Tóm tắt Luận án tiến sĩ Dược học: Đánh giá ô nhiễm và nguy cơ do độc tố vi nấm trong thực phẩm tại một số tỉnh phía Bắc Việt Nam

Mục đích nghiên cứu của luận án nhằm Xác định tỷ lệ nhiễm và hàm lượng các độc tố vi nấm trên trong các mẫu thu thập được tại một số địa phương ở phía Bắc Việt Nam. Đánh giá nguy cơ phơi nhiễm các độc tố vi nấm nghiên cứu đối với dân cư ở các địa phương đã khảo sát.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI ĐỖ HỮU TUẤN ĐÁNH GIÁ Ô NHIỄM VÀ NGUY CƠ DO ĐỘC TỐ VI NẤM TRONG THỰC PHẨM TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM Chuyên ngành: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 62720410 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2020 Cơng trình hồn thành tại: Trường Đại học Dược Hà Nội Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia Người hướng dẫn khoa học: GS.TS Thái Nguyễn Hùng Thu GS.TS Lê Danh Tuyên Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng đánh giá cấp Trường họp tại: vào hồi: ngày tháng năm Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện Trường Đại học Dược Hà Nội -1- MỞ ĐẦU Tính cấp thiết luận án An toàn thực phẩm bệnh thực phẩm vấn đề nhiều quốc gia có Việt Nam Sức khỏe, tính mạng người bị đe dọa tác nhân gây ngộ độc thực phẩm bệnh bị nhiễm qua thực phẩm Sử dụng thực phẩm không đảm bảo vệ sinh trước mắt bị ngộ độc cấp tính với triệu chứng ạt, dễ nhận thấy Nhưng nguy hiểm tích lũy chất độc hại số quan gây ngộ độc mạn tính gây dị tật cho hệ mai sau An toàn thực phẩm có tác động đến kinh tế xã hội Đối với nước ta nhiều nước phát triển, lương thực thực phẩm loại sản phẩm chiến lược, ngồi ý nghĩa kinh tế có ý nghĩa trị, xã hội quan trọng Vệ sinh an toàn thực phẩm nhằm tăng lợi cạnh tranh thị trường quốc tế Để cạnh tranh thị trường quốc tế, thực phẩm cần sản xuất, chế biến, bảo quản phòng tránh nhiễm loại vi sinh vật mà khơng chứa chất độc hại vượt mức quy định cho phép tiêu chuẩn quốc tế Khí hậu nhiệt đới nóng ẩm Việt Nam (đặc biệt phía Bắc) điều kiện thuận lợi cho phát triển loài nấm mốc Nhiều loài nấm mốc phát triển chất lương thực, thực phẩm sinh độc tố vi nấm Khi người vật nuôi sử dụng lương thực thực phẩm bị nhiễm độc tố vi nấm, gây ảnh hưởng khơng mong muốn sức khỏe, cấp tính mạn tính [110] Một số loại độc tố vi nấm xếp vào nhóm chất có khả gây ung thư người aflatoxin B1 (nhóm 1A), ochratoxin A fumonisin B1 (nhóm 2B) [77,79] Một số nghiên cứu cho thấy có mặt độc tố vi nấm nhiều loại thực phẩm Việt Nam ngô, gạo, lạc vừng Hiện nay, Việt Nam có quy định kiểm sốt độc tố vi nấm thực phẩm [1] Phần lớn quy định dựa tiêu chuẩn quốc tế Codex Nhưng thiếu nghiên cứu đánh giá phù hợp quy định với điều kiện Việt Nam, thực trạng mối nguy sức khỏe phơi nhiễm độc tố vi nấm từ thực phẩm Trước thực trạng cần có nghiên cứu đánh giá nguy sức khỏe người thực phẩm bị nhiễm độc tố vi nấm để làm sở khoa học cho nhà quản lý hoạch định sách phù hợp với mục tiêu đảm bảo quyền lợi, sức khỏe người tiêu dùng tăng tính cạnh tranh cho sản phẩm nông sản Việt thị trường quốc tế đồng thời hàng rào kỹ thuật ngăn chặn thực phẩm độc hại, giá rẻ xâm nhập vào thị trường nước ta Do đó, đề tài “Đánh giá ô nhiễm nguy độc tố vi nấm thực phẩm số tỉnh phía Bắc Việt Nam” thực với mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp phân tích đồng thời độc tố aflatoxin, fumonisin B1, ochratoxin A zearalenon có gạo, ngơ hạt có dầu Xác định tỷ lệ nhiễm hàm lượng độc tố vi nấm mẫu thu thập số địa phương phía Bắc Việt Nam -2- Đánh giá nguy phơi nhiễm độc tố vi nấm nghiên cứu dân cư địa phương khảo sát Những đóng góp luận án  Lần phương pháp QuEChERS ứng dụng để xử lý mẫu phân tích ĐTVN Việt Nam  Đã xây dựng phương pháp phân tích đồng thời ĐTVN LC-MS/MS đạt tiêu chuẩn châu Âu EC 657/2002 EC 401/2006  Đã thu thập phân tích ĐTVN 996 mẫu ngũ cốc hạt có dầu lấy địa phương thuộc phía Bắc Việt Nam  Đã điều tra mức tiêu thụ thực phẩm xác định liều phơi nhiễm ĐTVN nghiên cứu địa phương lấy mẫu  Đã đánh giá nguy ĐTVN AFB1, FUB1, OTA ZEA địa phương nghiên cứu phía Bắc Việt Nam  Đã phân tích đề xuất giải pháp hạn chế nguy phơi nhiễm ĐTVN địa phương phía Bắc Việt Nam Cấu trúc luận án Luận án gồm 139 trang, 61 bảng 33 hình Bố cục gồm phần: Đặt vấn đề (2 trang), Tổng quan (39 trang), Đối tượng phương pháp nghiên cứu (14 trang), Kết (50 trang), Bàn luận (31 trang), Kết luận kiến nghị (3 trang), Danh mục cơng trình công bố liên quan đến luận án (1 trang) Luận án có 134 tài liệu tham khảo (gồm tài liệu 29 tiếng Việt 105 tài liệu tiếng Anh) phụ lục Chương 1-TỔNG QUAN Đã tổng quan nội dung liên quan đến luận án gồm có: - Tổng quan số độc tố vi nấm: Khái niệm độc tố vi nấm số độc tố vi nấm cụ thể gồm: aflatoxin, fumonisin, ochratoxin, zearalenon - Tổng quan tình hình ngộ độc nhiễm độc tố vi nấm thực phẩm gồm nghiên cứu giới Việt Nam - Tổng quan phương pháp xác định độc tố vi nấm thực phẩm gồm: giới thiệu chung, phương pháp QuEChERS ứng dụng xác định đồng thời độc tố vi nấm, kỹ thuật phân tích độc tố vi nấm (sắc ký khí, sắc ký lỏng) yêu cầu phương pháp phân tích độc tố vi nấm - Tổng quan đánh giá nguy độc tố vi nấm thực phẩm gồm: giới thiệu đánh giá nguy (xác định mối nguy, mô tả mối nguy, đánh giá phơi nhiễm, mô tả nguy cơ), cách tiếp cận đánh giá nguy ĐTVN (đánh giá tiềm gây ung thư, đánh giá dựa liều hàng ngày chấp nhận được, đánh giá dựa khung phơi nhiễm), nghiên cứu đánh giá nguy độc tố vi nấm giới Việt Nam (aflatoxin, ochratoxin A, fumonisin B1 zearalenon) -3- Chương - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu ĐTVN gồm aflatoxin (AFB1, AFB2, AFG1 AFG2), fumonisin B1 (FUB1), ochratoxin A (OTA) zearalenon (ZEA) Các thực phẩm nghiên cứu đánh giá mức độ ô nhiễm độc tố số loại ngũ cốc (gạo, ngơ) hạt có dầu (lạc, vừng) thu thập số địa phương phía Bắc Việt Nam 2.1.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu Nghiên cứu xây dựng phương pháp, thẩm định phương pháp xác định đồng thời độc tố vi nấm ngũ cốc hạt có dầu thực Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia Thời gian thực từ năm 2015-2016 Nghiên cứu điều tra tiêu thụ thực phẩm lấy mẫu đánh giá hàm lượng độc tố vi nấm thực phẩm thực từ 2016 – 2018, tỉnh thành phố gồm: - Bắc Giang: thị trấn Kép, xã Đại Lâm, huyện Lạng Giang - Hà Nội: phường Nhân Chính Thanh Xuân Nam, quận Thanh Xuân - Thái Bình: xã Song Lãng Song An, huyện Vũ Thư - Thanh Hóa: xã Đa Lộc Hưng Lộc, huyện Hậu Lộc - Hà Giang: xã Cán Tỷ, huyện Quản Bạ xã Thài Phìn Lủng, huyện Mèo Vạc 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu 2.1.2.1 Thiết bị, dụng cụ  Thiết bị: Các thiết bị định kỳ hiệu chuẩn gồm: Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS/MS gồm bơm cao áp LC 20AD-XR với ổn nhiệt cột CTO-20A tiêm mẫu tự động SIL 20AC-XR Shimadzu; Cột sắc ký C18 (150 mm×4,6 mm; 5μm) tiền cột tương ứng hãng Waters, Hoa Kỳ; Khối phổ ba tứ cực 5500 QQQ ABSciex); Máy lắc xoáy IKA, Trung Quốc; Máy đồng mẫu HR1843, Philips, Việt Nam; Máy li tâm Z383K, Hermle, Đức; Cân phân tích (có độ xác 0,1 mg) cân kĩ thuật (có độ xác 0,01 g), Mettler Toledo, Thụy sĩ  Dụng cụ: Micropipet 20-200 µL, 100-1000 µL 1000-5000 µL; Bình định mức: 5, 10, 50, 100, 250 1000 mL; Ống ly tâm nhựa mL 50 mL; Vial loại 1,8 mL; Màng lọc mẫu 0,2 µm; Pipet pasteur; Ống đong, phễu; Giấy lọc 2.1.2.2 Dung mơi, hóa chất Các loại hố chất sử dụng thuộc loại tinh khiết phân tích - Dung mơi loại dùng cho sắc ký: methanol, acetonitril Merck, Đức - Các hóa chất HCOOH, CH3COOH, MgSO4 khan, CH3COONa, CH3COONH4 Merck, Đức - Chất hấp phụ PSA (primary secondary amines), C18: Agilent (Hoa Kỳ) - Nước cất lần thu từ hệ thống cất nước Hamilton -4- 2.1.2.3 Chất chuẩn - Chuẩn aflatoxin B1 (lô 025M4092V), aflatoxin B2 (lô 025M4138V), aflatoxin G1 (lô 055M4047V), aflatoxin G2 (lô 114M4032V), ochratoxin A (lô 045M4021V), zearalenon (lô 084M4034V) hãng Sigma Aldrich (Hoa Kỳ) Chuẩn funimisin B1 (lô 2-TIM-16-1) hãng TRC (Canada) 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 2.2.1 Xây dựng phương pháp xác định đồng thời ĐTVN LC-MS/MS  Khảo sát điều kiện phân tích độc tố vi nấm LC-MS/MS Khảo sát điều kiện sắc ký lỏng: tìm điều kiện tách sắc ký bao gồm pha động, pha tĩnh Khảo sát điều kiện khối phổ: tìm điều kiện tối ưu MS để xác định ion phân tử; lựa chọn ion sản phẩm phù hợp  Khảo sát điều kiện xử lý mẫu Ứng dụng phương pháp QuEChERS thực khảo sát: dung môi chiết trình làm d-SPE  Xác nhận giá trị sử dụng phương pháp xây dựng Phương pháp xây dựng thẩm định với thông số: tính đặc hiệu, LOD LOQ, xây dựng đường chuẩn, độ độ lặp lại độ (độ thu hồi) 2.2.2 Xác định tỷ lệ nhiễm hàm lượng ĐTVN mẫu lấy số địa phương phía Bắc Việt Nam Lấy mẫu địa phương phía Bắc Việt Nam gồm: Hà Giang, Thanh Hóa, Bắc Giang, Thái Bình Hà Nội Ứng dụng phương pháp xây dựng để phân tích độc tố có mẫu tính tốn kết 2.2.3 Đánh giá nguy ĐTVN  Điều tra lượng tiêu thụ thực phẩm đánh giá phơi nhiễm ĐTVN Thực điều tra chế độ tiêu thụ thực phẩm địa phương lấy mẫu phân tích phía Bắc theo lứa tuổi giới Kết hợp với hàm lượng ĐTVN đối tượng mẫu để đánh giá lượng phơi nhiễm độc tố vi nấm  Mô tả nguy độc tố vi nấm Báo cáo đánh giá nguy số loại ĐTVN thực phẩm gồm: Nguy gây ung thư gan AFB1 nguy phơi nhiễm FUB1, OTA ZEA so với PMTDI (Liều tối đa hàng ngày dung nạp được) 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Xây dựng phương pháp xác định ĐTVN ngũ cốc hạt có dầu 2.3.1.1 Hoàn thiện phương pháp xử lý mẫu Việc xử lý mẫu tiến hành chủ yếu theo phương pháp QuEChERS với số khảo sát cải tiến phù hợp với mẫu loại ngũ cốc hạt có dầu nghiên cứu Các khảo sát tập trung vào việc chọn dung môi chiết yếu tố trình làm với dSPE 2.3.1.2 Xác định điều kiện sắc ký lỏng khối phổ hai lần (LC-MS/MS)  Lựa chọn điều kiện khối phổ: Mỗi ĐTVN lựa chọn điều kiện phân mảnh phù hợp để -5- thu ion phân tử ion sản phẩm, ion có cường độ cao sử dụng để định lượng, ion có cường độ thấp để xác nhận Cả hai chế độ ion dương ion âm khảo sát để lựa chọn chế độ phù hợp với độc tố vi nấm  Lựa chọn điều kiện sắc ký lỏng: Lựa chọn pha tĩnh; Lựa chọn pha động (thành phần pha động, yếu tố chế độ gradient, chọn chất sử dụng để tăng hiệu trình ion hóa) 2.3.1.3 Thẩm định phương pháp phân tích  Pha dung dịch chuẩn: - Các dung dịch chuẩn gốc pha methanol để thu nồng độ khoảng 1000 µg/mL Pha dung dịch chuẩn hỗn hợp (nồng độ AFB1, AFB2, AFG1, AFG2 200 ng/mL; nồng độ FUB1 20 µg/mL; nồng độ OTA, ZEA 1000 ng/mL) Pha loãng 10 lần để dung dịch chuẩn hỗn hợp Bảo quản nhiệt độ khoảng 4C, giữ tháng  Thẩm định tính đặc hiệu Tính đặc hiệu phương pháp đánh giá qua thực phân tích so sánh phổ chất phân tích mẫu: mẫu trắng, mẫu chuẩn mẫu thêm chuẩn Mẫu trắng phải khơng xuất tín hiệu chất phân tích, mẫu thêm chuẩn phải có tín hiệu chất phân tích thời gian lưu tương ứng thời gian lưu mẫu chuẩn Ngồi ra, tính đặc hiệu khẳng định số điểm nhận dạng (IP) tỷ lệ ion theo tiêu chuẩn EC657/20002 Châu Âu  Xây dựng đường chuẩn: Đường chuẩn xây dựng đo dung dịch chuẩn có nồng độ thay đổi Xây dựng đường chuẩn dung mơi mẫu thực, nhằm mục đích loại trừ ảnh hưởng mẫu đến kết phân tích Ảnh hưởng ME (matrix effect, %) tính theo công thức: ME  am  a s 100 as đó: am: hệ số góc đường chuẩn mẫu (matrix) as: hệ số góc đường chuẩn dung môi (solvent)  Thẩm định độ lặp lại độ thu hồi: Để thẩm định độ lặp lại độ thu hồi phương pháp phân tích xây dựng tiến hành thí nghiệm lặp lại mẫu trắng thêm chuẩn mức nồng độ khác nhau, mức phân tích lặp lại lần tính tốn kết theo cơng thức: - Độ lặp lại: biểu diễn theo hệ số biến thiên CV(%): S CV (%)  100 x đó: S: độ lệch chuẩn; x : Nồng độ trung bình tính n lần thử nghiệm; - Độ thu hồi (R%): C R (%)  100 Cc đó: Cc: Nồng độ chuẩn thêm (lý thuyết) C: Nồng độ chất phân tích mẫu trắng thêm chuẩn  Xác định giới hạn phát giới hạn định lượng: Trong nghiên cứu giới hạn phát (LOD) xác định dựa tỷ lệ tín hiệu với nhiễu đường (S/N) qua phân tích mẫu thêm chuẩn nồng độ thấp pha lỗng -6- dần đến phát tín hiệu chất phân tích LOD nồng độ mà tín hiệu lớn gấp lần nhiễu (S/N = 3) LOQ nồng độ mà tín hiệu lớn gấp 10 lần nhiễu (S/N = 10) 2.3.2 Phương pháp lấy mẫu để đánh giá mức độ nhiễm độc tố vi nấm 2.3.2.1 Cỡ mẫu Sử dụng cơng thức tính cỡ mẫu tỉ lệ sử dụng độ xác tuyệt đối sau: p (1  p ) n  Z (21 / ) đó: n: cỡ mẫu tối thiểu cần đạt được; Z(1-/2): hệ số tin d2 cậy, lấy độ tin cậy 95%; : mức ý nghĩa, với  =0,05: Z(1-/2) = 1,96; p: ước lượng tỉ lệ biến nghiên cứu quần thể, p nghiên cứu ước lượng tỉ lệ nhiễm độc tố vi nấm dự kiến, ước tính p = 0,4 (trên sở nghiên cứu [6][7]); d: sai số chấp nhận ước lượng, với p = 0,4 lấy d = 0,1 Thay vào công thức, cỡ mẫu tính tốn theo lý thuyết cho tỉnh 92, tổng số lượng mẫu tối thiểu tỉnh 460 mẫu 2.3.2.2 Phương pháp địa điểm lấy mẫu - Các loại mẫu thu thập địa phương gồm: gạo, ngô (đại diện cho ngũ cốc), lạc vừng (đại diện cho hạt có dầu) - Địa điểm lấy mẫu tỉnh, thành phố phía Bắc Việt Nam gồm: Hà Nội, Thanh Hóa, Thái Bình, Bắc Giang Hà Giang Tại tỉnh thành phố Hà Nội, Bắc Giang, Thanh Hóa, Bắc Giang lựa chọn địa điểm thành phố nông thôn để thực lấy mẫu Riêng Hà Giang, tập trung lấy mẫu vùng núi cao nơi có tỷ lệ người H'Mong sinh sống chủ yếu - Lấy mẫu theo phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên theo danh sách sở địa phương (cửa hàng hộ gia đình), sở lấy mẫu loại sản phẩm Các mẫu có hình thức bên ngồi bình thường, khơng có dấu hiệu nấm mốc Lượng mẫu tối thiểu lấy kg, đóng túi kín, mã hóa chuyển phòng thí nghiệm phân tích ĐTVN 2.3.3 Phương pháp điều tra tiêu thụ thực phẩm Tại địa phương lấy mẫu tiến hành song song điều tra lượng tiêu thụ thực phẩm cân nặng theo lứa tuổi, giới tính Các hộ gia đình điều tra lượng thực phẩm gồm gạo, ngô, lạc vừng sử dụng hàng ngày thành viên 2.3.3.1 Cỡ mẫu t  N n e N  t  Cỡ mẫu xác định theo cơng thức sau [5]: đó: n: cỡ mẫu cần chọn; t: phân vị chuẩn hóa (thường xác suất 0,954); δ: độ lệch chuẩn (của Tiêu thụ gạo tham khảo tổng điều tra 2010); e: dung sai cho phép (5% giá trị tiêu thụ trung bình tham khảo tổng điều tra 2010); N: quy mô dân số (hoặc số hộ dân) khu vực điều tra Cỡ mẫu người hộ gia đình tính theo công thức cho địa phương Bắc Giang (192 người 48 hộ), Hà Nội 185 người 46 hộ), Hà Giang (192 người 48 hộ), Thái Bình (181 người 45 hộ), Thanh Hóa (181 người 45 hộ) -7- 2.3.3.2 Tiêu chuẩn chọn mẫu mẫu phiếu điều tra Chọn mẫu điều tra tiêu thụ thực phẩm: Các mẫu chọn để điều tra theo giai đoạn: - Giai đoạn chọn mẫu có chủ đích nhằm xác định khu vực có nguy cao thực phẩm nhiễm độc tố vi nấm lên sức khỏe người tiêu dùng số địa phương - Giai đoạn tỉnh, thành phố chọn xác định chọn mẫu ngẫu nhiên 02 đơn vị hành cấp xã để thực điều tra tỉnh, thành phố Tiêu chuẩn chọn mẫu: Người dân sống địa bàn năm trước nghiên cứu, khả giao tiếp bình thường, tình nguyện tham gia nghiên cứu, khơng biệt giới tính, nghề nghiệp Loại trừ người lực hành vi, rối loạn tâm thần, sa sút trí tuệ (căn vào danh sách quản lý trạm Y tế) 2.3.3 Phương pháp đánh giá nguy 2.3.3.1 Phương pháp đánh giá phơi nhiễm Dữ liệu tiêu thụ thực phẩm trung bình địa phương nghiên cứu tính tốn dựa thơng tin thu thập từ việc khảo sát lượng tiêu thụ thực phẩm thực đồng thời với việc lấy mẫu nhóm nghiên cứu Tuy nhiên, lạc vừng thường trộn lẫn với bữa ăn, liệu cho hai loại thực phẩm kết hợp giá trị cao chọn để tính tốn liều phơi nhiễm Tất liệu tiêu thụ thực phẩm ước tính cho nhóm tuổi khác từ 3-6 tuổi, 7-11 tuổi, 12-18 tuổi nhóm 18 tuổi Riêng nhóm 18 tuổi tính riêng theo giới tính tính chung cho nhóm Mức độ phơi nhiễm trung bình phân vị 95% (P95) tính tốn để tính đến thay đổi liệu tiêu thụ thực phẩm Kết điều tra xác định cân nặng trung bình nhóm tuổi nghiên cứu cho địa phương Liều phơi nhiễm (LPN, g/kg cân nặng/ngày) độc tố vi nấm từ nhóm thực phẩm tính theo cơng thức sau: HL ĐTVN  TTTPTB LPN  BWTB đó: HLĐTVN: hàm lượng độc tố vi nấm (g/kg) TTTPTB: tiêu thụ thực phẩm trung bình (kg/người/ngày); BWTB: cân nặng thể (bw) trung bình (kg) 2.3.3.2 Phương pháp mô tả mối nguy Nguy OTA, ZEA FUB1 đến sức khỏe người sử dụng đánh giá cách so sánh liều phơi nhiễm với giá trị PMTDI chúng: với ZEA 0,5 µg/kg bw/ngày với FUB1 2,0 µg/kg bw/ngày so sánh với PMTWI OTA (là 0,1 µg/kg bw/tuần) Nguy AFB1 sức khỏe người sử dụng đánh giá thông qua nguy tăng ung thư gan cộng đồng (số lượng ca ung thư 100.000 dân năm) Để đánh giá nguy ung thư gan phơi nhiễm AFB1, giá trị tiềm trung bình tính dựa tỷ lệ dân số Việt Nam nhiễm HBV ước tính nguy ung thư gan AFB1 nhóm dân số âm tính với HBV 0,01 ca/năm 100.000 người nhóm dân số dương tính với HBV 0,3 ca/năm 100.000 người ứng với ng AFB1/kg bw/ngày -8- Theo nghiên cứu trước đây, tỷ lệ nhiễm HBV Việt Nam lên tới 20% dân số nói chung Do đó, tỷ lệ lưu hành 20% sử dụng để tính tốn giá trị tiềm trung bình (ca ung thư/năm/100.000 người với ng AFB1/kg bw/ngày) sau: Tiềm trung bình = 0,3  0,2 + 0,01  0,8 = 0,068 Nguy gây ung thư (ca ung thư/năm/100.000 người) tính tốn sau: Nguy gây ung thư = Tiềm trung bình  Liều phơi nhiễm Các số liệu tổng hợp theo địa phương nghiên cứu Kết tỉnh, thành phố gồm Hà Nội, Bắc Giang, Thái Bình Thanh Hóa tổng hợp để đại diện cho miền Bắc Số liệu Hà Giang tập hợp làm sở đánh giá riêng 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu Kết phân tích tính tốn xử lý phần mềm Analyst hãng SCIEX Kết điều tra lượng tiêu thụ thực phẩm hàm lượng độc tố vi nấm mẫu thực phẩm tổng hợp xử lý phần mềm SPSS 16.0 Chuẩn t-student sử dụng để so sánh sai khác giá trị trung bình tập số liệu Tính tốn liều phơi nhiễm nguy gây ung thư tính tốn Microsoft Excel Chương -THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 KẾT QUẢ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ ĐỘC TỐ VI NẤM TRONG THỰC PHẨM 3.1.1 Khảo sát điều kiện tách xác định độc tố vi nấm LC-MS/MS 3.1.1.1 Lựa chọn điều kiện khối phổ Để tối ưu hóa điều kiện khối phổ, tiêm trực tiếp vào MS hỗn hợp chất chuẩn 50 ng/mL để khảo sát Ion phân tử lựa chọn dựa vào khối lượng phân tử, thường có dạng [M+H] [M-H] Chọn chế độ khảo sát tự động để bắn phá ion phân tử thành ion con, lựa chọn ion có cường độ cao để định lượng ion có cường độ thấp để xác nhận Tối ưu hóa lượng bắn phá (CE) thông số khác nguồn ESI tự động theo phần mềm thiết bị Cụ thể với ĐTVN sau: AFB1: ESI(+) mảnh mẹ 313, mảnh 241 269; AFB2: ESI(+) mảnh mẹ 315, mảnh 259 287; AFG1: ESI(+) mảnh mẹ 331, mảnh 245 285; AFG2: ESI(+) mảnh mẹ 329, mảnh 243 215; FUB1: ESI(+) mảnh mẹ 722, mảnh 352 334; OTA: ESI(-) mảnh mẹ 402, mảnh 358 167; ZEA: ESI(-) mảnh mẹ 317, mảnh 175 131 Từ đó, điều kiện khối phổ lựa chọn để xác định độc tố vi nấm nghiên cứu MS/MS hai chế độ ion dương ion âm đồng thời 3.1.1.2 Lựa chọn điều kiện sắc ký lỏng  Chọn pha tĩnh: Qua tham khảo tài liệu với điều kiện phòng thí nghiệm, cột tách pha đảo C18 lựa chọn Trong nghiên cứu này, ct Cortecs C18 (150 ì 4,6 mm; 2,7 àm) v tiền cột tương ứng Waters, Mỹ sử dụng  Khảo sát thành phần pha động: Pha động với thành phần dung dịch amoni acetat 10 mM nước (kênh A) methanol (kênh B) khảo sát sử dụng chế độ gradient - 12 - bình giá trị cao Tổng hợp kết phân tích ĐTVN tất mẫu ngô (tương tự với gạo, lạc vừng) thu thập địa phương Bảng 3.18 Bảng 3.18 Kết xác định độc tố vi nấm tất mẫu thu thập Kết định lượng (µg/kg) Đối tượng Số lượng Độc tố Số mẫu mẫu mẫu vi nấm có độc tố Trung vị Trung bình SD Cao Ngơ 287 Gạo AFB1 AFB2 AFG1 AFG2 FUB1 OTA ZEA 88 42 17 69 37 40 12,0 3,2 28,0 250,0 11,0 48,8 58,5 21,0 33,0 366,8 26,5 63,4 234,6 42,5 26,8 322,6 37,9 53,2 1572,5 155,0 92,5 1662 126,0 220,0 Hàm lượng độc tố vi nấm có khác biệt đáng kể địa phương nghiên cứu mẫu Đối với mẫu ngơ, hàm lượng AFB1 có khác biệt rõ Hà Giang địa phương lại Ngơ lạc đối tượng có tỷ lệ mẫu bị nhiễm độc tố vi nấm vượt giới hạn cho phép nhiều Có từ 10-27% mẫu ngơ có hàm lượng AF B1 vượt giới hạn cho phép (5 µg/kg) khoảng 10-15% mẫu lạc có hàm lượng AFB1 vượt giới hạn cho phép (8 µg/kg) OTA độc tố vi nấm chiếm tỷ lệ vượt giới hạn tối đa cho phép (5 µg/kg) lớn, cao Hà Giang với 14,00% số mẫu vượt giới hạn Tỷ lệ mẫu có hàm lượng FUB1 vượt giới hạn cho phép (1000 µg/kg) thấp, với có mẫu ngô Hà Giang mẫu ngô Thanh Hóa Khơng có mẫu có hàm lượng ZEA vượt giới hạn cho phép (100-350 µg/kg) 3.2.2.2.Tỷ lệ nhiễm độc tố vi nấm Aflatoxin độc tố vi nấm phát nhiều nhất, chủ yếu AFB1 với 192/996 mẫu (chiếm 19,28%) Ngô đối tượng bị nhiễm độc tố AFB1 cao nhất, với 88/287 mẫu (chiếm 30,66%) Tiếp theo lạc với 60/252 mẫu bị nhiễm AFB1 (chiếm 23,81%) Chỉ có 25/238 mẫu gạo (10,50%) 19/219 mẫu vừng (8,68%) bị nhiễm AFB1 Tỷ lệ bị nhiễm AFB2 AFG1 thấp hơn, 93/996 mẫu (chiếm 9,34%) 30/996 mẫu (chiếm 3,01%) Khơng có mẫu bị nhiễm độc tố AFG2 Tỷ lệ bị nhiễm độc tố vi nấm FUB1, OTA ZEA lần 7,43%; 5,32% 4,32% Các mẫu bị nhiễm chủ yếu tập trung vào mẫu ngô Tỷ lệ mẫu ngô bị nhiễm FUB1, OTA ZEA 24,04%; 12,89% 13,94% OTA phát lạc với tỷ lệ cao, chiếm 5,95% mẫu nghiên cứu Các mẫu gạo vừng có tỷ lệ bị nhiễm FUB1, OTA ZEA thấp Chỉ có 3/238 1/238 mẫu gạo bị nhiễm FUB1 ZEA, khơng có mẫu gạo bị nhiễm OTA Tương tự, có mẫu vừng bị nhiễm OTA, khơng có mẫu vừng bị nhiễm FUB1 ZEA Các kết cho thấy có nhiều mẫu phát có độc tố vi nấm chưa vượt giới hạn cho phép Trong đối tượng thực phẩm nghiên cứu, ngơ lạc hai nhóm sản phẩm có tỷ lệ nhiễm tỷ lệ vượt giới hạn AFB1 lớn nhất, kết phù hợp với nhiều nghiên cứu khác Việt Nam - 13 - 3.3 ĐÁNH GIÁ NGUY CƠ 3.3.1 Kết khảo sát lượng tiêu thụ thực phẩm cân nặng theo tuổi Qua điều tra lượng thực phẩm tiêu thụ địa phương, số liệu lượng thực phẩm tiêu thụ hàng ngày tính tốn theo nhóm tuổi, địa phương Ngồi giá trị trung bình, giá trị phân vị 95% tính tốn nhằm đánh giá mức độ phân bố số liệu Bảng 3.20 Lượng tiêu thụ thực phẩm (g/người/ngày) cân nặng trung bình Gạo Nhóm tuổi, Số Cân nặng giới tính lượng tr.bình (kg) Tr.bình P95 3-6 22 17,5 158,2 240,0 7-11 30 28,6 211,3 458,0 12-18 23 47,7 262,6 436,4 Bắc Giang >18 147 55,2 278,0 480,0 Nam >18 67 62,7 304,0 544,7 Nữ > 18 80 52,6 256,2 456,1 Địa điểm Ngô Lạc vừng Tr.bình P95 Tr.bình P95 10,7 55,0 1,5 5,4 14,3 76,4 3,2 14,3 22,9 40,4 4,3 20,0 27,6 57,1 4,8 14,4 24,7 57,1 5,3 20,0 30,1 57,1 4,5 14,4 Lượng tiêu thụ loại thực phẩm tóm tắt Bảng 3.20 (riêng với Bắc Giang, tương tự cho địa phương lại) thu qua điều tra Do lạc vừng sử dụng với nên lượng tiêu thụ hai nhóm sản phẩm tính chung tính theo lượng lớn Cân nặng trung bình nhóm tuổi khác địa phương tính tốn kết ghi Bảng 3.20 Kết thu cho thấy lượng thực phẩm chủ yếu sử dụng gạo, tỷ lệ sử dụng ngô thấp tỷ lệ sử dụng lạc vừng không đáng kể Giá trị phân vị 95% (P95) phản ánh mức độ dao động kết có khác biệt địa phương Cỡ mẫu nghiên cứu thiết kế 60 hộ gia đình cho địa phương Sự phân bố nhóm tuổi khác có khác biệt Điều dẫn đến mức độ dao động kết giá trị P95 sử dụng để tính đến dao động 3.3.2 Kết xác định liều phơi nhiễm độc tố 3.3.2.1 Tính tốn hàm lượng trung bình độc tố vi nấm mẫu Vì tỷ lệ mẫu không phát độc tố vi nấm (kết LOD LOQ) lớn 50% tổng số mẫu, hàm lượng độc tố vi nấm mẫu xác định theo hướng dẫn Cơ quan an toàn thực phẩm châu Âu: giới hạn (LB) tính cách thay mẫu không phát giá trị “0” thay mẫu phát thấp LOQ LOD, giới hạn (UB) xác định cách thay mẫu không phát LOD thay mẫu phát thấp LOQ LOQ [79] Kết xác định độc tố vi nấm (cho Bắc Giang, tương tự với địa phương khác) trình bày Bảng 3.21 Bảng 3.21 Tóm tắt kết xác định độc tố vi nấm Địa điểm Bắc Giang Loại mẫu Ngô Gạo Lạc Vừng Số lượng 56 51 59 49 AFB1 (µg/kg) LB UB 6,91 6,98 0,33 0,42 19,2 19,3 0,45 0,54 FUB1 (µg/kg) LB UB 24,7 48,3 25,0 25,0 25,0 OTA (µg/kg) LB UB 2,93 3,37 0,50 0,56 1,01 0,50 ZEA (µg/kg) LB UB 0,13 0,63 0,50 0,50 0,50 - 14 - Đối với AFB1, giá trị LB, UB tương ứng cao Hà Giang, tiếp đến Bắc Giang Thanh Hóa, thấp Thái Bình Hà Nội Giá trị cao xác định mẫu ngô Hà Giang 66,00 µg/kg (LB) 66,10 µg/kg (UB) Hàm lượng trung bình AFB1 lạc thấp so với ngô, cao Bắc Giang (UB = 19,3 µg/kg) Hà Giang (16,6) Trên gạo, giá trị LB UB địa phương thấp, cao Thanh Hóa (1,94 2,04 µg/kg) Đối với độc tố vi nấm khác, giá trị LB UB FUB1 ngô cao Hà Giang (154,0 169,0 µg/kg), tiếp đến Thanh Hóa (127,0 129,0 µg/kg), tương đồng Bắc Giang (24,7 48,3 µg/kg) Thái Bình (21,6 44,8 µg/kg), thấp Hà Nội (12,8 35,3 µg/kg) Giá trị LB UB OTA ngô cao Hà Giang 7,44 7,87 µg/kg cao địa phương lại Tiếp theo lạc với giá trị UB dao động địa phương từ 0,55 đến 2,25 µg/kg Giá trị LB UB ZEA ngơ Thanh Hóa 64,50 64,90 µg/kg cao giá trị tương ứng Hà Giang (20,90 21,30 µg/kg) cao hẳn địa phương lại Chỉ có mẫu gạo mẫu lạc có phát ZEA 3.3.2.2.Tính toán liều phơi nhiễm độc tố vi nấm Dựa kết hàm lượng độc tố vi nấm thực phẩm mức tiêu thụ thực phẩm, liều phơi nhiễm với loại độc tố AFB1, FUB1, OTA ZEA tính cho nhóm tuổi Các kết cho thấy, liều phơi nhiễm AFB1 Hà Giang cao rõ rệt so với địa phương lại, giá trị trung bình phân vị 95%, liều trung bình UB Hà Giang nhóm người trưởng thành 449,4 ng/kg bw/ngày; liều tương tự Thanh Hóa 14,4 ng/kg bw/ngày địa phương lại dao động từ 4,3 đến 7,4 ng/kg bw/ngày Qua so sánh tỷ lệ đóng góp vào tổng liều phơi nhiễm AFB1 cho thấy Hà Giang nguồn phơi nhiễm chủ yếu từ ngơ, Thanh Hóa Thái Bình chủ yếu từ gạo Ở Bắc Giang Hà Nội, nguồn phơi nhiễm từ lạc chiếm tỷ lệ đáng kể Liều phơi nhiễm FUB1 cao ghi nhận Hà Giang, Thanh Hóa Liều trung bình UB Hà Giang nhóm người trưởng thành 1325,0 ng/kg bw/ngày; liều tương tự Thanh Hóa 209,0 ng/kg bw/ngày tỉnh lại dao động từ 154,4 đến 173,8 ng/kg bw/ngày Liều phơi nhiễm OTA cao ghi nhận Hà Giang với liều trung bình UB nhóm người trưởng thành 55,4 ng/kg bw/ngày, cao khoảng 10 lần so với địa phương lại; liều tương tự tỉnh lại dao động từ 3,5 đến 4,3 ng/kg bw/ngày Tương tự độc tố vi nấm khác, liều phơi nhiễm ZEA Hà Giang cao với liều trung bình UB nhóm người trưởng thành 145,4 ng/kg bw/ngày; Thanh Hóa với liều tương ứng 38,7 ng/kg bw/ngày cao khoảng 10 lần so với địa phương lại; liều tương ứng địa phương lại dao động từ 2,9 đến 4,5 ng/kg bw/ngày 3.3.3 Kết đánh giá nguy phơi nhiễm độc tố vi nấm 3.3.3.1 Aflatoxin B1 Căn liều phơi nhiễm, tiềm gây ung thư hiệu chỉnh liều từ thực phẩm sống sang thực phẩm chín, nguy gây ung thư gan AFB1 tính tốn trình bày Bảng 3.24 (cho Hà Giang địa phương lại tương tự) - 15 - Bảng 3.24 Nguy gây ung thư gan AFB1 địa phương Nguy gây ung thư gan AFB1 Địa điểm Nhóm tuổi Hà Giang 3-6 7-11 12-18 >18 Nam >18 Nữ > 18 (ca ung thư/năm/100.000 dân) LB t.bình 14,26 18,30 18,44 21,03 20,01 21,18 UB t.bình 14,34 18,36 18,49 21,09 20,06 21,24 LB P95 54,26 50,10 44,15 40,64 38,94 41,87 UB P95 54,45 50,26 44,29 40,77 39,07 42,00 So sánh nguy ung thư theo giới nhóm tuổi 18 cho thấy nhìn chung nguy nữ cao nam (trừ Thái Bình) Sử dụng kiểm định t-test để đánh giá khác biệt cho thấy khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, với độ tin cậy 95% Các giá trị trung bình nguy gây ung thư địa phương Thanh Hóa, Hà Nội, Thái Bình Bắc Giang có khác biệt rõ rệt so với Hà Giang thiết kế nghiên cứu Hà Giang tập trung vào nhóm đồng bào H'Mong vùng núi cao với tập tục tiêu thụ ngô phổ biến Để đảm bảo tính đại diện đánh giá nguy ung thư miền Bắc, số liệu địa phương vùng đồng trung du đánh giá đại diện cho miền Bắc Như vậy, giá trị UB trung bình nhóm tuổi dao động từ 0,50 đến 0,76 ca ung thư/năm/100.000 dân Nguy ung thư nhóm tuổi nhỏ cao người lớn, cao nhóm tuổi 3-6 tuổi 3.3.3.2 Fumonisin B1 Liều phơi nhiễm tất nhóm tuổi nghiên cứu tỉnh, thành phố Hà Nội, Bắc Giang, Thái Bình Thanh Hóa thấp so với giá trị PMTDI Tại Hà Giang, liều phơi nhiễm trung bình thấp so với PMTDI, nhiên liều phân vị 95% nhóm tuổi cao so với PMTDI Điều cho thấy phận dân cư vùng cao Hà Giang có nguy phơi nhiễm FUB1 Tương tự nguy gây ung thư phơi nhiễm AFB1, nguy FUB1 xuất phát từ chế độ ăn uống chủ yếu ngô đồng bào H'Mong 3.3.3.3 Zearalenon Tại tất địa phương nghiên cứu, nguy phơi nhiễm ZEA tất nhóm tuổi thấp so với PMTDI Nguy cao gặp phải Hà Giang Thanh Hóa giá trị trung bình khoảng 20% so với PMTDI Mức phân vị 95% Hà Giang cao khoảng 70% so với PMTDI, gặp nhóm tuổi nhỏ từ 3-6 tuổi (Hình 3.15) Tính chung cho tồn miền Bắc, liều phơi nhiễm cao khoảng 3% so với PMTDI Kết cho thấy nguy thấp độc tố vi nấm ZEA chế độ ăn 3.3.3.4 Ochratoxin A Mức phơi nhiễm OTA gần so với PMTDI tất địa phương nghiên cứu Tại Hà Giang, mức phơi nhiễm trung bình vượt PMTDI cho thấy nguy cao nhóm độc tố Trong tự nhiên, OTA thường sinh loài nấm Aspergillus hay Penicillium tương tự AFB1, kết tương đồng với kết nguy gây ung thư AFB1 Hà Giang Tính chung cho tồn miền Bắc, chưa thấy có nguy độc tố vi nấm OTA chế độ ăn Giá trị trung bình cận liều phơi nhiễm OTA mức khoảng 30-40% - 16 - PMTDI Tại Hà Giang, mức phơi nhiễm trung bình vượt PMTDI cho thấy nguy cao nhóm độc tố (Hình 3.17) Trong tự nhiên, OTA thường sinh loài nấm Aspergillus hay Penicillium tương tự AFB1, kết tương đồng với kết nguy gây ung thư AFB1 Hà Giang Chương - BÀN LUẬN 4.1 VỀ KẾT QUẢ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI MỘT SỐ ĐỘC TỐ VI NẤM TRONG THỰC PHẨM 4.1.1 Về quy trình xử lý mẫu xác định đồng thời ĐTVN LC-MS/MS 4.1.1.1 Về quy trình xử lý mẫu  Về phương pháp xử lý mẫu: Trong nghiên cứu này, khảo sát lựa chọn điều kiện tối ưu phương pháp xử lý mẫu theo QuEChERS áp dụng mẫu ngũ cốc hạt có dầu Đây lần Việt Nam, phương pháp QuEChERS ứng dụng nghiên cứu phân tích đồng thời độc tố vi nấm Các kết cho thấy phương pháp có nhiều ưu điểm so với phương pháp sử dụng để xác định độc tố vi nấm ngũ cốc hạt có dầu Đó là: - Phương pháp áp dụng để chiết đồng thời ĐTVN loại mẫu ngũ cốc hạt có dầu Với số lượng mẫu khoảng gần 1000 mẫu, sử dụng phương pháp riêng biệt để chiết loại ĐTVN phải tiêu tốn nhiều chi phí cho loại cột lực miễn dịch dung mơi, hóa chất thời gian xử lý phân tích mẫu - Các kết thẩm định cho thấy đáp ứng yêu cầu EC 657/2002 - Phương pháp xử lý mẫu chọn sử dụng dung môi (15 mL acetonitril), tính độc hại nên giảm ảnh hưởng đến sức khỏe kiểm nghiệm viên mơi trường - Quy trình chiết nhanh, tổng thời gian xử lý lô mẫu chưa đến 30 phút mà đảm bảo hiệu làm mẫu độ xác phương pháp  Về lượng mẫu lấy để xử lý dung môi chiết sử dụng: Độc tố vi nấm phân bố mẫu thường không đều, phụ thuộc vào vị trí có phát triển nấm Do đó, lượng mẫu kg lấy đồng toàn trước phân tích Tỷ lệ pha nước pha dung mơi cần trì khoảng 1:1 để đảm bảo hiệu suất chiết Trong nghiên cứu này, g mẫu sử dụng sau bổ sung thêm 15 mL nước để thấm mẫu trước chiết dung môi acetonitril Việc cho thêm acid làm giảm pH mẫu, giúp ổn định độc tố vi nấm nhạy với kiềm từ tăng hiệu suất chiết Nồng độ acid thêm vào dung môi chiết dùng mức 1% Acid acetic chọn để xử lý mẫu  Về trình làm mẫu: Trong nghiên cứu này, MgSO4 C18 sử dụng Để đảm bảo khả hút nước, MgSO4 nung 450oC nghiền mịn cho qua rây 20 mesh MgSO4 C18 cân sẵn vào ống ly tâm lắc kỹ trước ly tâm thu dịch phân tích 4.1.1.2 Về quy trình phân tích LC-MS/MS Trong nghiên cứu này, kỹ thuật sắc ký lỏng pha đảo sử dụng với pha tĩnh - 17 - cột C18 pha động hỗn hợp methanol amoni acetat 10 mM theo chế độ gradient Đây điều kiện phân tích sắc ký lỏng dễ dàng áp dụng Chế độ gradient nghiên cứu nhằm tách ĐTVN khỏi mẫu đồng thời đưa pha động trạng thái ban đầu để phân tích mẫu Với điều kiện này, số độc tố vi nấm chưa tách khỏi hoàn toàn Tuy nhiên, việc sử dụng detector MS/MS có tính đặc hiệu cao giúp tách ĐTVN tín hiệu 4.1.2 Về kết thẩm định phương pháp Phương pháp thẩm định tính đặc hiệu thơng qua số điểm nhận dạng (IP) tỷ lệ ion xác nhận ion định lượng Các kết đánh giá đáp ứng tiêu chí theo tiêu chuẩn châu Âu EC 657/2002 Ảnh hưởng quy trình phân tích cao, có ZEA lạc có ảnh hưởng vượt giới hạn ±20% dùng đường chuẩn mẫu không loại bỏ chất ảnh hưởng nền, triệt tiêu ảnh hưởng Đường chuẩn tất độc tố vi nấm bao trùm mức giới hạn tối đa độc tố vi nấm nghiên cứu Giới hạn phát giới hạn định lượng thu nghiên cứu tương đồng với kết nghiên cứu giới định lượng nồng độ thấp mức tối đa cho phép độc tố vi nấm Các kết độ lặp lại độ thu hồi mẫu khác nhau, nồng độ thấp, trung bình cao cho thấy phương pháp có độ lặp lại tốt độ thu hồi đáp ứng yêu cầu Kết tương đồng so với nghiên cứu trước giới độ lặp lại (thông qua RSDr %) độ thu hồi (R%) phương pháp nghiên cứu so với số nghiên cứu gần sử dụng kỹ thuật phân tích phương pháp xử lý mẫu theo QuEChERS Phương pháp đề xuất có độ lặp lại độ thu hồi tương đồng với nghiên cứu xác định độc tố vi nấm QuEChERS LC-MS/MS; kết đạt đáp ứng yêu cầu theo AOAC EC 4.2 VỀ KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐỘC TỐ VI NẤM TRONG CÁC MẪU NGÔ, GẠO, LẠC, VỪNG TẠI MỘT SỐ TỈNH PHÍA BẮC VIỆT NAM 4.2.1 Về việc lấy mẫu phân tích độc tố Mẫu thực phẩm thu thập nghiên cứu ngũ cốc (ngô, gạo) hạt có dầu (lạc, vừng) lấy ngẫu nhiên tỉnh, thành phố miền Bắc đại diện cho vùng thành phố lân cận (Hà Nội), đồng (Thái Bình), đồng có xen lẫn đồi núi (Bắc Giang, Thanh Hóa) vùng cao dân tộc người (một số huyện tỉnh Hà Giang) (Hình 4.2) Tại tỉnh, mẫu thu thập chợ, cửa hàng khu vực thành thị nông thôn Các mẫu lấy có hình thức bên ngồi bình thường, khơng có dấu hiệu nấm mốc Lượng mẫu lấy tối thiểu kg, đóng túi kín, mã hóa Số lượng mẫu lấy tỉnh, thành phố đáp ứng yêu cầu cỡ mẫu theo tính tốn Ngồi việc lấy đủ số mẫu tối thiểu theo tính tốn cho địa phương 92 mẫu, việc lấy mẫu đảm bảo số mẫu cho loại thực phẩm đạt tối thiểu 30 mẫu để đảm bảo tính đại diện Kết số mẫu cho loại thực phẩm lấy địa phương từ 40 mẫu trở lên Do số mẫu lấy địa phương cho loại thực phẩm nghiên cứu nằm khoảng 160 mẫu (Hà Nội) đến 254 mẫu (Hà Giang) Số mẫu lấy cho loại thực phẩm địa phương nằm khoảng 219 mẫu (vừng) đến 287 mẫu (ngô) Riêng Hà Giang, tỷ lệ người sử dụng ngô cao so với loại thực phẩm khác, - 18 - ngô lấy nhiều (100 mẫu) lấy huyện khác để có đánh giá đầy đủ hàm lượng độc tố vi nấm nhóm thực phẩm chủ yếu Như số lượng mẫu lấy vượt yêu cầu số mẫu cần có cho địa phương loại thực phẩm 4.2.2 Về hàm lượng độc tố vi nấm tỷ lệ bị nhiễm độc tố Kết cho thấy, AFB1, số mẫu bị nhiễm độc tố chiếm 19,28% với mẫu bị nhiễm có hàm lượng cao 1572,5 g/kg Số mẫu bị nhiễm AFB1 chiếm tỷ lệ cao mẫu ngô 30,66%, mẫu lạc 23,81%, tiếp đến mẫu gạo 10,50% mẫu vừng 8,68% Số mẫu bị nhiễm AFB1 mẫu ngô vượt giới hạn tối đa cho phép chiếm tỷ lệ cao Hà Giang Thanh Hóa (26,53 - 27,00%) Tỷ lệ với mẫu lạc Hà Giang Bắc Giang (khoảng 15%) Đặc biệt, hàm lượng trung bình AFB1 ngơ Hà Giang 139 µg/kg, giá trị tỉnh, thành phố khác dao động khoảng - 25 µg/kg Ngơ loại thực phẩm có tỷ lệ nhiễm AFB1 vượt giới hạn cho phép chiếm đến 20,91% Tỷ lệ Hà Giang 27,00%, địa phương có tỷ lệ cao Thanh Hóa 26,53% Loại thực phẩm có tỷ lệ nhiễm AFB1 vượt giới hạn cho phép lạc, chiếm đến 13,49% tỷ lệ Hà Giang 15,52% Đối với AFB2, số mẫu bị nhiễm độc tố chiếm 9,34% với mẫu bị nhiễm có hàm lượng cao 155 g/kg Còn với AFG1, số mẫu bị nhiễm độc tố chiếm 3,01% với mẫu bị nhiễm có hàm lượng cao 92,5 g/kg Khơng có mẫu bị nhiễm độc tố AFG2 Các aflatoxin khơng có giới hạn tối đa cho phép riêng góp phần làm tăng nguy mẫu bị vượt giới hạn tối đa cho phép AF tồng Đối với độc tố lại, số mẫu bị nhiễm độc tố chiếm tỷ lệ không cao Cụ thể với FUB1 7,43% với mẫu bị nhiễm có hàm lượng cao 1662 g/kg; với OTA 5,32% với mẫu bị nhiễm có hàm lượng cao 126 g/kg; với ZEA 4,32% với mẫu bị nhiễm có hàm lượng cao 220 g/kg Theo loại thực phẩm ngô loại thực phẩm bị nhiễm loại độc tố cao nhất, tiếp đến lạc Kết tương đồng với số nghiên cứu công bố Việt Nam, theo ngơ lạc hai đối tượng có nguy cao nhiễm AF Đối với nhóm độc tố vi nấm khác, phần lớn mẫu nhiễm từ ngô, với mức nhiễm cao FUB1 thấp ZEA Ngồi ngơ, OTA phát mẫu lạc Điều giải thích OTA sản sinh loài nấm mốc Aspergillus Penicillium, lồi sinh độc tố AF Trong đó, FUB1 ZEA chủ yếu sinh loài nấm thuộc chi Fusarium, thường có mặt nhiều ngơ lúa mì Mặt khác, từ tập tục người H'Mong Hà Giang số địa phương với thói quen tích trữ ngơ dùng làm thực phẩm Cách thu hoạch bảo quản ngô, lạc tỉnh vùng cao đồng bào dân tộc người khác biệt với địa phương khác Ngô để ngun nương ngơ khô lấy cần dùng, ngô bảo quản thành đống gác bao bì Một cách phổ biến ngơ, lạc treo trước hiên nhà vừa dùng để trang trí cho nhà nghỉ kiểu “homestay”, vừa bảo quản dùng dần Do nguy bị nhiễm độc tố cao điều kiện nóng ẩm sương mù Khác với người dân vùng đồng ngô dùng để “ăn vặt” không Hà - 19 - Giang ngơ lại lương thực nên nhu cầu tích trữ cần thiết Tại địa phương vùng cao điều kiện bảo quản sơ sài vùng đồng Hơn ngơ khơng có vỏ lúa lạc nên nguy bị nhiễm độc tố cao Kết phân tích độc tố mẫu thu thập từ địa phương cho thấy: - Aflatoxin loại độc tố bị nhiễm nhiều nhất, AFB1 bị nhiễm với tỷ lệ cao (19,28%) loại độc tố nghiên cứu, tiếp đến AFB2 với 9,34% - Ngô loại thực phẩm dễ bị nhiễm độc tố vi nấm nghiên cứu nhất, đặc biệt AFB1, tiếp đến lạc - Tỷ lệ thực phẩm bị nhiễm độc tố hàm lượng độc tố địa phương vùng cao trung du cao vùng đồng thành phố điều kiện bảo quản lương thực, thực phẩm tập tục cư dân chưa thật phù hợp Hà Giang địa phương bị nhiễm nhiều Thanh Hóa Bắc Giang có tỷ lệ nhiễm cao tùy thuộc loại thực phẩm Tỷ lệ bị nhiễm độc tố thấp Hà Nội Thái Bình - Tỷ lệ thực phẩm bị nhiễm độc tố phụ thuộc vào trình bảo quản sau thu hoạch Do công tác tuyên truyền vận động người dân thực biện pháp bảo quản sau thu hoạch phù hợp để giảm bớt nguy bị nhiễm độc tố vi nấm cần thiết 4.3 VỀ KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ NGUY CƠ 4.3.1 Về lượng tiêu thụ thực phẩm Kết thu cho thấy lượng thực phẩm chủ yếu sử dụng gạo, tỷ lệ sử dụng ngô thấp tỷ lệ sử dụng lạc vừng không đáng kể Các giá trị thu có tương đồng nhóm tuổi địa phương Cỡ mẫu nghiên cứu thiết kế 60 hộ gia đình cho địa phương Sự phân bố nhóm tuổi khác có khác biệt Điều dẫn đến mức độ dao động kết giá trị P95 sử dụng để tính đến dao động Mức độ tiêu thụ nhóm thực phẩm tương đồng địa phương Riêng Hà Giang có khác biệt lượng tiêu thụ ngơ cao hẳn địa phương khác tập tục đồng bào H’Mong dùng ngô làm lương thực chủ yếu Do dùng nhiều ngô nên lượng gạo tiêu thụ hàng ngày có thấp địa phương khác Có thể địa phương khó khăn trồng lúa nên nguồn cung cấp thực phẩm không dồi địa phương khác chủ yếu cung cấp theo sách hỗ trợ đồng bào vùng cao dân tộc người Tuy lượng ngơ tiêu thụ gấp nhiều lần so với địa phương khác lượng gạo giảm không nhiều Sự khác biệt lượng cung cấp từ phần ăn hàng ngày người dân địa phương chưa đáp ứng nên họ phải tăng tiêu thụ ngũ cốc Mặt khác gạo cung cấp sau bảo quản dài ngày, chất lượng bị giảm sút so với gạo vừa xay xát dùng thời gian ngắn địa phương đồng thành phố Tỷ lệ tiêu thụ gạo ngơ thay đổi theo lứa tuổi gạo ưu tiên dùng cho trẻ nhỏ, lứa tuổi từ 12 trở lên ngô tiêu thụ nhiều gạo Do có khác biệt lượng tiêu thụ thực phẩm trung bình nêu kết hợp với hàm lượng tỷ lệ mẫu bị nhiễm độc tố vi nấm phân tích mục 4.2 nên nghiên cứu Hà Giang đánh giá riêng địa phương khác Để đảm bảo tính đại diện, số liệu thu từ Hà Giang không gộp vào địa phương khác để đánh giá nguy chung cho miền Bắc Việt Nam Các kết cho thấy lượng tiêu thụ thực phẩm trung bình với nam 18 tuổi - 20 - ngũ cốc cao so với nhóm nữ 18 tuổi Tuy nhiên cân nặng trung bình nhóm nam 18 tuổi cao so với nhóm nữ 18 tuổi Do tỷ lệ TTTPTB/ BWTB khơng có khác biệt tính liều phơi nhiễm Khi xử lý thống kê liều phơi nhiễm trung bình nhóm cho thấy khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê 4.3.2 Về tính tốn liều phơi nhiễm độc tố vi nấm  Tính tốn hàm lượng trung bình độc tố vi nấm mẫu Vì tổng số lượt mẫu bị nhiễm độc tố vi nấm nghiên cứu 485 lượt nên tỷ lệ mẫu phát bị nhiễm độc tố vi nấm chiếm tỷ lệ không 48,69% (485/996 mẫu) Tỷ lệ thấp 50% tổng số mẫu, hàm lượng độc tố vi nấm mẫu xác định theo hướng dẫn Cơ quan an toàn thực phẩm châu Âu: giới hạn (LB) tính cách thay mẫu không phát giá trị "0" thay mẫu phát thấp LOQ LOD, giới hạn (UB) xác định cách thay mẫu không phát LOD thay mẫu phát thấp LOQ LOQ [80] Số lượng mẫu có hàm lượng độc tố LOQ xác định cho loại mẫu địa phương Kết hợp với giá trị LOD LOQ phương pháp xây dựng hàm lượng độc tố vi nấm có mẫu để xác định giá trị giới hạn (UB) giới hạn (LB) Kết thu cho thấy tỷ lệ mẫu phát có AFB1 (19,28%) cao nhiều so với loại độc tố vi nấm khác Trong số có 30,66% mẫu ngơ 23,81% mẫu lạc có hàm lượng vượt LOQ Cũng phát thấy có AFB1 mẫu gạo vừng với tỷ lệ thấp Về hàm lượng, giá trị LB, UB tương ứng cao Hà Giang, tiếp đến Bắc Giang Thanh Hóa, thấp Thái Bình Hà Nội Giá trị cao xác định mẫu ngơ Hà Giang 66,00 µg/kg (LB) 66,10 µg/kg (UB) Có 10,50% mẫu gạo bị nhiễm AFB1 giá trị LB UB địa phương thấp, cao Thanh Hóa (1,94 2,04 µg/kg) Có 8,68% mẫu vừng có nhiễm AFB1, tỷ lệ nhiễm tương đồng địa phương Đây lần hàm lượng AFB1 mẫu vừng Việt Nam báo cáo, giá trị tương đối thấp so với loại thực phẩm khác, dao động từ 0,37 µg/kg (LB Hà Nội) đến 2,85 µg/kg (UB Thái Bình) Đối với độc tố vi nấm khác, có khoảng 24% mẫu ngơ phát bị nhiễm FUB1 địa phương Giá trị LB UB FUB1 ngô cao Hà Giang (154,0 169,0 µg/kg), tiếp đến Thanh Hóa (127,0 129,0 µg/kg), tương đồng Bắc Giang (24,7 48,3 µg/kg) Thái Bình (21,6 44,8 µg/kg), thấp Hà Nội (12,8 35,3 µg/kg) Tỷ lệ bị nhiễm FUB1 với mẫu gạo lạc thấp nhiều địa phương với tỷ lệ bị nhiễm FUB1 tương ứng khoảng 1,3% 0,8% Khơng có mẫu vừng bị phát có nhiễm FUB1 Tỷ lệ phát có OTA mẫu ngô cao so với đối tượng mẫu khác, khoảng 13% mẫu phát có OTA Giá trị LB UB OTA ngô cao Hà Giang 7,44 7,87 µg/kg cao địa phương lại Tỷ lệ mẫu phát có OTA lạc khoảng 6% vừng gần 0,5% Khơng có mẫu gạo bị nhiễm OTA Tỷ lệ phát có ZEA mẫu ngô cao so với đối tượng mẫu khác với khoảng 14% mẫu Giá trị LB UB ZEA ngơ Thanh Hóa 64,50 64,90 - 21 - µg/kg cao giá trị tương ứng Hà Giang (20,90 21,30 µg/kg) cao hẳn địa phương lại Tỷ lệ mẫu phát có ZEA lạc gần 0,8% gạo gần 0,5% Khơng có mẫu vừng bị nhiễm ZEA Mặc dù mẫu thu thập nghiên cứu mẫu ngồi khơng bị tổn thương có mặt ĐTVN đặc biệt AFB1 mẫu cho thấy có nguy người sử dụng phơi nhiễm với độc tố vi nấm  Tính toán liều phơi nhiễm độc tố vi nấm Dựa kết hàm lượng độc tố vi nấm thực phẩm mức tiêu thụ thực phẩm xác định, liều phơi nhiễm với loại độc tố AFB1, FUB1, OTA ZEA tính cho nhóm tuổi Về mặt xu hướng chung, liều phơi nhiễm độc tố vi nấm nhóm tuổi nhỏ cao so với nhóm tuổi cao Tuy nhiên, huyện vùng cao Hà Giang ảnh hưởng chế độ ăn người lớn có thành phần ngơ, liều phơi nhiễm độc tố vi nấm cao người lớn Nhìn chung, liều phơi nhiễm Hà Giang cao so với địa phương lại Liều phơi nhiễm độc tố vi nấm bàn luận cụ thể phần đánh giá nguy độc tố vi nấm 4.3.2 Về kết đánh giá nguy phơi nhiễm aflatoxin B1 Nguy AFB1 sức khỏe người sử dụng đánh giá thông qua nguy tăng ung thư gan cộng đồng (số lượng ca ung thư 100.000 dân năm), liều phơi nhiễm, tiềm gây ung thư hiệu chuẩn liều từ thực phẩm sống sang thực phẩm chế biến Giá trị tiềm trung bình tính dựa tỷ lệ dân số Việt Nam nhiễm HBV ước tính nguy ung thư gan AFB1 nhóm dân số âm tính với HBV 0,01 ca/năm 100.000 người nhóm dân số dương tính với HBV 0,3 ca/năm 100.000 người ứng với ng AFB1/kg bw/ngày Tỷ lệ nhiễm HBV Việt Nam [40] lên tới 20% dân số nói chung tỷ lệ lưu hành sử dụng để tính tốn giá trị tiềm trung bình Giá trị tiềm trung bình (ca ung thư/năm/100.000 người với ng AFB1/kg bw/ngày) xác định 0,0068 (mục 2.3.3.2) Giá trị tiềm nhân với liều phơi nhiễm để xác định nguy gây ung thư (ca ung thư/năm/100.000 người) Các kết thu dễ dàng cho thấy nguy gây ung thư gan cao Hà Giang Giá trị UB trung bình nhóm tuổi Hà Giang dao động từ khoảng 14 đến 21 ca ung thư/năm/100.000 dân; cao nhiều lần so với tỉnh lại Tiếp theo, nguy ung thư gan Thanh Hóa thấp Hà Giang, cao từ 2-5 lần so với địa phương lại Hà Nội, Thái Bình Bắc Giang với giá trị UB dao động từ 0,64 đến 1,28 ca ung thư/năm/100.000 dân Giá trị UB trung bình nguy gây ung thư Bắc Giang cao Thái Bình Hà Nội Về mặt xu hướng, địa phương Thanh Hóa, Hà Nội, Thái Bình Bắc Giang, nguy ung thư cao gặp phải nhóm tuổi nhỏ (3-6 tuổi) giảm dần nhóm tuổi cao Tuy nhiên, xu hướng ngược lại Hà Giang nguy ung thư người lớn (trên 18 tuổi) cao nhóm tuổi nhỏ Điều giải thích thơng qua chế độ ăn đồng bào H'Mong Hà Giang, với ngơ nguồn lương thực người lớn, trẻ em gạo So sánh nguy ung thư theo giới nhóm tuổi 18 cho thấy khác biệt giới tính khơng có ý nghĩa thống kê, với độ tin cậy 95% - 22 - Nguy gây ung thư trung bình nhóm tuổi miền Bắc dao động từ 0,50 đến 0,76 ca ung thư/năm/100.000 dân Giá trị tương đồng với kết nghiên cứu Malaysia [72], cao so với nhiều nghiên cứu Nhật Bản [116], Thái Lan [56, 103], Hồng Kông [70] nhiều nước phát triển châu Âu Tuy nhiên, kết thấp so với nghiên cứu Bùi Mai Hương cộng chế độ ăn số vùng Lào Cai với nguy gây ung thư AFB1 người lớn trẻ em tương ứng 1,5 2,3 ca ung thư/năm/100.000 dân [89] So với báo cáo kết nghiên cứu đánh giá nguy AFB1 ASEAN, giá trị phân vị 95% miền Bắc Việt Nam dao động từ 1,12 đến 1,46 ca ung thư/năm/100.000 dân cao so với giá trị tối đa nguy ung thư AFB1 Thái Lan (0,071 ca ung thư/năm/100.000 dân) tương đồng với Indonesia (1,228 ca ung thư/năm/100.000 dân) [57] Nguy gây ung thư trung bình Hà Giang cao nhiều so với quốc gia giới, nguy cao bất thường tương đương với nguy số quốc gia châu Phi [118] 4.3.3 Về kết đánh giá nguy phơi nhiễm fumonisin B1 Các kết cho thấy, liều phơi nhiễm tất nhóm tuổi nghiên cứu Hà Nội, Bắc Giang, Thái Bình Thanh Hóa thấp so với giá trị PMTDI Riêng Hà Giang, liều phơi nhiễm trung bình thấp so với PMTDI, nhiên liều phân vị 95% nhóm tuổi cao so với PMTDI Điều cho thấy phận dân cư vùng cao Hà Giang có nguy phơi nhiễm FUB1 Tương tự nguy gây ung thư phơi nhiễm AFB1, nguy FUB1 xuất phát từ chế độ ăn uống chủ yếu ngô đồng bào H'Mong Giá trị liều phơi nhiễm miền Bắc tổng hợp từ địa phương Hà Nội, Thanh Hóa, Bắc Giang Thái Bình thấp PMTDI với tất nhóm tuổi Có thể nhận thấy, liều phơi nhiễm miền Bắc theo nghiên cứu tương đồng với kết Hàn Quốc, cao nhiều so với kết quốc gia khác Kết thấp so với nghiên cứu Bùi Mai Hương cộng thực Hà Giang công bố năm 2016 4.3.4 Về kết đánh giá nguy phơi nhiễm ochratoxin A Các kết cho thấy mức phơi nhiễm OTA gần so với PMTDI tất địa phương nghiên cứu Tại Thanh Hóa Bắc Giang, mức phơi nhiễm trung bình chưa vượt PMTDI, nhiên nhóm tuổi nhỏ (nhóm từ đến tuổi nhóm từ đến 11 tuổi) mức phơi nhiễm phân vị 95% vượt PMTDI cho thấy có phân dân số nhóm tuổi có nguy OTA chế độ ăn Tính chung cho tồn miền Bắc, chưa thấy có nguy độc tố vi nấm OTA chế độ ăn Giá trị trung bình cận liều phơi nhiễm OTA mức khoảng 30-40% PMTDI Tại Hà Giang, mức phơi nhiễm trung bình vượt PMTDI cho thấy nguy cao nhóm độc tố Có thể thấy rằng, liều phơi nhiễm OTA miền Bắc tương đồng với nhiều nghiên cứu công bố giới Trung Quốc, Li băng, Bồ Đào Nha… cao so với kết Hồng Kông, Pháp hay New Zealand Kết Hà Giang cao khác biệt so với nghiên cứu giới 4.3.5 Về kết đánh giá nguy phơi nhiễm zearalenon Các kết cho thấy, tất địa phương nghiên cứu, nguy phơi nhiễm - 23 - ZEA tất nhóm tuổi thấp so với PMTDI Nguy cao gặp phải Hà Giang Thanh Hóa giá trị trung bình khoảng 20% so với PMTDI Mức phân vị 95% Hà Giang cao khoảng 70% so với PMTDI, gặp nhóm tuổi nhỏ từ 3-6 tuổi Tính chung cho tồn miền Bắc, liều phơi nhiễm cao khoảng 3% so với PMTDI Kết cho thấy nguy thấp độc tố vi nấm ZEA chế độ ăn Liều phơi nhiễm ZEA miền Bắc cao kết nghiên cứu Hà Lan, lại thấp so với kết công bố giới Điều cho thấy nguy thấp loại độc tố vi nấm Kết Hà Giang cao thấp PMTDI ZEA Nhìn chung, kết đánh giá liều phơi nhiễm độc tố vi nấm FUB1, OTA ZEA miền Bắc thấp khơng có khác biệt nhiều so với số nghiên cứu quốc gia châu Á Sự khác biệt thể rõ rệt Hà Giang chủ yếu OTA xuất phát từ tập quán sử dụng ngô làm thực phẩm thói quen bảo quản thực phẩm không cách Các kết đánh giá nguy phơi nhiễm độc tố vi nấm AFB1, FUB1, OTA ZEA chế độ ăn từ sản phẩm ngô, gạo, lạc, vừng địa phương cho thấy: - AFB1 gây từ 0,50-0,76 ca ung thư gan/100.000 dân/năm tỉnh miền Bắc nước ta khoảng 21 ca ung thư gan/100.000 dân/năm số điểm vùng cao Hà Giang Nhóm 3-11 tuổi có nguy cao lứa tuổi khác, khơng có khác biệt theo giới tính với nhóm người trưởng thành (trên 18 tuổi) - Liều phơi nhiễm trung bình FUB1 thấp so với mức PMTDI tất địa phương nghiên cứu Tuy nhiên Hà Giang liều phơi nhiễm phân vị 95% cao mức PMTDI, cho thấy phận dân cư vùng cao Hà Giang có nguy FUB1 - Liều phơi nhiễm trung bình OTA địa phương Hà Nội, Bắc Giang, Thanh Hóa, Thái Bình thấp mức PMTWI, Hà Giang cao PMTWI Mức phân vị 95% nhóm tuổi nhỏ (3-11 tuổi) Thanh Hóa Bắc Giang cao PMTWI cho thấy phân dân cư hai tỉnh có nguy OTA - Liều phơi nhiễm trung bình tối đa ZEA tất địa phương nghiên cứu thấp PMTDI cho thấy nguy thấp độc tố miền Bắc Việt Nam KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Luận án hoàn thành mục tiêu đề thu kết sau: Đã nghiên cứu xây dựng thẩm định phương pháp xác định đồng thời độc tố vi nấm AFB1, AFB2, AFG1, AFG2, FUB1, OTA ZEA LC-MS/MS với xử lý mẫu theo QuEChERS đạt tiêu chuẩn châu Âu theo EC 657/2002 EC 401/2006 - Đã xác định điều kiện LC-MS/MS phù hợp để phân tích đồng thời ĐTVN Các ĐTVN tách sắc ký lỏng pha đảo với pha tĩnh C18 theo gradient pha động; phát định lượng MS/MS với nguồn ion hoá ESI, chế độ ion dương ion âm đồng thời, chất phân tích lựa chọn ion mẹ để tiếp tục phân mảnh tạo hai ion đặc trưng - Đã khảo sát điều kiện chiết ĐTVN mẫu ngũ cốc hạt có dầu theo nguyên lý phương pháp chiết QuEChERS Acid acetic thêm vào acetonitril với tỷ - 24 - lệ 1% để tăng hiệu suất chiết C18 sử dụng với MgSO4 bước d-SPE để tăng khả làm mẫu Lượng chất hấp phụ phù hợp C18 100 mg cho mililit dịch chiết - Đã thẩm định phương pháp cho thấy phương pháp có tính đặc hiệu cao, có khả định lượng ĐTVN nồng độ thấp giới hạn tối đa cho phép; có độ xác đạt u cầu với độ lặp lại từ 1,5-13% độ thu hồi từ 84-114% đáp ứng yêu cầu theo tiêu chuẩn châu Âu Đã áp dụng phương pháp để xác định hàm lượng độc tố vi nấm 996 mẫu gạo, ngô, lạc vừng thu thập từ tỉnh, thành phố phía Bắc Việt Nam Kết xác định tỷ lệ nhiễm hàm lượng độc tố vi nấm mẫu thu thập cho thấy: - Aflatoxin nhóm độc tố bị nhiễm nhiều nhất, chủ yếu AFB1 AFB2 - Ngơ lạc nhóm sản phẩm có tỉ lệ phát độc tố vi nấm hàm lượng độc tố vi nấm cao - Hà Giang địa phương có tỉ lệ nhiễm hàm lượng độc tố vi nấm cao Đã đánh giá nguy phơi nhiễm độc tố vi nấm AFB1, FUB1, OTA ZEA chế độ ăn từ sản phẩm ngô, gạo, lạc, vừng địa phương cho thấy: - AFB1 gây từ 0,50-0,76 ca ung thư gan/100.000 dân/năm tỉnh miền Bắc nước ta khoảng 21 ca ung thư gan/100.000 dân/năm số điểm vùng cao Hà Giang - Liều phơi nhiễm trung bình FUB1 thấp so với mức PMTDI tất địa phương nghiên cứu, nhiên Hà Giang liều phơi nhiễm phân vị 95% cao mức PMTDI, cho thấy phận dân cư vùng cao Hà Giang có nguy FUB1 - Liều phơi nhiễm trung bình OTA địa phương Hà Nội, Bắc Giang, Thanh Hóa, Thái Bình thấp mức PMTWI, Hà Giang cao PMTWI Mức phân vị 95% nhóm tuổi nhỏ (3-11 tuổi) Thanh Hóa Bắc Giang cao PMTWI cho thấy phân dân cư hai tỉnh có nguy OTA - Liều phơi nhiễm trung bình tối đa ZEA tất địa phương nghiên cứu thấp PMTDI cho thấy nguy thấp độc tố miền Bắc Việt Nam KIẾN NGHỊ - Tăng cường tuyên truyền cho người dân tỉnh vùng cao Hà Giang cải thiện thói quen tích trữ lương thực, đặc biệt ngơ thời gian dài chuyển sang sử dụng lương thực từ gạo - Có biện pháp tun truyền thích hợp với bảo quản ngơ lạc loại thực phẩm có nguy bị nhiễm độc tố vi nấm cao không vùng cao mà vùng trung du đồng - Tích cực vận động người dân triển khai biện pháp bảo quản sản phẩm sau thu hoạch để hạn chế bị nhiễm độc tố vi nấm, đặc biệt không để sản phẩm nông nghiệp “giãi nắng dầm mưa” nương rẫy hiên nhà - Các kết đánh giá nguy cho thấy chưa cần thiết phải sửa đổi quy định pháp luật liên quan đến giới hạn tối đa độc tố vi nấm thực phẩm - Đối với vùng cao Hà Giang, tiếp tục giám sát chặt chẽ việc thực biện pháp đảm bảo an toàn thực phẩm tránh xảy vụ ngộ độc cấp tính gây tử vong CÁC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Đỗ Hữu Tuấn, Trần Cao Sơn, Lê Thị Hồng Hảo, Thái Nguyễn Hùng Thu (2016), "Xây dựng phương pháp phân tích hàm lượng đa độc tố vi nấm thực phẩm", Tạp chí Dược học, 479, 69-74 Đỗ Hữu Tuấn, Thái Nguyễn Hùng Thu, Trần Cao Sơn, Lê Thị Hồng Hảo (2017), “Xác nhận hiệu lực phương pháp xác định đồng thời số độc tố vi nấm thực phẩm theo quy định châu Âu”, Tạp chí Dược học, 496, 63-66 Đỗ Hữu Tuấn, Trần Cao Sơn, Lê Thị Hồng Hảo, Thái Nguyễn Hùng Thu (2019), “Hàm lượng độc tố vi nấm ngũ cốc hạt có dầu số tỉnh, thành phố phía Bắc Việt Nam”, Tạp chí Dược học, 518, 37-42 Đỗ Hữu Tuấn, Trần Cao Sơn, Lê Thị Hồng Hảo, Lê Danh Tuyên, Thái Nguyễn Hùng Thu (2019), “Đánh giá nguy độc tố vi nấm aflatoxin B1, ochratoxin A, fumonisin B1 zearalenon thực phẩm Bắc Giang Thái Bình”, Tạp chí Dược học, 521, 41-47 Đỗ Hữu Tuấn, Trần Cao Sơn, Vũ Tùng Lâm, Thái Nguyễn Hùng Thu (2019), “Đánh giá nguy độc tố vi nấm aflatoxin B1, ochratoxin A, fumonisin B1 zearalenon thực phẩm tỉnh Hà Giang”, Tạp chí Dược học, 523, 54-60 Tuan Huu Do, Son Cao Tran, Chi Dinh Le, Ha-Binh Thi Nguyen, Phuong- Thao Thi Le, Hong-Hao Thi Le, Tuyen Danh Le, Hung-Thu Thai-Nguyen (2020), “Dietary exposure and health risk characterization of aflatoxin B1, ochratoxin A, fumonisin B1, and zearalenone in food from different provinces in Northern Vietnam”, Food Control, 112, 107108 (https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2020.107108) ... rào kỹ thuật ngăn chặn thực phẩm độc hại, giá rẻ xâm nhập vào thị trường nước ta Do đó, đề tài Đánh giá nhiễm nguy độc tố vi nấm thực phẩm số tỉnh phía Bắc Vi t Nam thực với mục tiêu sau: Xây... tích độc tố vi nấm (sắc ký khí, sắc ký lỏng) yêu cầu phương pháp phân tích độc tố vi nấm - Tổng quan đánh giá nguy độc tố vi nấm thực phẩm gồm: giới thiệu đánh giá nguy (xác định mối nguy, mô tả... lạc nhóm sản phẩm có tỉ lệ phát độc tố vi nấm hàm lượng độc tố vi nấm cao - Hà Giang địa phương có tỉ lệ nhiễm hàm lượng độc tố vi nấm cao Đã đánh giá nguy phơi nhiễm độc tố vi nấm AFB1, FUB1,