Bài viết trình bày nghiên cứu các đột biến gen beta-thalassemia ở bệnh nhân miền Bắc được chẩn đoán beta-thalassemia vào Bệnh viện Nhi Trung ương từ 2008 đến nay.
tạp chí nhi khoa 2017, 10, ĐỘT BIẾN GEN Ở BỆNH NHÂN BETA-THALASSEMIA TẠI BỆNH VIỆN NHI TRUNG ƯƠNG Nguyễn Hoàng Nam, Lý Thị Thanh Hà Dương Bá Trực, Bùi Văn Viên, Ngơ Diễm Ngọc TĨM TẮT Beta-thalassemia phổ biến Việt Nam, tần suất mang gen bệnh thay đổi từ 1,5% đến 12% tùy theo dân tộc Mục tiêu: Nghiên cứu đột biến gen beta-thalassemia bệnh nhân miền Bắc chẩn đoán beta-thalassemia vào Bệnh viện Nhi Trung ương từ 2008 đến Đối tượng phương pháp nghiên cứu: 42 bệnh nhân, 27 beta-thalassemia, 15 betathalassemia - HbE, 25 người Kinh, 17 dân tộc người, 27 thể nặng 15 thể trung gian, nghiên cứu Phát đột biến gen beta-thalassemia kỹ thuật Multiplex ARMSPCR giải trình tự gen PCR sợi đơn Kết quả: Trong 42 bệnh nhân nghiên cứu, phát 83 đột biến, với dạng đột biến khác Ba loại đột biến phổ biến Cd 17 (A>T) 32,6%, Cd 41/42 (-CTTT) 32,6% Cd 26 (AGG-AAG) 19,2% Các đột biến khác gặp Cd 71/72 (+ A) 6%, -28(A>G) 4,8%, Cd 35 (TAC>TAA) 1,2%, IVS2-654 (C>T) 1,2%, IVS1-5 (G>T) 1,2%, IVS 1-1 (G>T) 1,2% Đột biến gen β0-thalassemia chủ yếu, nhiều gen β+-thalassemia Trong số 42 bệnh nhân có 15 bệnh nhân đột biến đồng hợp tử, lại dị hợp tử kép, đột biến gen đồng hợp tử gặp Cd 41/42 (9 bệnh nhân) Cd 17 (6 bệnh nhân) Đột biến Cd 17 phổ biến dân tộc Kinh nhiều hơn, Cd 41/42 dân tộc người nhiều Đột biến gen Cd 41/42 gặp nhiều thể nặng, Cd 26 gặp nhiều thể trung gian Kết luận: Đột biến gen β-thalassemia đa dạng, không khác với nghiên cứu miền Nam Việt Nam nhiều, khác tần suất Kết nghiên cứu giúp hiểu thêm tính đa dạng lâm sàng bệnh sở cho việc chẩn đốn trước sinh để dự phịng, kiểm sốt thalassemia Việt Nam Từ khóa: Thalassemia, Cơ sở phân tử thalassemia ABSTRACT STUDY OF β-THALASSEMIA MUTATIONS IN PATIENTS AT THE NATIONAL HOSPITAL OF PEDIATRICS Nguyễn Hoàng Nam, Lý Thị Thanh Hà, Dương Bá Trực, Bùi Văn Viên, Ngô Diễm Ngọc National Hospital of Pediatrics Beta-Thalassemia is very frequent in VietNam, the carrier rate varies from 1% to 12% depending on the ethmic groups of population Objectives: To study of β-Thalassemia mutations in patients of northern region admitted the National Hospital of Pediatrics, from the year of 2008 to 2014 Methods: 42 unrelated patients, 27 were β-Thalassemia and 15 had β-Thalassemia/HbE; 25 were King people, 17 were minority ethmic people, 27 were major form of β-Thalassemia and 15 were intermedia form, were observed Gene β-Thalassemia mutations were analysed by Multiplex ARMS – PCR and gene sequencing by single chain PCR Results: 83 different mutations were identified in 42 patients, with various types of mutations, three most friquent mutations were Cd 17 (A>T) 32.6%, Cd 41/42 (-CTTT) 32.6% end Cd 26 (AGG-AAG) 19.2% The six other mutations observed at lower frequency were Cd 71/72 (+ A) 6%, - 28(A>G) 4.8%, Cd 35 (TAC>TAA) 1.2%, IVS2-654 (C>T) 1.2%, IVS1-5 (G>T) 1.2%, IVS Nhận bài: 10-7-2017; Thẩm định: 20-8-2017 Người chịu trách nhiệm chính: Nguyễn Hồng Nam Địa chỉ: Khoa Huyết học lâm sàng Bệnh viện Nhi trung ương 46 phần nghiên cứu 1-1 (G>T) 1.2% β0-Thalassemia mutations were more frequent than β+-Thalassemia 15 of 42 studied patients were homozygous mutations, the other were double heterozygous; homozygous mutations observed were Cd 41/42 (9 patients) Cd 17 (6 patients) Cd 17 mutations were more frequent in Kinh people, and Cd 41/42 in minrity ethmic group Cd 41/42 mutation were more detected in major form of β-Thalassemia, Cd 26 were more in intermedia form Conclusions: Thus β-Thalassemia mutations were various, no different so much to that in southern of Vietnam, although at different frequencies These results help to understand more the clinical heterogeinity of disease, and were scientific basic for prenatal diagnosis for prevention an control thalassemia in Vietnam Keywords: Thalassemia; Molecular basic of thalassemia ĐẶT VẤN ĐỀ Beta-Thalassemia bệnh hemoglobin di truyền phổ biến Việt Nam, phát thấy tất tỉnh thành nước, phổ biến nhiều dân tộc người Các nghiên cứu trước cho thấy, tần số mang gen bệnh người Kinh 1% - 2% dân số, người dân tộc người 12% [1] Beta-thalassemia bệnh di truyền đơn gen, di truyền lép nhiễm sắc thể thường Gen betathalassemia nhiễm sắc thể 11 Hiện phát thấy có 300 đột biến khác dân tộc giới, tác động lên chức gen beta-globin Nhiều đột biến gen đặc hiệu (kiểu gen) có liên quan chặt chẽ tới mức độ nặng lâm sàng bệnh (kiểu hình) xác định Do đó, nghiên cứu đột biến gen beta-thalassemia giúp ích việc định hướng mức độ nặng bệnh điều trị, tiên lượng đồng thời sở cho chẩn đoán trước sinh để tư vấn di truyền, giảm trường hợp bệnh nặng mắc phòng bệnh Đã có vài nghiên cứu đột biến gen betathalassemia Việt Nam, song chưa đầy đủ, chúng tơi tiến hành nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu xác định kiểu đột biến gen beta-thalassemia bệnh nhân miền Bắc chẩn đoán beta-thalassemia vào điều trị Bệnh viện Nhi trung ương Hy vọng kết nghiên cứu góp phần hiểu biết đầy đủ đột biến gen beta-thalassemia Việt Nam ĐỐI TƯỢNG phương pháp NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu bệnh nhân beta-thalassemia khu vực miền Bắc vào điều trị khoa Huyết học lâm sàng, Bệnh viện Nhi Trung ương từ năm 2008 đến * Tiêu chuẩn chẩn đoán beta-thalassemia - Lâm sàng: Biểu thiếu máu tan máu mạn tính, vàng da, lách to - Huyết học: Có thay đổi thành phần hemoglobin (Hb): HbF tăng HbA2 bình thường tăng không 10% HbA1 giảm Với thể phối hợp β-thal/HbE: Ngồi HbF tăng, có nhiều HbE với bệnh nhân thiếu máu xảy sớm từ nhỏ, thiếu máu nặng, phải truyền máu nhiều, thường xuyên xếp vào thể nặng Với bệnh nhân thiếu máu vừa, phải truyền máu xếp vào thể trung gian - Có kết đột biến gen phù hợp * Phương pháp nghiên cứu: Mơ tả, phân tích, tiến cứu * Kỹ thuật phát đột biến gen: Multiplex ARMS-PCR giải trình tự gen PCR sợi đơn Chúng trọng phát đột biến gen β-thalassemia thường gặp nhất: Cd41/42(-CTTT), Cd17(AAG→TAG), -28(A→G), Cd71/72(+A), IVS2-654(C>T), IVS 1-5(G>C), IVS 1-1(G>T) Tìm đột biến HbE: CD26 (GAG>AAG) phương pháp ARMS - PCR * AND tách từ máu toàn phần chống đông EDTA KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Trong thời gian từ 2008 đến 2014 có 42 bệnh nhân β-thalassemia vào bệnh viện nghiên cứu, 27 β-thalassemia, 15 β-thalassemia/HbE 3.1 Đặc điểm bệnh nhân nghiên cứu 47 tạp chí nhi khoa 2017, 10, Bảng Đặc điểm bệnh nhân nghiên cứu Tuổi: - 1t - 5t - 10t 11 - 15 t Nam Nữ Dân tộc: Kinh Ít người Phân bệnh: - Nặng - Trung gian Số lượng % 21 16 27 15 25 17 27 15 4,8% 50,0% 38,1% 7,1% 64,3% 35,7% 59% 41% 64,3% 35,7% 3.2 Các đột biến gan β-thalassemia phát Bảng Các đột biến gen β-thalassemia phát Đột biến Kiểu Thalassemia n % Cd42/42 (-CTTT) β 27 32,6% Cd 17 (AAG-TAG) β0 27 32,6% Cd26 (GAG-AAG) HbE 16 19,2% Cd71/72 (+A) β+ 6,0% -28 (A>G) β0 4,8% Cd35 (TAC>TAA) β 1,2% IVS 2-654 (C>T) β0 1,2% IVS 1-5 (G>C) β0 1,2% IVS 1-1 (G>T) β Cộng 1,2% 83 100% Nhận xét: Đã phát 83 gen đột biến với kiểu đột biến khác Kiểu đột biến gen Cd41/42 Cd 17 phổ biến nhất, thứ chiếm 32,6% Đột biến gen gây HbE phổ biến, chiếm 19,2% Bảng Phân loại đột biến theo kiểu di truyền Kiểu gen n % Cd41/42 – Cd41/42 21,4 Cd17 – Cd17 14,3 Cd17 – Cd26 14,3 Cd41/42 – Cd26 9,5 Cd41/42 – Cd17 9,5 -28 – Cd17 7,1 Cd41/42 – Cd71/72 4,8 Cd26 – Cd71/72 4,8 -28 – Cd41/42 2,3 IVS 1-1 – Cd26 2,3 IVS 1-5 – Cd26 2,3 IVS 2-265 – Cd71/72 2,3 Cd35 – Cd26 Cd17 1 2,3 2,3 Tổng cộng 42 100,0 Nhận xét: Có 35,7% trường hợp đột biến gen đồng hợp tử, lại hầu hết đột biến gen dị hợp tử kép Kiểu gen đồng hợp tử Cd41/42 phổ biến đồng hợp tử Cd17 48 phần nghiên cứu Bảng Phân loại đột biến gen β-thalassemia theo dân tộc Đột biến Kinh (n= 25) Dân tộc người (n=17) Cd17 (A>T) 18 (36,7%) (26,4%) Cd41/42 (-CTTT) 13 (26,5%) 14 (41,2%) Cd26 (AGG-AAG) 11 (22,4%) (14,7%) Cd71/72 (+A) (6,1%) (5,9%) -28 (A>G) (2,0%) (8,8%) Cd35 (TAC-TAA) (2,9%) IVS 2-654 (C>T) (2%) IVS 1-5 (G>C) (2%) IVS 1-1 (G>T) (2%) 49 (100%) 34 (100%) Nhận xét: Cả đột biến Cd17, Cd41/42, Cd26 phổ biến dân tộc, Cd17 phổ biến dân tộc Kinh nhiều hơn, Cd41/42 dân tộc người nhiều Bảng Phân bố đột biến gen β-thalassemia theo mức độ bệnh Đột biến Cd17(A>T) Cd41/42 (-CTTT) Cd26(GAG-AAG) Cd71/72 (+A) -28(A>G) Cd35(TAC>TAA) IVS 2-654(C>T) IVS 1-5(G>C) IVS 1-1(G>T) Cộng Thể nặng n 20 25 3 1 60 Thể trung gian % 33,3% 41,7% 11,7% 5% 5% 1,6% 1,6% 100,0 n % 30,5% 8,7% 39,1% 8,7% 4,4% 1 23 4,4% 4,4% 100,0 Nhận xét: Đột biến Cd41/42 gặp phổ biến bệnh nhân thể nặng, Cd26 gặp phổ biến thể trung gian.4 BÀN LUẬN Trong thời gian từ 2008 đến 2013 nghiên cứu 42 bệnh nhân β-thalassemia, kết sau: 4.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu Trong số 42 bệnh nhân nghiên cứu 27 β-thalassemia, 15 β-thalassemia/HbE, đa số trẻ nhỏ tuổi (54,8%) tiếp 6-10 tuổi (38,1%), trẻ lớn (7,1%) Về giới, có 27 trẻ trai (64,3%), 15 trẻ gái (35,7%) Tất bệnh nhân đến từ tỉnh thành miền Bắc, 25 dân tộc Kinh (59%), 17 dân tộc người (41%), bao gồm trẻ dân tộc Tày, trẻ dân tộc Mường, Nùng, Thái, Dao trẻ dân tộc Sán Dìu Các nghiên cứu trước Việt Nam kết luận β-thalassemia phổ biến dân tộc người dân tộc Kinh Dân tộc người chiếm 10 – 15% dân dân số Việt Nam, nghiên cứu dân tộc người chiếm 41% số nghiên cứu Về lâm sàng, đa số bệnh nhân nghiên cứu thể nặng (64,3%), lại thể trung gian (35,7%) 4.2 Đột biến gen β-thalassemia Kết bảng cho thấy phát 83 đột biến gen β-thalassemia, với kiểu đột biến khác Ba loại đột biến phổ biến Cd41/42 (32,6% đột biến), Cd17 (32,6%) Cd26 (19,2%) Các đột biến khác gặp hơn, Cd71/72 (6%), - 28 (4,8%), Cd35 (1,2%), IVS 1-1 (1,2%), IVS 1-5 (1,2%), IVS 2-654 (1,2%) Trừ 15 đột biến Cd26 đột biến gen HbE, lại 68 đột biến đột biến gen β0-thalassemia β+-thalassemia Đột biến gen β0-thalassemia chủ yếu, nhiều hẳn gen β+-thalassemia Kết phù hợp với nghiên cứu trước 49 tạp chí nhi khoa 2017, 10, Vì số lượng nghiên cứu chưa nhiều, nghiên cứu không nghiên cứu đột biến gen β-thalassemia dân tộc khác nhau, nên chia nhóm, dân tộc Kinh dân tộc người Kết bảng cho thấy, đột biến phổ biến Cd17, Cd41/42, Cd26, Cd71/72, - 28 gặp người Kinh dân tộc người Đột biến Cd17 phổ biến người Kinh nhiều hơn, Cd41/42 dân tộc người nhiều (bảng 4) So sánh với nghiên cứu có Việt Nam, kết bảng đây: Việt Nam, gen β0-thalassemia phổ biến gen β+-thalassemia HbE phổ biến β-thalassemia [2] Trong số 42 bệnh nhân nghiên cứu, có 15 bệnh nhân có đột biến đồng hợp tử, lại đột biến dị hợp tử kép Đột biến gen đồng hợp tử gặp Cd41/42 (9 trường hợp) Cd17 (6 trường hợp) Dị hợp tử kép hay gặp dị hợp tử Cd17, Cd41/42 với Cd26 (Bảng 3) Như vậy, đột biến gen β-thalassemia bệnh nhân β-thalassemia nhiều, giải thích đặc điểm lâm sàng β-thalassemia đa dạng [3] Bảng Tần suất đột biến gen β-thalassemia theo số nghiên cứu Việt Nam Nghiên cứu (Miền Bắc) 32,6% Filon D cs 2000 (Miền Bắc) [4] 48,3% Svasti MLS 2002 (Miền Nam) [5] 25% Hảo LT cs 1988 (Miền Nam) [6] 13% Cd41/42 32,6% 34,5% 35,7% 43,5% Cd26 (GAG-AAG) 19,2% - - - Cd71/72 (+A) 6,0% 3,4% 7,3% 8,7% -28 (A>G) 4,8% 7,3% - Cd35 (TAC>TAA) 1,2% - - - IVS 2-654 (C>T) 1,2% 13,8% 7,3% 13,0% IVS 1-5 (G>T) 1,2% - - - IVS 1-1 (G>T) 1,2% - 6,0% 4,4% - - 11,8% 17,4% Đột biến Cd17(A>T) Khác Các nghiên cứu cho thấy có nhiều kiểu đột 41/42, Cd 71/72 IVS 2-654; trừ Cd26 đột biến biến gen β-thalassemia khác phát HbE Các nghiên cứu HbE cho HbE phân miền Bắc Nam Nghiên cứu phát bố tất tỉnh thành nước, từ miền Bắc kiểu đột biến, nhiều nghiên cứu vào miền Nam, miền Nam có tần số HbE cao [1,2] trước đây, phát từ 4-8 đột biến Tất Đối chiếu kết nghiên cứu với nghiên cứu thống nhất, có kiểu đột biến phổ kết nghiên cứu khác khu vực châu Á bảng biến người Việt Nam, theo thứ tự nhiều Cd17, Cd sau đây: Bảng Tần suất đột biến gen β-thalassemia với nghiên cứu khác châu Á Philipin (Ko TM cs 1998 [8] Hàn Quốc (Park SS cs 2002) [9] Malaysia (Tan M cs 2004) [10] 16,5% - 21,2% 9,3% Miền Nam Trung Quốc (Chen W cs 2010) [11] 15,9% 41,6% 1,7% 4,2% - 19,6% - 18,6% - 19% 12,6% Nghiên cứu Thái Lan (Fucharoen cs 1997) [7] Cd17 (A>T) 33,5% Cd41/42 (-CTTT) 33,5% Cd26 (GAG-AAG) 19,2% Đột biến 6% 2,1% - - - 3,7% -28 (A>G) Cd71/72 (+A) 4,8% 9,3% - - - 20,1% Cd35 (TAC>TAA) 1,2% - - - - - IVS 2-654 (C>T) IVS 1-5 (G>C) IVS 1-1 (G>T) Khác 1,2% 1,2% 1,2% - 8,0% 1,3% 21,2% 97,7% 74,6% 33,5% 4,8% 33,4% 9,3% 2,3% 16,5% 50 phần nghiên cứu Tất nghiên cứu số nước châu Á thống đột biến gen β-thalassemia đa dạng Đột biến gen β-thalassemia Việt Nam tương tự đột biến gen β-thalassemia phía nam Trung Quốc Thái Lan, khác biệt nhiều với đột biến gen Philippin, Malaysia Hàn Quốc (bảng 7) Nghiên cứu liên quan đột biến gen β-thalassemia với mức độ nặng bệnh, kết bảng cho thấy tất đột biến gen phổ biến thấy thể nặng trung gian, đột biến gen Cd41/42 gặp nhiều thể nặng, đột biến gen Cd26 gặp nhiều thể trung gian Các nghiên cứu y, y văn thống thể bệnh phối hợp với HbE (hay dị hợp tử kép với Cd26) lâm sàng biểu bệnh nhẹ hơn, chí trường hợp đồng hợp tử HbE khơng có biểu bệnh lâm sàng [1,2] Kết luận Đột biến gen β-thalassemia đa dạng, không khác biệt nhiều với nghiên cứu có Việt Nam, khác biệt tần suất Nghiên cứu đột biến gen β-thalassemia giúp hiểu biết thêm tính đa dạng lâm sàng bệnh, sở để chẩn đoán trước sinh để dự phịng, kiểm sốt thalassemia Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Khanh.NC (1993) Tần số bệnh hemoglobin Việt Nam Y học Việt Nam, Tập 174; 8: 11-16 Viên BV (2001) Một số đặc điểm lâm sàng huyết học bệnh HbE Bước đầu tìm hiểu tần suất HbE dân tộc Mường, tỉnh Hịa Bình Luận án Tiến sĩ Y học, Đại học Y Hà Nội Eleftheriou A (2003) Gene controlling globin synthesis In: About Thalassemia Thalassemia International Federation Publications (4): 14-15 Filon D Oppenheim A, Richmilewitz EA, Kot R, Bá Trực D (2000) Molecular analysis of β-thalassemia in Việt Nam Hemoglobin 2000; 24: 99-104 Svasti MLS, Hiếu TM, Munkongdee T, Winichagoon P, Bé TV, Bình TV, Fucharoen S (2002) Molecular analysis of β-thalassemia in South Vietnam American J of Hematology 71: 85-88 Hảo LT, Pissard S, Van PH, Lacobe C, Hanh TD, Gossens M, Kiệt TD (2001) Molecular analysis of β-thalassemia in South Vietnam Hemoglobin 25: 305-309 Fucharoen S, Winichagoon P (1997) Haemoglobinopathies in Southeast Asia: molecular biology and clinical medicine Hemoglobin 21: 299-319 Ko MT Caviles AP, Hwa HL, Liu CW, Hsu PM, Chung YP (1998) Prevalence and molecular characterization of β-thalassemia in Filipinos Ann Hemotology 77: 257-260 Park SS, Cho HI (2002) Beta-thalassemia in the Korea Population Interational J of Hematology Supplement II: 93-95 10 Tan E, George KL, Tan T, Chow PC, Tan J, Hassan P, Chia R, Subramanium R, Chandran R, Yap SF (2004) Molecular defects in the β-globin gene identified in different ethnic groups/ populations during prenatal diagnosis for β-thalassemia: a Malaysian experience Clin Exp Med 4: 142-147 11 Chen W, Zhang X, Shang X et al (2010) The molecular basis of β-thalassemia intermedia in Southern China: genotypic heterogencity and phenotypic diversity BMC Medical Genetics: 11-13 51 ... quan đột biến gen β-thalassemia với mức độ nặng bệnh, kết bảng cho thấy tất đột biến gen phổ biến thấy thể nặng trung gian, đột biến gen Cd41/42 gặp nhi? ??u thể nặng, đột biến gen Cd26 gặp nhi? ??u... định kiểu đột biến gen beta-thalassemia bệnh nhân miền Bắc chẩn đoán beta-thalassemia vào điều trị Bệnh viện Nhi trung ương Hy vọng kết nghiên cứu góp phần hiểu biết đầy đủ đột biến gen beta-thalassemia. .. châu Á thống đột biến gen β-thalassemia đa dạng Đột biến gen β-thalassemia Việt Nam tương tự đột biến gen β-thalassemia phía nam Trung Quốc Thái Lan, khác biệt nhi? ??u với đột biến gen Philippin,