng và thử tác dụng hạ đường huyết một số chế phẩm tự nhiên

đại học quốc gia hà nội trờng đại học khoa học tự nhiên Nguyễn Trung Quân Tạo mô hình tiểu đờng chuột nhắt trắng thử tác dụng hạ đờng huyết số chế phẩm tự nhiên Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 Luận văn thạc sĩ khoa học Ngời hớng dẫn khoa học: Ts Hoàng Thị Mỹ Nhung Hà Nội Những chữ viết tắt ACTH ADN Anti - GAD CDC Adrenocorticotropic hormone Acid deoxyribonucleic Glutamic acid decarboxylase antibodies Tế bào beta- đảo tụy Langerhans Centers for Disease Control and Prevention (Trung tâm kiểm soát dịch bệnh Mỹ) CNT Cv ĐTĐ FDA ICA IDM LD50 MLH NOD STH STZ WHO Chuột nhắt trắng Coefficient of variation (Hệ số biến thiên) Đái tháo đờng Food and Drug Administration Islet cells antibodies International Diabetes Mellitus Lethal dose 50% (Liều gây chết 50% động vật thí nghiệm) Lipid Mobilising Hormon Non-Obese Diabetic Somatotropic Hormon Streptozocin (Streptozotocin) World Health Organization (Tổ chức Y tế Thế giới) Mục lục Lời cảm ơn Trang Những chữ viết tắt Mục lục Mở đầu Chơng 1- Tổng quan Tổng quan bệnh ĐTĐ. 1.1 1.1.1 Tình hình bệnh ĐTĐ giới Việt Nam 1.1.2 Chẩn đoán phân loại bệnh ĐTĐ 1.1.3 Sinh lý bệnh ĐTĐ. 1.1.4 Thuốc điều trị . 10 Mô hình bệnh ĐTĐ động vật thực nghiệm 1.2 12 1.2.1 Khái lợc mô hình bệnh lý động vật thực nghiệm 12 1.2.2 Streptozocin chế gây mô hình ĐTĐ typ 13 Alloxan chế gây mô hình ĐTĐ typ 1.2.3 16 1.2.4 Mô hình ĐTĐ typ 19 Cây Bông ổi (Lantana camara L) 1.3 19 1.3.1 Đặc điểm hình thái phân bố . 19 1.3.2 Thành phần hóa học. 21 1.3.3 Công dụng tác dụng duợc lý Chơng 2- Đối tợng, Vật liệu phơng pháp nghiên cứu 2.1 Đối tợng 2.2 Vật liệu, hóa chất 2.3 Phơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Thử gây mô hình ĐTĐ typ STZ Alloxan CNT 2.3.2 Phơng pháp thu dịch chiết từ Bông ổi 2.3.3 Phơng pháp thử độc tính cấp dịch chiết Bông ổi 2.3.4 Sàng lọc tác dụng hạ glucose huyết dịch chiết CNT bình thờng 2.3.5 Thử khả dung nạp glucose huyết CNT bình thờng dịch chiết Bông ổi 2.3.6 Thử tác dụng hạ glucose huyết CNT gây ĐTĐ typ STZ 2.3.7 Thử tác dụng hạ glucose huyết CNT gây ĐTĐ typ STZ chế độ giàu dinh dỡng 2.3.8 Phơng pháp định lợng glucose huyết 2.3.9 Phơng pháp xử lý số liệu Chơng 3- Kết thảo luận Gây mô hình ĐTĐ typ 3.1 3.1.1 Gây mô hình ĐTĐ typ CNT alloxan 3.1.2 Gây mô hình ĐTĐ typ CNT STZ 3.2 Thu dịch chiết nghiên cứu thử độc tính cấp dịch chiết Bông ổi 3.2.1 Thu dịch chiết Bông ổi 3.2.2 Thử độc tính cấp dịch chiết Bông ổi 3.3 Thử tác dụng hạ glucose huyết dịch chiết Bông ổi CNT 3.3.1 Sàng lọc liều có tác dụng hạ glucose huyết dịch chiết Bông ổi 3.3.2 Thử tác dụng dung nạp glucose huyết dịch chiết Bông ổi CNT bình thờng 3.3.3 Thử tác dụng hạ glucose huyết dịch chiết Bông ổi mô hình ĐTĐ typ đợc gây STZ 3.3.4 Thử tác dụng hạ glucose huyết dịch chiết Bông ổi mô hình ĐTĐ typ đợc gây STZ chế độ ăn Kết luận Tài liệu tham khảo 22 24 24 24 25 25 27 27 28 29 30 31 32 33 35 35 35 38 40 40 41 43 43 46 49 51 54 55 Mở đầu Tiểu đờng (đái tháo đờng) bệnh nội tiết rối loạn chuyển hóa có mức tăng nhanh chóng thời gian gần số lợng nh chi phí điều trị trở thành gánh nặng kinh tế xã hội nhiều quốc gia giới Dự báo chuyên gia y tế từ năm 90 kỉ 20 trở thành thực Thế kỉ 21 kỉ bệnh nội tiết rối loạn chuyển hóa Theo WHO, năm 2025, có 300-330 triệu ngời mắc bệnh, chiếm tỷ lệ khoảng 5,4% dân số toàn cầu, ĐTĐ type chiếm 85-95% Với tốc độ phát triển nhanh chóng (tăng 170%), bệnh ĐTĐ quốc gia phát triển trở thành đại dịch Mỹ, theo thông báo Trung tâm kiểm soát dịch bệnh CDC, bệnh ĐTĐ tăng 14% năm (2003-2005) nguyên nhân hàng đầu gây tử vong Mỹ.[1,5,17] Việt Nam nằm số quốc gia có số ngời mắc bệnh ĐTĐ tăng nhanh chóng Số liệu điều tra quốc gia năm 2002-2003 thông báo tỷ lệ mắc bệnh nớc 2,7% Hiệp hội ĐTĐ quốc tế WHO phân loại tỷ lệ mắc bệnh đái tháo đ ờng Việt Nam nằm khu vực (tỷ lệ 2%-4,99%) với nớc khu vực nh Trung Quốc, Thái Lan, Indonesia [1] Với nhu cầu điều trị dự phòng ĐTĐ, hàng loạt thuốc tổng hợp đợc tập đoàn, công ty dợc phẩm nghiên cứu phát triển nh sulfonylurea, biguanid, thiazolidindion Tuy nhiên thuốc có nguồn gốc tổng hợp giải pháp tối u quốc gia phát triển nh Việt Nam, lý đa giá thành điều trị cao, thuốc tổng hợp có phản ứng phụ với tác dụng không mong muốn Thuốc có nguồn gốc thảo dợc đợc nớc quan tâm phát triển với u điểm nguồn dợc liệu sẵn có, dễ sử dụng, giá thành rẻ, tác dụng phụ dễ đợc cộng đồng chấp nhận, đặc biệt nớc phát triển phát triển [11,12,17] Để đánh giá hiệu tiền lâm sàng thuốc có nguồn gốc thảo dợc cần phải có nghiên cứu đánh giá tác dụng dợc lý Những nghiên cứu nhằm sàng lọc đánh giá hiệu tiền lâm sàng thuốc trớc đa vào thử nghiệm lâm sàng Xây dựng mô hình bệnh lý để thử thuốc có ý nghĩa quan trọng nhằm đáp ứng tiêu chuẩn phát triển sản phẩm thuốc Bộ Y tế Việt Nam WHO Đã có số mô hình ĐTĐ đợc áp dụng Việt Nam, nhiên cần có bổ xung nhằm mục đích hoàn thiện phong phú phơng pháp đánh giá tác dụng hạ đờng huyết thuốc thảo dợc Xuất phát từ thực tế tiến hành đề tài Tạo mô hình tiểu đờng chuột nhắt trắng thử tác dụng hạ đờng huyết số chế phẩm tự nhiên với nội dụng chính: - Xây dựng mô hình tiểu đờng (ĐTĐ) chuột nhắt trắng - Đánh giá tác dụng hạ glucose huyết dịch chiết Bông ổi (Lantana camara L ) chuột nhắt trắng Chơng Tổng quan tài liệu 1.1 Tổng quan bệnh ĐTĐ Bệnh ĐTĐ, theo Tổ chức Y tế giới (WHO), hội chứng có đặc tính biểu tăng glucose máu hậu việc thiếu hoàn toàn insulin có liên quan đến suy yếu tiết hoạt động insulin [1,39,50] Các chuyên gia thuộc ủy ban chẩn đoán phân loại bệnh ĐTĐ Hoa Kỳ lại đa định nghĩa ĐTĐ nh sau: nhóm bệnh chuyển hóa có đặc điểm tăng glucose máu, hậu thiếu hụt tiết insulin; khiếm khuyết hoạt động insulin; hai Tăng glucose máu mạn tính thờng kết hợp với hủy hoại, tăng rối loạn chức suy yếu chức nhiều quan đặc biệt mắt, thận, thần kinh, tim mạch máu.[1,26] 1.1.1 Tình hình bệnh ĐTĐ giới Việt Nam * Trên giới: ĐTĐ bệnh không lây nhiễm có tốc độ phát triển nhanh chóng giới Điều đáng lo ngại ĐTĐ tăng nhanh chóng nớc phát triển Theo thông báo IDM: năm 1994 giới có 110 triệu ngời mắc bệnh ĐTĐ; đến năm 2000 số 151 triệu ngời, dự báo đến năm 2010 số 221 triệu ngời [1,42] Bảng Số liệu thông báo tỷ lệ mắc ĐTĐ năm 1999 số quốc gia [1] Dân số Số ca TĐ Typ Nớc Tỷ lệ % Typ (triệu) (triệu) (triệu) (triệu) Thái Lan 62 4,0 6,7 0,046 1,8 Mỹ 250 10 4,0 0,75 9,0 ấn Độ 1200 38 4,0 0,176 38 Hồng Kông 6,0 0,24 4,0 0,007 0,23 Pakistan 160 4,6 3,0 0,4 4,2 Đài Loan 20 0,424 2,1 0,004 0,04 Trung Quốc 1300 24 2,0 1,2 23 Indonesia 210 2,7 1,3 0,009-0,036 1,8-3,6 WHO dự tính đến năm 2025 có 300-330 triệu ngời mắc bệnh ĐTĐ chiếm 5,4% dân số toàn cầu, theo Quỹ ĐTĐ giới (WDF) khoảng 300339 triệu Trong nớc phát triển tăng 42%; nớc phát triển tăng 170% Theo CDC, Mỹ bệnh ĐTĐ tăng 14% năm, từ 18,2 triệu ngời mắc bệnh ĐTĐ năm 2003 đến 20,8 triệu ngời năm 2005.[42] Số liệu thống kê WHO cho thấy ĐTĐ typ chiếm 85-95% tổng số ngời mắc bệnh ĐTĐ Nghiên cứu sàng lọc Nhật Bản Trung Quốc cho thấy, tỷ lệ ĐTĐ typ 2: ĐTĐ typ lứa tuổi học sinh trung học 4:1.[1,50] * Việt Nam Kết điều tra quốc gia năm 2002-2003 tình hình ĐTĐ [1] cho thấy: - Tỷ lệ ĐTĐ toàn quốc 2,7%, ĐTĐ nữ 3,7%, nam 3,3% - Xét theo khu vực vùng đô thị khu công nghiệp có tỷ lệ mắc ĐTĐ 4,4% vùng núi cao tỷ lệ 2,1% - Tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ nhóm đối tợng có yếu tố nguy cơ, tuổi từ 30-64 chiếm tỷ lệ cao 10,5% Tỷ lệ rối loạn dung nạp glucose 13,8% Theo phân loại Hiệp hội Đái tháo đờng quốc tế WHO, tỷ lệ mắc bệnh ĐTĐ Việt Nam nằm khu vực (tỷ lệ 2-4,99%) với nớc khu vực nh Trung Quốc, Thái Lan, Indonesia thấp so với nớc khu vực (5%7,99%) nh Nhật Bản, Hàn Quốc, Singapore [1] 1.1.2 Chẩn đoán phân loại bệnh ĐTĐ a) Chẩn đoán: Tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh ĐTĐ, đợc Hiệp hội ĐTĐ Mỹ kiến nghị năm 1997 đợc nhóm chuyên gia bệnh ĐTĐ WHO công nhận vào năm 1998, tuyên bố áp dụng vào năm 1999 với tiêu chí: (1) Có triệu chứng ĐTĐ lâm sàng; mức glucose huyết tơng thời điểm 11,1mmol/l (200mg/dl) (2) Mức glucose huyết tơng lúc đói 7,0mmol/l (126mg/dl) (3) Mức glucose huyết tơng 11,1mmol/l (200mg/dl) thời điểm sau nghiệm pháp dung nạp glucose đờng uống 75 gam đờng (loại anhydrous) 82,5 gam đờng (loại monohydrat) [1,18] Bảng Tiêu chuẩn chẩn đoán ĐTĐ theo IDM năm 2005 [1] Đặc điểm Khởi phát ĐTĐ typ Rầm rộ, kết hợp nhiều triệu chứng Biểu lâm - Sút cân nhanh chóng sàng - Đái nhiều - Uống nhiều nớc Nhiễm ceton C-peptid Kháng thể Điều trị Kết hợp với bệnh tự miễn khác Dơng tính Thấp/mất - ICA dơng tính - Anti-GAD dơng tính - Bắt buộc dùng insulin Có ĐTĐ typ Chậm, thờng triệu chứng - Thể trạng béo - Tiền sử gia đình có ngời mắc bệnh đái tháo đờng typ - Đặc tính dân tộc , có tỷ lệ mắc bệnh cao - Chứng gai đen (Acanthosis nigricans) - Hội chứng buồng trứng đa nang Thờng Bình thờng tăng - ICA âm tính - Anti-GAD âm tính - Thay đổi lối sống - Dùng thuốc hạ glucose máu đờng uống - Dùng insulin Không b) Phân loại: * ĐTĐ typ Phân loại theo hình thái miễn dịch - Typ 1a: Chiếm 80%, thể có loại tự kháng thể kháng tế bào đảo tụy thoáng qua từ lúc khởi đầu bệnh Loại kết hợp với bệnh tự miễn dịch khác, thờng có typ HLA B15, HLA DR4 Thờng xảy sau bị nhiễm virus gây phá hủy tế bào - Typ 1b: Các kháng thể kháng tế bào đảo tụy dai dẳng với hàm lợng cao Thờng kết hợp với rối loạn miễn dịch khác nh bệnh lý tuyến giáp; bệnh tuyến vỏ thợng thận; giảm chức tuyến sinh dục; thiếu máu ác tính Đa số ngời bệnh nữ giới có typ HLA- B8 HLA- DR3 Phân loại theo diễn biến lâm sàng - ĐTĐ typ thể không phụ thuộc insulin (thoáng qua) - ĐTĐ phụ thuộc insulin * ĐTĐ typ - Những rối loạn không đồng biểu giảm nhạy cảm với insulin gan, vân, mô mỡ suy chức của tế bào , dẫn tới rối loạn tiết insulin * ĐTĐ typ không qua trung gian miễn dịch Đây trờng hợp ĐTĐ thiếu insulin nhng chứng tự miễn Thể bệnh có yếu tố di truyền rõ Đặc điểm lâm sàng có đợt thiếu insulin xen lẫn giai đoạn bình thờng [1] 1.1.3 Sinh lý bệnh ĐTĐ a) Điều hòa cân glucose máu Trong điều kiện sinh lý bình thờng, glucose máu khoảng 5,6 mmol/l (100mg/dl) Khi thể sử dụng nhiều glucid (lao động nặng, hng phấn thần kinh, sốt,) glucose máu lên tới 6,7 8,3 mmol/l (120 150 mg/dl) Trong trạng thái ngủ nghỉ glucose máu giảm tới 4,5 mmol/l (80mg/dl) Nếu vợt 8,9 mmol/L (160mg/dl) glucose bị đào thải qua thận, giảm xuống dới 3,3 mmol/L (60mg/dl) tế bào thiếu lợng, dẫn tới hôn mê Bằng chế điều hòa, thể ngời bình thờng đợc trì lợng glucose máu khoảng 4,5 6,7 mmol/l (80-120mg/dl) Cơ chế điều hòa đợc kiểm soát hệ nội tiết hệ thần kinh [18] * Vai trò điều hòa hệ nội tiết Một số nội tiết tố có tác dụng lên enzym chuyển hóa glucid qua tác động đến cân glucose huyết Có hai nhóm nội tiết tố kiểm soát đối lập nhau: - Insulin làm giảm glucose máu - Tập hợp nội tiết tố chất làm tăng glucose máu Insulin: Insulin tế bào đảo tụy Langerhans tiết có tác dụng làm giảm glucose máu Insulin protein gồm 51 acid amin, đợc chia thành chuỗi alpha (21 acid amin) (gồm 30 acid amin), đợc nối với cầu nối S S Thời gian bán hủy insulin 3- 5phút Trung bình ngày tụy tiết 40-50 đơn vị insulin (IU), để đảm bảo nồng độ glucose máu đợc trì giới hạn từ 4,4-5,3 mmol/l (80-95 mg/dl) Nồng độ insulin huyết tơng đảm bảo tiết glucose gan với tỷ lệ 1,9-2,1mg/kg/phút [1,18] Bảng3 Tóm tắt vai trò sinh lý insulin Tình trạng insulin cao (sau ăn) Tình trạng insulin thấp (lúc đói) Gan Thu nhận glucose Tổng hợp glycogen Tổng hợp lipid Mất khả tạo thể ceton Mất khả tổng hợp glycogen Sản xuất glucose Phân hủy glucogen Mất khả tạo mỡ Tổng hợp thể ceton Phân hủy glycogen Cơ Thu nhận glucose Oxy hóa glycose Tổng hợp glycogen Tổng hợp protein Mất khả thu nhận glucose Oxy hóa acid béo, thể ceton Phân hủy glycogen Phân hủy protein tiết acid amin Mô mỡ Thu nhận glucose Tổng hợp lipid Thu nhận Triglycerid Mất khả thu nhận glucose Phân hủy lipid tiết acid béo tự Mất khả nhận triglyceride Hệ đối kháng với insulin: Có tác dụng làm tăng glucose máu - Adrenalin: kích thích tạo AMP vòng tế bào đích, tăng hoạt hóa enzym phosphorylase gan làm tăng thoái hóa glucogen tạo glucose - Glucagon: tác dụng tơng tự nh adrenalin nhng mạnh kéo dài Glucagon kích thích phân hủy mỡ enzym lipase đợc hoạt hóa AMP vòng - Glucocorticoid: ngăn cản glucose thấm vào tế bào (trừ tế bào não) Tăng hoạt hóa G-6-phosphatase làm tăng giải phóng glucose gan vào máu Tăng tân tạo glucose từ protid - Thyroxin: tăng hấp thu đờng ruột, tăng phân hủy glycogen - STH: tăng thoái hóa glycogen cách ức chế enzym hexokinase STH hoạt hóa insulinase - Insulinase kháng thể chống insulin: trực tiếp phân hủy insulin Hình Kiểm soát tiết insulin tế bào beta * Vai trò hệ thần kinh Đến nhà khoa học phát đợc hai trung tâm (A B) vùng dới đồi tham gia điều hòa glucose huyết thông qua hormon: - Trung tâm A: gồm tế bào thần kinh, mặt insulin thu nhận đợc glucose từ máu Trung tâm đại diện cho tế bào không cần insulin thu nhận đợc glucose nh: tế bào não, gan, hồng cầu Khi glucose máu giảm xuống dới 4,5mmol/l trung tâm A bị kích thích làm tăng tiết glucagon, adrenalin, ACTH, LMH để tăng tạo glucose đạt đợc nồng độ 5,6 mmol/l - Trung tâm B: Đại diện cho tế bào lại thể, phải có insulin thu nhận đợc glucose Các tế bào loại sử dụng đợc thể ceton nh nguồn lợng bổ xung quan trọng Khi thiếu insulin, trung tâm B huy động chế nội tiết làm tăng glucose máu, đủ thấm vào tế bào nhờ chênh lệch lớn nồng độ glucose tế bào Tuy nhiên chênh lệch phải đủ lớn (tăng gấp lần bình thờng) xảy khuếch tán Nhng có lợng lớn glucose bị thận đào thải (gặp bệnh tiểu đờng thiếu hụt insulin) [18] b) Cơ chế bệnh sinh ĐTĐ * Cơ chế bệnh sinh ĐTĐ typ - Do yếu tố di truyền sản xuất insulin, phát bệnh tự nhiên, phụ thuộc vào điều kiện môi trờng Các gen có liên quan HLA-DR3, HLA-D4 DQW-8, gen kháng HLA-DRW2, B7.[18] Bệnh gặp 0,2-0,5% số ngời quần thể chiếm 5-10% số ngời mắc bệnh 10 biểu sinh lý bình thờng Không nhận thấy biểu ngộ độc chuột thí nghiệm thời gian theo dõi Sau 72 giờ, nhóm thí nghiệm chuột chết Tiến hành mổ đại thể chuột lô nghiên cứu nhận thấy: tim, gan, thận, phổi tơi nhuận; dày, ruột hết thuốc Không xác định đợc liều gây chết 50% động vật thí nghiệm (LD 50) Dịch chiết nớc Bông ổi mặc chuột uống với thể tích liều cao 75g/kg trọng lợng b) Kết thử độc tính cấp dịch chiết cồn Bông ổi Thể tích cho uống chuột 0,5ml/con đợt thực nghiệm Chuột đợc uống dịch chiết nớc liều từ thấp đến cao bớc nhảy liều đợc dùng thí nghiệm 3g/kg (tăng dần theo lô) Liều cao cho uống đợt thực nghiệm 18g/kg Bảng Kết thử độc tính cấp dịch chiết cồn Bông ổi Liều dùng Số chuột thí Tỷ lệ chuột Lô thử Số chuột chết nghiệm (g/kg chuột) nghiệm chết (%) ĐC 10 0 10 0 10 0 12 10 0 15 10 0 18 10 0 Sau dịch chiết cồn Bông ổi, chuột lô hoạt động bình thờng Các biểu sinh lý bình thờng Không nhận thấy biểu ngộ độc chuột thí nghiệm thời gian theo dõi Sau 72 giờ, nhóm thí nghiệm chuột chết Tiến hành mổ đại thể chuột lô nghiên cứu nhận thấy: tim, gan, thận, phổi tơi nhuận; dày, ruột hết thuốc Không xác định đợc liều gây chết 50% động vật thí nghiệm (LD 50) Dịch chiết cồn Bông ổi mặc chuột uống với thể tích liều cao 18g/kg trọng lợng 3.3 Thử tác dụng hạ đờng huyết dịch chiết Bông ổi CNT 3.3.1 Sàng lọc liều có tác dụng hạ glucose huyết Sàng lọc liều bớc có ý nghĩa quan trọng nhằm xác định liều tối u có tác dụng hạ glucose huyết phục vụ cho nghiên cứu mô hình tiểu đờng thực nghiệm 45 a) Dịch chiết nớc Bông ổi Trên sở kết nghiên cứu độc tính cấp, lựa chọn bớc liều nh bảng dới nhằm chọn liều dịch chiết nớc Bông ổi có tác dụng hạ glucose huyết thấp có tác dụng chậm thời gian kéo dài Bảng 10 Kết sàng lọc liều có tác dụng hạ glucose huyết chuột bình thờng dịch chiết nớc Bông ổi Lô thử nghiệm 0h Chỉ số glucose huyết trung bình (mmol/l) X SE 1h 2h 3h 4h 7,46 0,91 7,27 0,78 6.96 0,73 6,83 0,82 -3,49% -5,95% -9,96% -11,6% 7,32 1,24 6,3 1,00 5,68 1,05 5,06 1,07 -5,91% -19,02%* -26,99% -34,9%* Lô (ĐC) 7,73 0,79 Lô (3g/kg) 7,78 0,88 Lô (6g/kg) 7,55 0,95 7,01 1,22 -7,15% 5,88 0,99 -22,12%* 3,7 0,82 -50,99%* 3,27 0,53 -56,68%* Lô (10g/kg) 8,16 0,86 8,01 1,18 -1,83% 6,53 0,66 -19,98%* 5,83 0,91 -28,55%* 5,23 0,88 -35,91%* Lô (15g/kg) 7,13 0,68 6,61 0,91 -7,29% 5,81 0,33 -18,51%* 5,20 0,76 -27,06%* 3,83 0,82 -46,28%* Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với P[...]... phân tán của dãy số liệu Hệ số biến thiên thấp thì dãy số liệu phân tán ít (số liệu tập trung hơn) hay kết quả chính xác hơn Cv(%) = S x 100 X S - Độ lệch chuẩn X - Giá trị trung bình *Một mô hình thực nghiệm dợc lý chỉ nói lên đợc một khía cạnh tác dụng của thuốc Trong nghiên cứu này chúng tôi thử nghiệm tác dụng hạ đờng huyết của dịch chiết Bông ổi trên 3 mô hình khác nhau (mô hình thử khả năng dung... glabrra) [17]v.v[10] 1.2 Mô hình bệnh ĐTĐ trên động vật thực nghiệm 1.2.1 Khái lợc về mô hình bệnh lý trên động vật thực nghiệm Mô hình động vật là mô hình mà ở đó động vật đợc gây bệnh hoặc tổn thơng tơng tự nh trên ngời Những điều kiện thử nghiệm này thờng đợc gọi là mô hình bệnh lý trên động vật Việc sử dụng các mô hình động vật cho phép các nhà nghiên cứu thực hiện các thử nghiệm tiền lâm sàng,... có một mô hình phù hợp phản ánh một cách xác thực, các bệnh đợc mô hình hóa phải tơng tự về nguyên nhân và cơ chế gây bệnh giống nh ở ngời Mô hình động vật thờng đợc sử dụng trong nghiên cứu y sinh học (nghiên cứu về cơ 13 chế bệnh sinh, hoặc trong chẩn đoán, điều trị hoặc phát triển các thuốc nghiên cứu mới) Các mô hình bệnh lý trên động vật có thể có bản chất tự nhiên hoặc đợc gây ra bằng các tác. .. thỏ, chuột cống, chuột nhắt trắng) đã trở nên phổ biến đặc biệt là trong nghiên cứu y dợc học [20,48] Một số các lĩnh vực khác cũng sử dụng mô hình động vật cho các nghiên cứu của mình nh tâm lý học, xã hội học quan sát hành vi động vật (mô hình hành vi) Hiện nay các nhà nghiên cứu đã phát triển rất nhiều các phơng pháp khác nhau trên cùng một loại mô hình bệnh nhằm tìm ra các mô hình phù hợp nhất và. .. định và từ từ mà không có sự thay đổi về nồng độ insulin máu Do nicotinamide là một chất chống oxi hóa bảo vệ tế bào bằng hoạt tính dọn gốc tự do (STZ sinh ra gốc tự do) và hạn chế tổn thơng tế bào beta đảo tụy trong ĐTĐ typ 2 [45] c) Chọn lọc và lai tạo Một số cá thể thuộc chủng chuột cống Wistar, chuột nhắt KK có biểu hiện rối loạn dung nạp glucose và tăng glucose huyết và kháng insulin mạnh trong tự. .. - Lô 4: Chuột đợc uống dịch chiết với liều 12g/kg 29 - Lô 5: Chuột đợc uống dịch chiết với liều 15g/kg - Lô 6: Chuột đợc uống dịch chiết với liều 18g/kg 2.3.4 Sàng lọc tác dụng hạ glucose huyết của dịch chiết trên CNT bình thờng a) Phơng pháp sàng lọc tác dụng hạ glucose máu của dịch chiết nớc trên CNT bình thờng Chuột nhắt trắng chủng Swiss, cả 2 giống, trọng lợng từ 18-22g 30 chuột nhắt trắng chia... (pentylenetetrazol) trong mô hình bệnh động kinh - Làm tắc động mạch não giữa để gây mô hình bệnh đột quỵ - Tiêm virus hoặc vi khuẩn gây mô hình nhiễm khuẩn hoặc các bệnh cúm - Sử dụng các tia ion phóng xạ để gây khối u - Chọn lọc di truyền chuột NOD gây mô hình ĐTĐ đờng - Cắt buồng trứng để gây bệnh loãng xơng - Dùng Plasmodium yoelii gây mô hình bệnh sốt rét Việc nghiên cứu và ứng dụng các mô hình bệnh lý trên các... glucose huyết của chuột bằng cách cắt bỏ 2mm đuôi, để máu chảy tự nhiên, thấm bỏ giọt đầu tiên, rồi nhỏ 1 giọt vào test thử gắn với máy đo glucose huyết Sau 20 giây, ghi nhận kết quả nồng độ glucose huyết (mmol/L) Chỉ 35 số glucose huyết đợc đo bằng máy đo glucose huyết tự động và bộ kit thử One touch Ultra Easy của Hãng Johnson-Johnson của Mỹ 2.3.9 Phơng pháp xử lý số liệu Chỉ số glucose huyết đợc... trong tự nhiên Nhằm tạo ra các chủng chuột có biểu hiện tăng glucose huyết và kháng insulin mạnh, các nhà nghiên cứu đã lai tạo giữa chuột nhắt chủng KK có rối loạn dung nạp glucose với chuột béo bệu lông vàng, tạo ra con lai KK-Ay có glucose huyết tăng cao và kháng insulin mạnh [17, 21,23, 29] Ngoài ra còn có chuột nhắt ob/ob(obese), db/db(diabetes), chuột cống ZDF (Zucker diabetic fatty), chuột cống... dung dịch đệm citrat (pH 4,5) - 31 Hình 11 Gây mô hình ĐTĐ typ1 bằng STZ - Định lợng glucose huyết sau 72h, lựa chọn chuột có glucose huyết 10mmol/L và chia thành các lô nghiên cứu - Cho chuột uống thuốc và đánh giá tác dụng hạ glucose huyết tại thời điểm trớc và sau khi uống thuốc Lô uống dịch chiết đợc tiến hành so sánh cới lô đối chứng âm (uống dung môi pha thuốc) ; và lô chứng dơng (uống glyclazid)