Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu xác định tỉ lệ Her-2 (+) bằng HMMD và FISH; xác ñịnh tương quan 2 phương pháp HMMD và FISH; đánh giá khả năng ứng dụng kỹ thuật TMA. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 ĐÁNH GIÁ HĨA MƠ MIỄN DỊCH VÀ LAI HUỲNH QUANG TẠI CHỖ XÁC ĐỊNH TÌNH TRẠNG HER-2 TRONG UNG THƯ VÚ TRÊN SẮP XẾP DÃY MÔ Thái Anh Tú*, Trần Thị Ngọc Mỹ*, Lê Nguyễn Phương Thảo*, Bùi Ngọc Em*, Cao Ngọc Tuyết Nga*, Nguyễn Văn Thành*, Phạm Xuân Dũng* TĨM TẮT Chúng tơi đánh giá hóa mơ miễn dịch (HMMD) lai huỳnh quang chỗ (FISH) xác ñịnh tình trạng Her-2 ung thư vú mẫu mô bướu thông thường (qui ước) xếp dãy mơ (TMA) Mục tiêu: Xác định tỉ lệ Her-2 (+) HMMD FISH; xác ñịnh tương quan phương pháp HMMD FISH; ñánh giá khả ứng dụng kỹ thuật TMA Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Gồm 195 trường hợp carcinôm vú xâm nhập, 61 trường hợp mẫu mơ qui ước 134 trường hợp mẫu TMA HMMD (hãng DAKO); FISH kit Pathvysion (Cty Abbott) Thực khoa Giải phẫu bệnh (GPB), Bệnh viện Ung bướu TP HCM, từ tháng 12-2009 ñến tháng 9-2010 Kết quả: Đối với mẫu qui ước, tương hợp HMMD FISH tình trạng HER-2: HMMD 3+ cho FISH (+) 91%, HMMD 2+ cho FISH (+) 26% FISH (+) chủ yếu khuyếch ñại cao Đối với mẫu mô TMA, HMMD 3+ 20,9% HMMD 2+ 12,7% Tỉ lệ ung thư vú xâm nhiễm có FISH (+) 25,4% Tương hợp cao HMMD FISH (kappa: 0,95): HMMD 0/1+ cho FISH (+) 1,12%; HMMD 3+ cho FISH (+) 92,86%; HMMD 2+ cho FISH (+) 41,18% HMMD mẫu qui ước mẫu TMA có tương hợp cao (kappa:0,88) Kết luận: Tương hợp cao kết HMMD FISH xác định tình trạng HER-2 ung thư vú xâm nhiễm Từ khóa: Ung thư vú, HER2, hóa mơ miễn dịch (HMMD), lai huỳnh quang chỗ (FISH), xếp dãy mô (TMA) ABSTRACT ASSESSMENT OF IMMUNOCHEMISTRY AND FLUORESCENT IN SITU HYBRIDIZATION FOR HER-2 STATUS IN BREAST CANCER USING OF TISSUE MICROARRAY Thai Anh Tu, Tran Thi Ngoc My, Le Nguyen Phuong Thao, Bui Ngoc Em, Cao Thi Tuyet Nga, Nguyen Van Thanh, Pham Xuan Dung * Y Hoc TP Ho Chi Minh – Vol.14 - Supplement of No – 2010: 712 - 718 Aim: To compare the results obtained by IHC and FISH methods in determination of HER2 status in breast cancer using tissue microarrays (TMAs) and conventional full sections Methods and materials: A total of 195 cases (including of 61 cases by conventional full sections and 134 TMA cases) of invasive breast cancer were evaluated for HER-2 status using IHC and FISH and results were compared Results: In conventional full section specimens, concordance between IHC and FISH: Tumors with scoring 3+ IHC were FISH positive in 91% and those with 2+ IHC scores to be FISH positive in 26% of cases Most of FISH positive cases were high grade amplification (27/30 cases) In TMA specimens, the percentage of tumors with 2+IHC were 12.7%, those with 3+IHC were 20.9% The percentage of tumors with FISH positive were 25.4% Tumors with 0/1+ IHC reactivity were FISH positive in 1.1% of cases, those scoring 2+ to be FISH positive in 41.2% and those with 3+ scores to be FISH positive in 92.9% of cases Concordance between IHC and FISH (kappa: 0.95) Concordance between conventional full sections and TMA sections for IHC (kappa: 0.88) Conclusion: High concordance between IHC and FISH in conventional full sections and TMAs Key words: Breast cancer, HER2, fluorescent in situ hybridization, immunohistochemistry, tissue microarray * Bệnh viện Ung Bướu TP HCM Địa liên lạc: ThS Thái Anh Tú Email: thaianhtupath@yahoo.com Chuyên ñề Ung Bướu 712 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 ĐẶT VẤN ĐỀ Trên carcinôm tuyến vú xâm nhiễm, loại ung thư thường gặp phụ nữ(12), gen sinh ung Her-2 yếu tố sinh học quan trọng tiên lượng lựa chọn hướng ñiều trị(19) Nhiều nghiên cứu(4,9,26) cho thấy khuyếch ñại gen thường ñi kèm với trường hợp bệnh diễn tiến nhanh, tiềm di tăng, khơng đáp ứng với Tamoxifen,… Theo ASCO năm 2009(17) tỉ lệ khuyếch ñại gen Her-2 ung thư vú chiếm 20 - 25%, có nhiều nghiên cứu xác ñịnh hiệu ñiều trị trúng đích với kháng thể đơn dòng kháng Her-2 cho trường hợp khuyếch ñại gen Her-2 Tuy nhiên, ñiều trị ñắt tiền tác dụng phụ tim mạch Trong đó, thuốc có hiệu trường hợp có khuyếch đại gen Vì vậy, quan trọng xác định xác nhóm bệnh nhân hưởng lợi từ phương pháp điều trị Hóa mơ miễn dịch (HMMD) lai huỳnh quang chỗ (FISH) hai phương pháp thường dùng ñể xác ñịnh Her-2 ung thư vú Nhiều nghiên cứu ñã so sánh kết phương pháp ñể ñi ñến “tiêu chuẩn vàng” cho xét nghiệm tình trạng gen Her-2(1,2,6,7,10,13,15) Theo Y văn(20), chưa có xét nghiệm đánh giá lý tưởng cho Her-2, ước tính khoảng 20% xét nghiệm Her-2 khơng xác Gần ñây, người ta ứng dụng kỹ thuật xếp dãy mơ (TMA) để khảo sát đánh giá tương quan HMMD FISH tốt(7,15) Chúng nghiên cứu so sánh kết phương pháp HMMD FISH xét nghiệm xác định tình trạng Her-2 ung thư vú xâm nhiễm mẫu mô bướu thông thường (qui ước) TMA nhằm: - Xác ñịnh tỉ lệ Her-2 (+) phương pháp HMMD FISH - Xác ñịnh tương quan phương pháp HMMD FISH - Đánh giá khả ứng dụng kỹ thuật TMA ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu Chúng tơi nghiên cứu 195 trường hợp có chẩn đốn mơ học carcinơm vú xâm nhập, bao gồm 61 trường hợp qui ước, ñược BS lâm sàng ñịnh 134 trường hợp chọn ngẫu nhiên, thực TMA, khoa Giải phẫu bệnh (GPB), Bệnh viện Ung bướu TP HCM, từ tháng 12-2009 ñến tháng 9-2010 Phương pháp nghiên cứu Phương pháp chọn mẫu Mẫu bệnh phẩm phải ñược cố ñịnh dung dịch formol ñệm trung tính từ đến 48 Mẫu mơ ung thư vú xâm nhập chẩn đốn GPB phương pháp nhuộm Hematoxylin Eosin (H & E) Mẫu mơ làm TMA: Chọn đánh dấu (mapping) vùng carcinơm tuyến vú xâm nhiễm tiêu H&E, ñối chiếu vùng tương ứng “khối nến bướu”, dùng máy ñục lõi chuyển sang “khối nến TMA” ñã ñịnh vị theo thứ tự, lõi mơ có đường kính 3mm, TMA bao gồm nhiều trường hợp Phương pháp HMMD: Sử dụng kỹ thuật nhuộm gián tiếp với streptavidin-biotin với hóa chất kỹ thuật theo hướng dẫn hãng DAKO Phân tích kết theo khuyến cáo ASCO/CAP(24) năm 2007 với mức ñộ từ ñến 3+ HHMD âm tính (0 1+); giáp biên (hoặc dương tính yếu 2+); dương tính rõ (3+) Phương pháp FISH: Sử dụng Kit Pathvysion ñược FDA chấp thuận, kỹ thuật theo ñào tạo hướng dẫn nhà sản xuất công ty Abbott Molecular, Mỹ Phân tích kết theo khuyến cáo ASCO/CAP(24) 2007, đếm tín hiệu (HER2 CEP-17) 20 nhân tế bào bướu rời, vùng ung thư xâm nhiễm Tỉ lệ HER2/CEP-17 > 2,2: Khuyếch ñại gen (FISH+); HER2/CEP-17 < 1,8: khơng khuyếch đại (FISH - ); HER2/CEP-17 = 1,8-2.2: Giáp biên, ñếm tiếp tục ñến 60 tế bào cho giáp biên làm lại FISH Xử lý số liệu phần mềm SPSS 11.5 KẾT QUẢ HMMD FISH mẫu mô qui ước Trên 61 trường hợp carcinôm tuyến vú xâm nhiễm, thực HMMD FISH mẫu mô qui ước Kết HMMD Bảng Đánh giá HER2 HMMD Chuyên ñề Ung Bướu 713 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 HMMD Âm tính Số ca Tỷ lệ% 0/1+ 4.9 Dương tính (+) 36 59.0 (+) 22 36.1 Tổng 61 100.0 Nhiều nhóm có HMMD 2+ chiếm ½ trường hợp (56,9%) Kết FISH Bảng Đánh giá HER2 FISH, tỷ lệ HER2/CEP17 FISH HER2/CEP 17 ÂM TÍNH DƯƠNG TÍNH Số ca Tỷ lệ% 2, 2: Khuyếch đại gen (FISH+); HER2 /CEP-17 < 1,8: khơng khuyếch ñại (FISH - ); HER2 /CEP-17