Hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro một số giống hoa cẩm chướng cắt cành (dianthus caryophyllus l )

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN - - NGUYỄN THỊ THANH HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO MỘT SỐ GIỐNG HOA CẨM CHƢỚNG CẮT CÀNH (Dianthus caryophyllus L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lí học thực vật HÀ NỘI – 2017 TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN - - NGUYỄN THỊ THANH HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO MỘT SỐ GIỐNG HOA CẨM CHƢỚNG CẮT CÀNH (Dianthus caryophyllus L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Sinh lí học thực vật Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS La Việt Hồng HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS La Việt Hồng tận tình hƣớng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 2, Ban Chủ nhiệm khoa Sinh – KTNN, Phòng thí nghiệm sinh lý học thực vật, khoa Sinh – KTNN, Trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện suốt trình thực đề tài Trong thời gian thực đề tài nhận đƣợc giúp đỡ tận tình cô Mai Thị Hồng – Phòng thí nghiệm Sinh lý học thực vật giúp đỡ, đóng góp ý kiến để hoàn thành khóa luận này, nhân xin chân thành cảm ơn Cuối xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, tạo điều kiện giúp đỡ suốt thời gian học tập nhƣ hoàn thành khóa luận Mặc dù cố gắng nhƣng điều kiện thời gian trình độ chuyên môn nhiều hạn chế nên không tránh khỏi thiếu sót, mong nhận đƣợc góp ý quý thầy cô để khóa luận hoàn thiện Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Thị Thanh LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu đề tài: ― Hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro số giống hoa cẩm chƣớng cắt cành (Dianthus caryophyllus L)‖ kết nghiên cứu riêng TS La Việt Hồng hƣớng dẫn Các số liệu, kết nghiên cứu trung thực không trùng lặp với kết nghiên cứu ngƣời khác Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Thị Thanh DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT BAP : 6-Benzyl amino purin NAA : Napthalene acetic acid CT : Công thức Agar : Thạch Nxb : Nhà xuất MS : Murashige Skoog, 1962 ĐC : Đối chứng K : Kinetin MỤC LỤC MỞ ĐẦU Error! Bookmark not defined .Lý chọn đề tài Error! Bookmark not defined 2.Mục đích nghiên cứu Error! Bookmark not defined 3.Nhiệm vụ nghiên cứu Error! Bookmark not defined 4.Phạm vi nghiên cứu Error! Bookmark not defined Ý nghĩa lý luận thực tiễn Error! Bookmark not defined NỘI DUNG Error! Bookmark not defined CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Error! Bookmark not defined 1.1 Giới thiệu họ Cẩm chƣớng (Caryophyllaceae) Error! Bookmark not defined 1.1.1 Phân loại phân bố Error! Bookmark not defined 1.1.2 Tính thẩm mỹ giá trị kinh tế Error! Bookmark not defined 1.1.3 Đặc điểm sinh học Error! Bookmark not defined 1.1.4 Tình hình nghiên cứu nước Error! Bookmark not defined 1.1.5 Tình hình nghiên cứu nước Error! Bookmark not defined CHƢƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Error! Bookmark not defined 2.1 Vật liệu nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm Error! Bookmark not defined 2.3 Môi trƣờng nuôi cấy Error! Bookmark not defined 2.4 Điều kiện nuôi cấy: Error! Bookmark not defined 2.5 Phƣơng pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.5.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm Error! Bookmark not defined 2.5.2 Phương pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.5.3 Phương pháp phân tích thống kê số liệu Error! Bookmark not defined CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined 3.1 Hoàn thiện giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu ba giống cẩm chƣớng Error! Bookmark not defined 3.1.1 Giống cẩm chướng Trắng viền đỏ Error! Bookmark not defined 3.1.2 Giống cẩm chướng Trắng cút Error! Bookmark not defined 3.1.3 Giống cẩm chướng Hồng cánh sen Error! Bookmark not defined 3.2 Hoàn thiện giai đoạn tái sinh nhân nhanh chồi in vitro ba giống cẩm chƣớng Error! Bookmark not defined 3.2.1 Giống cẩm chướng Trắng viền đỏ Error! Bookmark not defined 3.2.2 Giống cẩm chướng Trắng cút Error! Bookmark not defined 3.2.3 Giống cẩm chướng Hồng cánh sen Error! Bookmark not defined 3.3 Hoàn thiện giai đoạn rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh chồi cẩm chƣớng Error! Bookmark not defined KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Error! Bookmark not defined Kết luận Error! Bookmark not defined Kiến nghị Error! Bookmark not defined TÀI LIỆU THAM KHẢO Error! Bookmark not defined Tài liệu nƣớc Error! Bookmark not defined Tài liệu nƣớc Error! Bookmark not defined Tài liệu từ website Error! Bookmark not defined PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1.1: Tỷ lệ mẫu nhiễm, tỷ lệ mẫu sống hiệu khử trùng cẩm chƣớng Trắng viền đỏ 19 Bảng 3.1.2: Tỷ lệ mẫu nhiễm, tỷ lệ mẫu sống hiệu khử trùng cẩm chƣớng Trắng cút 20 Bảng 3.1.3: Tỷ lệ mẫu nhiễm, tỷ lệ mẫu sống hiệu khử trùng cẩm chƣớng Hồng cánh sen 22 Bảng 3.2.1 Ảnh hƣởng BAP, Kinetin đến tái sinh nhân nhanh chồi giống cẩm chƣớng Trắng viền đỏ 24 Bảng 3.2.2 Ảnh hƣởng BAP, Kinetin đến tái sinh nhân nhanh chồi giống cẩm chƣớng Trắng cút 27 Bảng 3.2.1 Ảnh hƣởng BAP, Kinetin đến tái sinh nhân nhanh chồi giống cẩm chƣớng Hồng cánh sen 29 Bảng 3.1.1 Ảnh hƣởng NAA đến rễ ba giống cẩm chƣớng 31 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1.1 Cẩm chƣớng Trắng viền đỏ 20 Hình 3.1.2 Cẩm chƣớng Trắng cút 21 Hình 3.1.3 Cẩm chƣớng Hồng cánh sen 23 Hình 3.2.1 Cẩm chƣớng trắng viền đỏ .26 Hình 3.2.2 Cẩm chƣớng trắng cút 28 Hình 3.2.3 Cẩm chƣớng hồng cánh sen 30 Hình 3.3.1 Rễ cẩm chƣớng sau 15 ngày nuôi cấy 32 MỞ ĐẦU .Lý chọn đề tài Cây hoa cẩm chƣớng (Dianthus caryophyllus L) loại hoa cắt cành phổ biến cho suất giá trị kinh tế cao [18] Cây hoa cẩm chƣớng ngày đƣợc ngƣời tiêu dùng biết đến đa dạng màu sắc, hoa bền, thuận lợi cho việc bảo quản vận chuyển xa [14] Hiện nay, loại hoa cắt c n h đƣợc trồng, cẩm chƣớng bốn loại hoa cắt cành có giá trị thƣơng mại lớn Với ƣu điểm: màu sắc đẹp, đa dạng, phong phú, sản lƣợng cao, dễ vận chuyển, bảo quản,…cẩm chƣớng trở thành loài hoa cắt cành đƣợc trồng phổ biến giới, chiếm khoảng 17% tổng sản lƣợng hoa cắt cành [4] Ở Việt Nam cẩm chƣớng đƣợc đánh giá loại hoa có nhiều triển vọng sản xuất nhƣ xuất nƣớc ta Trong tháng đầu năm 2009 cẩm chƣớng loại hoa đứng thứ kim ngạch xuất (sau hoa cúc) với kim ngạch xuất đạt 1,5 triệu USD chiếm 27% tổng kim ngạch xuất hoa nƣớc [35] Ở đồng Bắc bộ, hoa cẩm chƣớng đƣợc trồng vụ năm, đó, việc giữ giống qua mùa hè điều kiện khí hậu không thuận lợi nhân giống cho vụ sau khó thực Về kỹ thuật nhân giống, sản xuất nhân giống chủ yếu phƣơng pháp giâm cành qua nhiều hệ, chất lƣợng kém, hệ số nhân thấp [14] Khi xã hội ngày phát triển, thu nhập nhu cầu thẩm mỹ ngƣời dân đƣợc nâng cao đời sống tinh thần ngày đƣợc coi trọng thú chơi hoa có vai trò đặc biệt quan trọng sống Sản xuất hoa trở thành ngành thƣơng mại có giá trị kinh tế cao, mang lại lợi ích lớn a b c d Hình 3.2.1 Cẩm chƣớng trắng viền đỏ a, BAP 0,1 mg/l b, BAP 0,2 mg/l c, K 0,2 mg/l d, K 0,5 mg/l 26 3.2.2 Giống cẩm chướng Trắng cút Bảng 3.2.2 Ảnh hƣởng BAP, Kinetin đến tái sinh nhân nhanh chồi giống cẩm chƣớng Trắng cút Công Số thức chồi/mẫu Chiều cao Độ đồng chồi (cm) chồi Đặc điểm Thủy tinh chồi hóa Hiệu BAP 4,03±0,31a Đều Xanh-mập - BAP 0,1 2,33±0,57ab 4,4±0,2a Đều Xanh-mập X BAP 0,2 3,33±0,57b 5,26±0,4c Đều Xanh-gầy - BAP 0,3 5±1c 3,06±0,15b Đều Xanh-mập - ĐC 1,33±0,57a Hiệu Kinetin K 0,1 2,67±0,57a 3,33±0,35a Đều Xanh-mập - K 0,3 3,33±0,57a 4,67±0,25b Đều Xanh-mập - K 0,5 5,67±1,15b 3,67±0,25c Không Xanh-gầy - với thí nghiệm, cột, kí tự theo sau khác a, b, c…thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α=0,05 Sau tiến hành thí nghiệm giống cẩm chƣớng Trắng cút thu đƣợc kết nhƣ sau: số chồi/mẫu dao động khoảng 1,76 – 6,82 chồi/mẫu; chiều cao chồi trung bình từ 2,91 – 4,92 cm Nhóm công thức bổ sung BAP cho hệ số nhân nhanh cao, chồi tƣơng đối đồng đều, mập, xanh Trong môi trƣờng bổ sung BAP 0,3 mg/l cho kết tốt nhất: số chồi dao động khoảng - chồi/ mẫu, chiều cao chồi từ 1,76 – 2,9 cm Môi trƣờng bổ sung BAP 0,2 mg/l cho kết tốt: số chồi/mẫu dao động từ 2,76 – 3,9 chồi/mẫu với chiều cao chồi khoảng 4,86 – 5,66 cm, nhiên công thức chồi không Môi trƣờng bổ sung BAP 0,1 mg/l cho kết thấp nhất: số chồi/mẫu 27 dao động từ 1,76 – 2,9 chồi/mẫu với chiều cao chồi khoảng 4,2 – 4,6 cm (Bảng 3.2.2) Nhóm công thức bổ sung Kinetin nồng độ khác thu đƣợc kết tốt, tốt công thức K 0,3: số chồi/mẫu dao động khoảng 2,76 – 3,9 chồi/mẫu; chiều cao chồi từ 4,42 – 4,92 cm (Bảng 3.2.2) b b a c c d Hình 3.2.2 Cẩm chƣớng trắng cút a, Đối chứng b, BAP 0,3 mg/l c, BAP 0,2 mg/l 28 d, K 0,3 mg/l 3.2.3 Giống cẩm chướng Hồng cánh sen Bảng 3.2.1 Ảnh hƣởng BAP, Kinetin đến tái sinh nhân nhanh chồi giống cẩm chƣớng Hồng cánh sen Công Số thức chồi/mẫu Chiều cao chồi (cm) Độ đồng Đặc điểm Thủy tinh chồi chồi hóa Hiệu BAP ĐC 1,67±0,57a 4,63±0,31c Đều Xanh-mập - BAP 0,1 2,33±0,57a 5,36±0,37a Đều Xanh-gầy X BAP 0,2 2,33±0,57b 5,13±0,21a Đều Xanh-gầy - BAP 0,3 5,33±0,57c 3,23±0,15b Đều Xanh-mập - Hiệu Kinetin K 0,1 3,23±0,57a 4,33±0,15a Đều Xanh-mập - K 0,3 5,43±0,57b 5,46±0,25b Đều Xanh-mập - K0,5 2,07±0,57ab 4,23±0,5a Không Xanh-mập X với thí nghiệm, cột, kí tự theo sau khác a, b, c…thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α=0,05 Sau tiến hành thí nghiệm giống cẩm chƣớng Hồng cánh sen thu đƣợc kết nhƣ sau: số chồi/mẫu dao động khoảng 1,5 – chồi/mẫu; chiều cao chồi trung bình từ 3,08 – 5,71 cm Thí nghiệm 1: Công thức ĐC cho hệ chồi tƣơng đối đồng đều, mập, xanh nhƣng không đẻ thêm chồi mới, công thức khác phát sinh nhiều chồi Trong môi trƣờng bổ sung BAP 0,3 mg/l cho kết tốt nhất: số chồi dao động khoảng 4,76 – 5,9 chồi/ mẫu, chiều cao chồi từ 3,03 – 3,38 cm Môi trƣờng bổ sung BAP (0,1; 0,2 mg/l) cho kết tốt: số chồi/mẫu thấp dao động từ 1,76 – 2,9 chồi/mẫu nhƣng chồi cao 29 khoảng 4,92 – 5,73 cm, nhiên công thức này, chồi gầy (Bảng 3.2.3) Thí nghiệm 2: Các môi trƣờng bổ sung Kinetin cho nhiều chồi, chồi mập xanh: số chồi/mẫu dao động khoảng 1,5 – chồi/mẫu; chiều cao chồi từ 3,73 – 5,71 cm Công thức K 0,3 mg/l cho kết tốt với số chồi từ 4,86 – 6; chiều cao chồi khoảng 5,21 – 5,71 cm (Bảng 3.2.3) b b b a c c d Hình 3.2.3 Cẩm chƣớng hồng cánh sen 30 a, BAP 0,3 mg/l b, BAP 0,1 mg/l c, BAP 0,2 mg/l d, K 0,3 mg/l 3.3 Hoàn thiện giai đoạn rễ - tạo in vitro hoàn chỉnh chồi cẩm chƣớng Sau hoàn thành việc nhân nhanh chồi hoa cẩm chƣớng in vitro, tiếp tục giai đoạn kích thích chồi rễ tạo hoàn chỉnh để chúng sống độc lập, phát triển tốt chuyển trồng vào bầu đất vào vƣờn ƣơm α-NAA auxin hay đƣợc sử dụng nông nghiệp nhƣ nhân giống thực vật in vitro lẽ α-NAA có độ bền vững hóa học cao, có tác sụng kích thích sinh trƣởng mạnh, kích thích hình thành rễ đặc biệt rễ bất định cành giâm, cành chiết mô nuôi cấy α-NAA nồng độ 0,1 – mg/l đƣợc dung phổ biến việc tạo rễ chồi in vitro đa số loài thực vật [15], [17], [21] Bảng 3.1.1 Ảnh hƣởng NAA đến rễ ba giống cẩm chƣớng Giống Trắng viền đỏ Trắng cút Chiều dài rễ Công thức % mẫu rễ Số rễ/mẫu CT1 (ĐC) 100% 3±1a 3,23±0,15a CT2 100% 3,67±0,57a 3,93±0,25b CT3 100% 6,67±0,57b 4,8±0,1c CT4 100% 3,33±1a 3,3±0,2a CT1 (ĐC) 100% 3,33±0,57a 3,03±0,15a CT2 100% 3,67±0,57a 3,33±0,21ab CT3 100% 4±1a 3,63±0,25b CT4 100% 5,67±1,15b 4,9±0,2c 31 (cm) Hồng cánh sen CT1 (ĐC) 100% 3,67±0,57ab 2,97±0,21a CT2 100% 3,33±0,57a 3,53±0,11b CT3 100% 4,67±0,57b 4,33±0,15c CT4 100% 6,33±1,15c 5,43±0,15d với thí nghiệm, cột, kí tự theo sau khác a, b, c…thể sai khác có ý nghĩa thống kê với α=0,05 Qua kết bảng 3.1.1 cho thấy việc bổ sung α-NAA vào môi trƣờng có tác động tốt cho hình thành rễ từ chồi in vitro, Sau 10 ngày nuôi cấy bắt đầu xuất rễ Cụ thể môi trƣờng công thức CT3 (MS + 0,2 mg/l NAA) tốt cho hình thành rễ giống Trắng viền đỏ, với số rễ trung bình đạt 6,67 chiều dài rễ 4,8 cm (Bảng 3.1.1) Công thức CT4 (MS + 0,3 mg/l NAA) tốt cho hình thành rễ giống Trắng cút Hồng cánh sen với số rễ trung bình lần lƣợt 5,67 6,33, chiều dài rễ lần lƣợt 4,9 cm 5,43 cm (Bảng 3.1.1) Hình 3.3.1 Rễ cẩm chƣớng sau 15 ngày nuôi cấy Với môi trƣờng bổ sung NAA 0,3 mg/l 0,2 mg/l kết thu đƣợc tƣơng đƣơng với kết công trình ‗Nghiên cứu quy trình nhân 32 giống hoa cẩm chƣớng SP1 (Diathus Caryophyllus Topaz) phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào‖ Lê Đức Thảo Nguyễn Thị Kim Lý (Viện di truyền nông nghiệp) có kết nhƣ sau: Giai đoạn tạo hoàn chỉnh: ½ MS + 6,5 g/l agar + 2% đƣờng + 0,2 mg/l NAA, tỷ lệ rễ: 93,11% Sự chênh lệch tỷ lệ rễ đề tài không đáng kể khoảng từ – % [14] 33 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận a Tạo vật liệu khỏi đầu Nồng độ khử trùng thích hợp cho giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu ba giống cẩm chƣớng là: Xử lý sơ + Gia ven 10% 15 phút cho hiệu khử trùng cao 93,2% giống Trắng cút, 92,3% giống Trắng viền đỏ, 89,6% giống Hồng cánh sen b Tái sinh nhân nhanh Môi trƣờng MS + 30 g/l đƣờng sacharose + g/l agar bổ sung BAP 0,2 mg/l thích hợp cho tái sinh nhân nhanh hai giống cẩm chƣớng Trắng cút Hồng cánh sen Môi trƣờng bổ sung BAP 0,1 mg/l thích hợp cho tái sinh nhân nhanh giống Trắng viền đỏ c Ra rễ - tạo hoàn chỉnh Môi trƣờng MS + 30 g/l dƣờng sacharose + g/l agar bổ sung NAA 0,3 mg/l thích hợp để rễ hai giống Trắng cút Hồng cánh sen; môi trƣờng bổ sung NAA 0,2 mg/l tốt cho việc rễ giống Trắng viền đỏ Cây in vitro hoàn chỉnh có chiều cao – cm, chiều dài rễ – cm thích hợp để rèn luyện tự nhiên Cây đƣợc nhân quy trình sinh trƣởng phát triển tốt Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu, đánh giá ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng khác đến trình nhân giống in vitro ba giống cẩm chƣớng: Trắng viền đỏ, Trắng cút, Hồng cánh sen, hoàn thiện môi trƣờng nhân giống in vitro đạt hiệu cao Tiếp tục nghiên cứu để tìm giá thể phù hợp cho tỷ lệ sống cao Đƣa vào sản xuất đại trà số lƣợng lớn cẩm chƣớng in vitro sạch, nâng cao chất lƣợng, số lƣợng giống thị trƣờng nƣớc 34 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu nƣớc Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Hân, Nguyễn Quang Thạch (2010), ― N g h i ê n cứu nhân giống hoa cẩm c h ƣ n g ( D i a n t h u s caryophyllus L.) kỹ thuật khí canh‖, Tạp chí Nông nghiệp phát triển nông thôn, Kỳ 2, Tháng 7/2010, Tr 14 – 18 Nguyễn Tiến Bân (chủ biên), (2005), Danh lục loài thực vật Việt Nam, tập III, Nxb Nông nghiệp Hà Nội Đặng Văn Đông - Dự án hợp tác quốc tế với IDRC Canada: “ Nuôi cấy sản xuất hoa thương mại miền Bắc Việt Nam” 1994-1996 - Trƣờng Đại học Nông nghiệp I - Hà Nội Đặng Văn Đông (2009), ―Thực trạng định hƣớng phát triển hoa cảnh Việt Nam‖, Báo cáo Hội nghị tổng kết khoa học công nghệ, Viện nghiên cứu rau Hà Nội ngày 19 – 20 tháng 3/2009 Đặng Văn Đông, Đinh Thế Lộc (2005), Công nghệ trồng hoa cho thu nhập cao, Quyển 5, NXB Lao động – Xã hội, Hà Nội Phạm Mỹ Linh (1998), ―Kết bƣớc đầu nghiên cứu đặc điểm hoa Cẩm chƣớng (Diathus Caryophyllus L.)‖ báo cáo khoa học Nguyễn Xuân Linh CTV (1998), ―Điều tra khả phát triển hoa khu vực miền Bắc Việt Nam‘‘, Tạp chí Nông nghiệp – Công nghiệp thực phẩm, số 2/1998 Nguyễn Xuân Linh (1998), ―Kỹ thuật trồng hoa‖ Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội 36 Nguyễn Thị Kim Lý, Nguyễn Xuân Linh (2005), Ứng dụng công nghệ sản xuất hoa, NXB Lao động, Hà Nội 10.Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng, Ong Xuân Phong (2013), Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 11.Nguyễn Thị Ngân (2007), Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật thủy canh khí canh nhân giống hoa cẩm chướng, Luận văn thạc sỹ nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp Hà Nội 12.Hoàng Minh Tấn, Nguyễn Quang Thạch Trần Văn Phẩm (2000), Giáo trình Sinh lý thực vật, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 13.Lê Đức Thảo (2003), “Nghiên cứu, tuyển chọn giống hoa Cẩm chướng (Dianthus Cariophylus L.) phương pháp nhân giống giâm cành”, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 14.Lê Đức Thảo, Nguyễn Thị Kim Lý, Hoàng Ngọc Thuận “Nghiên cứu quy trình nhân giống hoa Cẩm chướng SP1(Diathus Caryophyllus.Topaz.) phương pháp nuôi cấy mô tế bào”, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 15.Vũ Văn Vụ (1999), Sinh lý thực vật ứng dụng, Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 16.Hoàng Thị Thế (2012), Nghiên cứu nhân giống phương pháp nuôi cấy mô sản xuất hoa cẩm chướng (Dianthus caryophyllus L) Quảng Ninh, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Trung tâm Khoa học sản xuất Lâm Nông nghiệp, sở NN PTNN tỉnh Quảng Ninh 17.Hoàng Minh Tấn, Nguyễn Quang Thạch (2002), Chất điều hòa sinh trưởng trồng, Nxb Nông nghiệp 37 18.Nguyễn Mạnh Hùng (2009), Bước đầu nghiên cứu xử lý đợt biến thực nghiệm cẩm chướng tia Gammar, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Trƣờng Đại học Nông nghiệp Hà Nội 19.Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm, Hoàng Minh Tấn (2005), Sinh lý học thực vật, Nxb Giáo dục Việt Nam 20.Dƣơng Công Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật II, Nxb Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh 21.Nguyễn Nhƣ Khanh (1996), Sinh lý học sinh trưởng phát triển thực vật, Nxb giáo dục Tài liệu nƣớc 22.Donnan RS.(1998), ‗‗Carnation cropping in rockwool‘‘, International Society for Soilless Culture, Netherlands, 1998, p 117-134 23.Cox Rj (19970, ―Carnation production in Kenya‖, ActaHorticulture, No.216, p.43 24.D.M.U.B Dhanasekera (1998), Cut flower production in Srilankan, FAO, Bangkok, Thailand, p 50 – 54 25.Menguc A (1987), ―Carnation growing and problem in Turkey‖, Acta- Horticulture, No.216, p.23-28 26.Teresita L (1998), Cut flowerproduction in the Philippin, FAO, Bangkok, Thailand, p 42-49 27.Harbaugh D T., Nepokroeff M., Rabeler R K., Mc Neill J., Zimmer E A., & Wagner W L., 2009 A new lineage-based tribal classification of the family Caryophyllaceae Int J Plant Sci 171(2):185–198 28.Erixon Per & Oxelman Bengt (2008), ―Reticulate or tree-like chloroplast DNA evolution 38 in Sileneae (Caryophyllaceae)?‖ Molecular Phylogenetics and Evolution 48(1), tháng năm 2008: 313–325 29 Smissen R D., Clement J C., Garnock-Jones P J., & Chambers G K (2002), ―Subfamilial relationships in Caryophyllaceae as inferred from 5' ndhF sequences‖, American J Bot 89(8): 1336-1341 30.Fior S., Karis P O., Casazza G., Minuto L., & Sala F(2006), ―Molecular phylogeny of the Caryophyllaceae (Caryophyllales) inferred from chloroplast matK and nuclear rDNA ITS sequences‖ American J Bot 93(3): 399-411 31 Rudolph ―Antarctic Lichens and Vascular Plants: Their Significance‖ American Institute of Biological Sciences 15 (4): 285–287 32 Teresita L (1998), Cut flower production in the Philippin, FAO, Bangkok, Thailand, p 42 – 49 33.Yang X, G Liu, L.Zhu (1998), Cut flower production in China, FAO, Bangkok, Thailand, p5 – 13 Tài liệu Internet 34.http://www.clast.ac.vn/AP/tapchitrongnuoc/kcm/2001/tapchi10/4/te p46.htm 35.http:// www.rauhoaquavietnam.vn 36.http:// www.dalat.gov.vn 37.http:// www.quantumtuber.com 39 PHỤ LỤC Một số hình ảnh trình làm thí nghiệm Hình a: Hoa cẩm chƣớng in vitro Hình b: Kiểm tra mẫu nuôi cấy thao tác box cấy vô trùng Phòng Sinh lý học thực vật, Khoa Sinh-KTNN, Trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 40 ... cứu đề tài : Hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro số giống hoa cẩm chƣớng cắt cành (Dianthus caryophyllus. L) ” nhằm cải thiện số giai đoạn quy trình nhân giống in vitro loài hoa với mục đích... HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH – KTNN - - NGUYỄN THỊ THANH HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO MỘT SỐ GIỐNG HOA CẨM CHƢỚNG CẮT CÀNH (Dianthus caryophyllus L. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI... cung cấp nguồn giống hoa cẩm chƣớng bệnh, có chất l ợng cho thị trƣờng Mục đích nghiên cứu Hoàn thiện quy trình nhân in vitro số giống hoa cẩm chƣớng cắt cành (Dianthus caryophyllus L) , nhằm góp