ĐÁNH GIÁ mức độ TRƯỞNG THÀNH TINH TRÙNG BẰNG NHUỘM ANILINE BLUE và mối LIÊN QUAN với HÌNH THÁI

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN NỮ THỤC HIỀN ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ TRƯỞNG THÀNH TINH TRÙNG BẰNG NHUỘM ANILINE BLUE VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI HÌNH THÁI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SỸ Y KHOA KHÓA 2011 – 2017 Hà Nội – 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI PHAN NỮ THỤC HIỀN ĐÁNH GIÁ MỨC ĐỘ TRƯỞNG THÀNH TINH TRÙNG BẰNG NHUỘM ANILINE BLUE VÀ MỐI LIÊN QUAN VỚI HÌNH THÁI KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP BÁC SỸ Y KHỌA KHÓA 2011 - 2017 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: ThS BS NGUYỄN THANH HOA Hà Nội – 2017 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, tơi nhận giúp đỡ to lớn Thầy - Cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Mô phôi trường Đại học Y Hà Nội bệnh nhân tham gia nghiên cứu Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ThS BS Nguyễn Thanh Hoa -Giảng viên môn Mô phôi - Trường Đại học Y Hà Nội, người cô trực tiếp hướng dẫn, nhiệt tình bảo dìu dắt tơi q trình nghiên cứu hồn thành khóa luận Tơi xin chân thành cảm ơn phòng Đào tạo Đại học Trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập Cuối xin chân thành cảm ơn tới bạn bè gia đình, người thân chia sẻ khó khăn, động viên khích lệ giúp đỡ tơi để tơi có kết ngày hơm Bản khóa luận hoàn thành với nỗ lực người viết, chắn không tránh khỏi thiếu sót Tơi mong muốn nhận ý kiến bảo quý báu Thầy - Cô để khóa luận hồn thiện Xin trân trọng cảm ơn Hà Nội ngày 20 tháng 05 năm 2017 Phan Nữ Thục Hiền LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Tác giả khóa luận Phan Nữ Thục Hiền MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN .3 1.1 QUÁ TRÌNH SẢN SINH TINH TRÙNG 1.1.1 Đại cương trình hình thành tinh trùng người 1.1.2 Quá trình trưởng thành tinh trùng .3 1.2 ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG TINH DỊCH 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Tinh dịch đồ 1.2.3 Các xét nghiệm sâu liên quan đến tinh dịch 10 1.3 MÔÍ LIÊN QUAN GIỮA CÁC BẤT THƯỜNG DNA TINH TRÙNG VA KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA NAM GIỚI 12 1.3.1 Khái niệm 12 1.3.2 Các kỹ thuật đánh giá chất lượng DNA 12 1.3.3 Các nghiên cứu liên quan bất thường DNA tinh trùng khả sinh sản nam giới .19 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHÁP, KỸ THUẬT NGHIÊN CỨU 22 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 22 2.1.1 Tiêu chuẩn lựa chọn .22 1.3.2 Tiêu chuẩn loại trừ 22 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 22 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 22 2.2.3 Thời gian địa điểm nghiên cứu 22 2.2.4 Phương pháp xử lý số liệu .23 2.2.5 Kỹ thuật khống chế sai số 23 2.3 KỸ THUẬT NGHIÊN CỨU .23 2.3.1 Kỹ thuật lấy xét nghiệm tinh dịch .23 2.3.2 Khảo sát đại thể 23 2.3.3 Khảo sát vi thể 24 Chương 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 26 3.1 MỘT SỐ THÔNG TIN VỀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 26 3.2 ĐẶC ĐIỂM VỀ HÌNH THÁI VÀ ĐỘ TRƯỞNG THÀNH CỦA TINH TRÙNG .32 Chương 4: BÀN LUẬN 43 4.1 VỀ CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ TINH DỊCH ĐỒ VA PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ ĐỘ TRƯỞNG THANH CỦA TINH TRÙNG .43 4.1.2 Phương pháp nhuộm Aniline Blue 43 4.1.3 Phương pháp đánh giá độ trưởng thành tinh trùng 43 4.1.4 Các phương pháp đánh giá tinh dịch đồ khác: .44 4.2 VỀ ĐẶC ĐIỂM CHUNG CỦA ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 46 4.2.2 Đặc điểm tuổi 46 4.2.3 Về mật độ độ di động 47 4.2.4 Về hình thái 47 4.2.5 Về độ trưởng thành tinh trùng 48 4.3 VỀ MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA HÌNH THÁI VÀ ĐỘ TRƯỞNG THÀNH CỦA TINH TRÙNG 50 KẾT LUẬN 53 KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AB : Aniline Blue DNA : Acid Deoxyribonucleic ICSI : Tiêm tinh trùng vào bào tương noãn (Intracytoplasmic sperm injection) IUI : Bơm tinh trùng vào buồng tử cung (Intra- Uterine Insemination) IVF : Thụ tinh ống nghiệm (Invitro Fertilization) WHO : Tổ chức Y tế giới (World Health Organization) DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Đặc điểm mật độ mẫu tinh dịch nghiên cứu 30 Bảng 3.2 Đặc điểm tỷ lệ độ di động mẫu tinh dịch nghiên cứu 31 Bảng 3.3 Đặc điểm hình thái tinh trùng mẫu nghiên cứu sau nhuộm Eosin 32 Bảng 3.4 Đặc điểm độ trưởng thành tinh trùng mẫu nghiên cứu sau nhuộm Aniline Blue 33 DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Phân bố độ tuổi đối tượng nghiên cứu 30 Biều đồ 3.2 Mối tương quan tỷ lệ bất thường đầu sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành sau nhuộm AB 34 Biểu đồ 3.3 Mối tương quan tỷ lệ bất thường đầu sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành bán trưởng thành sau nhuộm AB .35 Biểu đồ 3.4 Mối tương quan tỷ lệ bất thường cổ sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành sau nhuộm AB 36 Biểu đồ 3.5 Mối tương quan tỷ lệ bất thường cổ sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành bán trưởng thành sau nhuộm AB 37 Biểu đồ 3.6 Mối tương quan tỷ lệ bất thường đuôi sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành sau nhuộm AB 38 Biểu đồ 3.7 Mối tương quan tỷ lệ bất thường đuôi sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành bán trưởng thành sau nhuộm AB .39 Biểu đồ 3.8 Mối tương quan tỷ lệ tinh trùng bất thường chung sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành sau nhuộm AB 40 Biểu đồ 3.9 Mối tương quan tỷ lệ tinh trùng bất thường chung sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành bán trưởng thành sau nhuộm AB 41 Biểu đồ 3.10 Mối tương quan tỷ lệ tinh trùng bình thường sau nhuộm Eosin với tỷ lệ tinh trùng trưởng thành sau nhuộm AB 42 DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Phiến đồ nhuộm Eosin 26 Hình 3.2 Phiến đồ nhuộm Eosin 27 Hình 3.3 Phiến đồ nhuộm Eosin 27 Hình 3.4 Phiến đồ nhuộm Eosin 28 Hình 3.5 Phiến đồ nhuộm Aniline Blue .28 Hình 3.6 Phiến đồ nhuộm Aniline Blue .29 49 sẩy thai tự nhiên cao đáng kể sau thụ tinh nhân tạo cách sử dụng tinh trùng với tỷ lệ tinh trùng hạt nhân chưa trưởng thành cao [53] [54] Vì vậy, nhận thấy tinh trùng thiếu hụt protamine tăng histone dẫn đến chưa trưởng thành ngưng tụ chromatin nguyên nhân gây thất bại thụ tinh phát triển phôi [55] [56] Ngược lại, Hammadeh et al [57] không thấy khác biệt tỷ lệ thụ tinh bệnh nhân có tinh trùng thu xuất tinh tinh trùng thu từ sinh thiết tinh hồn, có khác biệt đáng kể tỉ lệ tinh trùng trưởng thành nhuộm AB hai nhóm Tuy nhiên, khơng giống nhuộm AB, họ tìm thấy khác biệt đáng kể tỷ lệ phần trăm tinh trùng dương tính CMA3 hai nhóm Sự khác biệt việc nhuộm AB CMA3 nhuộm CMA3 xét nghiệm nhạy đặc hiệu CMA3 khơng diện tinh trùng thừa histone mà tinh trùng thiếu hụt protamine [52] Tương tự, Razavi et al [58] khơng tìm thấy tương quan thừa histones đánh giá nhuộm AB tỷ lệ thụ tinh theo ICSI Điều giải thích có mặt yếu tố gây nhiễu lựa chọn tinh trùng ICSI theo hình thái học bình thường ảnh hưởng đến tỷ lệ thụ tinh ICSI [49] 4.3 VỀ MỐI TƯƠNG QUAN GIỮA HÌNH THÁI VÀ ĐỘ TRƯỞNG THÀNH CỦA TINH TRÙNG Theo kết nghiên cứu chúng tôi, khơng có tương quan bất thường độ trưởng thành tinh trùng (so sánh nhóm: chưa trưởng thành; chưa trưởng thành bán trưởng thành) với tỷ lệ bất thường hình thái cổ đuôi tinh trùng Tương tự vậy, mối tương quan tỷ lệ tinh trùng bất thường hình thái đầu với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành tổng tỷ lệ chưa bán trưởng thành ngưng tụ chromatin lỏng leo 50 Tuy nhiên thấy có mối tương quan trung bình tổng tỷ lệ bất thường hình thái tinh trùng với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành Bên cạnh đó, xét tỷ lệ bất thường hình thái đầu tinh trùng tổng tỷ lệ bất thường hình thái chung với tổng tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành bán trưởng thành thấy mối tương quan trở nên chặt chẽ Đây tinh trùng bán trưởng thành xem xét xếp loại với tinh trùng chưa trưởng thành, theo số khuyến cáo nghiên cứu thực nghiệm trước Nguyên nhân thiếu hụt protamine phát Aniline Blue có mối liên quan với tồn vẹn ADN Kovanci et al chứng minh mối tương quan chặt chẽ tỷ lệ xuất tinh trùng chưa trưởng thành tỷ lệ tinh trùng dị dạng Những kết cho thấy diện mối liên kết phân tách màng nhiễm sắc thể trình động học nucleoprotein trình hình thành giao tử đực [59] Các nghiên cứu trước chứng minh có mối liên quan hình thái phần đầu tinh trùng trưởng thành tinh trùng Cụ thể nghiên cứu Zini cộng cho thấy mối tương quan bất thường hình thái đầu tinh trùng bất thường trình ngưng tụ hạt nhân, gợi ý bất thường hình thái phần phân mảnh chromatine không đầy đủ [60] Những kết phù hợp với kết Boitrelle et al sử dụng kính hiển vi tương phản phóng đại cao(x10000 lần) để nghiên cứu hình thái tinh trùng chứng minh có mặt khơng bào đầu tinh trùng có liên quan đến thất bại tồn phần phần ngưng tụ chromatin [61] Bên cạnh đó, Adham et al báo cáo thay đổi hình thái túi cực đầu (acrosome) q trình sinh tinh trùng có đơi với ngưng tụ chromatin Vì vậy, gợi ý thất bại ngưng tụ chromatin 51 trình sinh tinh dẫn đến suy yếu việc gắn acrosome với nhân cô đặc khiếm khuyết acrosome từ hạt nhân [62] Ngoài xét tỷ lệ tinh trùng bình thường hình thái tỷ lệ tinh trùng trưởng thành có mối tương quan trung bình với nhau, mối tương quan chặt chẽ xét riêng bất thường hình thái phần đầu tinh trùng Hay nói cách khác, kết nghiên cứu cho thấy có ve thực có mối liên hệ hình thái độ trưởng thành tinh trùng, cụ thể tăng tỷ lệ bất thường hình thái chung tinh trùng phần đầu tinh trùng tăng tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành ngược lại Điều phù hợp với số nghiên cứu trước mối liên hệ hình thái học ngưng tụ chromatin tinh trùng phương pháp nhuộm Aniline Blue [34], [32], [63], [64], [65], [66] Tuy nhiên số nghiên cứu khác cho kết đối lập khơng có mối liên hệ hình thái học bất thường độ trưởng thành tinh trùng đánh giá nhuộm Aniline Blue [67], [68] Nguyên nhân dẫn đến kết khác nghiên cứu với nghiên cứu điều kiện chọn mẫu chúng tơi lấy mẫu có mật độ tinh trùng bình thường theo WHO 2010, sử dụng phương pháp thu thập mẫu để đối tượng nghiên cứu tự xuất tinh hình thức thủ dâm, nghiên cứu khác lại lựa chọn mẫu từ đối tượng nam giới có tinh dịch đồ teratozoospermia (tinh trùng vừa ít, vừa yếu, vừa dị dạng) [67] đối tượng nam giới vô sinh [68] Điều làm ảnh hướng đáng kể đến tỷ lệ bất thường hình thái chung, tỷ lệ bất thường hình thái đầu, cổ, tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành bán trưởng thành ảnh hưởng đến mối quan hệ hình thái độ trưởng thành tinh trùng Tóm lại, nghiên cứu chúng tơi, có mối tương quan lỏng leo bất thường hình thái đầu tinh trùng trưởng thành tinh trùng Ngoài ra, mối tương quan bất thường chung hình thái tinh trùng độ 52 trường thành tinh trùng chặt chẽ xét riêng bất thường hình thái phần đầu, nhiên mức độ tương quan vẫn ngưỡng trung bình (R = 0,6) Vì chúng tơi kiến nghị thực nghiên cứu với quy mô lớn để khẳng định kết luận tìm hiểu sâu để tìm chứng chứng minh ngun nhân có mối liên quan thông số 53 KẾT LUẬN Chuẩn hóa quy trình nhuộm Aniline Blue: + Các tiêu chuẩn bị cách lấy 10µL mỡi mẫu tinh dịch + Các tiêu hong khơ khí phịng sau cố định PFA 4% phút nhiệt độ phòng, rửa lại nước, nhuộm màu aniline blue 2.5% dung dịch axit acetic 2% (pH 3.5) phút + Sau tiêu rửa hong khơ khí phịng + Theo đánh giá kính hiển vi quang học, 200 tinh trùng đếm khu vực khác mỗi tiêu sử dụng độ phóng đại ×100 lần: o Tinh trùng chưa trưởng thành có phần đầu bắt màu xanh đậm AB o Tinh trùng trưởng thành có phần đầu không bắt màu Tinh trùng bán trưởng thành có phần đầu vẫn bắt màu thuốc nhuộm, phần khơng bắt màu thuốc nhuộm chiếm >50% diện tích phần đầu Môi tương quan độ trưởng thành hình thái tinh trùng: Khơng có tương quan bất thường độ trưởng thành tinh trùng (so sánh nhóm: chưa trưởng thành; chưa trưởng thành bán trưởng thành) với tỷ lệ bất thường hình thái cổ tinh trùng Tương tự vậy, mối tương quan tỷ lệ tinh trùng bất thường hình thái đầu với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành tổng tỷ lệ chưa bán trưởng thành ngưng tụ chromatin lỏng leo Tuy nhiên thấy có mối tương quan trung bình tổng tỷ lệ bất thường hình thái tinh trùng với tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành Bên cạnh đó, xét tỷ lệ bất thường hình thái đầu tinh trùng tổng tỷ lệ bất thường hình thái chung với tổng tỷ lệ tinh trùng chưa trưởng thành bán trưởng thành thấy mối tương quan trở nên chặt chẽ 54 KIẾN NGHỊ Nghiên cứu chúng tơi cho thấy có mối tương quan trung bình mức độ ngưng tụ chromatin tinh trùng đánh giá cách nhuộm AB hình thái chung tinh trùng đánh giá phương pháp nhuộm Eosin Kết cho thấy ngưng tụ chromatin tham số có giá trị tương đối việc đánh giá khả sinh sản nam giới, độc lập với thơng số hình thái chung, bất thường hình thái đầu cổ Bất thường độ trưởng thành tinh trùng nguyên nhân dẫn đến thất bại kỹ thuật hỡ trợ sinh sản Vì đề nghị làm thêm xét nghiệm chuyên sâu độ trưởng thành tinh trùng để tiên lượng tốt trước tiến hành biện pháp hỗ trợ sinh sản bệnh nhân thiểu sinh sản chưa rõ nguyên nhân, đặc biệt loại trừ nguyên nhân bất thường người nữ, tinh dịch đồ bình thường hình thái Chúng tơi kiến nghị nhuộm Aniline Blue xem xét sử dụng lâm sàng biện pháp đơn giản, re tiền, dễ áp dụng Ngoài ra, thực nhuộm tinh trùng theo quy trình nhuộm Aniline Blue chúng tơi chuẩn hóa có nhược điểm khó quan sát nhận định lúc đọc kết Vì chúng tơi đề xuất kết hợp nhuộm Aniline Blue với nhuộm Eosin để dễ quan sát TÀI LIỆU THAM KHẢO Agarwal, A., et al., A unique view on male infertility around the globe Reprod Biol Endocrinol, 2015 13: p 37 Andrabi, S.M., Mammalian sperm chromatin structure and assessment of DNA fragmentation J Assist Reprod Genet, 2007 24(12): p 561-9 Belokopytova, I.A., et al., Human male infertility may be due to a decrease of the protamine P2 content in sperm chromatin Mol Reprod Dev, 1993 34(1): p 53-7 Angelopoulou, R., K Plastira, and P Msaouel, Spermatozoal sensitive biomarkers to defective protaminosis and fragmented DNA Reprod Biol Endocrinol, 2007 5: p 36 Turek, P.J., Practical approaches to the diagnosis and management of male infertility Nat Clin Pract Urol, 2005 2(5): p 226-38 Allen, M.J., et al., Atomic force microscopy of mammalian sperm chromatin Chromosoma, 1993 102(9): p 623-30 Lewis, J.D., D.W Abbott, and J Ausio, A haploid affair: core histone transitions during spermatogenesis Biochem Cell Biol, 2003 81(3): p 131-40 Braun, R.E., Packaging paternal chromosomes with protamine Nat Genet, 2001 28(1): p 10-2 Simoes, R., et al., Use of chromomycin A3 staining in bovine sperm cells for detection of protamine deficiency Biotech Histochem, 2009 10 84(3): p 79-83 Boe-Hansen, G.B., et al., The sperm chromatin structure assay as a diagnostic tool in the human fertility clinic Hum Reprod, 2006 21(6): 11 p 1576-82 Cebesoy, F.B., K Aydos, and C Unlu, Effect of sperm chromatin damage on fertilization ratio and embryo quality post-ICSI Arch Androl, 2006 52(5): p 397-402 12 Lingappa, H.A., et al., Quest for An Ideal, Simple and Cost-Effective Stain for Morphological Assessment of Sperms J Clin Diagn Res, 2015 13 9(10): p EC01-4 Menkveld, R., et al., Relationship between human sperm morphology 14 and acrosomal function J Assist Reprod Genet, 2003 20(10): p 432-8 World Health Organization, WHO laboratory manual for the 15 examination and processing of human semen 2010 Cooper, T.G., et al., World Health Organization reference values for human semen characteristics Hum Reprod Update, 2010 16(3): p 16 231-45 Evenson, D and R Wixon, Meta-analysis of sperm DNA fragmentation using the sperm chromatin structure assay Reprod 17 Biomed Online, 2006 12(4): p 466-72 Talebi, A.R., et al., Cytochemical evaluation of sperm chromatin and DNA integrity in couples with unexplained recurrent spontaneous 18 abortions Andrologia, 2012 44 Suppl 1: p 462-70 Hekmatdoost, A., N Lakpour, and M.R Sadeghi, Sperm chromatin integrity: etiologies and mechanisms of abnormality, assays, clinical importance, preventing and repairing damage Avicenna J Med 19 Biotechnol, 2009 1(3): p 147-60 Aksoy, E., et al., Assessment of Spermatozoa Morphology under Light Microscopy with Different Histologic Stains and Comparison of 20 Morphometric Measurements 2012 Bungum, M., L Bungum, and A Giwercman, Sperm chromatin structure assay (SCSA): a tool in diagnosis and treatment of infertility 21 Asian J Androl, 2011 13(1): p 69-75 Gunasekarana, V., G.V Raj, and P Chand, A comprehensive review on clinical applications of comet assay J Clin Diagn Res, 2015 9(3): p GE01-5 22 Fernandez, J.L., et al., The sperm chromatin dispersion test: a simple method for the determination of sperm DNA fragmentation J Androl, 23 2003 24(1): p 59-66 Balasuriya, A., et al., Sperm chromatin dispersion test in the assessment of DNA fragmentation and aneuploidy in human 24 spermatozoa Reprod Biomed Online, 2011 22(5): p 428-36 Zini, A., et al., Sperm DNA damage is associated with an increased risk of pregnancy loss after IVF and ICSI: systematic review and meta- 25 analysis Hum Reprod, 2008 23(12): p 2663-8 Zini, A and M Sigman, Are tests of sperm DNA damage clinically 26 useful? Pros and cons J Androl, 2009 30(3): p 219-29 Lewis, S.E and I.M Agbaje, Using the alkaline comet assay in prognostic tests for male infertility and assisted reproductive 27 technology outcomes Mutagenesis, 2008 23(3): p 163-70 Sharma, R.K., et al., TUNEL as a test for sperm DNA damage in the 28 evaluation of male infertility Urology, 2010 76(6): p 1380-6 Muratori, M., et al., Critical aspects of detection of sperm DNA fragmentation by TUNEL/flow cytometry Syst Biol Reprod Med, 2010 29 56(4): p 277-85 Wu, T.F and D.S Chu, Sperm chromatin: fertile grounds for proteomic discovery of clinical tools Mol Cell Proteomics, 2008 7(10): p 1876- 30 86 Lolis, D., et al., Chromomycin A3-staining as an indicator of protamine 31 deficiency and fertilization Int J Androl, 1996 19(1): p 23-7 Iranpour, F.G., et al., Chromomycin A3 staining as a useful tool for 32 evaluation of male fertility J Assist Reprod Genet, 2000 17(1): p 60-6 Dadoune, J.P., M.J Mayaux, and M.L Guihard-Moscato, Correlation between defects in chromatin condensation of human spermatozoa stained by aniline blue and semen characteristics Andrologia, 1988 20(3): p 211-7 33 Auger, J., et al., Aniline blue staining as a marker of sperm chromatin defects associated with different semen characteristics discriminates between proven fertile and suspected infertile men Int J Androl, 1990 34 13(6): p 452-62 Sellami, A., et al., Assessment of chromatin maturity in human spermatozoa: useful aniline blue assay for routine diagnosis of male 35 infertility Adv Urol, 2013 2013: p 578631 Wong, A., et al., Addition of eosin to the aniline blue assay to enhance detection of immature sperm histones Fertil Steril, 2008 90(5): p 36 1999-2002 Park, Y.S., et al., Efficacy of testicular sperm chromatin condensation assay using aniline blue-eosin staining in the IVF-ET cycle Clin Exp 37 Reprod Med, 2011 38(3): p 142-7 Dung, T.T.H., et al., Chất đánh dấu tinh trùng trưởng thành ứng 38 dụng thực tế lâm sàng 2010 Shennawy, I.E., et al., Novel application of aniline blue Fluorescent staining of glycogen and some protein structures Histochemistry, 1984 39 81(1): p 93-8 Thủy, P.m.T.T., Đánh giá chất lượng tinh trùng sau bảo quản lạnh sâu 40 mẫu nhược tinh lọc rửa 2011 Bái, N.X., Nghiên cứu đặc điểm tinh dịch đồ 1000 cặp vợ chồng vô 41 sinh Trường Đại học Y Hà Nội, 2001 Andrade-Rocha, F.T., Sperm parameters in men with suspected infertility Sperm characteristics, strict criteria sperm morphology analysis and hypoosmotic swelling test J Reprod Med, 2001 46(6): p 42 577-82 Eggert-Kruse, W., et al., Clinical relevance of sperm morphology assessment using strict criteria and relationship with sperm-mucus interaction in vivo and in vitro Fertil Steril, 1995 63(3): p 612-24 43 Chemes, H.E and C Alvarez Sedo, Tales of the tail and sperm head aches: changing concepts on the prognostic significance of sperm pathologies affecting the head, neck and tail Asian J Androl, 2012 44 14(1): p 14-23 Esterhuizen, A.D., et al., Sperm chromatin packaging as an indicator of 45 in-vitro fertilization rates Hum Reprod, 2000 15(3): p 657-61 Hammadeh, M.E., et al., Association between sperm cell chromatin condensation, morphology based on strict criteria, and fertilization, cleavage and pregnancy rates in an IVF program Andrologia, 1998 46 30(1): p 29-35 Foresta, C., et al., Sperm nuclear instability and staining with aniline blue: abnormal persistence of histones in spermatozoa in infertile men 47 Int J Androl, 1992 15(4): p 330-7 Jeulin, C., et al., Sperm factors related to failure of human in-vitro 48 fertilization J Reprod Fertil, 1986 76(2): p 735-44 Agarwal, A and T.M Said, Role of sperm chromatin abnormalities and DNA damage in male infertility Hum Reprod Update, 2003 9(4): p 49 331-45 Sadeghi, M.R., et al., Effects of sperm chromatin integrity on fertilization rate and embryo quality following intracytoplasmic sperm 50 injection Avicenna J Med Biotechnol, 2009 1(3): p 173-80 Esterhuizen, A.D., et al., Chromatin packaging as an indicator of human 51 sperm dysfunction J Assist Reprod Genet, 2000 17(9): p 508-14 Liu, D.Y and H.W Baker, Sperm nuclear chromatin normality: relationship with sperm morphology, sperm-zona pellucida binding, 52 and fertilization rates in vitro Fertil Steril, 1992 58(6): p 1178-84 Nasr-Esfahani, M.H., S Razavi, and M Mardani, Relation between different human sperm nuclear maturity tests and in vitro fertilization J Assist Reprod Genet, 2001 18(4): p 219-25 53 Mohamed, E.E and M.A Mohamed, Effect of sperm chromatin condensation on the outcome of intrauterine insemination in patients 54 with male factor infertility J Reprod Med, 2012 57(9-10): p 421-6 Lin, M.H., et al., Sperm chromatin structure assay parameters are not related to fertilization rates, embryo quality, and pregnancy rates in in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection, but might be 55 related to spontaneous abortion rates Fertil Steril, 2008 90(2): p 352-9 Oliva, R., Protamines and male infertility Hum Reprod Update, 2006 56 12(4): p 417-35 Sakkas, D., et al., Sperm nuclear DNA damage and altered chromatin structure: effect on fertilization and embryo development Hum Reprod, 57 1998 13 Suppl 4: p 11-9 Hammadeh, M.E., et al., Comparison between chromatin condensation and morphology from testis biopsy extracted and ejaculated spermatozoa and their relationship to ICSI outcome Hum Reprod, 58 1999 14(2): p 363-7 Razavi, S., et al., Effect of human sperm chromatin anomalies on 59 fertilization outcome post-ICSI Andrologia, 2003 35(4): p 238-43 Kovanci, E., et al., FISH assessment of aneuploidy frequencies in mature and immature human spermatozoa classified by the absence or presence 60 of cytoplasmic retention Hum Reprod, 2001 16(6): p 1209-17 Zini, A., et al., Sperm head morphology is related to high deoxyribonucleic acid stainability assessed by sperm chromatin 61 structure assay Fertil Steril, 2009 91(6): p 2495-500 Boitrelle, F., et al., Large human sperm vacuoles observed in motile spermatozoa under high magnification: nuclear thumbprints linked to 62 failure of chromatin condensation Hum Reprod, 2011 26(7): p 1650-8 Adham, I.M., et al., Teratozoospermia in mice lacking the transition 63 protein (Tnp2) Mol Hum Reprod, 2001 7(6): p 513-20 Leiva, S., et al., Evaluation of DNA/protein status and nuclear maturity of human sperm Cytobios, 1994 78(312): p 7-18 64 Hofmann, N and B Hilscher, Use of aniline blue to assess chromatin condensation in morphologically normal spermatozoa in normal and 65 infertile men Hum Reprod, 1991 6(7): p 979-82 Franken, D.R., et al., Normal sperm morphology and chromatin packaging: comparison between aniline blue and chromomycin A3 66 staining Andrologia, 1999 31(6): p 361-6 Lazaros, L.A., et al., Assessment of sperm chromatin condensation and ploidy status using flow cytometry correlates to fertilization, embryo quality and pregnancy following in vitro fertilization J Assist Reprod 67 Genet, 2011 28(10): p 885-91 Sun, F., E Ko, and R.H Martin, Is there a relationship between sperm chromosome abnormalities and sperm morphology? Reprod Biol 68 Endocrinol, 2006 4: p Hammadeh, M.E., et al., Predictive value of sperm chromatin condensation (aniline blue staining) in the assessment of male fertility Arch Androl, 2001 46(2): p 99-104 DANH SÁCH BỆNH NHÂN STT Họ tên Năm sinh Mật độ tinh dịch (đơn vị: x 106 tinh trùng/ml) Nguyễn Văn H 1991 56 Hoàng Văn T 1984 66 Nguyễn Tuấn T 1988 45 Lưu Tùù̀ng D 1989 69 Võ Đình T 1977 66 Đinh Trung T 1983 55 Đào Bảo L 1991 64 Phương Hữu C 1980 49 Lê Văn H 1987 160 10 Bùi Viết T 1982 42 11 Trần Tuấn B 1969 117 12 Nguyễn Đức C 1987 140 13 Vũ Văn Đ 1992 91 14 Nguyễn Văn T 1983 70 15 Lê Văn S 1991 68 16 Trần Ngọc G 1983 58 17 Phạm Ngọc L 1990 76 18 Nguyễn Văn D 1987 70 19 Lại Minh T 1980 210 20 Vương Thế A 1986 72 21 Nguyễn Văn C 1998 110 22 Nguyễn Văn K 1989 105 23 Lê Văn H 1981 90 24 Đoàn Thế T 1973 100 25 Dương Văn H 1991 20 26 Trần Mạnh K 1987 68 27 Nguyễn Văn C 1983 61 28 Đặng Minh P 1993 78 29 Vũ Quỳnh Đ 1987 49 30 Hoàng Văn H 1976 54 ... thuật đánh giá mức độ trưởng thành NST tinh trùng Các trình liên kết protein với DNA tinh trùng ngày quan tâm để đánh giá trưởng thành tinh trùng [29] f Các phương pháp nhuộm tinh trùng  Nhuộm. .. thành của tinh trùng - Phiến đồ tinh dịch nhuộm Aniline Blue - Phân loại độ trưởng thành tinh trùng: tinh trùng trưởng thành, tinh trùng bán trưởng thành, tinh trùng chưa trưởng thành, tính... thích: Tinh trùng chưa trưởng thành 29 Tinh trùng trưởng thành Hình 3.6 Phiến đồ nhuộm Aniline Blue Chú thích: & Tinh trùng trưởng thành Tinh trùng chưa trưởng thành Hình 3.7 Phiến đồ nhuộm Aniline