Nghiên cứu đột biến gen PIK3CA trên bệnh nhân ung thư dạ dày

1 ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư dày (UTDD) bệnh lý ác tính, đứng thứ tư ung thư thường gặp đứng thứ hai nguyên nhân gây tử vong ung thư [1] Theo số liệu GLOBOCAN 2012, có 952.000 trường hợp mắc bệnh 723.000 trường hợp tử vong, 70% trường hợp ung thư dày xảy nước phát triển, 50% gặp nước Đơng Á, phần lớn gặp nước Trung Quốc, Nhật Bản Hàn Quốc [2] UTDD hậu tương tác phức tạp yếu tố vật chủ với môi trường Nhiều yếu tố nguy ung thư dày xác định như: nhiễm Helicobacter pylori (H.pylori), hút thuốc lá, uống rượu, chế độ ăn nhiều nitrit, yếu tố di truyền, polip dày… Ở Việt Nam nhiều nghiên cứu yếu tố nguy thường gặp như: tỷ lệ nhiễm H.pylori cao, thói quen sử dụng rượu, thuốc lá, chế độ ăn rau, nhiều muối… Việc làm sáng tỏ đường sinh học dẫn tới phát triển ung thư dày quan trọng tích tụ biến đổi di truyền liên quan tới phát triển khối u [3] Sự thay đổi di truyền liên quan đến protein dọc theo số đường tín hiệu, chẳng hạn kích hoạt cấu tạo receptor kinase tyrosine receptor G-protein, protein liên kết GTP với protein adaptor, dẫn đến kích hoạt phosphoinositide 3-kinase (PI3K) - đường AKT [4], [5], [6], [7] Vì tín hiệu PI3K đóng vai trò quan trọng phát triển tế bào, chuyển hóa, sống còn, di căn, đề kháng với hóa trị, đường PI3K-AKT coi quan trọng trình gây ung thư [8], [9], [10], [11] Tầm quan trọng đột biến PIK3CA ung thư dày chưa rõ ràng Mặc dù số báo cáo mối quan hệ đột biến tiên lượng PIK3CA, có bệnh nhân phân tích phát khác nghiên cứu Nhiều nghiên cứu cho thấy kích hoạt đường PI3K/AKT có vai trò trực tiếp việc kháng hóa trị liệu trường hợp UTDD Sự kết hợp chất ức chế PI3K/AKT với hóa trị liệu thành cơng làm giảm tính đề kháng hóa trị liệu UTDD [12], [13] Với phát triển khoa học kĩ thuật, nhà khoa học phân tích DNA người để xác định xác tổn thương gen gây bệnh UTDD kiểm soát tốt nhờ xác định đột biến gen, phát dấu ấn giúp chẩn đoán sớm theo dõi điều trị tiên lượng UTDD, nhằm góp phần giảm tỷ lệ mắc bệnh tử vong Do tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu đột biến gen PIK3CA bệnh nhân ung thư dày” với mục tiêu: Xác định đột biến exon 20 gen PIK3CA bệnh nhân ung thư dày Tìm hiểu mối liên quan đột biến gen PIK3CA với đặc điểm mô bệnh học CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm chung 1.1.1 Dịch tễ học Trong lịch sử, ung thư dày bệnh lý ác tính gây tử vong đứng thứ hai sau ung thư phổi Năm 1990, UTDD xếp bốn loại ung thư thường gặp nhất, chiếm 9,9% trường hợp ung thư [14], [15] Năm 2002 UTDD loại ung thư phổ biến thứ tư giới với 900.000 ca bệnh [16] 2/3 trường hợp xảy nước phát triển [17] Năm 2011, ước tính giới có 989.600 trường hợp UTDD mắc mới, 738.000 trường hợp tử vong [18] Nhìn chung, bệnh lý UTDD khơng có phân bố theo địa lý rõ rệt Theo số liệu GLOBOCAN 2012, 70% trường hợp ung thư dày xảy nước phát triển, 50% gặp nước Đông Á, phần lớn gặp nước Trung Quốc, Nhật Bản Hàn Quốc Ung thư dày nguyên nhân thứ ba gây tử vong hai giới toàn giới (723.000 người chết, 8.8% tổng số) Tỷ lệ tử vong ước tính cao Đông Á (24 100.000 nam giới, 9.8 100.000 phụ nữ), thấp Bắc Mỹ (2.8 1.5) Tỷ lệ tử vong cao xuất hai giới Trung Đông Âu, Trung Nam Mỹ [2] Tỷ lệ tử vong UTDD nước phát triển giảm đáng kể Điều giải thích chế độ ăn uống, việc bảo quản thực phẩm, kiểm soát tốt H pylori [18], [19], [20], [21], [22] UTDD bệnh lý có độ tuổi mắc bệnh chiếm tỷ lệ cao từ 60- 80 tuổi, người 30 tuổi bị bệnh Tại miền Nam Ấn Độ, độ tuổi mắc bệnh chủ yếu từ 35- 55 tuổi, miền Bắc số bệnh nhân mắc bệnh thường độ tuổi 45 - 55 Hầu hết quốc gia giới, tỷ lệ mắc bệnh UTDD thường cao nam giới, gấp - lần so với nữ giới [18], [23] Phần lớn bệnh nhân UTDD Mỹ độ tuổi 65 - 74 Tuổi trung bình lúc chẩn đốn 70 nam giới nữ giới 74 tuổi Các nước có tỷ lệ mắc UTDD cao, tuổi lúc chẩn đốn có xu hướng thấp Điều giải thích có chương trình khám sàng lọc tốt hơn, nhờ tỷ lệ phát UTDD sớm tăng lên rõ rệt [22], [24] Khi UTDD có xu hướng lệch phía trẻ tuổi tỷ lệ nam nữ tương đương [18] Ở Mỹ, năm 2013, tỷ lệ mắc UTDD nam 13,2/100.000 dân, nữ 8,3/100.000 dân Trong đó, số bệnh nhân tử vong UTDD năm 2013 nam 6740, nữ 4250 [25] Theo thống kê vào năm 2010, tỷ lệ mắc loại ung thư nam giới Việt Nam 181,3/100.000 dân, nữ giới 134,9/100.000 dân Trong số 71.940 trường hợp ung thư nam, có 10.384 trường hợp UTDD, chiếm tỉ lệ 14,43%, số 54.367 trường hợp ung thư nữ, có 4.728 trường hợp UTDD, chiếm tỷ lệ 8,06% Tại Việt Nam theo số liệu bệnh viện K Hà Nội, UTDD chiếm tỉ lệ cao ung thư hệ tiêu hóa xếp thứ tư loại ung thư Mỗi năm có 15.000 trường hợp mắc mới, 11.000 trường hợp tử vong Bệnh gặp nhiều lứa tuổi gặp người 40 tuổi [26] Theo nghiên cứu Hà Nội, thành phố Hồ Chí Minh Thừa Thiên Huế cho thấy, UTDD đứng hàng thứ bệnh ung thư Vị trí hay gặp ung thư dày phần dưới, chiếm tỉ lệ 80-90% Tính đến năm 2000, nghiên cứu UTDD Việt Nam thấy 90% UTDD mổ có di hạch, điều đồng nghĩa với ung thư giai đoạn muộn [27], [28], [29] 1.1.2 Nguyên nhân yếu tố nguy cuả ung thư dày UTDD hậu tương tác phức tạp yếu tố vật chủ với mơi trường, đáng lưu ý nhiễm H pylori 1.1.2.1 Yếu tố mơi trường Nhiều nghiên cứu cho thấy nhóm nguy môi trường quan trọng chế độ ăn uống, hút thuốc nhiễm H pylori - Chế độ ăn uống có nhiều nitrate loại cá, thịt chế biến sẵn, loại thức ăn xơng khói, ướp muối, làm tăng nguy UTDD Nitrosamin có thức ăn số loại thức ăn chứa nitrate tạo chất gây UTDD [30], [31] Ăn rau trái làm tăng nguy UTDD [30] - Hút thuốc làm tăng nguy UTDD lên 1,56 lần [32] Theo Gonzalez, xấp xỉ 18% trường hợp UTDD quy cho hút thuốc Nguy UTDD tăng theo thời gian hút thuốc giảm sau 10 năm cai thuốc [33] - H pylori Tổ chức Y tế Thế giới (TCYTTG) xếp vào tác nhân gây ung thư nhóm I [31] Có nhiều chứng dịch tễ mối liên quan nhiễm H pylori với UTDD, đặc biệt UTDD không thuộc tâm vị Nhiễm H pylori làm tăng nguy UTDD không thuộc tâm vị xấp xỉ lần Người ta ước tính H pylori nguyên nhân khoảng 63% trường hợp UTDD không thuộc tâm vị toàn giới [17] Người ta cho nhiễm H pylori khởi phát trình viêm niêm mạc thân vị, sau dẫn đến teo niêm mạc dày dị sản ruột Theo dõi 4655 người triệu chứng thời gian trung bình 7,7 năm, Ohata phát 45 trường hợp UTDD (tỷ suất 126/100.000 người/năm) Phân tích đơn biến sau điều chỉnh tuổi cho thấy H pylori viêm dày teo mạn tính có liên quan rõ rệt với UTDD [34] Tại Việt Nam, Phạm Quang Cử nhận thấy có mối liên quan nhiễm H pylori với viêm dày teo, dị sản ruột, loạn sản niêm mạc dày [35] Tỷ lệ UTDD người nhiễm H pylori cao người không nhiễm H pylori với tỷ số chênh (Odds Ratio: OR) = 3,3-3,6 [35], [36] Do vậy, người ta cho viêm dày teo mạn tính, dị sản ruột tổn thương tiền ác tính UTDD [31] 1.1.2.2 Yếu tố nguy liên quan với vật chủ - Yếu tố di truyền: UTDD thường xảy người có nhóm máu A thường gặp gia đình anh em sinh đôi [30] Yatsuya ghi nhận tiền sử UTDD nhiều người thân hệ có liên quan với tăng nguy UTDD phụ nữ (OR: 5,1) sau kiểm soát biến số nhiễm H pylori biến số gây nhiễu khác [37] - Polyp dày [38]: Một số loại polyp dày có tiềm ác tính U tuyến (adenoma) khối u xuất phát từ tổ chức tuyến dày, có nguy tiến triển thành ung thư cao U tuyến chiếm khoảng 10% polyp dày Khoảng 2% polyp tăng sản phát triển thành ung thư Các polyp tuyến đáy vị thường gặp phần đáy dày, không diễn biến thành ác tính trừ người có hội chứng đa polyp tuyến gia đình (familial adenomatous polyposis syndrome) - Loét dày tá tràng: Nghiên cứu tập lớn Hansson theo dõi gần 60.000 bệnh nhân Thụy Điển vào viện loét dày loét tá tràng thời gian trung bình năm cho thấy nguy UTDD tăng 1,8 lần bệnh nhân loét dày lành tính giảm 0,6 lần bệnh nhân lt tá tràng lành tính [39] - Tiền sử có phẫu thuật cắt dày: Tỷ lệ mắc UTDD phần dày lại tăng lên sau phẫu thuật cắt dày Sau 20 năm, tỷ lệ mắc UTDD hàng năm bệnh nhân cắt bán phần dày khoảng 3% [38] Một tổng phân tích Tersmette (1990) cho thấy tùy thuộc vào loại phẫu thuật, thời gian theo dõi vị trí địa lý, nguy tương đối UTDD bệnh nhân sau cắt dày dao động khoảng 1,5-3,0 [40] - Nội tiết tố sinh dục nữ: Trên toàn giới, tỷ lệ mắc UTDD phụ nữ thấp định so với nam giới ung thư tâm vị lẫn UTDD không thuộc tâm vị [30], [38], [41] Nghiên cứu Freedman cho thấy có liên quan chặt chẽ UTDD với tuổi mãn kinh, tuổi sinh đẻ, số năm sau mãn kinh Tỷ lệ nguy UTDD giảm 0,80 tăng tuổi mãn kinh năm Người sinh đẻ nhỏ 30 tuổi có nguy UTDD tăng 1,9 lần so với người sinh đẻ lúc lớn 30 tuổi Sau mãn kinh, tỷ số nguy UTDD tăng 1,26 lần năm [42] 1.1.3 Triệu chứng 1.1.3.1 Triệu chứng Giai đoạn sớm xuất triệu chứng không đặc hiệu: - Chán ăn - Đầy hơi, ậm ạch, khó tiêu - Đau thượng vị nhiều mức độ - Nôn buồn nôn - Mệt mỏi Giai đoạn muộn có triệu chứng sau: - Xuất huyết tiêu hóa cao: nơn máu, ngồi phân đen - Đau bụng thượng vị kiểu loét điển hình - Đầy hơi, nôn, chướng bụng - Nôn hẹp môn vị 1.1.3.2 Triệu chứng thực thể - Sốt hội chứng cận u - Thiếu máu - Khám bụng: u vùng thượng vị, cổ chướng… - Khám hạch ngoại vi: thường di hạch thượng đòn trái - Khám tim phổi: phát tràn dịch màng phổi, tràn dịch màng tim - Khám thần kinh: phát liệt khu trú hội chứng tăng áp lực hộp sọ di não - Khám xương: phát di xương 1.1.3.3 Cận lâm sàng - Để đánh giá tình trạng khối u, ngồi phương pháp khám tay, có nhiều phương pháp cận lâm sàng sử dụng chụp X quang cản quang, siêu âm qua ổ bụng, siêu âm nội soi, nội soi dày sinh thiết, CT.scan, PET- Scan… Mỗi phương pháp có ưu, nhược điểm - X quang dày có chất cản quang phương tiện chẩn đốn hình ảnh cổ điển Đây phương pháp thường dùng để sàng lọc bệnh nhân UTDD cộng đồng Tùy theo tính chất ung thư tổn thương bệnh lý mà hình thành hình ảnh X quang Mặc dù giá trị chẩn đốn UTDD nói chung phương pháp lên đến 90%, q trình thực phức tạp so với phương pháp khác, nên X quang dày có cản quang định Hiện nay, Nhật Bản tiến hành khám sàng lọc UTDD cộng đồng phương pháp chụp X quang hàng loạt, tất người 40 tuổi có biểu nghi ngờ tiến hành nội soi dày sinh thiết để xác định có UTDD hay khơng - Nội soi dày có giá trị chẩn đốn ung thư dày Qua hình ảnh quan sát tổn thương ung thư mặt đại thể, tính chất bề mặt khối u, mức độ xâm lấn vào lỗ tâm vị xâm lấn vào lòng thực quản [43], [44] Một điểm hạn chế nội soi dày khó quan sát hình ảnh vùng đáy vị Do vậy, số trường hợp phải cần đến hình ảnh CT.scan việc chẩn đoán khối u vùng đáy vị Mặc dù có điểm hạn chế nêu trên, nội soi dày với ống soi mềm, kết hợp sinh thiết làm giải phẫu bệnh lý, có giá trị định chẩn đoán UTDD [15], [45], [46] Nếu sinh thiết nhiều vị trí sinh thiết nhiều lần vị trí, độ xác đạt 98% [23], [47] Các mẫu sinh thiết ngâm cố định dung dịch formol đúc khuôn sáp cố định, cắt làm tiêu bản, nhuộm Hematoxylin-Eosin Hình 1.1: Hình ảnh UTDD vùng tâm vị qua nội soi [15] - Siêu âm ổ bụng phương pháp sử dụng thường quy, với giá thành rẻ dễ thực Cho phép nhận biết dấu hiệu dày thành dày, dịch ổ phúc mạc, di gan, hạch cuống gan [15] Đối với việc phát di gan, độ nhạy siêu âm ghi nhận 85% Tuy nhiên, nhìn chung, phương pháp có độ nhạy khơng cao Những khối u có kích thước nhỏ thường không phát Trường hợp dày đầy khó đánh giá tình trạng khối u - Chụp cắt lớp vi tính (CT.scan) phương pháp chẩn đoán chủ yếu để đánh giá giai đoạn UTDD Chụp cắt lớp vi tính cho phép đánh giá xác độ xâm lấn khối u thành dày quan lân cận Tuy nhiên, điểm hạn chế phương pháp khả 10 phát hạch di căn, khối di gan hay khoang phúc mạc có kích thước 5mm Độ xác việc đánh giá giai đoạn ung thư CT scan thay đổi từ 25-86% [15], [45], [48] - Siêu âm nội soi: Siêu âm nội soi CT Scan sử dụng bổ sung CT Scan sử dụng để phân giai đoạn UTDD, khơng có di xâm lấn quan chỗ, siêu âm nội soi sử dụng để sàng lọc lại giai đoạn chỗ Độ sâu khối u xâm lấn không đánh giá xác qua CT Scan, nên việc nghiên cứu cho lựa chọn siêu âm nội soi Đây phương tiện giúp đánh giá xác mức độ xâm lấn khối u thành dày di hạch vùng lân cận Hình 1.2: Hình ảnh UTDD di hạch qua siêu âm nội soi [15] Với loại đầu dò có độ phân giải cao, tần số từ 15-20 MHz, tỳ sát vào vùng tổn thương nên hình ảnh thu rõ nét, đường tiêu hóa thấy nhiều lớp hơn, giúp chẩn đoán UTDD giai đoạn sớm dễ dàng [15] Ngoài ra, siêu âm nội soi phương pháp dùng để chẩn đoán hướng dẫn chọc hút tế bào kim nhỏ Hiện nay, phương pháp có giá trị để đánh giá giai đoạn ung thư đoạn nối dày - thực quản Nhiều 7(6), 561–573 80 Shigaki H., Baba Y., Watanabe M et al (2013) PIK3CA mutation is associated with a favorable prognosis among patients with curatively resected esophageal squamous cell carcinoma Clin Cancer Res Off J Am Assoc Cancer Res, 19(9), 2451–2459 81 Tan I.B., Ng I., Tai W.M et al (2012) Understanding the genetic basis of gastric cancer: recent advances Expert Rev Gastroenterol Hepatol, 6(3), 335–341 82 Oki E., Baba H., Tokunaga E et al (2005) Akt phosphorylation associates with LOH of PTEN and leads to chemoresistance for gastric cancer Int J Cancer, 117(3), 376–380 83 Li V.S.W., Wong C.W., Chan T.L et al (2005) Mutations of PIK3CA in gastric adenocarcinoma BMC Cancer, 5, 29 84 Welker M.E and Kulik G (2013) Recent syntheses of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway inhibitors Bioorg Med Chem, 21(14), 4063–4091 85 Harada K., Baba Y., Shigaki H et al (2016) Prognostic and clinical impact of PIK3CA mutation in gastric cancer: pyrosequencing technology and literature review BMC Cancer, 16 86 Shi J., Yao D., Liu W et al (2012) Highly frequent PIK3CA amplification is associated with poor prognosis in gastric cancer BMC Cancer, 12, 50 87 Ito C., Nishizuka S.S., Ishida K et al (2017) Analysis of PIK3CA mutations and PI3K pathway proteins in advanced gastric cancer J Surg Res, 212, 195–204 88 Đỗ Văn Tráng Nghiên cứu kỹ thuật nạo vét hạch phẫu thuật nội soi điều trị ung thư dày vùng hang môn vị 89 Barbi S., Cataldo I., De Manzoni G et al (2010) The analysis of PIK3CA mutations in gastric carcinoma and metanalysis of literature suggest that exon-selectivity is a signature of cancer type J Exp Clin Cancer Res CR, 29(1), 32 90 Đặng Văn Thởi (2017) Nghiên Cứu Đặc Điểm Lâm Sàng, Thương Tổn Và Đánh Giá Kết Quả Lâu Dài Phẫu Thuật Triệt Căn Ung Thư Phần Trên Dạ Dày 91 Vũ Quang Toản (2017) Đánh giá kết điều trị ung thư dày giai đoạn IIB-III (T4, N0-3, M0) hóa chất bổ trợ EOX sau phẫu thuật bệnh viện K 92 Sự N.Đ.T (2012) Cancer registry in Thua Thien Hue period 2001-2009, Ghi nhận ung thư Thừa Thiên Huế giai đoạn 2001-2009 Tạp Chí Dược Học, 2(2), 75 93 Mabula J.B., Mchembe M.D., Koy M et al (2012) Gastric cancer at a university teaching hospital in northwestern Tanzania: a retrospective review of 232 cases World J Surg Oncol, 10, 257 94 Petrelli F., Berenato R., Turati L et al (2017) Prognostic value of diffuse versus intestinal histotype in patients with gastric cancer: a systematic review and meta-analysis J Gastrointest Oncol, 8(1), 148–163 95 van der Woude C.J., Kleibeuker J.H., Tiebosch A.T.G.M et al (2003) Diffuse and intestinal type gastric carcinomas differ in their expression of apoptosis related proteins J Clin Pathol, 56(9), 699–702 96 Ushiku T., Arnason T., Ban S et al (2013) Very well-differentiated gastric carcinoma of intestinal type: analysis of diagnostic criteria Mod Pathol Off J U S Can Acad Pathol Inc, 26(12), 1620–1631 97 Sengüven B., Baris E., Oygur T et al (2014) Comparison of Methods for the Extraction of DNA from Formalin-Fixed, Paraffin-Embedded Archival Tissues Int J Med Sci, 11(5), 494–499 98 Chacon-Cortes D and Griffiths L.R (2014) Methods for extracting genomic DNA from whole blood samples: current perspectives Journal of Biorepository Science for Applied Medicine, , accessed: 03/08/2018 99 Bamford S., Dawson E., Forbes S et al (2004) The COSMIC (Catalogue of Somatic Mutations in Cancer) database and website Br J Cancer, 91(2), 355–358 100.Bader A.G., Kang S., and Vogt P.K (2006) Cancer-specific mutations in PIK3CA are oncogenic in vivo Proc Natl Acad Sci U S A, 103(5), 1475–1479 101.Kang S., Bader A.G., and Vogt P.K (2005) Phosphatidylinositol 3-kinase mutations identified in human cancer are oncogenic Proc Natl Acad Sci U S A, 102(3), 802–807 102.Lu W., Wei H., Li M et al (2015) Identification of KRAS and PIK3CA but not BRAF mutations in patients with gastric cancer Mol Med Rep, 12(1), 1219–1224 103.Velho S., Oliveira C., Ferreira A et al (2005) The prevalence of PIK3CA mutations in gastric and colon cancer Eur J Cancer Oxf Engl 1990, 41(11), 1649–1654 104.Kim J.-W., Lee H.S., Nam K.H et al (2017) PIK3CA mutations are associated with increased tumor aggressiveness and Akt activation in gastric cancer Oncotarget, 8(53), 90948–90958 105.Zhao L and Vogt P.K (2008) Helical domain and kinase domain mutations in p110alpha of phosphatidylinositol 3-kinase induce gain of function by different mechanisms Proc Natl Acad Sci U S A, 105(7), 2652–2657 106.Miled N., Yan Y., Hon W.-C et al (2007) Mechanism of two classes of cancer mutations in the phosphoinositide 3-kinase catalytic subunit Science, 317(5835), 239–242 107.Mandelker D., Gabelli S.B., Schmidt-Kittler O et al (2009) A frequent kinase domain mutation that changes the interaction between PI3Kα and the membrane Proc Natl Acad Sci U S A, 106(40), 16996–17001 108.Gabelli S.B., Huang C.-H., Mandelker D et al (2010) Structural effects of oncogenic PI3Kα mutations Curr Top Microbiol Immunol, 347, 43–53 109.Scheid M.P and Woodgett J.R (2001) PKB/AKT: functional insights from genetic models Nat Rev Mol Cell Biol, 2(10), 760–768 110.Vivanco I and Sawyers C.L (2002) The phosphatidylinositol 3-Kinase AKT pathway in human cancer Nat Rev Cancer, 2(7), 489–501 111 Downward J (2004) PI 3-kinase, Akt and cell survival Semin Cell Dev Biol, 15(2), 177–182 112.Fresno Vara J.A., Casado E., de Castro J et al (2004) PI3K/Akt signalling pathway and cancer Cancer Treat Rev, 30(2), 193–204 113.Bacus S.S., Altomare D.A., Lyass L et al (2002) AKT2 is frequently upregulated in HER-2/neu-positive breast cancers and may contribute to tumor aggressiveness by enhancing cell survival Oncogene, 21(22), 3532–3540 114.Aoki M., Blazek E., and Vogt P.K (2001) A role of the kinase mTOR in cellular transformation induced by the oncoproteins P3k and Akt Proc Natl Acad Sci U S A, 98(1), 136–141 115.Lee J.W., Soung Y.H., Kim S.Y et al (2005) PIK3CA gene is frequently mutated in breast carcinomas and hepatocellular carcinomas Oncogene, 24(8), 1477–1480 116.Chong M.-L., Loh M., Thakkar B et al (2014) Phosphatidylinositol-3kinase pathway aberrations in gastric and colorectal cancer: Meta-analysis, co-occurrence and ethnic variation Int J Cancer, 134(5), 1232–1238 117.Sukawa Y., Yamamoto H., Nosho K et al (2012) Alterations in the human epidermal growth factor receptor 2-phosphatidylinositol 3-kinasev-Akt pathway in gastric cancer World J Gastroenterol, 18(45), 6577– 6586 118.Lee H., Hwang I.-S., Choi I.-J et al (2015) Are PIK3CA Mutation and Amplification Associated with Clinicopathological Characteristics of Gastric Cancer? Asian Pac J Cancer Prev APJCP, 16(11), 4493–4496 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI DƯƠNG THỊ MINH THOA NGHIÊN CỨU ĐỘT BIẾN GEN PIK3CA TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƯ DẠ DÀY Chuyên ngành: Hóa sinh Mã số: 60720106 LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Tạ Thành Văn HÀ NỘI – 2018 LỜI CẢM ƠN Tơi xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Sau đại học Bộ mơn Hóa sinh trường Đại học Y Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến GS.TS Tạ Thành Văn, người thầy tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện cho tơi học tập, nghiên cứu hồn thành luận văn Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn tới PGS.TS Đặng Thị Ngọc Dung ln nhiệt tình hướng dẫn, động viên, giúp đỡ cho suốt q trình học tập thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn lời nhận xét quý báu, góp ý xác đáng Ths Nguyễn Thị Ngọc Lan, thầy Bộ mơn Hóa sinh thành viên nhóm nghiên cứu ung thư dày - Trường Đại học Y Hà Nội Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn tơi tới Trung tâm kiểm chuẩn chất lượng y học trường Đại học Y Hà Nội, Ban giám đốc, phòng Kế hoạch tổng hợp, khoa Giải phẫu bệnh khác phòng khoa bệnh viện tạo điều kiện thuận lợi cho q trình thực luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô hội đồng thông qua đề cương, thầy cô hội đồng chấm luận văn cho tơi ý kiến q báu Nghiên cứu tài trợ Quỹ Phát triển khoa học công nghệ Quốc gia (NAFOSTED) đề tài mã số 106-YS.02-2015.37 Tôi xin chia sẻ nỗi đau đớn, mát mà bệnh nhân người thân họ không may phải trải qua Và cuối cùng, trân trọng khắc ghi tim tình cảm mà gia đình, bạn bè, đồng nghiệp, người thân yêu bên cạnh động viên, để tơi có thành bước đầu ngày hôm Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2018 Dương Thị Minh Thoa LỜI CAM ĐOAN Tôi Dương Thị Minh Thoa, Cao học khóa 25, Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành Hóa sinh, xin cam đoan Đây luận văn thân trực tiếp thực hướng dẫn thầy GS.TS Tạ Thành Văn Cơng trình khơng trùng lặp với nghiên cứu khác công bố Việt Nam Các số liệu thơng tin nghiên cứu hồn tồn xác, trung thực khách quan, xác nhận chấp nhận sở nơi nghiên cứu Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm trước pháp luật cam kết Tác giả luận văn Dương Thị Minh Thoa DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AJCC American Joint Committee on Cancer (Ủy ban Hợp Hoa Kỳ Ung thư) BN Bệnh nhân CEA Carcino- Embryonic- Antigen (Kháng nguyên bào thai) CT Computerized Tomography (Chụp cắt lớp vi tính) EGFR Epidermal Growth Factor Receptor (Thụ thể yếu tố tăng trưởng thượng bì) GWAS Genome-Wide Association Studies (Nghiên cứu tương quan toàn nhiễm sắc thể) H pylori Helicobacter pylori HE Hematoxylin - Eosin HER Human Epidermal Growth Factor Receptor (Thụ thể yếu tố tăng trưởng thượng bì người) HER2 Human Epidermal Growth Factor Receptor (Thụ thể yếu tố tăng trưởng thượng bì người loại 2) HMMD OR PET_ CT Hóa mơ miễn dịch Odds Ratio (tỷ số chênh) Positron emission tomography–computed tomography (Chụp cắt lớp vi tính phát xạ) PI Phosphatidylinositol PKB Protein kinase B Rpm Revolutions Per Minute (số vòng phút) SNP Single nucleotide polymorphism (Các dạng đa hình nucleotide đơn) TCYTTG Tổ chức Y tế Thế giới TNM Tumor–Node–Metastasis (Khối u – Hạch – Di căn) UICC Union for International Cancer Control (Liên minh Kiểm soát Ung thư Quốc tế) UTBM Ung thư biểu mô UTBMDD Ung thư biểu mô dày UTBMT Ung thư biểu mô tuyến UTDD Ung thư dày VEGF Vascular Endothelial Growth Factor WHO World Health Organization (Tổ chức y tế giới) MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm chung .3 1.1.1 Dịch tễ học 1.1.2 Nguyên nhân yếu tố nguy cuả ung thư dày 1.1.3 Triệu chứng .7 1.1.4 Giải phẫu bệnh ung thư dày .12 1.1.5 Chẩn đoán giai đoạn 16 1.1.6 Điều trị UTDD 18 1.2 Gen PIK3CA .23 1.2.1 Vị trí, chức 23 1.2.2 Gen PIK3CA ung thư dày 27 1.2.3 Các nghiên cứu nước 28 1.3 Các kỹ thuật sinh học phân tử phát đột biến gen PIK3CA gây UTDD 29 1.3.1 Phản ứng PCR .29 1.3.2 Giải trình tự gen 32 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .33 2.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.2 Thiết kế nghiên cứu .33 2.1.3 Phương pháp chọn mẫu 33 2.1.4 Cỡ mẫu nghiên cứu .33 2.2 Thời gian nghiên cứu 33 2.3 Chỉ tiêu nghiên cứu .34 2.4 Kết phân tích gen 34 2.5 Dụng cụ, trang thiết bị, hóa chất nghiên cứu 34 2.5.1 Dụng cụ 34 2.5.2 Hóa chất 34 2.6 Phương pháp nghiên cứu .35 2.6.1 Mô hình nghiên cứu 35 2.6.2 Nội dung nghiên cứu .36 2.6.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 36 2.6.4 Quy trình kỹ thuật nghiên cứu 36 2.6.5 Phương pháp xử lý số liệu: 42 2.7 Đạo đức nghiên cứu 42 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 43 3.1 Đặc điểm chung đối tượng 43 3.1.1 Đặc điểm tuổi 43 3.1.2 Đặc điểm giới 43 3.1.3 Đặc điểm tuổi theo mô bệnh học 44 3.1.4 Đặc điểm giới theo mô bệnh học 44 3.2 Kết tìm đột biến exon (codon 542, 545) exon 20 (codon 1047) gen PIK3CA 45 3.2.1 Tách DNA từ mô đúc paraffin .45 3.2.2 Phản ứng PCR .48 3.2.3 Phân tích kết đột biến .49 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 52 4.1 Đặc điểm chung nhóm nghiên cứu .52 4.1.1 Đặc điểm tuổi: 52 4.1.2 Đặc điểm giới 53 4.1.3 Đặc điểm giới theo mô bệnh học .54 4.1.4 Đặc điểm tuổi theo mô bệnh học 54 4.2 Xác định đột biến exon (codon 542, codon 545) exon 20 gen PIK3CA .55 4.3 Liên quan đột biến exon (codon 542, codon 545) exon 20 gen PIK3CA với mô bệnh học 66 4.4 Nghiên cứu phát đột biến gen PIK3CA giới 67 KẾT LUẬN 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1: Đặc điểm tuổi bệnh nhân 43 Bảng 3.2: Đặc điểm giới bệnh nhân 43 Bảng 3.3: Đặc điểm tuổi bệnh nhân theo mô bệnh học 44 Bảng 3.4: Đặc điểm giới bệnh nhân theo mô bệnh học 44 Bảng 3.5 Kết đo nồng độ độ tinh mẫu DNA tách từ mô ung thư dày bệnh nhân 46 Bảng 3.6 Kết đột biến gen liên quan mô bệnh học 51 Bảng 3.7 Kết đột biến gen liên quan đến số khác 51 Bảng 4.1 Các đột biến gen PIK3CA nghiên cứu .58 Bảng 4.2 Các đột biến gen PIK3CA nghiên cứu khác 58 Bảng 4.3 Kết đột biến gen PIK3CA liên quan mô bệnh học nghiên cứu khác 66 Bảng 4.4 Kết đột biến gen PIK3CA liên quan mô bệnh học nghiên cứu khác 66 Bảng 4.5 Đột biến PIK3CA ung thư khác 67 Bảng 4.6 Tỉ lệ đột biến exon 20 68 Bảng 4.7: Tỉ lệ đột biến PIK3CA bệnh nhân ung thư dày nghiên cứu 69 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Hình ảnh UTDD vùng tâm vị qua nội soi Hình 1.2: Hình ảnh UTDD di hạch qua siêu âm nội soi .10 Hình 1.3: Hình ảnh giải phẫu bệnh ung thư biểu mơ tuyến biệt hóa tốt 12 Hình 1.4 : Nhiễm sắc thể số 23 Hình 1.5: Sự tạo vị trí gắn phospholipid inositol PI3K 25 Hình 1.6 Một cách mà tín hiệu thơng qua PI 3-kinase thúc đẩy sống tế bào 26 Hình 1.7 Các bước phản ứng PCR 30 Hình 3.1 Hình ảnh đo nồng độ độ tinh mẫu DNA tách từ mô ung thư dày bệnh nhân HP1591 45 Hình 3.2 Kết điện di sản phẩm PCR với cặp mồi codon 542, 545 (111bp) gel agarose 1.5% Giếng M: Marker 100 bp, giếng ( -): chứng âm 48 Hình 3.3: Kết điện di sản phẩm PCR với cặp mồi exon 20 (192bp) gel agarose 1.5% Giếng M: Marker 100 bp , giếng (-): chứng âm 48 Hình 3.4 Kết giải trình tự exon 49 Hình 3.5 Kết giải trình tự exon 20 .50 Hình 4.1 Liên kết p110α p85α 61 ... nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu đột biến gen PIK3CA bệnh nhân ung thư dày với mục tiêu: Xác định đột biến exon 20 gen PIK3CA bệnh nhân ung thư dày Tìm hiểu mối liên quan đột biến gen PIK3CA với... bào 28 1.2.2 Gen PIK3CA ung thư dày Các đột biến gen PIK3CA tìm thấy nhiều loại ung thư, bao gồm ung thư buồng trứng, vú, phổi, não dày Các đột biến gen PIK3CA liên quan đến ung thư somatic,... HER chiến lược nghiên cứu quan trọng góp phần cải thiện tiên lượng UTDD [63] 1.1.7 Đột biến gen UTDD [68] Nhiều nghiên cứu đột biến gen bệnh nhân ung thư dày báo cáo Tính tồn vẹn gen quan trọng