Hoa đồng tiền có tên khoa học là “ Genbera Jamesonii Bolus ” có nguồn gốc từ Nam phi. Hoa đồng tiền là một loài hoa đẹp với hàng trăm giống hoa khác nhau đa dạng về màu sắc: đỏ, trắng, hồng, vàng, cam… Đến nay nó đã được trồng nhiều nơi trên thế giới điển hình là: Hà Lan, Mỹ, Đức, Nhật Bản, Trung Quốc.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHƯƠNG ĐÔNG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC – MÔI TRƯỜNG - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO HOA ĐỒNG TIỀN LÙN (Gerbera Jamesonii Bolus.)” Hà Nội – 2017 TRƯỜNG ĐẠI HỌC PHƯƠNG ĐÔNG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC – MÔI TRƯỜNG - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO HOA ĐỒNG TIỀN LÙN (Gerbera Jamesonii Bolus.)” Sinh viên thực Ngành Giáo viên hướng dẫn : Nguyễn Thị Minh Huyền : Công nghệ sinh học : TS Lê Đức Thảo Hà Nội – 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu Các số liệu, kết quả, hình ảnh đưa hoàn toàn trung thực, chưa sử dụng công bố công trình nghiên cứu khoa học trước Tôi xin cam đoan thông tin, tài liệu tham khảo luận văn ghi rõ nguồn gốc Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm lời cam đoan trước hội đồng nhà trường Hà Nội, ngày 28 tháng 05 năm 2017 Sinh viên thực Nguyễn Thị Minh Huyền i LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực tập Bộ môn Đột biến ưu lai – Viện di truyền nông nghiệp, quan tâm, dạy dỗ tận tình anh chị, cán phòng thí nghiệm, cố gắng, nỗ lực thân, hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Trước hết, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban Giám đốc viện, Ban chủ nhiệm Khoa Công nghệ sinh học toàn thể thầy cô giáo truyền đạt cho kiến thức, kỹ vô quan trọng quý báu suốt thời gian học tập, rèn luyện Viện Di Truyền Nông nghiệp Việt Nam Đặc biệt, xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Lê Đức Thảo, ThS Nguyễn Viết Dũng môn Đột biến ưu lai Viện di truyền nông nghiệp tận tình hướng dẫn, dạy dỗ suốt trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn đến toàn thể phòng, ban Khoa Công nghệ sinh học Viện di truyền nông nghiệp giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập, rèn luyện thực tập tốt nghiệp Và cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình người thân, bạn bè bên động viên tạo động lực cho suốt trình học tập, nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 28 tháng 05 năm 2017 Sinh viên ii Nguyễn Thị Minh Huyền iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT KHÓA LUẬN xi PHẦN I 1.2 Mục đích yêu cầu .2 1.2.1 Mục đích .2 1.2.2 Yêu cầu đề tài .2 PHẦN II 2.1 Nguồn gốc, phân loại đặc điểm thực vật học hoa đồng tiền 2.1.1 Nguồn gốc, vị trí, phân loại Hình 2.1: Đồng tiền lùn (Gerbera Jamesonii Bolus) 2.1.2 Đặc điểm thực vật học hoa đồng tiền 2.4 Kĩ thuật trồng chăm sóc hoa đồng tiền .10 2.4.1 Yêu cầu điều kiện ngoại cảnh 10 2.4.2 Kĩ thuật trồng, chăm sóc .11 2.5.1 Tình hình sản xuất hoa đồng tiền giới 13 2.5.2 Tình hình sản xuất Việt Nam .14 2.6 Tình hình nghiên cứu ứng dụng nuôi cấy mô nhân giống hoa đồng tiền 15 2.6.1 Tình hình nghiên cứu ứng dụng nuôi cấy mô nhân giống hoa đồng tiền giới 15 2.6.2 Tình hình nghiên cứu ứng dụng nuôi cấy mô nhân giống hoa đồng tiền nước .18 Từ nghiên cứu thấy rằng, hoa đồng tiền nhân nhanh tốt môi trường MS có bổ sung BA, α – NAA cho hiệu rễ tốt nhất, môi trường rễ thích hợp MS 21 Tóm lại, việc nhân nhanh hoa đồng tiền không cần kĩ thuật đặc biệt so với kĩ thuật nhân nhanh trồng khác, sử dụng chất điều tiết sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin auxin phổ biến BA, Kinetin, NAA để điều khiển phát sinh chồi, tạo rễ hoàn chỉnh 21 PHẦN III .22 VẬT LIỆU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu .22 iv 3.2 Nội dung nghiên cứu phương pháp nghiên cứu .22 3.2.1 Nội dung 1: Giai đoạn nuôi cấy khởi động 22 3.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 27 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 4.1 Kết giai đoạn nuôi cấy khởi động .28 Đây giai đoạn đưa mẫu từ môi trường bên vào nuôi cấy môi trường vô trùng, giai đoạn quan trọng định thành công nuôi mô Mục đích giai đoạn nhằm tạo lượng lớn mẫu vô trùng có khả sinh trưởng, phát triển tốt 28 Vật liệu sử dụng để vào mẫu hạt giống hoa đồng tiền lùn đóng gói bảo quản Thời gian khử trùng thích hợp phút Hạt nảy mầm sau tuần nuôi cấy Tỉ lệ hạt nảy mầm 98%, tỉ lệ nhiễm 0% Chồi đồng tiền lùn sinh trưởng phát triển khỏe mạnh Nuôi chồi môi trường MS tuần Kết cho thấy hạt giống đồng tiền lùn vật liệu phù hợp để tạo vật liệu khởi đầu 28 28 Hình 4.1 Chồi đồng tiền nảy mầm từ hạt sau tuần cấy môi trường MS 28 4.2 Kết giai đoạn nhân nhanh 29 4.2.1 Kết ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi in vitro 29 4.2.2 Kết ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro 32 4.2.3 Kết ảnh hưởng phối hợp BA nước dừa tới nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 36 4.2.4 Kết ảnh hưởng phối hợp BA Kinetin tới nhân nhanh chồi hoa đồng tiền .38 4.2.5 Kết ảnh hưởng phối hợp Kinetin α – NAA tới nhân nhanh chồi hoa đồng tiền 41 4.3 Kết giai đoạn tạo hoàn chỉnh .44 4.3.3 Kết ảnh hưởng than hoạt tính đến tạo rễ chồi in vitro 49 4.4 Giai đoạn vườn ươm 53 Bảng 4.9 Ảnh hưởng loại giá thể đến khả sinh trưởng sau nuôi cấy mô 53 Theo bảng 4.9 cho thấy: Gía thể trấu hun (công thức 2) có khả thoát nước tốt , giữ nước có thành phần Kali kiềm tính cao không thích hợp với hoa đồng tiền Tỷ lệ sống sau 30 ngày đạt thấp (23,33%) .53 Giá thể cát ngày phát triển tương đối tốt cát có khả thoát nước tốt xong giữ nước dễ bị rửa trôi chất dinh dưỡng nên chết nhiều sau 30 ngày, đồng thời mảnh yếu 53 Giá thể đất cát cho tỷ lệ sống đạt 46,67% Cây 20 ngày đầu sinh trưởng yếu, sau có tượng sinh trưởng trở lại không mạnh 53 Giá thể công thức đất +cát +trấu hun (1:1:1 ) có tỷ lệ sống cao đạt mức 86,67% Cây xuất làm tăng trưởng chiều cao tốt Giá thể có khả giữ thoát nước tốt, sau 30 ngày trồng v giá thể phát triển khỏe mạnh, cứng cáp, mở rộng, màu xanh thẫm Như giá thể thích hợp cho đồng tiền giai đoạn vườn ươm giá thể gồm đất + cát + trấu hun (1:1:1) 53 Nguyễn Văn Hồng (2009) khảo sát ảnh hưởng giá thể đến khả sinh trưởng phát triển sau nuôi cấy mô Kết nghiên cứu cho thấy giá thể đất + cát + trấu hun + vi sinh Sông Gianh (1:1:1:1/4) cho tỉ lệ sống cao đạt 98,33% Kết nghiên cứu sử dụng giá thể đất +cát + trấu hun (1:1:1) cho tỉ lệ sống cao đạt 86,67 % Kết thấp nghiên cứu Nguyễn Văn Hồng Tuy nhiên so sánh kết với kết công thức đất + cát+ trấu hun (1:1:1) nghiên cứu Nguyễn Văn Hồng có tỉ lệ sống sau tuần nuôi cấy đạt 76,11% kết có tỉ lệ sống cao 54 55 Giá thể: Cát Giá thể: Trấu hun 55 55 Giá thể: Đất + Cát (1:1) Giá thể:Đất +Cát+Trấu hun (1:1:1) 55 Hình 4.11 Hoa đồng tiền nuôi cấy mô sinh trưởng giá thể vườn ươm .55 PHẦN V 56 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 5.1 Kết luận 56 5.2 Kiến nghị 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 vi DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi in vitro (sau tuần nuôi cấy) Error: Reference source not found Bảng 4.2 Ảnh hưởng Kinetin đến khả nhân nhanh chồi in vitro (sau tuần nuôi cấy) Error: Reference source not found Bảng 4.3 Ảnh hưởng phối hợp BA nước dừa tới nhân nhanh chồi hoa đồng tiền (sau tuần nuôi cấy) Error: Reference source not found Bảng 4.4 Ảnh hưởng phối hợp BA Kinetin tới nhân nhanh chồi hoa đồng tiền (sau tuần nuôi cấy) .Error: Reference source not found Bảng 4.5 Ảnh hưởng phối hợp Kinetin α – NAA tới nhân nhanh chồi hoa đồng tiền (sau tuần nuôi cấy) Error: Reference source not found Bảng 4.6 Ảnh hưởng α – NAA đến tạo rễ chồi in vitro sau tuần nuôi cấy Error: Reference source not found Bảng 4.7 Ảnh hưởng IBA đến tạo rễ chồi in vitro sau tuần nuôi cấy Error: Reference source not found Bảng 4.8 Ảnh hưởng than hoạt tính tạo rễ chồi in vitro sau tuần nuôi cấy Error: Reference source not found Bảng 4.9 Ảnh hưởng loại giá thể đến khả sinh trưởng sau nuôi cấy mô Error: Reference source not found vii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1: Đồng tiền lùn (Gerbera Jamesonii Bolus) Error: Reference source not found Hình 3.1: Bao bì đồng tiền lùn nhiều màu .Error: Reference source not found Hình 4.1 Chồi đồng tiền nảy mầm từ hạt sau tuần cấy môi trường MS .Error: Reference source not found Hình 4.2: Chồi hoa đồng tiền in vitro môi trường có bổ sung BA sau tuần nuôi cấy 27 Hình 4.3: Chồi hoa đồng tiền nhân nhanh môi trường có bổ sung Kinetin sau tuần nuôi cấy .Error: Reference source not found Hình 4.4: Chồi đồng tiền môi trường có bổ sung BA nước dừa sau tuần nuôi cấy .Error: Reference source not found Hình 4.5: Chồi nhân nhanh môi trường bổ sung BA Kinetin Error: Reference source not found Hình 4.6: Hình ảnh chồi nhân nhanh môi trường bổ sung Kinetin + αNAA Error: Reference source not found Hình 4.7: Rễ chồi in vitro môi trường có bổ sung α – NAA sau tuần nuôi cấy .Error: Reference source not found Hình 4.8: Rễ chồi in vitro môi trường có bổ sung IBA sau tuần nuôi cấy .Error: Reference source not found Hình 4.9: Rễ chồi in vitro môi trường có bổ sung than hoạt tính sau tuần nuôi cấy Error: Reference source not found Hình 4.10: Rễ chồi đồng tiền sau tuần nuôi cấy môi có bổ sung chất khác Error: Reference source not found Hình 4.11: Hoa đồng tiền nuôi cấy mô sinh trưởng giá thể vườn ươm Error: Reference source not found viii NL 129773 648867E-01 77.53 0.000 * RESIDUAL 669577E-02 836971E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 19.0197 1.35855 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN7 15/04/17 14:54 - :PAGE MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS SR/C CDR 2.49000 4.26000 4.12000 4.93000 3 3.15000 2.68333 3.12000 2.15000 2.85000 2.29000 SE(N= 3) 0.136625E-01 0.167030E-01 5%LSD 8DF 0.445521E-01 0.544668E-01 82 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS SR/C CDR 3.03800 3.15800 3.12800 3.24600 3.27200 3.38400 SE(N= 5) 0.105829E-01 0.129381E-01 5%LSD 8DF 0.345099E-01 0.421898E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN7 15/04/17 14:54 - :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 83 VARIATE CT GRAND MEAN |NL DEVIATION C OF V | | (N= | STANDARD 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS % | | | | | SR/C 0.0000 15 3.1460 0.56982 0.23664E-01 0.8 15 3.2627 1.1656 0.28930E-01 0.9 0.0000 CDR 0.0000 0.0000 Ảnh hưởng IBA đến tạo rễ chồi in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR/C FILE TN6 15/04/17 14:52 - :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ========================================================== =================== 84 CT ****** 0.000 29.9840 7.49601 131880 NL 659401E-01 128.00 0.000 * RESIDUAL 412123E-02 515154E-03 -* TOTAL (CORRECTED) CDR 14 30.1200 2.15143 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE FILE TN6 15/04/17 14:52 - :PAGE VARIATE V004 CC LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ========================================================== =================== CT ****** 0.000 9.43296 85 2.35824 NL 100000 500000E-01 ****** 0.000 * RESIDUAL 929640E-06 116205E-06 -* TOTAL (CORRECTED) 14 9.53296 680926 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN6 15/04/17 14:52 - :PAGE MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS SR/C CDR 3.11000 4.77000 5.60000 3.89000 3 7.32000 4.49000 6.35000 3.17000 6.18000 2.65000 SE(N= 3) 0.131041E-01 0.196812E-03 5%LSD 8DF 0.427312E-01 0.641784E-03 86 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS SR/C CDR 5.60600 3.69400 5.69600 3.79400 5.83400 3.89400 SE(N= 5) 0.101504E-01 0.152450E-03 5%LSD 8DF 0.330995E-01 0.497124E-03 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN6 15/04/17 14:52 - :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 87 VARIATE CT GRAND MEAN |NL DEVIATION C OF V | | (N= | STANDARD 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS % | | | | | SR/C 0.0000 15 5.7120 1.4668 0.22697E-01 0.4 0.0000 CDR 0.0000 15 3.7940 0.82518 0.34089E-03 0.1 0.0000 Ảnh hưởng than hoạt tính đến tạo rễ chồi in vitro BALANCED ANOVA FOR VARIATE SR/C FILE TN8 15/04/17 14:55 - :PAGE VARIATE V003 HSNC LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF ER SQUARES SQUARES LN 88 MEAN ========================================================== =================== CT ****** 0.000 10.4582 2.61456 133000 NL 665000E-01 76.00 0.000 * RESIDUAL 700015E-02 875019E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 10.5982 757017 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE CDR FILE TN8 15/04/17 14:55 - :PAGE VARIATE V004 CC LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ========================================================== =================== 89 CT 706.39 0.000 1.41276 353190 111000 NL 555000E-01 111.00 0.000 * RESIDUAL 399996E-02 499995E-03 -* TOTAL (CORRECTED) 14 1.52776 109126 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN8 15/04/17 14:55 - :PAGE MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS SR/C CDR 2.69000 4.79000 4.05000 5.75000 3 1.85000 5.34000 1.85000 5.20000 2.05000 5.29000 90 SE(N= 3) 0.170784E-01 0.129099E-01 5%LSD 8DF 0.556910E-01 0.420978E-01 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS SR/C CDR 2.38800 5.17400 2.48800 5.26400 2.61800 5.38400 SE(N= 5) 0.132289E-01 0.999995E-02 5%LSD 8DF 0.431381E-01 0.326088E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN8 15/04/17 14:55 - :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 91 VARIATE CT GRAND MEAN |NL DEVIATION C OF V | | (N= | STANDARD 15) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON % OBS TOTAL SS RESID SS 0.87007 0.29581E-01 | | | | | SR/C 0.0000 15 2.4980 1.2 0.0000 CDR 0.0000 15 5.2740 0.33034 0.22361E-01 0.4 0.0000 Ảnh hưởng giá thể đến khả sinh trưởng phát triển sau nuôi cấy mô BALANCED ANOVA FOR VARIATE BDCC FILE TN9 17/04/17 21:52 - :PAGE VARIATE V003 BDCC LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF ER SQUARES SQUARES LN 92 MEAN ========================================================== =================== CT 4.21222 520.01 0.000 1.40407 NL 242000E-01 121000E-01 4.48 0.064 * RESIDUAL 162005E-01 270008E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 11 4.25262 386602 -BALANCED ANOVA FOR VARIATE BDSL FILE TN9 17/04/17 21:52 - :PAGE VARIATE V004 BDSL LN SOURCE OF VARIATION F RATIO PROB DF SUMS OF MEAN ER SQUARES SQUARES LN ========================================================== =================== 93 CT 3.44362 425.14 0.000 1.14787 NL 242000E-01 121000E-01 4.48 0.064 * RESIDUAL 162000E-01 270001E-02 -* TOTAL (CORRECTED) 11 3.48402 316730 -TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN9 17/04/17 21:52 - :PAGE MEANS FOR EFFECT CT -CT NOS BDCC BDSL -.250000 -.280000 -.300000 -.600000 3 -.390000 -.900000E-01 1.05000 SE(N= 3) 0.840000 0.300004E-01 0.300000E-01 94 5%LSD 6DF 0.103776 0.103775 -MEANS FOR EFFECT NL -NL NOS BDCC BDSL -.275000E-01 -.875000E-01 0.275000E-01 -.325000E-01 0.825000E-01 0.225000E-01 SE(N= 4) 0.259812E-01 0.259808E-01 5%LSD 6DF 0.898729E-01 0.898717E-01 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN9 17/04/17 21:52 - :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - 95 VARIATE CT GRAND MEAN |NL DEVIATION C OF V | | (N= | STANDARD 12) SD/MEAN | | | NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS % | | | | BDCC 0.0000 0.51962E-0118 5.1 12 -.32500E-010.56279 0.51962E-0115 0.2 0.0645 BDSL 0.0000 12 0.27500E-010.62177 0.0645 96 | ... hoa đồng tiền lùn tiến hành nghiên cứu đề tài Hoàn thiện quy trình nhân giống in vitro hoa đồng tiền lùn. ” 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích Xây dựng quy trình tối ưu nhân giống hoa đồng tiền. .. PHƯƠNG ĐÔNG KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC – MÔI TRƯỜNG - - KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: “HOÀN THIỆN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO HOA ĐỒNG TIỀN LÙN (Gerbera Jamesonii Bolus.) Sinh viên thực... nhiều đề tài để xây dựng quy trình nhân nhanh hoa đồng tiền lùn Tuy nhiên quy trình nghiên cứu trước chưa thực tối ưu cho dòng đồng tiền lùn Để góp phần vào hoàn thiện quy trình kĩ thuật thâm canh