Nghiên cứu sơ bộ thành phần hóa học quả đào tiên

TRƯỜNG• ĐẠI HỌC sư PHẠM HÀ NỘI KHOA HĨA HỌC ••• ===S0 Cữ G3=== BÙI THỊ HẠNH NGHIÊN CỨU Sơ Bộ THÀNH PHẦN HÓA HỌC QUẢ ĐÀO TIÊN ịCrescentia cuịete L.) KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC • ••• Chuyên ngành: Hóa hữu Ctf Hà nội, tháng năm 2019 TRƯỜNG• ĐẠI HỌC sư PHẠM HÀ NỘI KHOA HĨA HỌC ••• ===S0 Cữ G3=== BÙI THỊ HẠNH NGHIÊN CỨU Sơ Bộ THÀNH PHẦN HÓA HỌC QUẢ ĐÀO TIÊN ịCrescentia cuịete L.) KHĨA •LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC ••• Chun ngành: Hóa hữu Ctf Ngưòi hướng dẫn khoa học PGS.TS NGUYỄN VĂN BẰNG Hà nội, tháng năm 2019 LỜI CẢM ƠN Người em muốn gửi lời cảm ơn đến PGS.TS NGUYỄN VĂN BẢNG Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy - người tận tình bảo em suốt thời gian làm đề tài khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến ban lãnh đạo đặc biệt TS Nguyễn Xuân Cường TS Trần Thị Hồng Hạnh anh, chị kỹ thuật viên Viện Hóa sinh biển tận tình bảo, giúp đỡ tạo điều kiện cho em học hỏi sử dụng thiết bị tiên tiến viện nghiên cứu để hồn thành tốt đề tài khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo thầy cô khoa Hóa học Trường ĐHSP Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ, dạy dỗ em trình học tập năm trường Em xin gửi lời cảm ơn tới bố mẹ bạn bè giúp đỡ, động viên đồng hành em lúc căng thẳng, mệt mỏi gặp khó khăn.” Trình độ hiểu biết kiến thức thân hạn chế nên q trình thực khóa luận tốt nghiệp chắn khơng thể tránh thiếu sót Em mong quý thầy cô thông cảm Em xin chân thành ghi nhận góp ý quý báu từ q thầy bạn bè để em hồn thành tốt khóa luận Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, thảng 05 năm 2019 Sình viên Bùi Thỉ Hanh LỜI CAM ĐOAN m m Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu, số liệu trình bày khóa luận : “Nghiên cứu sơ thành phần hóa học Đào tiên” kết tơi trực tiếp nghiên cứu tìm hiểu hướng dẫn PGSTS Nguyễn Văn Bằng Trong trình nghiên cứu tơi có sử dụng số tài liệu số nhà nghiên cứu, số tác giả Tuy nhiên sở để tơi rút vấn đề cần tìm hiểu đề tài Đây kết cá nhân tơi kết tác giả khác Sinh viên Bùi Thị Hạnh DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Chú gỉảỉ 13 c - NMR ^-NMR 2D-NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Carbon Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Phổ cộng hưởng từ hạt nhân hai chiều (Two- Dimensional NMR) cc Sắc ký cột Column Chromatography DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer El - MS Electron Impact Ionization Mass Spectroscopy ESI - MS phổ phun mù điện tử (Electrob Sprayt Ionization Mass Spectroscopy) Ethyl Ethylacetat HMBC Phổ tương tác dị hạt nhân qua nhiều liên kết Heteronuclear Multiple Bond Corelation HSQC Phổ tương tác H-C Heteronuclear Single Quantum Coherence IR Phổ hồng ngoại MeOH Methanol MS Phổ khối lượng NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (Nuclear magnetic Resonance) NOESY Hiệu ứng NOE Nuclear Overhauser Effect SKLM Sắc kí lớp mỏng TLC Sắc ký mỏng Thin Layer Chromatography CC2 Ningpogenin CC3 Dehydrodiconiferyl alcohol CC4 Balanophonin Trang MỤC LỤC MỞ ĐẦU Việt Nam nước nằm khu vực có kiểu khí hậu nhiệt đới gió mùa kết hợp với địa hình ba phần tư đồi núi nên Việt Nam đa dạng địa hình, kiểu đất, cảnh quan Đặc điểm điều kiện thuận lợi để giới thực vật phát triển Theo thống kê ‘Tiếp cận nguồn gen chia sẻ lợi ích Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Thế giới-IUCN’ nước ta có khoảng 10585 lồi thực vật thuộc 2342 chi, 337 họ Thực vật có vai trò quan trọng sống Trái Đất Nó góp phàn điều hòa khí hậu, cung cấp oxi cho q trình hơ hấp, giúp bầu khơng khí lành, giảm thiểu nguồn gây nhiễm khơng khí Khơng thực vật cung cấp thức ăn cho ngưòi động vật, nơi trú ngụ cho động vật, cung cấp nguồn nguyên liệu quý cho ngành dược, cung cấp nguyên liệu cho ngành cơng nghiệp, xây dựng, Nhiều lồi thực vật người ta trồng để trang trí Những nơi có thảm thực vật đa dạng, phong phú, sinh động người ta khai thác ngành du lịch Với phát triển khoa học công nghệ kĩ thuật đại, người sản xuất nhiều thực phẩm dược phẩm có nguồn gốc từ thiên nhiên Tuy nhiên lợi nhuận kinh tế, canh tranh thị trường nên khơng nhà sản xuất cho thêm thành phàn hóa chất độc hại vào sản phẩm Khi sản phẩm tới tay người tiêu dùng gây ảnh hưởng trực tiếp đến sức khỏe người Tùy vào liều lượng chất độc hại thời gian sử dụng sản phẩm hay nhiều mà gây bệnh ngộ độc, tiêu chảy, đau bụng, kích ứng da, ung thư, nghiêm ừọng dẫn đến tà vong Để đảm bảo sức khỏe người, sản phẩm chiết xuất từ thiên nhiên ngày quan tâm ứng dụng rộng rãi đặc tính độc, dễ hấp thụ khơng làm tổn hại đến môi trường Theo tài liệu cơng bố nay, có khoảng 60% - 70% loại thuốc chữa bệnh lưu hành ừong giai đoạn thử nghiệm lâm sàng có nguồn gốc thiên nhiên Bên cạnh cạnh tranh thuốc tây thuốc nam hay thuốc bắc đối thủ đáng gườm Có địa bệnh nhân điều trị thuốc nam thuốc bắc lại đem lại hiệu cao Vì ngày người bệnh quan tâm đến thuốc có nguồn gốc từ thực vật thiên nhiên Trong số đó, có Đào tiên đặc biệt Đào tiên thu hút nhà tiêu dùng nhà khoa học nghiên cứu Theo kinh nghiệm dân gian Đào tiên thường dùng để điều trị viêm họng, ho; tăng cường tuổi thọ; nhuận tràng, chống táo bón; tẩy độc đường tiêu hóa; làm đẹp da; trị nhức mỏi xương khớp; ngâm rượu giúp bồi bổ sức khỏe; Vì vậy, tơi chọn Đào tiên làm đối tượng nghiên cứu, với mục đích nhằm góp phàn làm rõ thêm hiểu biết thành phàn hóa học Đào tiên Góp phần nâng cao giá trị sử dụng tăng thêm kho tàng tri thức thuốc cổ truyền Việt Nam vói đề tài khóa luận là: “ Nghiên cứu sơ thành phần hóa học Đào tiên ” Nhiệm vụ đề tài: Thu mẫu Đào tiên xử lí mẫu Phân tách làm hợp chất Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 1.1 1.1.1 CHƯƠNG TỔNG QUAN Tổng quan Đào tiên Giới thiệu Đào tiên Tên khoa học: Crescentia cujete (L.) Tên tiếng việt: Cây Đào tiên (cây Trường sinh, Đào vạn thọ ) Chi: Crescentia Họ: Chùm núc nác (Bignoniaceae) Bộ: Hoa mõm chó (Scrophulariales) Phân lớp: Hoa mơi (Lamiadae) Hình 1.1: Cây Đào tiên Hình 1.3: Hoa Đào tiên Hình 1.2: Quả Đào tiên Hình 1.4: Thịt Đào tiên Hình 4.1d Phổ HSQC hợp chất CC4 Phổ 13C-NMR hợp chất CC4 (hỉnh 4.1c) xuất tín hiệu 20 nguyên từ cacbon có tín hiệu nhóm andehit ơc 196,13/Ỗh 9,60, tương tác nhóm andehit với cặp nối đôi Sc 127,12 (C-80/156,07 (C-7 /) tương tác H-7' vói C-2', C-6', H~8' vứi C-l' xác định vị trí nhánh -CH=CH-CHO so với vòng benzen Vòng dihydrofuran xác định tín hiệu đặc trưng sc 90,11 (C-7), 54,66 (C-8), 64,59 (C~9) tương tác HMBC H-7 vói C-l, C-2, C-6, C-8, C-9, C-4' cấu hình nhóm C-7, C-8 xác định tram dựa vào số tương tác /h-7 h-8=6,5 Hz [7] ^•OH Hình 4.1f Cảc tương tác HMBC chỉnh cửa hợp chất CC4 CACBON ÖC A.B OC DEPT SHA'C MULT, Ự= HZ) HMBC 129,1 133,96 C - 108,6 110,64 CH 6,97 D (1,5) 146,5 149,20 C - 145,6 147,85 C - 114,3 116,26 CH 6,80 D (8,5) 1,3 119,1 119,83 CH 6,85 DD (2,0, 8,0) 2, 4,7 88,8 90,11 CH 5,63 D (6,5) 1,2, 6, 8, 9, 4’ 52,9 54,66 CH 3,58 DD (6,0, 12,0) 1,7, 9, 4’, 5’ 63,7 64,59 CH2 3,87 M 8, 9, 5’ 1’ 127,8 129,64 C - 2’ 112,3 114,35 CH 7,25 D (1,5) 3’ 144,4 146,04 C - 4’ 151,2 152,98 C - 5’ 132,0 131,31 C - 6’ 118,0 119,99 CH 7,31 S 8, 2’, 4’, 7’ 7’ 152,9 156,07 CH 7,63 D (15,5) 2’, 6’ 8’ 126,0 127,12 CH 6,70 DD (7,5, 15,5) 1’, 9’ 9’ 193,2 196,13 CH 9,60 D (8,0) 8’ 3-OCH3 55,9 56,42 CH3 3,84 S 3’-OCH3 56,0 56,84 CH3 3,94 S 4,6 3’, 4’, 6’, 7’ 4.2 Hqp chát CC3: Dehydrodiconiferyl alcohol OH Hinh 4,2a1 Cau truc hóa hgc cúa htfp chát CC3 C T ' í T- t T- ^ ' í ^ W K r s í N p - w i f ' í c c nnh c r- ^ r- e e e e e e csce:?^! ,i-=?‘-!,i-=?‘-ri-=*5*s*5*s*5*s*5*sjn-^- ^rri— Hinh 4.2b Phé *H-NMR cüa hffp chát CC3 JU «MMMHMMMM zoo 130 40 160 20 140 0ppm 120 100 80 GD ÉÉH N 1ỗc: số liệu phổ Balanophonỉn [8] đò DMSO, “đo MeOD, h 125MHz,c 500MHz So sánh liệu phổ hợp chất CC4 với Balanophonin [8] cho thấy phù hợp tất vị trí tương ứng cấu trúc hợp chất CC4 khẳng định chắn dựa ừên tương tác HMBC (xem bảng 4.1) Như hợp chất CC4 xác định Balanophonin Hình 4.2c Phổ 13C-NMR hợp chat CC3 Hợp chất CC3 thu dạng dầu Phổ 1H, 13C-NMR hợp chất tương tự hợp chất CC4 vód xuất hai vòng thơm dạng ABX AX, vòng dihydrofuran với tín hiệu đặc trưng 8C 87,20 (C-7)/§H 5,45, ỗc 52,98 (C-8)/ỗH 3,44, ỏc 62,94 (C-9)/Sh 3,61, 3,69, tín hiệu nối đơi dạng trans Sc 128,97 (C~7')/Sh 6,46, ồc 127,98 (C-7)/Ỗh 6,21 Tín hiệu hai nhóm oxim Sh 3,74 3,79 (s, 3H/mỗi tín hiệu) Sự khác biệt hợp chất CC3 so với hợp chất CC4 tín hiệu nhóm andehit vùng trường yếu thay vào xuất nhóm oximen ỗc 61,64 (C-Ọ^/ỗH 4,08, điều khẳng định dựa tương tác HMBC H-9' với C-7', C-8' tương tác nhóm hydoxy Ơh 4,77 với c~9' (Hình 4.2e) Hình 4.2e Phổ HMBC hợp chầ CC3 Hình 4.2.f Các tương tác HMBC chỉnh cửa hợp chất CC3 Cấu hình cùa nhóm C-7, C-8 xác định trans dựa vào số tương tác Jh-7, h-8 = 6,5 Hz [7] Các vị trí khác khẳng định chắn dựa tương tác HMBC (Bảng 4.2) Như cấu trúc hợp chất CC3 xác định Dehydrdiconiferyl alcohol hay có tên gọi Vladinol E [9] Hình 4.2e Phổ HMBC hợp chầ CC3 POSITION 1' 2' 3' 4' 5' 6' 7' 8' 9' 3-OCH3 3'-OCH3 4-OH 9-OH 9’-OH GLC-1 GLC-2 GLC-3 GLC-4 GLC-5 GLC-6 OC 135,9 110,7 150,3 150,4 112,9 119,5 89,1 55,2 64,9 132,3 112,2 145,5 149,4 130,2 116,7 134,3 124,3 71,2 56,4 56,8 A,B OC DEPT ÕHA’C MULT, Ự= HZ) HMBC 132,34 c 110,35 CH 6,91 BR S 4,6 147,54 c 146,38 c 115,32 CH 6,75 118,52 CH 6,75 87,20 CH 5,45 D (6,5) 2, 6, 8, 9,4', 5' 52,98 CH 3,44 D (6,0) 1,7, 4', 5' 62,94 CH2 3,61 MỈ 3,69 M 7, 5' 130,50 c 110,35 CH 6,91 BR S 143,67 c 147,09 c 129,47 c 114,94 CH 6,94 BR S 2', 4', 7' 128,97 CH 6,46 D (16,0) 1', 2', 6' 127,984.2e Phổ CH HMBC 6,21 TD (5,0, Hình hợp16,0) chầ CC3 1', 9' 61,64 CH2 4,08 M 7', 8' 55,64 CH3 3,74 S 55,69 CH3 3,79 S 3' 9,00 S 3, 4,5 5,021 (5,0) 8,9 4,77 T (5,5) 9' 103,2 75,1 77,8 71,6 78,0 62,8 *ỗc: sổ liệu phổ chẩt Woorenoside V [9] đo MeOH, “ đo DMSO, h 125MHz,c 500MHz Hình 4.3a* cấu trúc hóa học cửa hợp chất CC2 Hợp chất CC2 thu dạng dầu màu vàng nhạt Phổ ^-NMR hợp chất CC2 xuất tín hiệu proton olefin Ôh 5,62 gợi ỷ cho có mặt nối đơi vị trí (~CH=C