Sự phát triển của kỹ thuật sắp xếp dãy mô (TMA) cho phép tiết kiệm thời gian, công sức và tiền bạc trong khảo sát các dấu ấn sinh học của carcinôm vú bằng phương pháp hóa mô miễn dịch. Vì vậy nghiên cứu với mục tiêu khảo sát sự phân bố của ER và PR trong mô vú ung thư và sự tương đồng về kết quả biểu hiện của ER và PR giữa mẫu mô lớn và mẫu TMA.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 KHẢO SÁT SỰ PHÂN BỐ CỦA THỤ THỂ ESTROGEN VÀ PROGESTERON TRÊN MẪU BỆNH PHẨM LỚN VÀ MẪU SẮP XẾP DÃY MÔ (TMA) TRONG CARCINÔM VÚ BẰNG PHƯƠNG PHÁP HĨA MƠ MIỄN DỊCH Âu Nguyệt Diệu*, Thái Anh Tú* TĨM TẮT Mục đích: Sự phát triển kỹ thuật xếp dãy mô (TMA) cho phép tiết kiệm thời gian, công sức tiền bạc khảo sát dấu ấn sinh học carcinôm vú phương pháp hóa mơ miễn dịch Chúng tơi khảo sát phân bố ER PR mô vú ung thư tương ñồng kết biểu ER PR mẫu mô lớn mẫu TMA Đối tượng phương pháp: 712 khối nến 712 bệnh nhân carcinơm vú khối nến TMA xây dựng từ 114 khối nến lựa chọn ngẫu nhiên 712 khối nến nhuộm hóa mơ miễn dịch ER PR Thang ñiểm Allred ñược dùng ñể ñánh giá phân bố biểu ER PR Kết quả: ER+ 60,5%, PR+ 48,2%, ER và/hoặc PR+ 61,9%; 71,4% ER+ 48,8% PR+lan tỏa ñều khắp mơ bướu ¾ trường hợp ER+ có điểm số Allred và tỉ lệ ½ trường hợp ñối với PR+ Tương ñồng biểu ER PR mẫu mô lớn TMA 91,2% (kappa = 0,82) 88,6% (kappa = 0,77) Kết luận: Đa số trường hợp ER phân bố lan tỏa mơ bướu Trong đó, PR biểu khu trú ổ chiếm nửa số trường hợp Nghiên cứu cho thấy có tương đồng cao mẫu mơ lớn mẫu TMA nhuộm hóa mơ miễn dịch ER PR Từ khóa: Thụ thể estrogen, thụ thể progesteron, xếp dãy mơ, hóa mơ miễn dịch ABSTRACT INTRATUMORAL DISTRIBUTION OF ESTROGEN AND PROGESTERON RECEPTORS ON WHOLE SECTIONS AND TMA SECTIONS IN BREAST CARCINOMA BY IMMUNOHISTOCHEMISTRY Au Nguyet Dieu, Thai Anh Tu * Y Hoc TP Ho Chi Minh – Vol.14 - Supplement of No – 2010: 697 - 705 Aims: The recent development of the tissue microarray technology, composed from multiple donor tumours aligned within a single recipient block, allows saving in time, labor and reagent costs We investigated the intratumoral distribution of estrogen and progesterone receptors in breast carcinoma by immunohistochemistry and the concordance between whole sections and tissue microarray sections Materials and methods: 712 formalin-fixed paraffin-embedded tissue blocks from 712 breast carcinoma patients and TMA blocks constructed from 114 donor blocks were immunostained for ER and PR The Allred score was used to evaluate the expression and distribution of hormonal receptors Results: ER positive in 60.5% , PR positive in 48.2% ; ER and/or PR positive in 61.9% of cases 71.4% of ER+ and 48.8% of PR+cases had diffuse and uniform staining Allred scores and in ắ cases of ER+ and in more than ẵ cases of PR+ The concordance of posive and negative results of ER and PR between whole sections and TMA sections were 91.2% (kappa = 0.82) and 88.6% (kappa = 0.77) respectively Conclusions: A majority of cases had a diffuse distribution of ER Whereas the distribution of PR was focal in more than half of PR+ cases This study also shows a high concordance rate between the whole sections and TMA sections for ER and PR immunostaining Key words: Estrogen receptor, progesterone receptor, tissue microarray, immunohistochemistry ĐẶT VẤN ĐỀ Bộ ba dấu ấn sinh học gồm thụ thể estrogen (ER), thụ thể progesteron (PR) Her2 có ý nghĩa quan trọng dự đốn đáp ứng điều trị tiên lượng trường hợp carcinôm tuyến vú Khảo sát * Bệnh viện Ung bướu TP.HCM Chuyên ñề Ung Bướu Địa liên lạc: BS Âu Nguyệt Diệu ĐT: 0913988989 biểu thụ thể estrogen progesteron phương pháp nhuộm hóa mơ miễn dịch (HMMD) thực thường qui Bệnh viện Ung bướu TP Hồ Chí Minh, mang lại nhiều lợi ích thiết thực cho bệnh nhân 697 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 Trong nhiều năm, người ta ñã khảo sát dấu ấn sinh học carcinôm tuyến vú mẫu bệnh phẩm thường qui có kích thước lớn Ngày nay, với phát triển kỹ thuật TMA (tisuue microarray – xếp dãy mô) cho phép việc ñi sâu vào nghiên cứu chất phát triển khối bướu vú ung thư trở nên thuận tiện, dễ dàng tiết kiệm ñược nhiều chi phí Các mảnh nhỏ có đường kính khoảng 0,6 – mm ñược lấy từ khối nến chứa mẫu mơ bướu nhiều bệnh nhân, sau xếp lại thành dãy mô khối nến Lát cắt mỏng từ khối nến cho phép khảo sát tế bào bướu ung thư mức ñộ protein DNA cho hàng chục bệnh nhân lúc Nhưng liệu mẫu mơ có kích thước q nhỏ (0,6 – mm) có đủ đại diện cho mẫu bệnh phẩm lớn hay khơng? Có thể sử dụng kỹ thuật TMA thay cho mẫu mô lớn hay khơng? Nhiều cơng trình nghiên cứu giới cho biết có tương hợp cao mẫu mơ lớn mẫu TMA khảo sát dấu ấn sinh học ung thư vú Tại Bệnh viện Ung bướu TP HCM, chúng tơi bắt đầu thử nghiệm thực kỹ thuật TMA khảo sát ER, PR Her2 Thực ñề tài nghiên cứu này, nhằm mục tiêu sau: + Khảo sát phân bố ER PR mô bướu trường hợp carcinôm tuyến vú mẫu mô bệnh phẩm lớn mẫu TMA phương pháp HMMD + Đánh giá tương hợp tình trạng biểu ER PR hai mẫu bệnh phẩm lớn mẫu TMA ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu 712 khối mô vùi nến 712 bệnh nhân chẩn đốn carcinơm tuyến vú, nhuộm hóa mơ miễn dịch ER PR Bệnh viện Ung bướu TP HCM từ 3/2010 ñến 8/2010 khối nến TMA xây dựng từ 114 khối nến 712 khối nến kể Phương pháp nghiên cứu Loại nghiên cứu Tiền cứu, mô tả cắt ngang Phương pháp tiến hành Mẫu bệnh phẩm lớn: 712 khối nến ñược cắt lát mỏng µm, nhuộm hóa mơ miễn dịch khảo sát thụ thể estrogen progesteron Mẫu TMA: khối nến TMA ñược xây dựng từ 114 khối nến chọn ngẫu nhiên 712 khối nến Chuyên ñề Ung Bướu Lõi mơ lấy có đường kính mm Khối nến TMA ñược cắt mỏng nhuộm hóa mơ miễn dịch khảo sát ER PR Nhuộm hóa mơ miễn dịch: Kỹ thuật nhuộm gián tiếp, sử dụng hệ thống hiển thị màu Envision + hãng DAKO, kháng thể đơn dòng sử dụng: 1D5 (DAKO) phát ER PgR636 (DAKO) phát PR Kết ñược ñánh giá bán ñịnh lượng theo hệ thống tính điểm Allred UK - NEQAS đề nghị, dựa tỉ lệ nhân nhuộm màu (0%: ñiểm; < 1%: ñiểm; 1% - 0%: ñiểm; 11% - 33%: ñiểm; 34% -66%: ñiểm; 67% - 100%: ñiểm) cường ñộ bắt màu nhân (khơng bắt màu: điểm; bắt màu yếu: điểm; bắt màu trung bình: điểm; bắt màu đậm: ñiểm) Điểm tổng cộng từ – 8; dương tính điểm tổng cộng > Phân tích số liệu phần mềm thống kê SPSS 16.0 KẾT QUẢ Qua khảo sát 712 mẫu bệnh phẩm lớn vùi nến 712 bệnh nhân carcinôm tuyến vú khối nến TMA xây dựng từ 114 mẫu bệnh phẩm lớn 114 bệnh nhân lựa chọn ngẫu nhiên loạt 712 bệnh nhân trên, chúng tơi có kết sau: Mẫu mô lớn Biểu thụ thể estrogen progesteron Bảng Biểu Thụ thể Dương tính ER 430 (60,5%) 282 (39,5%) 712 (100%) PR 343 (48,2%) 369 (51,8%) 712 (100%) Âm tính Tổng cộng Nhận xét: Tỉ lệ ER dương tính 60,5%; PR dương tính 48,2% Bảng Thụ thể Tỉ lệ % ER+PR+ 46,6% (332/712) ER+PR- 13,8% (98/712) ER-PR+ 1,5% (11/172) (ER 0ñ 7/11; ER ñ 4/11) ER-PR- 38,1% (271/712) Nhận xét: Tỉ lệ ER và/hoặc PR dương tính 61,9% ER –PR - 38,1% ER – PR + chiếm tỉ lệ thấp, 698 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 số có 1/3 số trường hợp có biểu ER ngưỡng dương tính Đặc điểm phân bố ER PR mơ bướu: Bảng Phân bố – khơng Thụ thể Phân bố Phân bố khơng 48,8% (167/342) PR 51,2% (175/342) 100% (342/342) Nhận xét: Khảo sát trường hợp thụ thể dương tính, chúng tơi nhận thấy 71,4% trường hợp ER phân bố ñều khắp mô bướu Tỉ lệ PR thấp nhiều, có 48,8% Tổng cộng 71,4% 28,6% 100% (307/430) (123/430) (430/430) Bảng Tổng ñiểm bán ñịnh lượng theo Allred ER Điểm thụ thể Tổng cộng ER 39% 0,7% 3,2% 3,7% 2,1% 5,1% 6,3% 39,9% 100%(712/712) PR 51,8% 0,1% 1,0% 6,2% 6,5% 6,0% 6,7% 21,6% 100%(712/712) Nhận xét: ¾ trường hợp ER dương tính có tổng điểm bán định lượng ñiểm, ñại ña số trường hợp điểm Chỉ có ½ trường hợp PR dương tính có tổng điểm Bảng Cường ñộ bắt màu phầm trăm tế bào bướu bắt màu Cường ñộ Điểm thụ thể Phần trăm ER 8/430 55/430 367/430 (1,9%) (12,8%) (85,3%) PR 1/342 (0,3%) 23/342 (6,7%) 34/430 (7,8%) 25/430 (5,8%) 32/430 7,4%) 47/430 293/430 (10,9%) (68,1%) 318/342 45/342 44/342 49/342 48/342 156/342 (93%) (13,1%) (12,9%) (14,3%) (14,1%) (45,6%) Nhận xét: Trong ña số trường hợp (85,3%), ER bắt màu có cường độ mạnh (3 điểm) số trường hợp có tỉ lệ bắt màu từ 34% trở lện chiếm 79% 95% trường hợp PR bắt màu ñậm (3 ñiểm) bắt màu từ 34% tế bào bướu trở lên 59,7% Tương hợp mẫu mô lớn mẫu TMA Tương hợp ñiểm số Bảng 6a Tương hợp ñiểm số ER mẫu mô lớn TMA TMA TMA TMA TMA TMA TMA TMA TMA TC MML 44 0 0 0 44 MML 0 0 0 0 MML 0 0 MML 1 1 0 MML 0 0 0 MML 0 2 MML 0 1 0 MML 2 35 50 53 4 38 114 TC Chuyên ñề Ung Bướu 699 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 Phép kiểm Wilcoxon Signed Ranks kiểm ñịnh tương hợp ñiểm số MML mẫu TMA cho biết có khác biệt có ý nghĩa thống kê Mẫu TMA có điểm số thấp MML (z = -3,691, p < 0,001) Nhận xét: Có 10/114 trường hợp ER MML thay đổi điểm số từ ≥ điểm điểm, có trường hợp từ 5-8 điểm thay đổi ≤ điểm Khơng trường hợp MML có điểm số ≤ điểm thay ñổi thành ≥ ñiểm mẫu TMA Bảng 6b Tương hợp điểm số PR mẫu mơ lớn TMA TMA TMA TMA TMA TMA TMA TMA TMA TC MML 55 0 0 56 MML 0 0 0 0 MML 0 0 0 0 MML 0 0 1 10 MML 0 1 0 MML 0 MML 0 MML 0 19 29 65 20 114 TC Phép kiểm Wilcoxon Signed Ranks kiểm ñịnh tương hợp ñiểm số MML mẫu TMA cho biết có khác biệt có ý nghĩa thống kê Mẫu TMA có ñiểm số thấp MML (z = -3,696, p < 0,001) Nhận xét: Có 12/114 trường hợp PR MML thay ñổi ñiểm số từ ≥ ñiểm điểm, có trường hợp từ - điểm thay đổi ≤ điểm Khơng trường hợp MML có điểm số ≤ điểm thay ñổi thành ≥ ñiểm mẫu TMA Chuyên ñề Ung Bướu 700 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 Tương hợp tình trạng biểu ER PR Bảng 7a Tỉ lệ tương đồng tình trạng biểu ER MML mẫu TMA TMA – ER dương tính TMA – ER âm tính TC MML – ER dương tính 60 10 70 MML – ER âm tính 44 44 TC 60 54 114 ER Nhận xét: 104/114 trường hợp (91,2%) có kết tương đồng MML mẫu TMA, kappa = 0,82 (tương đồng gần hồn tồn) Bảng 7b Tỉ lệ tương đồng tình trạng biểu PR MML mẫu TMA PR TMA – PR dương tính TMA – PR âm tính TC MML – PR dương tính 46 12 58 MML – PR âm tính 55 56 47 67 114 TC Nhận xét: 101/114 trường hợp (88,6%) có kết tương ñồng MML mẫu TMA, kappa = 0,77 (tương ñồng mạnh) BÀN LUẬN Biểu ER PR Tỉ lệ ER+ theo nghiên cứu 60,5% Tỉ lệ khơng thay đổi so với khảo sát bệnh viện Ung bướu vòng năm nay, chứng tỏ ổn định kỹ thuật nhuộm hóa mơ miễn dịch thụ thể nội tiết Tỉ lệ ER+ chúng tơi tương đồng với tác giả nước, khu vực Đông Nam Á Châu Á Theo Tạ Văn Tờ (2004), ER+ chiếm 59,1%(19) Theo tác giả người Mã Lai, Singapore, Thái lan, ER+ có tỉ lệ thay đổi từ 53,8 đến 65%(13,15,20) Tỉ lệ 64,4% ñối với người Nhật(11) 67% ñối với người Trung Quốc(14) Khi so sánh với tác giả Châu Âu Bắc Mỹ, tỉ lệ ER+ khu vực cao nhiều, thay ñổi từ 75% ñến 81%(9,16,21) Điều chứng tỏ tương đồng hồn tồn chất sinh học bệnh ung thư vú người Việt Nam Châu Á với người Châu Âu Bắc Mỹ Tuy nhiên, nhiều nghiên cứu cho biết có thay ñổi ñáng kể theo hướng tăng dần tần suất mắc bệnh ung thư vú Châu Á vốn vùng trước có tỉ lệ mắc bệnh thấp Thay ñổi ñiều kiện kinh tế xã hội, lối sống có ảnh hưởng lớn với ung thư vú Tỉ lệ PR + theo nghiên cứu 48,2% Theo Tạ Văn Tờ, tỉ lệ 51,4%(19) PR + nước Đơng Nam Á có tỉ lệ thay đổi lớn, từ 35% đến 42,1%(13,20) Có thể giải thích khác biệt tỉ lệ sử dụng kháng thể có độ nhạy khác Tỉ lệ PR+ nhóm bệnh nhân Âu Mỹ thay đổi từ 55% ñến 69%(9,16,21) Tỉ lệ ER+và/hoặc PR+ theo nghiên cứu 61,9% Theo Tạ Văn Tờ, tỉ lệ 62,3%(19) Khơng có khác biệt hai nhóm bệnh nhân ung thư vú phía Bắc phía Nam Tỉ lệ tác giả Đông Nam Á tương tự, thay ñổi từ 57,63% ñến 66%(13,15,20) Tỉ lệ cao rõ rệt nhóm bệnh nhân Âu Mỹ, thay ñổi từ 75% ñến 77,9%(9,16) Sự biểu thụ thể progesteron phụ thuộc vào tính toàn vẹn mặt chức thụ thể estrogen Tuy nhiên tồn nhóm ER-PR+ Tỉ lệ ER-PR+ nghiên cứu 1,5% Tỉ lệ thay ñổi theo Chuyên ñề Ung Bướu 701 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 nhiều tác giả, từ 2,9% đến 10% Có ý kiến khác giải thích diện nhóm Theo Elledge, thật tồn nhóm ER-PR+ biểu PR thơng qua đường khác không phụ thuộc ER(6) Trong nghiên cứu Nadji khơng có tồn nhóm ER-PR+ Tác giả giải thích tình trạng âm tính ER trường hợp (1) ER âm tính giả đặc điểm kỹ thuật phương pháp thử nồng ñộ ER bướu thấp, ngưỡng phát phương pháp thử(16); cho ñến ngày có kháng thể nhận biết ER ñược kiểm chứng lâm sàng gồm 1D5, 6F11 SP1(8) Kết nhuộm HMMD với kháng thể tương hợp cao với diễn tiến lâm sàng tương hợp cao phương pháp gắn phối tử Nghiên cứu gần ñây cho biết SP1 cho kết tốt Theo Gown, với kháng thể SP1 1D5 khơng tồn nhóm ER-PR+ nữa(8) (2) tồn biến thể ER, biến thể hoạt động bình thường khơng kết hợp với kháng thể đặc hiệu(16) Trong nghiên cứu này, chúng tơi sử dụng kháng thể 1D5, có 4/11 trường hợp ER-PR+ có ER có điểm số = (thang điểm Allred), ngưỡng dương tính phương pháp thử Điều phù hợp với giải thích Nadji Nhóm ER-PR+ nhạy cảm với điều trị nội tiết nhóm ER+PR+ ER+PR-(2) Đặc điểm phân bố ER, PR mơ bướu Theo nghiên cứu chúng tôi, 71,4% ER phân bố rải khắp mơ bướu, có 48,8% trường hợp PR phân bố rải Douglas - Johns tiến hành nghiên cứu phân bố thụ thể mơ bướu, sử dụng thang điểm H score, cho biết, quang trường 0,4 mm, xét phương diện tế bào, có khơng đồng biểu ER: Có tỉ lệ nhân không bắt màu nằm bện cạnh loạt nhân bắt màu mức độ khác nhau; xét tồn mơ bướu có đồng điểm số H score quang trường 0,4 mm Cũng theo tác giả này, tình trạng khơng đồng bướu, hay nói cách khác, bướu có phân bố thụ thể khơng chiếm tỉ lệ thấp, có 0,5%(5) Theo nghiên cứu Nadji 92% trường hợp ER+ 79% PR + lan tỏa khắp mô bướu(16) Nadji Douglas - Johns ñều cho biết thụ thể có xu hướng dương tính ngoại vi mẫu mơ nhiều giảm dần vào trung tâm bướu, có liên quan với cố định mẫu mơ ER+ khu trú mơ bướu cố định mẫu mơ khơng đủ mơ bướu bị hoại tử(5,16) Bên cạnh đó, kháng thể sử dụng có vai trò định Khơng phải tất kháng thể dùng nhuộm HMMD cho kết nhuộm ñồng ñều khắp mơ bướu Kháng thể 1D5 cho kết nhuộm âm hồn tồn dương đồng nhận biết vùngA/B đầu tận N thụ thể(16) Giải thích phân bố khơng ñều PR mô bướu, Nadji cho biết không giống ER, tình trạng PR+ khu trú khơng phải lỗi cố định Kháng thể PgR636 dung nạp tình trạng cố định mơ tốt kháng thể 1D5(16) Biểu PR phụ thuộc vào ER, chức ER khơng đồng mơ bướu dẫn đến tình trạng biểu PR khơng đồng Nghiên cứu cho thấy phần lớn trường hợp ER có tổng điểm = (thang điểm Allred) (39,9%); xét trường hợp ER+, có đến ¾ số trường hợp có điểm 8; 85,3% bắt màu ñậm (3 ñiểm), 79% có tỉ lệ bắt màu từ 34% tế bào bướu trở lên Đối với PR, tỉ lệ PR có tổng điểm = 21,6%; 93% PR bắt màu đậm (3 điểm); 59,7% PR+ có tỉ lệ bắt màu từ 34% tế bào bướu trở lên Như vậy, với kháng thể chúng tơi sử dụng, phần lớn trường hợp ER+ PR+ ñều có điểm số cao Nhận xét tương hợp với khảo sát Henriksen Trong nghiên cứu Henriksen ER có 40/55 trường hợp điểm 8; 14/55 trường hợp điểm từ đến 6; PR có 26/54 trường hợp điểm 8; 20/54 trường hợp có ñiểm từ ñến 6(10) Collins khảo sát 825 trường hợp carcinơm tuyến vú nhận thấy có đến 99% trường hợp ER hồn tồn âm tính dương tính mạnh 70% số tế bào bướu 1% lại có tỉ lệ tế bào dương tính thay đổi từ 20 - 60% Collins cho biết 80,1% trường hợp có điểm số Allred chứng tỏ biểu ER mạnh phân bố đều, 19,1% âm tính hồn tồn; trường hợp (0,8%) có điểm số thấp (5 6, khơng có điểm số 3,4)(4) Do đó, Collins xác định có hai kiểu phân bố thụ thể estrogen: Dương tính mạnh lan tỏa khắp bướu âm tính hồn tồn Điều khơng giống với nghiên cứu chúng tơi, có đến 14,8% trường hợp Chun ñề Ung Bướu 702 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 ER có điểm số ñến Sự khác biệt lỗi kỹ thuật (ví dụ: Cố định khơng đủ), kháng thể sử dụng kháng thể tốt nhất, chất sinh học bướu người Việt Nam không giống với người Âu Mỹ Kỹ thuật xếp dãy mô (Tissue microarrays - TMA) Kỹ thuật TMA ñược Kononen cộng ñưa lần ñầu tiên vào năm 1998 nhằm mục đích làm giảm thiểu thời gian cắt nhuộm mẫu mô, giảm số block paraffin, giảm chi phí cho thuốc nhuộm lẫn chi phí trả cho người nhuộm Đã có nhiều tranh luận xung quanh kỹ thuật TMA Tính khơng đồng tế bào bướu khiến mẫu TMA khơng đại diện cho tồn mơ bướu Ngược lại, TMA có nhiều lợi thế: mức ñộ ñịnh nhuộm mẫu mô nhỏ nằm tiêu chắn cao nhuộm hàng trăm mẫu mô lớn riêng biệt; nữa, việc chấm ñiểm dễ dàng thực tồn vùng mơ bướu, tránh sai lệch chủ quan lựa chọn vùng để khảo sát đọc mẫu mơ lớn Như vậy, ñể khắc phục nhược ñiểm mang lại tính khơng đồng bướu, tác giả đề nghị tăng kích thước lõi mơ TMA tăng số lượng lõi mô cho trường hợp Tăng kích thước giúp tăng thêm tối thiểu số lượng tế bào bướu khảo sát Còn tăng số lượng, lõi mơ lấy từ nhiều vị trí khác bướu, đại diện cho mơ bướu Cho đến có nhiều cơng trình nghiên cứu kích thước số lượng mẫu mô cần lấy Theo Kyndi, nhuộm HMMD ER, PR lõi mơ 1mm cho thấy kết tương đồng mẫu TMA với mẫu mô lớn, hai lõi mô lấy từ vùng ngoại vi trung tâm bướu hai lõi mô lấy từ hai block paraffin khác bệnh nhân(12) Henriksen dùng lõi mơ mm cho biết có tương đồng cao(10) Camp cho biết với lõi mơ 0,6 mm ñủ ñể ñạt ñộ tương ñồng cao(3) Anagnostou nhận thấy mẫu 0,6 mm ñủ ñại diện mẫu 1,5 mm khảo sát dấu ấn sinh học ung thư vú(10) Tuy nhiên, dụng cụ thực TMA mắc tiền, tác giả người Ấn Độ ñã giới thiệu phương pháp xây dựng mẫu mơ TMA ơng ta sử dụng kim sinh thiết tủy 16 - gauge để lấy lõi mơ cho biết có 148/150 trường hợp tương hợp mẫu mơ lớn TMA(18) Block TMA lưu giữ kháng nguyên lâu ñến 60 nằm theo Camp(3), ñã ñược cắt thành lát mỏng, kháng nguyên bị ñi ñáng kể(7) Tương hợp TMA MML Khi khảo sát tương hợp ñiểm số Allred hai mẫu mô TMA MML, nhận thấy có khác biệt có ý nghĩa thống kê Mẫu TMA có xu hướng thấp điểm MML Đối với ER, phân tích 10 trường hợp thay đổi điểm số, chúng tơi nhận thấy trường hợp có ñiểm - 5, tương ứng với phần trăm tế bào bướu bắt màu thường thấp (< 33%), xác suất lấy lõi mô vào vùng âm tính cao; trường hợp lại có điểm số - MML trở nên âm tính hồn tồn (0 điểm) TMA, chúng tơi nhận thấy nguyên nhân lỗi kỹ thuật: Khi trải mảnh mơ TMA cắt mỏng lên lam kính, người kỹ thuật viên để mẫu mơ nằm sát rìa lam kính mẫu mơ khơng tiếp xúc tiếp xúc với thuốc nhuộm, dẫn đến kết âm tính giả Giải thích tương tự với trường hợp thay ñổi ñiểm số PR Khi khảo sát tỉ lệ tương đồng dương tính âm tính MML mẫu TMA, nhận thấy tương hợp MML TMA ñối với ER 91,2% (kappa = 0,82), tương hợp cao chúng tơi khắc phục lỗi kỹ thuật phân tích trên; tương hợp PR 88,6% (kappa = 0,77), bên cạnh lỗi kỹ thuật, đặc tính phân bố khơng phần lớn trường hợp PR ñã khiến ñộ tương hợp PR MML TMA khơng cao ER Tham khảo nghiên cứu khác chúng tơi nhận thấy có tương hợp cao MML mẫu TMA nhuộm HMMD ER PR, họ dùng mẫu mơ nhỏ, có 0,6 mm Tỉ lệ tương ñồng theo Zhang (Singapore) ER 97% (kappa = 0,93), PR 98% (kappa = 0,95)(22); theo Henriksen tương ñồng 96% 93% cho ER PR(10); theo Camp 95%(3) Theo Parker, tương ñồng kết nhuộm phòng xét nghiệm khác khơng phải người đọc mà kỹ thuật nhuộm kháng thể sử dụng khác nhau(17) Do Chun ñề Ung Bướu 703 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 TMA công cụ hiệu ñể khảo sát dấu ấn sinh học ung thư vú sử dụng chương trình kiểm định chất lượng phòng xét nghiệm KẾT LUẬN Qua khảo sát 712 mẫu bệnh phẩm lớn vùi nến khối nến TMA xây dựng từ 114 mẫu bệnh phẩm lớn 114 bệnh nhân lựa chọn ngẫu nhiên, chúng tơi có kết luận sau: (1) Đa số trường hợp ER phân bố lan tỏa khắp mơ bướu, PR có gần nửa số trường hợp phân bố đều; (2) Tương đồng mẫu mơ lớn mẫu TMA 91,2% với kappa = 0,82 ñối với thụ thể estrogen 88,6% với kappa = 0,77 ñối với thụ thể progesteron ; (3) Cần hoàn chỉnh kỹ thuật TMA ñể ñạt ñộ tương hợp cao hơn.g TÀI LIỆU THAM KHẢO Anangostou V.K., Lowery F.J., Syrigos K.N., Cagle P.T., Rimm D.L (2010), “Quantitative evaluation of protein expression as a function of tissue microarray core diameter: is a large (1.5 mm) core better than a small (0.6 mm) core?”, Arch Pathol Lab Med, Apr; 134(4):613-9 Bardou V.J., Arpino G., Elledge R.M., Osborne C.K., Clark G.M (2003), “Progesterone receptor status significantly improves outcome prediction over estrogen receptor status alone for adjuvant endocrine therapy in two large breast cancer databases”, Journal of Clinical Oncology Vol 21 Issue 10 (May), pp 1973-1079 Camp R.L., Charette L.A., Rimm D.L (2004), « Validation of tissue microarray technology in breast carcinoma”, Lab Invest Dec;84(12):1677 Collins L.C.,Botero M.L., Schnitt S.J (2005), “Bimodal frequency distribution of estrogen receptor immunohistochemical staining results in breast cancer An analysis of 825 caeses”, Am J Clin Pathol, 122:16-20 Douglas-Jones A.G., Collett N., Morgan J.M., Jasani B (2001), “Comparison of core oestrogen receptor (ER) assay with excised tumour: intratumoral distribution of ER in breast carcinoma”, J Clin Pathol, 54: 951-955 Elledge R.M., Fuqua S.A.W (2000), “Chapter 31: Estrogen and progesterone receptors”, Diseases of the Breast, 2nd edition, Lippincott Williams & Wilkins, pp 471-488 Fergenbaum J.H., Garcia-Glosas M., Hewitt S.M., Lissowska J., Sakoda L.C., Sherman M.E (2004), “Loss of antigenicity in stored sections of breast cancer tissue microarrays”, Cancer epidemiol biomarkers prev 13(4) Gown A.M (2008), ”Current issues in ER and HER2 testing by IHC in breast cancer”, Modern Pathology , 21,S8-S15 Harvey J.M., Clark G.M., Osborne C.K., Allred D.C (1999), “Estrogen receptor status by immunohistochemistry is superior to the ligand-binding assay for predicting response to adjuvant endocrine therapy in breast cancer”, J Clin Oncol 17, pp 1474-1481 10 Henriksen K.L., Rasmussen B.B., Lykkesfieldt A.E., Moller S., Ejlertsen B., Mouridsen H.T (2007), “Semi-quantitative scoring of potentially predictive markers for endocrine treatment of breast cancer: a comparison between wlole sections and tissue microarrays”, J clin pathol , 60:397-404 11 Horiguchi L., Koibuchi Y., Iijima K., Yoshida T., Yoshida M et al (2003), “Immunohistochemical double staining with estrogen receptor and HER2 on primary breast cancer”, Int J Mol Med Dec 12(6), PP 855-859 12 Kyndi M., Sorensen F.B., Knudsen H., Overgaard M., Nielsen H.M., Andersen J., Overgaard J (2008), “Tissue microarrays compared with whole sections and biochemical analyses A subgroup analysis of DBCG 82 b&c”, Acta Oncologica, 47:591-599 13 Lertsanguansinchai P., Chottetanaprasith T., Chatamra K et al (2002), “Estrogen and progesterone receptors status in Thai female breast cancer patients: an analysis of 399 cases at King Chulalongkorn Memorial Hospital”, J Med Assoc Thai Jun 85 Suppl 1, pp S193-202 14 Liu R.B., Zhou X.H., Wang J.N., Liang H.Z., Li X.X., Wu Z.H., Ye J.L., Wang S.M (2008), “ Expression of estrogen receptor, progesterone receptor, and human epithelial growth factor Chuyên ñề Ung Bướu 704 Nghiên cứu Y học 15 16 17 18 19 20 21 22 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 receptor in breast cancer and the significance thereof: analysis of 910 cases”, Zhonghua Yi Xue Za Zhi Dec 30;88(48):3397-400 Looi L.M., Azura W.W., Cheah P.L., Ng M.H (2001), “pS2 expression in infiltrating ductal carcinoma of the breast correlates with oestrogen receptor positivity but not with histological grade and lymph node status”, Pathology Aug 33(3), pp 283-286 Nadji M., Gomez-Fernandez C., Ganjei-Azar P., Morales A.R (2005), « Immunohistochemistry of estrogen and progesterone receptors reconsidered Experience with 5,993 breast cancers”, Am J Clin Pathol, 123:21-27 Parker R.L., Huntsman D.G., Lesack D.W., Cupples J.B., Grant D.R., Akbari M., Gilks B.C (2002), “Assessment of interlaboratory variation in the immunohistichemical determination of estrogen receptor status using a breast cancer tissue microarray” Am J Clin Pathol, 117:723-728 Sharma S.K., Deka L., Gupta R., Gupta S., Singh D.K., Singh S (2010), “Tissue microarray construction from gross specimens: development of a novel simple technique”, J Clin Pathol, Sep;63(9):782-5 Tạ Văn Tờ (2004), Nghiên cứu hình thái học, hóa mơ miễn dịch giá trị tiên lượng chúng ung thư biểu mô tuyến vú, Luận án Tiến sĩ Y học, Trường ĐạI học Y Hà Nội Thike A.A., Cheng M.J., Fook-Chong S., Tan P.H (2001), “Immunohistochemical expression of hormone receptors in invasive breast carcinoma: correlation of results of Hscore with pathological parameters”, Pathology Feb 33(1), pp 21-25 Zafrani B., Aubriot M.H., Mouret E., De Cremoux P., De Rycke Y et al (2000), “High sensitivity and specificity of immunohistochemistry for the detection of hormone receptors in breast carcinoma: comparison with biochemical determination in a prospective study of 793 cases”, Histopathology Dec 37(6), pp 536-545 Zhang D.H., Salto-Tellez M., Putti T.C., Do E., KoayE.S.C (2003), “Reliability of tissue microarrays in detecting protein expression and gene amplification in breast cancer”, Mod Pathol, 16(1):79-85 Chuyên ñề Ung Bướu 705 ... mô bướu trường hợp carcinôm tuyến vú mẫu mô bệnh phẩm lớn mẫu TMA phương pháp HMMD + Đánh giá tương hợp tình trạng biểu ER PR hai mẫu bệnh phẩm lớn mẫu TMA ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối... nghiên cứu Tiền cứu, mô tả cắt ngang Phương pháp tiến hành Mẫu bệnh phẩm lớn: 712 khối nến ñược cắt lát mỏng µm, nhuộm hóa mơ miễn dịch khảo sát thụ thể estrogen progesteron Mẫu TMA: khối nến TMA... cộng > Phân tích số liệu phần mềm thống kê SPSS 16.0 KẾT QUẢ Qua khảo sát 712 mẫu bệnh phẩm lớn vùi nến 712 bệnh nhân carcinôm tuyến vú khối nến TMA xây dựng từ 114 mẫu bệnh phẩm lớn 114 bệnh nhân