Đang tải... (xem toàn văn)
Nhằm đánh giá sự đa dạng của các loài vi sinh vật cố định đạm cộng sinh với rễ cây đậu tương ở một trong các vùng trồng đậu tương chính tại Việt Nam, tiến tới tạo các chế phẩm phân bón thích hợp cho từng vùng đất trồng nông nghiệp.
ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA MÔI TRƯỜNG Lưu Ngọc Hưng NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI SINH VẬT CỐ ĐỊNH ĐẠM CỘNG SINH VỚI RỄ CÂY ĐẬU TƯƠNG TẠI ĐỒNG NAI Khóa luận tốt nghiệp đại học hệ quy Ngành: Mơi trường (Chương trình đào tạo: Chuẩn) Cán hướng dẫn: TS.Phan Thị Hồng Thảo PGS.TS Nguyễn Kiều Băng Tâm HÀ NỘI, 2018 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Kiều Băng Tâm, TS Phan Thị Hồng Thảo, người cô mẫu mực tận tụy hướng dẫn truyền đạt kiến thức cho tơi suốt q trình thực đề tài quan tâm, động viên giúp đỡ tơi sống Xin cảm ơn nguồn kinh phí từ dự án KHCN trọng điểm cấp Viện Hàn lâm KH CN Việt Nam mã số VAST.TĐ.NANO-NN/15-18 “Nghiên cứu ứng dụng Công nghệ nano nồng nghiệp” PGS.TS Nguyễn Hồi Châu làm chủ nhiệm Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô Khoa Môi trường đặc biệt thầy cô môn sinh thái, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội dành tâm huyết giảng dạy, truyền đạt kiến thức cho suốt khóa học Tơi xin gửi lời cảm ơn đến tập thể anh, chị, em phòng Vi sinh vật Đất, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam nhiệt tình cộng tác giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Cuối cùng, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè ln bên động viên, chia sẻ khó khăn giúp đỡ tơi q trình học tập thực khóa luận tốt nghiệp Hà Nội, ngày 22 tháng năm 2018 Sinh viên Lưu Ngọc Hưng MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG MỞ ĐẦU Nitơ dinh dưỡng thiết yếu trồng rễ hấp thụ dạng NH4+, NO3- Việc cung cấp nitơ cho trồng vấn đề quan trọng sản xuất nông nghiệp tất nước toàn giới Dân số giới ngày tăng nhanh kéo theo nhu cầu lương thực tăng cao nông nghiệp đại phải đối mặt với thách thức lớn mức độ sử dụng phân bón ngày tăng với tốc độ chóng mặt.Tuy nhiên, việc lạm dụng nhiều phân bón hóa học với liều lượng cao số quốc gia có nơng nghiệp cịn lạc hậu gây nhiều vấn đề môi trường cân dinh dưỡng đất, dư thừa NO3- đất, nước ngầm, giảm độ pH đất, nước ngầm,… vấn đề ô nhiễm môi trường đất, nước, khơng khí trở thành mối quan tâm cấp thiết tồn giới địi hỏi bảo vệ mơi trường sống người Do đó, việc nghiên cứu sử dụng nguồn nitơ sinh học xem giải pháp quan trọng việc cân phát triển nông nghiệp bảo vệ môi trường Trong hệ thống cố định nitơ sinh học, cố định nitơ cộng sinh vi khuẩn nốt sần (Rhizobium) họ đậu quan trọng nhất, ước tính đạt 80 triệu năm, tương đương với lượng phân đạm vơ tồn giới sản xuất năm 1990 [5] Điều đặc biệt quan trọng nước nơng nghiệp có cơng nghiệp hóa học chưa phát triển Việt Nam Việt Nam nước sản xuất nông nghiệp, năm sử dụng lượng lớn phân bón hóa học thuốc bảo vệ thực vật nhằm nâng cao suất trồng Đậu tương trồng quan trọng phổ biến để cung cấp dầu thực vật giới [23] Đây trồng có giá trị cao mặt dinh dưỡng đóng vai trị quan trọng nhiều sản xuất nông nghiệp Tại Việt Nam, đậu tương loại trồng phủ ưu tiên phát triển năm gần để đáp ứng nhu cầu chuyển đổi cấu trồng số địa phương [2] Mối quan hệ cộng sinh rễ đậu tương vi khuẩn nốt sần Rhizobium đề tài nhiều nhóm nghiên cứu quan tâm Việt Nam nhờ vai trò cố định nitơ, bổ sung dinh dưỡng cho đất, hỗ trợ phát triển trồng, góp phần vào tính đa dạng chủng vi sinh vật đất, Sự hiểu biết đặc tính sinh lý sinh hóa chủng vi khuẩn nốt sần cần thiết làm tiền đề cho nghiên cứu đánh giá ảnh hưởng yếu tố bên hàm lượng dinh dưỡng, điều kiện môi trường… đến phát triển khả cố định đạm giống họ đậu điều kiện sinh thái tối ưu để vi khuẩn nốt sần thực chức cách tối ưu Xuất phát từ thực tế đó, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu đánh giá số đặc điểm sinh học vi khuẩn cố định đạm Rhizobium đậu tương Đồng Nai ” nhằm đánh giá đa dạng loài vi sinh vật cố định đạm cộng sinh với rễ đậu tương vùng trồng đậu tương Việt Nam, tiến tới tạo chế phẩm phân bón thích hợp cho vùng đất trồng nơng nghiệp Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 1.1.1 Đối tượng nghiên cứu Tổng quan chung đậu tương Cây đậu tương có tên khoa học Glycine Max (L) Merr, thuộc Fabaceae, họ Fabaceae, chi Glycine, bụi nhỏ, cao trung bình 1m, có lơng tồn thân Lá có chét hình bầu dục Chùm lơng mọc nách lá, bơng có màu trắng tím Trái dài – cm, rộng 0,8 cm, có nhiều lơng vàng, trái có từ – hạt Cây đậu tương ngắn ngày, phát triển tốt vùng nhiệt đới, ưa sáng ưa nhiệt Rễ đậu tương khác với rễ hồ thảo có rễ rễ phụ Rễ ăn sâu 30-50 cm Trên rễ mọc nhiều rễ phụ, rễ phụ cấp 2, cấp tập trung nhiều tầng đất 7-8 cm rộng 30-40 cm [6] Trên rễ rễ phụ có nhiều nốt sần Nốt sần rễ đậu tương thường tập trung tầng đất - 20cm, từ 20-30cm nốt sần dần sâu có khơng có Hoa đậu tương nhỏ, không hương vị, thuộc loại cánh bướm Màu sắc hoa thay đổi tuỳ theo giống thường có màu tím, tím nhạt trắng Thời gian bắt đầu hoa sớm hay muộn, dài hay ngắn tuỳ thuộc vào giống thời tiết khác Giống chín sớm sau mọc 30 ngày hoa giống chín muộn 45-50 ngày hoa Thời gian hoa dài hay ngắn theo giống theo thời vụ Có giống thời gian hoa kéo dài 10-15 ngày Kết nghiên cứu cho thấy thời kỳ hoa rộ thường từ ngày thứ đến ngày thứ 10 sau hoa bắt đầu nở Hoa đợt rộ tạo nhiều, trước sau đợt hoa rộ tỷ lệ đậu thấp[6] Đậu tương gọi đậu nành trồng cạn ngắn ngày có giá trị kinh tế cao Sản phẩm làm thực phẩm cho người, thức ăn cho gia súc nguyên liệu cho công nghiệp, hàng xuất cải tạo đất tốt Hạt đậu tương có thành phần dinh dưỡng cao, hàm lượng protein 100g phần ăn 34,0g cao so với số thực phẩm thông thường khác (gạo tẻ giã 8,1g/100g phần ăn, thịt gà ta 20,3g/100g phần ăn, thịt lợn nạc 19,0g/100g phần ăn…) [10] 1.1.2 Tình hình sản xuất đậu tương giới Đậu tương trồng lấy hạt, có dầu quan trọng bậc giới, đứng hàng thứ sau lúa mì, lúa nước ngơ Do khả thích ứng rộng nên trồng khắp năm châu lục, tập trung nhiều châu Mỹ 70%, tiếp đến châu Á [6] Bảng 1.1 Tình hình sản xuất đậu tương giới giai đoạn 2011-2016 Năm Diện tích gieo trồng (triệu ha) Năng suất (kg/ha) Tổng sản lượng (triệu tấn) 2011 103,75 2519,7 261,43 2012 105,35 2289,4 241,18 2013 111,01 2499,9 277,53 2014 117,63 2604,4 306,37 2015 120,79 2675,7 323,20 2016 121,53 2755,6 334,89 Nguồn: (FAOSTAT Data crops, 2016) Từ bảng số liệu cho thấy, diện tích gieo trồng sản lượng đậu tương giới tăng nhanh vòng năm qua Hàng năm giới trồng khoảng 100 triệu tạo sản lượng đậu tương gấp gần lần so với 15 năm trước (sản lượng đậu tương toàn giới vào năm 2001 khoảng 176,76 triệu – FAOSTAT Data crops) Vai trị tình hình sản xuất đậu tương nông nghiệp Việt Nam 1.1.3 Đậu tương nguyên liệu nhiều ngành công nghiệp khác như: chế biến cao su nhân tạo, sơn, mực in, xà phòng, chất dẻo, tơ nhân tạo, chất đốt lỏng, dầu bôi trơn ngành hàng không, chủ yếu đậu tương dùng để ép dầu Hiện giới đậu tương đứng đầu cung cấp nguyên liệu cho ép dầu, dầu đậu tương chiếm 50% tổng lượng dầu thực vật Đặc điểm dầu đậu tương: khô chậm, số iốt cao: 120- 127; ngưng tụ nhiệt độ: -18 đến -15oC Từ loại dầu người ta chế hàng trăm sản phẩm công nghiệp khác như: làm nến, xà phịng, ni lơng v.v Trong cải tạo đất: Đậu tương luân canh cải tạo đất tốt trồng đậu tương sinh trưởng phát triển tốt để lại đất từ 30-60 kg N [Phạm Gia Thiều, 2000] Trong hệ thống luân canh, bố trí đậu tương vào cấu trồng hợp lý có tác dụng tốt trồng sau, góp phần tăng suất hệ thống trồng mà giảm chi phí cho việc bón N Thân đậu tương dùng bón ruộng thay phân hữu tốt hàm lượng N thân chiếm 0,05%, lá: 0,19% Ở Việt Nam, đậu tương đóng vai trị quan trọng cấu trồng nông nghiệp đặc biệt tỉnh miền núi phía Bắc.Đến năm 2007, nước hình thành vùng sản xuất đậu tương: vùng Đơng Nam có diện tích lớn (26,2% diện tích đậu tương nước), miền núi Bắc 24,7%, đồng sông Hồng 17,5%, đồng sông Cửu Long 12,4% [2] Tổng diện tích vùng chiếm 80% diện tích trồng đậu tương nước, cịn lại đồng ven biển miền Trung Tây Nguyên[6] Do đậu tương loại ngắn ngày có khả trồng nhiều loại đất khác nên thích hợp làm trồng luân canh, xen canh, gối vụ với nhiều loại trồng khác làm tăng hiệu sử dụng đất nông nghiệp Tuy nhiên, quy mơ sản xuất đậu tương cịn nhỏ lẻ chưa cạnh tranh với loại khác Diện tích trồng đậu tương mở rộng từ năm 2011 suất sản lượng thấp Năm 2013, tổng sản lượng đậu tương toàn quốc đạt 168,4 nghìn đáp ứng khoảng 1/10 nhu cầu Năng suất (2014 2015) mức thấp Vì thiếu khả cạnh tranh, tới năm 2016, diện tích gieo trồng đậu tương bị giảm cịn 94 nghìn ha, sản lượng đạt 147,5 nghìn tấn, suất tăng nhẹ 8,2% so với năm 2015 Để bù đắp thiếu hụt thực phẩm giàu protein nước, đồng thời đáp ứng nhu cầu ngày tăng mạnh nghành công nghiệp thức ăn chăn nuôi nuôi trồng thủy sản, Việt Nam phải nhập lượng lớn bột đậu từ nước khác Theo số liệu nông nghiệp phát triển nông thơn 2017 Ước tính Bradyrhizobium sp TUTVU39 KY941247.1 Bradyrhizobium sp TUTRAH5B2 KR491957.1 Chủng vi khuẩn so sánh ĐN19, 1518 Nu Mã số truy cập GenBank Bradyrhizobium elkanii CCBAU 53142 Bradyrhizobium sp PZG_S14 Bradyrhizobium elkanii PV1.14 Bradyrhizobium elkanii PV1.1 EF394150.1 KY660605.1 KX242478.1 KX242475.1 Chủng vi khuẩn so sánh ĐN 24, 1018 Nu Mã số truy cập GenBank Rhizobium pusense RP21 MG575706.1 Rhizobium sp HBUM200007 Rhizobium pusense S19 KY985305.1 Rhizobium sp JSN115 KT380607.1 LK936578.1 Rhizobium sp BGVW2 Rhizobium sp HBUM20000 Chủng vi khuẩn so sánh ĐN41, trình tự gen 16S-rDNA 532 Nu Rhizobium pusense CRP21 Rhizobium pusense ASU4 Rhizobium sp HBUM200049 Rhizobium pusense SitB161 Chủng vi khuẩn so sánh ĐN42, trình tự gen 16S-rDNA 871 Nu Rhizobium pusense CRP21 Rhizobium sp HBUM200007 Rhizobium pusense S19 Rhizobium pusense ASU4 KF008234.1 KY985309.1 Mã số truy cập GenBank MG575706.1 MG515189.1 KY985309.1 KY859842.1 Mã số truy cập GenBank MG575706.1 KY985305.1 KT380607.1 MG515189.1 Kết hợp đặc điểm sinh học, đặc điểm hình thái kết phân tích trình tự gen 16S rDNA cho thấy, chủng vi khuẩn đặt tên tương ứng Rhizobium sp ĐN6, Rhizobium pusense ĐN10, Bradyrhizobium sp ĐN17; Bradyrhizobium elkanii ĐN19; Rhizobium pusense sp ĐN24; Microvirga sp ĐN27; Mesorhizobium sp ĐN31; Rhizobium sp ĐN37; Rhizobium sp ĐN42; Rhizobium pusense ĐN41 Bảng 3.6 Độ tương đồng cao chủng Rhizobium sp nghiên cứu với chi loài tương ứng genbank STT Tên chủng ĐN6 ĐN10 ĐN17 ĐN19 Định danh thuộc chi loài chủng vi khuẩn Rhizobium sp Rhizobium pusense Bradyrhizobium sp Bradyrhizobium elkanii 10 11 12 Rhizobium pusense ĐN24 Microvirga sp ĐN27 ĐN31 Mesorhizobium sp ĐN37 Rhizobium sp ĐN41 Rhizobium pusense ĐN42 Rhizobium sp ĐN18 Agrobacterium tumefaciens ĐN30 Agrobacterium tumefaciens Kết phân loại cho thấy, Các loài vi khuẩn Rhizobium nốt rễ đậu tương vùng Đồng Nai, chủ yếu thuộc chi Rhizobium, Mesorhizobium, Bradyrhizobium loài thuộc chi Microvirga sp có khả cố định đạm họ đậu Hai chủng vi khuẩn ĐN18 ĐN 30 trình tự gen có tương đồng cao với lồi Agrobacterium tumefaciens vi khuẩn có khả cố định đạm tạo u nốt cố định giả đậu tương Chi Rhizobium chiếm đa số chi cố định đạm đậu tương Đồng Nai, 60%; sau đến chi Bradyrhizobium, chiếm 20%, chi Mesorhizobium chiếm 10% chi Microvirga chiếm 10% KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ 15 mẫu rễ đậu tương Đồng Nai phân lập mô tả 44 chủng vi khuẩn nốt rễ đậu tương Thông qua đặc điểm sinh học phân tích trình tự gen 16S rDNA định danh 10 loài vi khuẩn thuộc họ Rhizobia cố định đạm cộng sinh với rễ đậu tương Đồng Nai bao gồm chi Bradyrhizobium sp, Rhizobium sp, Mesorhizobium sp Microvirga sp Chi Rhizobium chiếm đa số chi cố định đạm đậu tương Đồng Nai, 60%; sau đến chi Bradyrhizobium, chiếm 20%, chi Mesorhizobium chiếm 10% chi Microvirga chiếm 10% Kiến nghị Tiếp tục đánh giá số đặc điểm sinh học khác vi khuẩn Rhizobium trình sinh trưởng như: nguồn đường, nhiệt độ, pH, khả chịu úng chịu hạn để nâng cao khả ứng dụng chủng Đánh giá tính đa dạng chủng vi sinh vật đất cộng sinh với rễ họ đậu vùng khác vùng ĐBSCL TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn (2017) “Báo cáo kết thực kế hoạch tháng năm 2017 ngành nông nghiệp phát triển nông thôn” Ngày 25/1/2017 Bộ nông nghiệp phát triển nông thôn (2014) “Quyết định phê duyệt quy hoạch chuyển đổi cấu trồng đất trồng lúa giai đoạn 2014-2020” Số: 3367/QĐ-BNN-TTngày 31 tháng 07 năm 2014 Ngô Thế Dân công sự, (1999), “Cây đậu tương”, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội Ngô Thế Dân, Nguyễn Ngọc Quyên, Nguyễn Kim Vũ, “Phân vi khuẩn nốt sần cách sử dụng cho đậu đỗ”, Nhà xuất Nơng nghiệp Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến Phạm Văn Ty, (2009), “Vi sinh vật học”, Nhà xuất Giáo dục Trần Văn Điền (2007), “Giáo trình đậu tương”, NXB Nông Nghiệp Dương Văn Hợp, Nguyễn Lân Dũng (2007) “Phân loại vi sinh sinh học phân tử” Vietsciences 27/2/2007 Nguyễn Quang Hùng (2017) “Nghiên cứu đánh giá tác động số nano kim loại đến vi khuẩn cố định đạm Rhizobium đậu tương” Lê Quốc Hưng, (2007), “Phát triển đậu tương - Tiềm lớn”, Tạp chí NN & PTNT, 73-74 10 Nguyễn Cơng Khẩn, Hà Thị Anh Đào (2007) “Bảng thành phần thực phẩm Việt Nam” NXB y học, 2007 11 Lê Xuân Phương (2008) “Giáo trình Vi sinh vật học mơi trường” NXB Đại Học Quốc Gia Hà Nội 12 Nguyễn Xuân Thành (1993) “Nghiên cứu số đặc điểm sinh học vi khuẩn Rhizobium cộng sinh với đậu xanh (phaseolus Aureus) hiệu lực chế phẩm vi khuẩn đậu xanh số loại đất miền Bắc Việt Nam” Luận án phó tiến sĩ khoa học Nơng Nghiệp, Trường Đại học Nông Nghiệp I – Hà Nội 13 Trần Cẩm Vân (2002) “Giáo trình vi sinh vật học môi trường” NXB Đại học Quốc Gia Hà Nội 14 Nguyễn Văn Viết, Tạ Kim Bính, Nguyễn Thị Yến (2006) “Kỹ thuật trồng số giống lạc đậu tương đất cạn miền núi” NXB Nông Nghiệp Tài liệu tiếng anh Anton Hartmann el al (2015) “Systemic colonization of clover (Trifolium repens) by Clostridium botulinum strain 2301”.Frontiers in Microbiology volume article 1207 16 J.G Howieson and M.J Dilworth (Eds.) (2016) “Working with rhizobia” Australian Centre for International Agricultural Research (ACIAR) 2016 No 173 17 Halima Berrada1 and Kawtar Fikri-Benbrahim (2014) “Taxonomy of the Rhizobia: Current Perspectives” British Microbiology Research Journal 4(6): 616-639 18 Mohini Joshi1, Deshpande J.D (2011) “Polymerase chain reaction: methods, principles and application” International Journal of Biomedical Research IJBR [2011]81‐97 19 M.G George, Bergey’s manual of systematic bacteriology, Springer (2005) 20 P Somasegaran and H J Hoben (1985) “Methods in legume-Rhizobium technology” University of Hawaii NifTAL Project and MIRCEN May 1985 21 Shraddha Bhatt, Dr.R.V.Vyas, H Shelat and Sneha J Mistry.” Isolation and Identification of Root Nodule Bacteria of Mung Bean (Vigna radiata L.) for Biofertilizer Production” International Journal of Research in Pure and Applied Microbiology 2013; 3(4): 127-133 22 Ridvan Kizilkaya (2008) “Nitrogen fixation capacity of Azotobacter spp strains isolated from soils in different ecosystems and relationship between them and the microbiological properties of soils” Journal of Environmental Biology January, J Environ Biol ISSN : 0254-8704 30(1), 73-82 (2009) 23 Alkharouf N, Khan R, Matthews BF (2004) “Analysis of expressed sequence tags from roots of resistant soybean infected by the soybean cyst nematode” Genome 47 380–388 24 Woo PCY, Leung PKL, Leung KW, Yuen KY 2000 Identification by 16S ribosomal RNA gene sequencing of an Enterobacteriaceae species from a bone marrow transplant recipient J Clin Pathol 53(4):211-215 doi:10.1136/mp.53.4.211 25 Zackary J Jay and William P Inskeep (2015) “The distribution, diversity, and importance of 16S rRNA gene introns in the order Thermoproteales” Biology Direct (2015) 10:35 DOI 10.1186/s13062-015-0065-6 26 Ardley JK, Parker MA, De Meyer SE, Trengove RD, O'Hara GW, Reeve WG, Yates RJ, Dilworth MJ, Willems A, Howieson JG (2012), Microvirga lupini sp nov., Microvirga lotononidis sp nov and Microvirga zambiensis sp 15 nov are alphaproteobacterial root-nodule bacteria that specifically nodulate and fix nitrogen with geographically and taxonomically separate legume hosts, Int J Syst Evol Microbiol 2012 Nov;62(Pt 11):2579-88 27 Radl V, Simões-Araújo JL, Leite J, Passos SR, Martins LM, Xavier GR, Rumjanek NG, Baldani JI, Zilli JE (2014) Microvirga vignae sp nov., a root nodule symbiotic bacterium isolated from cowpea grown in semi-arid Brazil Int J Syst Evol Microbiol 64(Pt 3):725-30 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Trình tự gen chủng thuộc Rhizobium Tên chủng ĐN6 ĐN10 Trình tự gen CGCATGGCGCAGGCTACCATGCAGTCGAGCGGTAACACAGGGAGCTT GCTCCTGGGTGACGAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGTCTGGGAAAC TGCCTGATGGAGGGGGATAACTACTGGAAACGGTAGCTAATACCGCAT AACGTCGCAAGACCAAAGAGGGGGACCTTCGGGCCTCTTGCCATCA CATGTGCCCAGATGGGATTAGCTAGTAGGTGGGGTAACGGCTCACCTA GGCGACAATCCCTAGCTGGTCTGAGAGGATGACCAGCCACACTGGAA CTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATT GCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCACCCATGCCGCGTGTATGAAAAA GGCCTTCGGGTTGTAAAGTACTTTCAGCGGGGAGGAAGGCGTTGAGG TTAATAACCTCACCGATTGACGTTACCCGCAGAAAAAGCACCGGCTA ACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGGTGCAAGCGTTAATC GGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGCAGGCGGTCTGTCAAGTCGGAT GTGAAATCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTCTAAACTGGCAGG CTAGAGTCTTGTAGAGGGGGGTAGAATTTCAGGTGTAGCGGTGAAAT GCGTATAGATCTGGAGGAGTACCGGTGGCGAAAGCGGCCCCCCTGTG ACAAAGACTGACGCTCAGGTGCGAGAGCGTGTGGAGCACACAGGAT TATATACCCCTGGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCGACTTGTAGGT TGTGCCCTCGAGGCGTGTCTTCTCGGAGCTAACACGTCAAGTCGACC GCCTGGGGAGTACGGCCCGCAAGGTGAAAACTCACATGAATTTGACG GGGGGCCCCCACAGCCGGTGGTAGCATGTGGTTTTATTTCGATGCACG CGAGAGCCTTACCTACTCTGACATCCACAGGACTTTCAGAGATGCTTT TGGTGCCTTCGGGAACTCTGAGACAGTGCTGCATGGCTGTCGTCACC TCTGGTTGTGGAATGTGGTTAAGTTCCCTACGA CTNAGGGGGGCCCACCTGCAGTCGACGCCCCGCAGGGGAGTGGCAG ACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACATACCCTTTCCTGCGGAATAGCTC CGGGAAACTGGAATTAATACCGCATACGCCCTACGGGGGAAAGATTTA TCGGGGAAGGATTGGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAA GGCCTACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGC CACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAG TGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCG TGAGTGATGAAGGCCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGATGAAGAT AATGACGGTAGTCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCA GCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCG TAAAGCGCACGTAGGCGGATATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGCAG CTCAACTGCGGAACTGCCTTTGATACTGGGTATCTTGAGTATGGAAGA GGTAAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGA GGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTACTGGTCCATTACTGACGCTGA GGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCC ACGCCGTAAACGATGAATGTTAGCCGTCGGGCAGTATACTGTTCGGTG DN17 DN19 GCGCAGCTAACGCATTAAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAG ATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGC ATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCTCTTGACA TTCGGGGTATGGGCATTGGAGACGATGTCCTTCAGTTAGGCTGGCCCC AGAACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTG GGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCAT TTAGTTGGGCCCTCTAGGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGAGAAGAAG GTGGGGATGACCTCCAGTTCCTCATGGCCCCTTACGGGCTGGGCTAC ACACGTGCCTACAATGGGTGGTGAACATTGGGCAACC TGCGTTCGGTTTCGATACCATGCAGTCGAGCGGGCATAGCAATATGTC AGCGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACGTACCTTTTGGTTCGG AACAACTGAGGGAAACTTCAGCTAATACCGGATAAGCCCTTACGGGG AAAGATTTATCGCCGAAAGATCGGCCCGCGTCTGATTAGCTAGTTGGT GAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGA TGATCAGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAG GCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCA TGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTTGTGC GGGAAGATAATGACGGTACCGCAAGAATAAGCCCCGGCTAACTTCGT GCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATCA CTGGGCGTAAAGGGTGCGTAGGCGGGTCTTTAAGTCAGGGGTGAAAT CCTGGAGCTCAACTCCAGAACTGCCTTTGATACTGAAGATCTTGAGTT CGGGAGAGGTGAGTGGAACTGCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGAT ATTCGCAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCCCGATACTG ACGCTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCT GGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCCAGCCGTTAGTGGGTTTACT CACTAGTGGCGCAGCTAACGCTTTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACG GTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGC GGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGCAGAACCTTACCAG CCCTTGACATCCCGGTCGCGGACTCCAGAGACGGAGTTCTTCAGTTC GGCTGGACCGGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCG TGAGATGTTGGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCCGTCCTTA GTTGCTACCATTTAAGTTGAGCACTCTAAGGGAGACTGCCCGGTGATA AGCCCCCGAGGAAAGGTGGGGGATGAACGTCCAAGTCCTTCATGGG CCCTTTACGGGGCTGGGGCTAACCACGTGGCTAACAATGGGCGGTTG AACAATGGGGATGGCTAAAGGGGGCGAACCCTTCCCCAAATTCTCAA AAAAGCCCGTTCCCAATTTCCGGAATTGGGGCTCTTGGCAACTCCCG AGCCCCATGGAAATTTGGGAAATCCCCTAGTAAATCTTGGGGAATCCC CCGCCCCCCGGGGGAAAAAACTTTTCCCGGGGGCCTTTTGTAAAAAC CCCGGCCCCGTTAAACCCCCATGGGGAAATTTTGGGTTTTTACCCCCG AAAAAAGGGGGCCCCTTACCCCAAAAAGGGGGGGGAACCCCGCCCC CCCGGGGAGGGTGTCCCACCCAACGGGGGTGAGGGGGGGGTTTAAC CCCCGAAAGAGGAGGAGCCACAAAAACGGGGGGG TGCTAGTTCGATACCATGCAGTCGAGCGGGCATAGCAATATGTCAGCG GCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAACGTACCTTTTGGTTCGGAACA ACTGAGGGAAACTTCAGCTAATACCGGATAAGCCCTTACGGGGAAAG DN24 DN27 ATTTATCGCCGAAAGATCGGCCCGCGTCTGATTAGCTAGTTGGTGAGG TAATGGCTCACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGATGAT CAGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCA GCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGC CGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTTGTGCGGG AAGATAATGACGGTACCGCAAGAATAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCC AGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGCTCGGAATCACTG GGCGTAAAGGGTGCGTAGGCGGGTCTTTAAGTCAGGGGTGAAATCCT GGAGCTCAACTCCAGAACTGCCTTTGATACTGAAGATCTTGAGTTCG GGAGAGGTGAGTGGAACTGCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATAT TCGCAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCCCGATACTGA CGCTGAGGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTG GTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCCAGCCGTTAGTGGGTTTACTC ACTAGTGGCGCAGCTAACGCTTTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGG TCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCG GTGGAGCATGTGGTTTAATTCGACGCAACGCGCAGAACCTTACCAGC CCTTGACATCCCGGTCGCGGACTCCAGAGACGGAGTTCTTCAGTTCG GCTGGACCGGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGT GAGATGTTGGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCCGTCCTTAG TTGCTACCATTTAGTTGAGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGATAAGCC GCGAGGAAAGTGGGGGATGACGTCCAATCCCTCATGGGCCCTTACGG GCTGGGGCTACCCACCGTGCCTACAATGGGCGGTTGACAATGGGGAA TGCTAAGGGCCAACCCTTTCCCAAATTCTCAAAAAAGCCGGTCCCAA TTTCGGAATTGGGGCCTTTTGCAACTCCCGACCCCCATGGAAATTTGG GAATCCCCCTAGTTAATCCCGGGGAACCCCCCCCCCCCCGGGGGAAA ACCTTTTCCCCGGGCCCTTTGTACCCCCGGCCCCGGTCAACCCCTGGG GGAATTTGGTTTTCCCCTTGAAAACGGGGGCCTTAAACAAAAAGGGG GGGCACCCCCGGCCCCCCGGTAGGGTTCCCCCCCCGGGGGGAAAGTT GAACTTTAACCAAGGGGGATACCAAAAATCCTTTTCCCCCAAATTTTC CCAAATTTGGC CATGCAGTCGACGCCCCGCAAGGGGAGTGCGCAGACGGGTGAGTAA CGCGTGGGAACATACCCTTTCCTGCGGAATAGCTCCGGGAAACTGGA ATTAATACCGCATACGCCCTACGGGGGAAAGATTTATCGGGGAAGGAT TGGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGG CGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGGACT GAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTG GACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAG GCCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTTCCCGATGAAGATAATGACGGTAGT C GTCGCACGGGCCCTTCGGGGTCAGTGGCAGACGGGTGAGTAACGCG TGGGAACGTGCCCTTCAGTTTGGAATAACCCAGGGAAACTTGGGCTA ATACCGGATACGCCCTTTGGGGGAAAGATTTATCGCTGAAGGATCGGC CCGCGTCTGATTAGCTGGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGAC GATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGGACTGAGA CACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAA DN31 DN37 TGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGACGGCCTT AGGGTTGTAAAGCTCTTTCGCACGCGACGATAATGACGGTAGCGTGA GAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAG GGGGCTAGCGTTGTTCGGAATCACTGGGCGTAAAGGGCGCGTAGGCG GCTTTGTAAGTCGGGGGTGAAAGCCTGTGGCTCAACCACAGAATTGC CTTCGATACTGCGAGGCTTGAGACCGGAAGAGGTTAGTGGGAACTGC GAGTGTAAAGGTGAAATTCGTAGATATTTCGCAAGAACACCAGTGG TGCAAGTCGAGCGCCTCGCAAGAGGAGCGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAAT CTACCCATCTCTACGGAACAACTCCGGGAAACTGGAGCTAATACCGTATACGTCCTTCG GGAGAAAGATTTATCGGAGATGGATGAGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTA ATGGCCTACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGG ACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGG GCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGC TCTTTCAACGGTGAAGATAATGACGGTAACCGTAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTG CCAGCAGCCG CGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAG GCGGATATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTTGATA CTGGGTATCTCGAGTCCGAGAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTC GTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGCTCGGTACTGACGC TGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCTGT AAACGATGGAAGCTAGCCGTTGGCAAGTTTACTTGTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTA AGCTTCCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGG CCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCA GCCCTTGACATCCCGGTCGCGGTTTCCAGAGATGGGAACCTTCAGTTCGGCTGGACCG GTGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCC GCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCATTAAGTTGGGCACTCTAAGGGGA CTGCCGGTGATAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTA CGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGCAGCGAGACCGCGA GGTCGAGCTAATCTCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCA TGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCGGGCC TTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTTTACCCGAAGGCGCTGTGCTAA CCGCAAGGAGGCAGGC TCGACGCGCCCGCAAGGGGAGTCGCGCAGACGGGTGAGTAACGCGT GGGAACATACCCTTTCGTGCGGAATAGCTCCGGGAAACTGGAATTAA GACCGCGTACGCCCTACGGGGGAAAGATTTATCGGGGAAGGATTGGC CCGCGTTGGATTACCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGAC GATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGGACTGAGA CACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAA TGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCTT AGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGATGAAGATAATGACGGTAGTCGGA GAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAG GGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCG GATATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGCAGCTCAACTGCGGAACTGC CTTTGATACTGGGTATCTTGAGTATGGAAGAGGTAAGTGGAATTCCGA DN41 DN42 GTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAA GGCGGCTTACTGGTCCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGA GCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAAT GTTAGCCGTCGGGCAGTATACTGTTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTAA ACATTCCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGAAT TGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGTTTAATTCGAAGCA ACGCGCAAACTTTACAGCT TGCAGTCGCACGCCCCGCAAGGGGAGTGCGCAGACGGGTGAGTAAC GCGTGGGAACATACCCTTTCCTGCGGAATAGCTCCGGGAAACTGGAA TTAATACCGCATACGCCCTACGGGGGAAAGATTTATCGGGGAAGGATT GGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGC GACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGGACTG AGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGG ACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGG CCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGATGAAGATAATGACGGTAGTC GGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACG AAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAG GCGGATATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGCAGCTCAACTGCGGAAC TGCCTTTGATACTGG TGCGGTCGACGCGCCCGCAAGGGGAGTCGCGCAGACGGGTGAGTAA CGCGTGGGAACATACCCTTTCCTGCGGAATAGCTCCGGGAAACTGGA ATTAAGACCGCGTACGCCCTACGGGGGAAAGATTTATCGGGGAAGGA TTGGCCCGCGTTGGATTACCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAG GCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGGAC TGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTG GACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAG GCCTTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGATGAAGATAATGACGGTAGT CGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATAC GAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTA GGCGGATATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGCAGCTCAACTGCGGAA CTGCCTTTGATACTGGGTATCTTGAGTATGGAAGAGGTAAGTGGAATT CCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGG CGAAGGCGGCTTACTGGTCCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGT GGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGAT GAATGTTAGCCGTCGGGCAGTATACTGTTCGGTGGCGCAGCTAACGCA TTAAACATTCCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAA GAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGTTTAATTCGA AGCAACGCGCAAACTTTACAGCT Phục lục ĐN4 ĐN2 ĐN6 ĐN3 ĐN3 ĐN7 ĐN9 ĐN3 ĐN12 ĐN3 ĐN16 ĐN3 ĐN20 ĐN3 ĐN21 ĐN3 ĐN23 ĐN3 ĐN24 ĐN3 ĐN25 ĐN3 ĐN26 ĐN4 ĐN27 ĐN4 ĐN28 ĐN4 ĐN4 ... nghiên cứu Các nội dung nghiên cứu đề tài: - Phân lập chủng vi khuẩn cố định đạm Rhizobium nốt sần rễ đậu tương Đồng Nai Vi? ??t Nam Định danh nghiên cứu số đặc điểm sinh học chủng vi khuẩn cố định. .. giá số đặc điểm sinh học vi khuẩn cố định đạm Rhizobium đậu tương Đồng Nai ” nhằm đánh giá đa dạng loài vi sinh vật cố định đạm cộng sinh với rễ đậu tương vùng trồng đậu tương Vi? ??t Nam, tiến tới... Clostridium Nhóm vi khuẩn cố định N cộng sinh cộng sinh với rễ họ đậu Rhizobium … 1.2.1 Nhóm vi khuẩn cố định nitơ sống tự 1.2.1.1 Nhóm vi khuẩn cố định nitơ sống tự hiếu khí Azotobacter spp vi khuẩn hiếu