Thẩm Định Quy Trình Nhận Dạng 10 Týp Kháng Nguyên Phế Cầu Trong Vắc Xin Synflorix

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ──────*****────── LÊ THỊ HÒA THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH NHẬN DẠNG 10 TÝP KHÁNG NGUYÊN PHẾ CẦU TRONG VẮC XIN SYNFLORIX™ LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Hà Nội - 2015 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ──────*****────── LÊ THỊ HỊA THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH NHẬN DẠNG 10 TÝP KHÁNG NGUYÊN PHẾ CẦU TRONG VẮC XIN SYNFLORIX™ Chuyên ngành : Động vật học (Vi sinh vật học) Mã số : 60420103 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS Phạm Văn Hùng Hà Nội - 2015 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận văn “Thẩm định quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™” cơng trình nghiên cứu cá nhân thực hướng dẫn TS Phạm Văn Hùng Các nội dung nghiên cứu kết trình bày luận văn trung thực rõ ràng Hà Nội, ngày 29/10/2015 Học viên Lê Thị Hịa Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Lời xin đươ ̣c bày tỏ lòng biế t ơn sâu sắ c tới giáo viên hướng dẫn: TS Phạm Văn Hùng, Phó viện trưởng Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế đã tận tình hướng dẫn truyề n d ạy nhiều kiến thức quý báu đồ ng thời đô ̣ng viên t ạo điều kiện thuận lợi cho quá trin ̀ h nghiên cứu hoàn thành luâ ̣n văn Tôi xin chân thành cảm ơn th ầy, cô giáo đồng nghiệp Viện Sinh Thái Tài Nguyên Sinh Vật-Viện Hàn Lâm Khoa học Công Nghệ Việt Nam giúp đỡ, chia sẻ truyền đạt cho nhiều kiến thức bổ ích q trình tơi học tập Viện Tơi xin chân thành cảm ơn tới anh, chị đồng nghiệp Khoa Quản lý chất lượng Viện kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế động viên, chia sẻ hỗ trợ công việc để tơi có điều kiện học tập thực tốt đề tài nghiên cứu luận văn Nhân dịp xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới Ban Lãnh đạo Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế, Ths Lưu Anh Thư đồng nghiệp Khoa Kiểm định vắc xin Vi khuẩn, phòng Tổ chức cán bộ, phòng Khoa học Đào tạo đã hỗ trợ tạo điều kiện giúp đỡ tơi q trình học tập, làm việc để tơi hồn thành luận văn Đặc biệt, tơi xin dành những tiǹ h cảm thân thương nhấ t gửi tới gia điǹ h tôi, người đã luô n bên , ủng hộ , đô ̣ng viên tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn Xin trân trọng cảm ơn ! Học viên Lê Thị Hịa Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt BSA Bovine Serum Albumin Huyết bò CV Coefficient Variation Hệ số biến thiên DT Diphtheria toxoid Giải độc tố Bạch Hầu ELISA Enzyme-linked Immunosorbent Phương pháp miễn dịch gắn assay Enzyme EU European Union Liên hiệp Châu âu GMP Good Manufacturing Practice Thực hành sản xuất tốt GSK Glaxo Smith Kline ICH IEC ISO IU International Conference on Hiệp hội quốc tế hài hòa Harmonization kỹ thuật Dược phẩm International Electrotechnical Ủy ban kỹ thuật điện quốc tế Commission International Organization for Standardization Internationnal Unit Tổ chức tiêu chuẩn quốc tế Đơn vị quốc tế KKT Kháng kháng thể KN Kháng nguyên KT Kháng thể LAL Limulusamoebocyte lysate LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of Quantitation Giới hạn định lượng OD Optic density Độ hấp thu mẫu thử Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn PCV Pneumococcal Polysaccharide vaccine PD PPV Vắc xin phế cầu cộng hợp Protein D Pneumococcal polysaccharide Vắc xin phế cầu vaccine polysaccharide PS Polysaccharide SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn SOP Standard Operating Procedure Qui trình chuẩn NICVB NTHi National Institute for Control of Viện kiểm định quốc gia vắc Vaccine and Biologicals Non-typeable H influenzae xin sinh phẩm y tế Haemophilus influenza không định týp Giá trị trung bình TB TMB Tetramethylbenzidine Cơ chất TRS Technical Report Series Báo cáo kỹ thuật TT Tetanus toxoid Giải độc tố uốn ván TTB Trang thiết bị WHO World Health Organization Tổ chức Y tế Thế giới USP United States of Pharmacopeia Dược điển Mỹ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Phế cầu khuẩn số bệnh gây phế cầu khuẩn 1.1.1 Phế cầu khuẩn 1.1.2 Một số bệnh gây phế cầu khuẩn 1.2 Vắc xin phế cầu vắc xin Synflorix™ 1.2.1 Vắc xin phế cầu 1.2.2 Vắc xin Synflorix™ 10 1.3 Phương pháp phân tích miễn dịch sử dụng emzym đánh dấu 15 1.3.1 Nguyên lý chung 15 1.3.2 Một số phương pháp ELISA 15 1.4 Thẩm định quy trình 18 1.4.1 Định nghĩa thẩm định quy trình 18 1.4.2 Phân loại thẩm định quy trình 19 1.4.3 Các thơng số thẩm định quy trình 23 1.5 Thẩm định quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin SynflorixTM phương pháp ELISA 27 CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.1 Đối tượng nghiên cứu 28 2.3 Phương pháp nghiên cứu 30 2.3.1 Thiết kế thử nghiệm 30 2.3.2 Cỡ mẫu 30 2.3.3 Quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin SynflorixTM phương pháp ELISA 30 2.3.4 Xây dựng quy trình thẩm định cho thông số tiêu chuẩn chấp thuận thông số cần thẩm định 34 2.3.5.Cách tính tốn giá trị cut-off cho thơng số 36 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 37 3.1 Giới hạn phát 37 3.2 Độ mạnh 44 3.3 Độ đặc hiệu 48 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 60 4.1 Thử nghiệm có giá trị 60 4.2 Giới hạn phát 60 4.3 Độ mạnh 62 4.4 Độ đặc hiệu 63 KẾT LUẬN 64 KIẾN NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Thành phần týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™ 11 Bảng 1.2 Các thông số dùng thẩm định toàn phần 20 Bảng 1.3 Các thông số dùng thẩm định phần 21 Bảng 1.4 Các thông số dùng tái thẩm định 22 Bảng 1.5 Các thông số dùng thẩm định 26 Bảng 2.1 Mẫu chuẩn, hóa chất sử dụng cho thí nghiệm 28 Bảng 2.2 Dụng cụ, thiết bị sử dụng cho thí nghiệm 29 Bảng 2.3 Cơng thức tính giá trị cut-off cho thông số 36 Bảng 3.1 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp qua lần thử nghiệm 37 Bảng 3.2 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp qua lần thử nghiệm 38 Bảng 3.3 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 7F qua lần thử nghiệm 38 Bảng 3.4 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 14 qua lần thử nghiệm 39 Bảng 3.5 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 19F qua lần thử nghiệm 40 Bảng 3.6 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp qua lần thử nghiệm 40 Bảng 3.7 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 9V qua lần thử nghiệm 41 Bảng 3.8 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 18C qua lần thử nghiệm 42 Bảng 3.9 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 6B qua lần thử nghiệm 42 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn Bảng 3.10 Giới hạn phát thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 23F qua lần thử nghiệm 43 Bảng 3.11 Kết lần thử nghiệm nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu 45 Bảng 3.12 Kết lần thử nghiệm nhận dạng 10 týp kháng nguyên người thực 47 Bảng 3.13 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp mẫu thử 49 Bảng 3.14 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp mẫu thử 50 Bảng 3.15 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 7F mẫu thử 51 Bảng 3.16 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 14 mẫu thử 52 Bảng 3.17 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 19F mẫu thử 53 Bảng 3.18 Kết lần thử nghiệm nhận dạng týp mẫu thử 54 Bảng 3.19 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 9V mẫu thử 55 Bảng 3.20 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 18C mẫu thử 56 Bảng 3.21 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 6B mẫu thử 57 Bảng 3.22 Kết lần thử nghiệm nhận dạng kháng nguyên týp 23F mẫu thử 58 Bảng 4.1 Giới hạn phát týp kháng nguyên phế cầu 61 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn CHƢƠNG BÀN LUẬN 4.1 Thử nghiệm có giá trị Để đánh giá thử nghiệm có giá trị nhóm nghiên cứu thiết kế thử nghiệm cách sử dụng chứng dương công thức tính giá trị cut-off chứng dương, kháng thể đặc hiệu cho 10 týp kháng nguyên nhà sản xuất cung cấp; tất trang dụng cụ, trang thiết bị tham gia thử nghiệm thẩm định hiệu chuẩn, người tham gia thử nghiệm đánh giá tay nghề Theo tiêu chuẩn: Thử nghiệm có giá trị tất giếng nhỏ chứng dương cho phản ứng dương tính (Giá trị OD trung bình týp kháng nguyên phế cầu lớn giá trị cut-off giếng cột 11 nhỏ chứng dương), trình thử nghiệm tính tốn kết nhóm thử nghiệm thu kết chứng dương hồn tồn dương tính quan sát định tính mắt thường hình 3.1; 3.2; 3.3 bên cạnh tính tốn giá trị OD trung bình chứng dương tất týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™ lơn giá trị cut-off cho thông số giới hạn phát hiện, độ mạnh, độ đặc hiệu Như kết luận thử nghiệm có giá trị thông số cần kiểm tra qua lần thực thử nghiệm Từ tiếp tục tiến hành đọc kết thử nghiệm ghi lại tất giá trị OD trung bình mẫu thử cho thông số cần đánh giá qua lần thực thử nghiệm 4.2 Giới hạn phát Giới hạn phát là lượng nhỏ mẫu phân tích xác định khơng định lượng giá trị xác Áp dụng 60 nghiên cứu này, giới hạn phát quy trình độ pha lỗng lớn mẫu thử mà phản ứng cịn dương tính Trong nghiên cứu này, dựa vào giá trị OD thu độ lặp lại, tiến hành pha loãng bậc 10 týp kháng nguyên phế cầu Nhóm nghiên cứu phải tiến hành thử nghiệm nhiều lần với độ pha lỗng khác để thiết kế thử nghiệm giới hạn phát cho týp kháng nguyên phế cầu độ pha loãng tương ứng phần kết nêu, kết giới hạn phát thể sau: Bảng 4.1 Giới hạn phát týp kháng nguyên phế cầu Týp kháng nguyên phế cầu Giới hạn phát (độ pha loãng) Týp 1/80 Týp 1/320 Týp 1/640 Týp 6B 1/80 Týp 7F 1/40 Týp 9V 1/320 Týp 14 1/80 Týp 18C 1/40 Týp 19F 1/320 10 Týp 23F 1/80 STT Giới hạn phát týp kháng nguyên phế cầu nằm khoảng từ độ pha loãng 1/40 đến 1/640 Như vậy, khả phát kháng nguyên quy trình cao có khác giới hạn phát týp kháng nguyên Sở dĩ có khác giới hạn phát 61 týp kháng nguyên hàm lượng kháng nguyên týp vắc xin thành phẩm khác sản phẩm tạo thành phản ứng kết hợp kháng nguyên - kháng thể khơng bị rửa trơi quy trình kháng nguyên khác 4.3 Độ mạnh Độ mạnh quy trình thể qua việc đánh giá độ lặp lại, độ xác trung gian điều kiện hay thay đổi điều kiện thử nghiệm mẫu thử, quy trình cho kết Với độ lặp lại, người tiến hành lần thử nghiệm lô vắc xin Synflorix™ làm thử nghiệm đúp cho lần Kết lần thử nghiệm nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu: 1, 4, 7F, 14, 19F, 5, 9V, 6B, 18C 23F lớn giá trị cut-off cho kết dương tính (bảng 3.12) Kết lần thử nghiệm ổn định nằm khoảng TB ± 2SD tương ứng với khoảng tin cậy 95% CV týp kháng nguyên phế cầu nhỏ 20 Để xác định độ xác trung gian, chúng tơi thiết kế có thay đổi thời gian người thực Nghiên cứu thực lần thử nghiệm người mẫu vắc xin ngày khác làm thử nghiệm đúp cho lần So sánh kết quả, người thực khác nhau, thời gian tiến hành khác kết OD trung bình tất týp vắc xin Synflorix™ lớn giá trị cut-off dương tính với kháng nguyên phế cầu Kết người thực phân tích phần mềm phân tích thống kê SPSS týp kháng ngun phế cầu khơng khác biệt có ý nghĩa thống kê kết thử nghiệm Như vậy, với quy trình, thực mẫu thử, trang thiết bị, hai người thử nghiệm khác khoảng thời gian khác 62 cho kết lặp lại lần thử nghiệm người thực cho kết tương đương (dương tính), quy trình nhận dạng đạt độ mạnh 4.4 Độ đặc hiệu Độ đặc hiệu khả xác định chất cần tìm có mẫu thử có mặt thành phần khác tá dược, tạp chất, sản phẩm phụ gia , để đánh giá độ đặc hiệu nhóm nghiên cứu sử dụng mẫu thử mẫu có chứa 10 týp kháng nguyên phế cầu (vắc xin Synflorix™); mẫu thử mẫu thêm (thêm lượng 10 týp kháng nguyên phế cầu biết vào vắc xin thương hàn - Typhim vi có chất với kháng nguyên phế cầu polysaccharide có hàm lượng kháng nguyên Vi 1,0 μg/ml theo tỉ lệ 1:1); mẫu thử mẫu trắng (mẫu không chứa 10 týp kháng nguyên phế cầu mẫu vắc xin thương hàn Vi - Typhim Vi) Kết bảng từ 3.13 đến 3.22 cho thấy, mẫu trắng tất giá trị OD trung bình mẫu nhỏ giá trị cut-off qua lần thực thử nghiệm chứng tỏ xảy phản ứng âm tính tức khơng có mặt 10 týp kháng nguyên phế cầu týp 1, 4, 7F, 14, 19F, 5, 9V, 6B, 18C 23F; mẫu thêm mẫu Synflorix™ giá trị OD trung bình hai mẫu lớn giá trị cut-off; hai mẫu dương tính với 10 týp kháng nguyên phế cầu týp 1, 4, 7F, 14, 19F, 5, 9V, 6B, 18C 23F; mặt khác kết OD thu mẫu thêm mẫu Synflorix™ tương đương nhau, tức có kháng nguyên phế cầu tham gia phản ứng kết hợp đặc hiệu với kháng thể tương ứng Như vậy, quy trình thử nghiệm cho kết dương tính có mặt chất cần nhận dạng (mẫu vắc xin SynflorixTM) , có lẫn thành phần khác (mẫu có chứa vắc xin SynflorixTM vắc xin Typhim Vi) âm tính khơng có mặt chất cần nhận dạng (mẫu vắc Typhim Vi) điều cho thấy quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu đạt độ đặc hiệu 63 KẾT LUẬN Quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™ có độ tin cậy cao với: Giới hạn phát Giới hạn phát kháng nguyên phế cầu nằm khoảng từ độ pha loãng 1/40 đến 1/640 Độ mạnh thử nghiệm Quy trình đạt độ mạnh thay đổi điều kiện thực quy trình, giống thực thử nghiệm thường quy Các kết thu sau thay đổi khác biệt có ý nghĩa thống kê Độ đặc hiệu Độ đặc hiệu quy trình đánh giá thông qua việc nhận dạng kháng nguyên phế cầu mẫu có chứa nhiều thành phần khác nhau, cho kết dương tính 64 KIẾN NGHỊ Quy trình “nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix™” đạt yêu cầu giới hạn phát hiện, độ mạnh, độ đặc hiệu theo tiêu chuẩn WHO Đề nghị sử dụng quy trình để kiểm tra nhận dạng vắc xin Synflorix™ Viện Kiểm định Quốc gia Vắc xin Sinh phẩm Y tế 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [1] Bộ môn Vi sinh y học - trường Đại học Y Hà Nội (2007),“Vi sinh y học”, nhà xuất Y học, Hà nội, tr 160-163 [2] Bộ Y tế (2009), "Dược điển Việt Nam IV", nhà xuất Y học, Hà Nội, mục 15.11.Phụ lục 323 [3] Đặng Đức Hậu (2008), “Xác xuất thống kê”, nhà xuất giáo dục, y tế, tr 80-89, 141-143 [4] Hoàng Thanh Dương (2009), “Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp”, văn phịng Cơng nhận chất lượng, Tổng cục Tiêu chuẩn đo lường chất lượng [5] Học viện quân y (1992),“Vi sinh vật học”, nhà xuất giáo dục đào tạo chuyên nghiệp, Hà nội, tr 242-243 [6] Học viện quân y (2008),“Vi sinh vật y học”, nhà xuất Quân đội nhân dân, tr 96 [7] Học viện quân y (1999), “Bệnh học truyền nhiễm”, nhà xuất y học, Hà nội, tr.15-17 [8] Lê Văn Hiệp (2006), “Vắc xin học vấn đề bản”, nhà xuất y học tr 286 [9] Lê Văn Phủng (2009), “Vi khuẩn y học”, nhà xuất Giáo dục Việt Nam tr 33-37 [10] Nguyễn Lê Huyền Trang (2014), “Hướng dẫn thầm định thử nghiệm”, tài liệu nội Viện kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế [11] Viện Kiểm định quốc gia vắc xin sinh phẩm y tế ( 2014), “Bộ tiêu chuẩn xuất xưởng vắc xin- sinh phẩm”, tài liệu lưu hành nội bộ, tr.150 – 155 [12] Viện kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia (2010), “Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật”, nhà xuất khoa học kỹ thuật, tr.10-59 Tài liệu tiếng anh [13] Anh DD, Kilgore PE, Slack MP, Nyambat B, le Tho H, Yoshida LM, Nguyen HA, Nguyen CD, Chong CY, Nguyen D, Ariyoshi K, Clemens JD, Jodar L (2009), “Surveillance of pneumococcal-associated disease among hospitalized children in Khanh Hoa Province, Vietnam”, Clin Infect Dis, 48:57–64 [14] Black RE, Cousens S, Johnson HL, Lawn JE, Rudan I, Bassani DG, Jha P, Campbell H, Walker CF, Cibulskis R, Eisele T, Liu L, Mathers C (2010), “Global, regional, and national causes of child mortality in 2008: a systematic analysis”, Lancet, 375:1969–1987 [15] Bogaert D, Ha NT, Sluijter M, Lemmens N, De Groot R, Hermans PW (2002), “Molecular epidemiology of pneumococcal carriage among children with upper respiratory tract infections in Hanoi, Vietnam”, J Clin Microbiol, 40:3903–3908 [16] Chung Keel Lee (2011), “Validation system and inspection”, WHO global Learning Opptunities for vaccine quanlity, KFDA [17] European Medicines Agency (2009), “Assessment report for Synflorix”, London, UK [18] GAVI Alliance (2013), “Pneumococcal disease”, GAVI Factsheet, Geneva [19] Guidelines for Independent Lot Release of Vaccines by Regulatory Authorities, World Health Organization, 2010 [20] ICH Q2A (1995),“Guidline for validation of analytical methods: definitions and terminology”,CPMP/ICH/381/95, The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements Registration of Pharmaceuticals for Human Use, London, UK for [21] ICH Q2B,(1995), “Guidline for validation of analytical procedures: methodology”, CPMP/ICH/381/95, The International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use , London, UK [22] Kim SH, Song JH, Chung DR, Thamlikikul V, Yang Y, Wang H, Lu M, So TM, Hsueh PR, Yasin RM, Carlos CC, Pham HV, Lalitha MK, Shimono N, Perera J, Shibl AM, Baek JY, Kang CI, Ko KS, Peck KR (2012), “Changing trend of antimicrobial resistance and serotypes in Streptococcus pneumoniae in Asian countries: an ANSORP study”, Antimicrob Agents Chemother, 56:1418-1425 [23] Lin T Z Summary of invasive pneumococcal disease burden among children in the Asia-Pacic region Vaccine 28 (2010), pp7589–7605 [24] Lonneke Levels (2010), "Method validation, part one" Nederlands Vaccin Institute (NVI) [25] Teeranart Jivapaisarnpong (2006), "Validation of bioassay" Training course on quality control of vaccines used in EPI, Ha Noi [26] Summary Protocol for Synflorix™ vaccine (2010), GSK [27] USP (2013), “Validation and Verification of Analytical procedures” Training course, Hà nội pp 3-7 [28] WHO (1992), "Good manufacturing practices for biological products WHO expert committee on biological standardization" Technical Report Series No.822, forty - second Report [29] WHO (1997),“ Part 2: validation,WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirement”, Geneva [30] WHO-TRS No 927 Annex (2005), “Recommendation for production and control of pneumococcal conjugate vaccines”, pp72-84 [31] Whale walker (2008), “The ELISA guide book”, 2nd edition, Humana Press, New York, USA [32] WHO (1997), “Manual of laboratory methods” For testing of vaccines used in the WHO Expanded programe on Immunization, pp 72-86 [33] WHO (2001), “Part 2: Validation”, A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements, pp.63 - 85 [34] WHO (2004), “Part 2: Validation”, A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements, pp.63 - 87 [35] WHO (2006), “Validation” Supplementary guidelines on good manufacturing practice (GMP) Technical report series, No 937, annex 4, pp 107-119 [36] WHO (2000), “Supplementary information on vaccine safety”, departmnet of vaccines and biologys, pp75 [37] WHO in- country workshop on analytical method validation, 17 February 2014, Ha Noi –Viet Nam [38] WHO position paper-Wkly Epidemiol Dec 2012, 87 (14): 129-144 [39] Yeowon Sohn (2011), “Analytical method validation of bioassay” Training course on quanlity control of vaccines used in EPI, Ha Noi Các trang Web [40] Http://niheold.nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-kythuat/954/Qui-trinh-nuoi-cay-phan-lap-vi-khuan-Streptococcuspneumoniae.vhtm [41] Http://www.historyofvaccines.org/content/timelines/Pneumococcal [42] Http://www.phoiviet.com/benh-tiem-ngua-phe-cau [43] Http://www.nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-kythuat/147/phe-cau-khuan-spneumoniae.vhtm PHỤ LỤC PHỤ LỤC CÁCH PHA LOÃNG KHÁNG THỂ Kháng thể Độ pha kháng týp lỗng Cơng thức pha 1/100 40µl dung dịch mẹ + 3960µl dung dịch post-coating 7F 14 - Dung dịch 1: 10µl dung dịch mẹ + 490µl dung dịch post-coating (1/50) 19F 1/5000 - Dung dịch 2: 50µl dung dịch + 4950µl dung dịch post-coating (1/100) - Dung dịch 1: 10µl dung dịch mẹ + 990µl dung dịch post-coating (1/100) - Dung dịch 2: 50µl dung dịch + 4950µl dung dịch 1/150000 post-coating (1/100) - Dung dịch 3: 350µl dung dịch + 4900µl dung dịch 9V post-coating (1/15) 18C 1/250000 - Dung dịch 1: 10µl dung dịch mẹ + 990µl dung dịch post-coating (1/100) - Dung dịch 2: 50µl dung dịch + 4950µl dung dịch post-coating (1/100) - Dung dịch 3: 200µl dung dịch + 4800µl dung dịch post-coating (1/25) 6B 23F 1/50 50µl dung dịch mẹ + 2450µl dung dịch post-coating PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH RỬA VÀ HẬU PHỦ PHIẾN Pha dung dịch rửa: Tên hóa chất Công thức NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g Na2HPO4 1.15g KCl 0.2g Tween 20 1ml Nước cất lần Vừa đủ 100ml Pha dung dịch hậu phủ phiến PBS Tween 20 – BSA 1%: Tên hóa chất BSA Dung dịch rửa Công thức 1g 100ml Chú ý: Sử dụng không tháng kể từ ngày pha chế PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH DỪNG PHẢN ỨNG Tên hóa chất Cơng thức H2SO4 98% 2.717ml Nước cất lần Vừa đủ 100ml Chú ý: Sử dụng không tháng kể từ ngày pha chế PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH ĐỆM CARBONATE 0,05M a b Pha dung dịch đệm carbonate 0,2M: Tên hóa chất Công thức Natri bicarbonate 1.172g Natri carbonate 0,636g Nước cất lần Vừa đủ 100ml Pha dung dịch đệm carbonate 0,05M: Tên hóa chất Cơng thức Dung dịch đệm carbonate 0,2M 25ml Nước cất lần 75ml Chú ý: Sử dụng không tháng kể từ ngày pha chế PHỤ LỤC CÔNG THỨC PHA DUNG DỊCH CỘNG HỢP - Dung dịch 1: Tên hóa chất Dung dịch hậu phủ phiến (post-coating) Dung dịch Protein A – peroxidase - Cơng thức 980 µl 20µl Dung dịch 2: Tên hóa chất Cơng thức Dung dịch hậu phủ phiến (post-coating) 9.1ml Dung dịch 15ml Chú ý: Dung dịch dùng sau pha ... mạnh quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix? ?? Đánh giá độ đ ặc hiệu quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix? ?? Giới hạn phát quy trình nhận dạng. .. dụng quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên chứa vắc xin Synflorix? ?? áp dụng phòng kiểm định NICVB Chúng tơi tiến hành đề tài ? ?Thẩm định quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin Synflorix? ??”... quy trình nhận dạng cơng nhận theo WHO ISO17025; quy trình nhận dạng 10 týp kháng nguyên phế cầu vắc xin SynflorixTM cần thẩm định toàn phần Thẩm định toàn phần cho thử nghiệm nhận dạng cần thông