Đang tải... (xem toàn văn)
Sarcoma mô mềm là dạng ung thư có nguồn gốc từ các mô mềm của cơ thể. Tỷ lệ mắc sarcoma mô mềm thấp, khoảng 1% các ca mắc ung thư mới hàng năm ở người lớn và khoảng 15% ở trẻ em. Hai khối u thường gặp nhất ở trẻ em là Ewing sacroma và sarcoma cơ vân.
phần nghiên cứu CHẨN ĐOÁN CHUYỂN ĐOẠN ĐẶC HIỆU TRÊN CÁC KHỐI U SARCOMA MÔ MỀM BẰNG KỸ THUẬT LAI HUỲNH QUANG TẠI CHỖ Nguyễn Xuân Huy1, Vũ Đình Quang1, An Thùy Lan1, Ngô Diễm Ngọc1, Bùi Ngọc Lan2, Nguyễn Thu Hà2, Phạm Duy Hiền3, Lê Anh Tuấn4, Lê Đình Cơng5, Lê Thị Kim Ngọc5, Hồng Ngọc Thạch6, Lê Thanh Hải7 Khoa Di truyền Sinh học phân tử, 2Khoa Ung bướu, 3Khoa Ngoại, Khoa Chỉnh hình Nhi, 5Khoa Chẩn đốn hình ảnh, 6Khoa Giải phẫu bệnh, Khoa Cấp cứu chống độc, Bệnh viện Nhi Trung ương Tóm tắt Sarcoma mơ mềm dạng ung thư có nguồn gốc từ mô mềm thể Tỷ lệ mắc sarcoma mô mềm thấp, khoảng 1% ca mắc ung thư hàng năm người lớn khoảng 15% trẻ em Hai khối u thường gặp trẻ em Ewing sacroma sarcoma vân Về mặt di truyền, chuyển đoạn gen PAX3 (hoặc PAX7) với gen FOXO1 phát 80% khối u sarcoma vân thể nang Ở khối u Ewing, 95% tế bào u có chuyển đoạn đặc hiệu gen FLI1 (hoặc ERG) với gen EWS Mục đích: Xác định chuyển đoạn khối u sarcoma vân Ewing sarcoma kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ tiêu u nến Đối tượng: Bệnh nhân chẩn đoán mắc sarcoma vân Ewing sarcoma Bệnh viện Nhi Trung ương Phương pháp: Phản ứng lai huỳnh quang chỗ (FISH) tiêu u nến với đầu dò đặc hiệu Kết quả: Phát chuyển đoạn vùng gen FOXO1 khối u vân thể nang vùng gen EWS khối u Ewing Kết luận: Xác định biến đổi di truyền khối u mô mềm giúp chẩn đốn phân biệt cho bệnh nhân để có phác đồ điều trị thích hợp Từ khóa: Sarcoma vân, Ewing sarcoma, lai huỳnh quang chỗ Abstract DIAGNOSIS OF SPECIFIC TRANSLOCATION ON SOFT TISSUE SARCOMA BY FLUORESCENT IN-SITU HYBRIDIZATION TECHNIQUE Nguyen Xuan Huy1, Vu Dinh Quang1,An Thuy Lan1, Ngo Diem Ngoc1, Bui Ngoc Lan2, Nguyen Thu Ha2, Le Anh Tuan3, Pham Duy Hien4, Le Đinh Cong5, Le Thi Kim Ngoc5, Hoang Ngoc Thach6, Le Thanh Hai7 Human Genetics Department, 2Oncology Department, Orthopediatrics Department, 4Surgery Department, 5Radiology Department, Pathology Department, 7Emergency Department, National Children’s Hospital Soft tissue sarcomas is a rare type of cancer that begins in the tissues that connect, support and surround other body structures. They account for 1% new cancer in adults and 15% in children Rhabdomyosarcoma (RMS) and Ewing Sarcoma (ES) are the most common in children About the genetics, the translocation between PAX3 (PAX7) gene with FOXO1 gene is found over 80% alveolar RMS In ES, there is a translocation in EWS region in over 95% cases Purpose: Detection of the specific translocation in RMS and ES tumor by fluorencent in-situ hybridization technique in National Children’s Nhận bài: 15-4-2019; Thẩm định: 25-4-2019; Chấp nhận:5-6-2019 Người chịu trách nhiệm: Nguyễn Xuân Huy Địa chỉ: Khoa Di truyền Sinh học phân tử - Bệnh viện Nhi Trung ương Email: xuanhuy@nch.org.vn 65 tạp chí nhi khoa 2019, 12, Hospital Results: The specific translocation in alveolar RMS and ES was detected clearly Conclusion: Diagnosis of specific translocation on soft tissue sarcoma by fluorescent in-situ hybridization technique is well established in Human Genetics Department, National Children’s Hospital for helping the clinical to choose the right treatment protocol Đặt vấn đề Sarcoma mô mềm dạng ung thư ác tính có nguồn gốc từ mơ mềm thể, loại mơ có tác dụng liên kết, hỗ trợ bao quanh cấu trúc thể Các mô mềm bao gồm mô cơ, mô mỡ, mạch máu, dây thần kinh, gân lớp lót khớp xương (mô hoạt dịch) [1] Sarcoma mô mềm là loại ung thư phổ biến (tỷ lệ mắc hàng năm khoảng 1% ung thư người lớn 15% ung thư nhi) Ở trẻ em, Ewing sacroma sarcoma vân thường gặp [2] Sarcoma vân (Rhabdomyosarcoma, RMS) loại ung thư mô mềm phổ biến trẻ em (khoảng 3% ung thư nhi), với thể là: u vân thể phôi (Embryonal RMS) gặp chủ yếu trẻ sơ sinh trẻ biết (khoảng 70% số ca) u vân thể nang (Alveolar RMS) xuất nhóm tuổi (khoảng 20% số ca) Để lựa chọn phác đồ điều trị phù hợp cho bệnh nhân, nhà lâm sàng cần phân biệt xác sarcoma thể nang thể phơi Cùng với tuổi, vị trí, mơ bệnh học, chuyển đoạn đặc hiệu gen PAX3 (trên nhiễm sắc thể số 2) PAX7 (trên nhiễm sắc thể số 1) với gen FOXO1 (trên nhiễm sắc thể số 13) yếu tố phân biệt quan trọng [3] Ewing sacroma ung thư mô liên kết xương chiếm 16% số ca ung thư xương, thường gặp xương khung chậu xương chày Có nhóm nhỏ Ewing sarcoma phát triển từ mô mềm gọi ung thư mô liên kết Ewing ngoại vi hay PNET Cũng sarcoma vân, việc chẩn đoán phân biệt khối u Ewing sarcoma điều kiện tiên để đưa phác đồ điều trị thích hợp Theo cơng bố giới, 95% tế bào u có chuyển đoạn đặc hiệu gen FLI1 (trên nhiễm sắc thể số 11) gen ERG (trên nhiễm sắc thể số 21) với gen EWS (trên nhiễm sắc thể số 22) [4] 66 Hiện nay, có kỹ thuật sử dụng để chẩn đoán chuyển đoạn đặc hiệu khối u sarcoma mô mềm lai huỳnh quang chỗ Real-time PCR Giữa kỹ thuật này, kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ có ưu điểm thực khối nến thời gian trả kết nhanh chóng sử dụng đầu dò huỳnh quang đặc hiệu đánh dấu vào vùng gen nghiên cứu Việc chẩn đoán chuyển đoạn đặc hiệu khối u nói chưa thực hiện, gây khó khăn chẩn đốn cho bác sĩ lâm sàng Do vậy, đề tài nghiên cứu “Chẩn đoán chuyển đoạn đặc hiệu khôi u sarcoma mô mềm kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ” thực khoa Di truyền Sinh học phân tử với mục tiêu: Triển khai thành công xét nghiệm Bệnh viện Nhi Trung ương PHƯƠNG PHÁP VÀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Bệnh nhân sarcoma vân Ewing sarcoma định làm xét nghiệm di truyền 2.2 Phương pháp nghiên cứu Kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ thực tiêu u nến Tiêu u nến trải qua trình tẩy nến để bộc lộ tế bào u kit SPOT-Light Tissue Pretreatment (Invitrogen) với thời gian xử lý enzym 25 phút Đầu dò chẩn đoán chuyển đoạn gen khối u sarcoma vân LSI FOXO1 Dual Color, Break Apart Rearrangement Probe (Vysis), đầu dò màu đánh dấu vào đầu gen FOXO1 vị trí 13q13 Cịn đầu dị chẩn đoán chuyển đoạn gen khối u Ewing sarcoma LSI EWSR1 Dual Color, Break Apart Rearrangement Probe (Vysis) đánh dấu màu vào đầu gen EWSR1 vị trí 22q12 phần nghiên cứu Đầu dị đặc hiệu phủ lên mảnh u, biến tính 80oC phút lai 37oC qua đêm Tiêu quan sát kính hiển vi huỳnh quang Zeiss, chụp ảnh độ phóng đại 1000 lần phân tích phần mềm Metasystem Isis Các chuyển đoạn vùng gen FOXO1 hay EWSR1 xác định thơng qua số lượng tín hiệu quan sát KẾT QUẢ Trên khối u sarcoma vân, đầu dò huỳnh quang đánh dấu vào đầu gen FOXO1 để khảo sát chuyển đoạn gen Nếu tế bào u khơng có chuyển đoạn, tín hiệu xanh đỏ liền kề (Hình 1A) Cịn tế bào u có xảy chuyển đoạn đặc hiệu, tín hiệu đầu gen tách thành tín hiệu xanh đỏ độc lập (Hình 1B) Chuyển đoạn vùng gen FOXO1 Khơng có chuyển đoạn vùng gen FOXO1 Khơng có chuyển đoạn vùng gen FOXO1 Chuyển đoạn vùng gen FOXO1 A B Hình Hình ảnh lai huỳnh quang chỗ vị trí gen FOXO1 A Khơng có chuyển đoạn; B Có chuyển đoạn đặc hiệu Trên khối u Ewing sarcoma, đầu dò huỳnh quang đánh dấu vào đầu gen EWSR1 để xác định chuyển đoạn xảy gen Nếu tế bào u khơng có chuyển đoạn tín hiệu xanh đỏ cạnh (Hình 2A) Cịn tế bào u có xảy chuyển đoạn đặc hiệu, tín hiệu huỳnh quang tách để thành tín hiệu độc lập (Hình 2B) Chuyển đoạn vùng gen EWSR1 Không chuyển đoạn vùng gen EWSR1 Chuyển đoạn vùng gen EWSR1 A B Hình Hình ảnh lai huỳnh quang chỗ vị trí gen EWSR1 A Khơng có chuyển đoạn; B Có chuyển đoạn đặc hiệu 67 tạp chí nhi khoa 2019, 12, BÀN LUẬN Việc xác định chuyển đoạn đặc hiệu số khối u sarcoma mô mềm kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ hỗ trợ nhà lâm sàng chẩn đoán phân loại bệnh nhân xác Với khối u sarcoma vân, thường gặp thể nang thể phôi Trong số trường hợp, việc chẩn đốn gặp nhiều khó khăn vào kết mô bệnh học hay số tuổi, sinh hóa, huyết học, chẩn đốn hình ảnh… Về mặt di truyền, thể nang phân biệt với thể phôi có chuyển đoạn gen PAX3 (hoặc PAX7) với gen FOXO1 nhiễm sắc thể số 13 Vì vậy, việc xác định chuyển đoạn đặc hiệu giúp phân loại khối u sarcoma vân để có phác đồ điều trị thích hợp Khó khăn lớn với khối u Ewing sarcoma chẩn đoán xác định khối u vị trí gặp Do tế bào u Ewing thuộc nhóm tế bào hình trịn, nhỏ, màu xanh nên hình ảnh tiêu nhuộm HE dễ nhầm lẫn với khối u nhóm Chuyển đoạn di truyền đặc hiệu gặp 95% khối u Ewing giúp bác sĩ chẩn đoán phân loại xác khối u Các kết nghiên cứu cho thấy việc phát chuyển đoạn di truyền đặc hiệu khối u mô mềm xét nghiệm cần thiết bệnh nhân Bằng kỹ thuật FISH, chúng tơi tiến hành xét nghiệm thời gian sau khối u đúc nến Thời gian trả kết sau 24 sau tiến hành xét nghiệm giúp bác sĩ sớm đưa phác đồ điều trị tương ứng 68 Tuy nhiên, kỹ thuật bộc lộ hạn chế không đánh giá giá trị tồn dư tối thiểu, lần thực xét nghiệm phát chuyển đoạn đặc hiệu, chi phí xét nghiệm cao, đơi tín hiệu huỳnh quang khơng rõ ràng ảnh hưởng thời gian xử lý enzym Do đó, chúng tơi khuyến cáo thu thập sử dụng mẫu bệnh phẩm u tươi để tiến hành kỹ thuật khác Realtime-PCR Kết luận Chẩn đoán chuyển đoạn đặc hiệu khối u sarcoma mô mềm kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ thực thành công khoa Di truyền Sinh học phân tử, Bệnh viện Nhi Trung ương, đáp ứng nhu cầu lâm sàng việc chẩn đốn phân biệt nhóm bệnh nhân TÀI LIỆU THAM KHẢO M von Mehren, R Lor Randall, R S Benjamin, S Boles, M M Bui and E U e a Conrad, “Soft Tissue Sarcoma,” National Comprehensive Cancer Network, vol 14, no 6, pp 758-786, 2016 O D M H B C O O Minard-Colin V, “Soft tissue tumors in neonates,” Arch Pediatr., vol 16, no 7, pp 1039-48, 2009 R D a L Helman, “Rhabdomyosarcoma: An Overview,” The Oncologist, vol 4, no 1, pp 34-44, 1999 S A Burchill, “Ewing’s sarcoma: Diagnostic, prognostic, and therapeutic implications of molecular abnormalities,” Journal of Clinical Pathology, vol 56, no 2, pp 96-102, 2003 ... chuyển đoạn đặc hi? ?u khối u sarcoma mô mềm lai huỳnh quang chỗ Real-time PCR Giữa kỹ thuật này, kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ có ? ?u điểm thực khối nến thời gian trả kết nhanh chóng sử dụng đ? ?u dò huỳnh. .. chúng tơi khuyến cáo thu thập sử dụng m? ?u bệnh phẩm u tươi để tiến hành kỹ thuật khác Realtime-PCR Kết luận Chẩn đoán chuyển đoạn đặc hi? ?u khối u sarcoma mô mềm kỹ thuật lai huỳnh quang chỗ thực... lai huỳnh quang chỗ vị trí gen EWSR1 A Khơng có chuyển đoạn; B Có chuyển đoạn đặc hi? ?u 67 tạp chí nhi khoa 2019, 12, BÀN LUẬN Việc xác định chuyển đoạn đặc hi? ?u số khối u sarcoma mô mềm kỹ thuật