Bài báo này công bố kết quả khảo sát bƣớc đầu tác dụng của dịch chiết từ một số cây dƣợc liệu trong phòng trừ nấm Sclerotium rolfsii gây bệnh héo rũ gốc mốc trắng địa hoàng.
Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 BƢỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ỨC CHẾ NẤM Sclerotium rolfsii CỦA DỊCH CHIẾT MỘT SỐ CÂY DƢỢC LIỆU TRONG PHỊNG THÍ NGHIỆM Preliminary Research into The Effects of Extracts from Some Medicinal Plants on Sclerotium rolfsii in The Laboratory 1 1 Chu Thị M , Đặng Thị Hà , Trần Hữu Khánh Tân , Nguyễn Thị Duyên , Đào Văn Núi , Nguyễn Văn Hùng , Trần Văn Lộc Phan Thúy Hiền Ngày nhận bài: 07.9.2018 Ngày chấp nhận: 28.9.2018 Abstract To test the ability to control Sclerotium rolfsii on PDA media, powdered medicinal materials such as dutara, garlic, sophora, camphor, and Artermisia annua were collected and extracted using sterile distilled water at room temperature at different concentration levels of 5%, 10%, 15% and 20% The effect of peppermint oil was also tested at varying concentrations of 0.1%, 0.5% and 1% The results showed that garlic extract at concentration of 10%, 15% and 20%, the A annua extract at 15% and 20%, peppermint oil at 0.5 and 1%, and extract of camphor 20% completely suppressed the mycelin growth of S rolfsii on PDA after 72 hours Additionally, 5% garlic extract, 10% A annua extract, and 15% camphor extract could control the growth of S rolfsii The extracted formulations of the dutara and sophora at the studied concentrations had no effect on the inhibition of S rolfsii in the conditional study Keywords: Control Sclerotium rolfsii, extract, medicinal materials * ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, áp dụng biện pháp sinh học phòng trừ bệnh hại xu hƣớng đƣợc quan tâm an tồn, hiệu quả, đảm bảo tiêu chí phát triển trồng dƣợc liệu sạch, thân thiện với mơi trƣờng Đã có nhiều cơng trình nghiên cứu sử dụng dịch chiết thực vật nhƣ hành, tỏi, sả, xoan Ấn Độ, rau ngải phòng trừ bệnh trồng, có hiệu cao phòng trừ số nấm đất nấm nhƣ Rhizoctonia sp., Sclerotium sp., Sclerotinia sp., Fusarium sp (Dissanayaka Jan Jayasinghe, 2013) Ở số nƣớc giới phòng trừ bệnh dịch chiết từ thực vật bƣớc đầu mang lại hiệu rõ rệt Nghiên cứu rễ gừng đu đủ có tác dụng hạn chế phát triển nấm Ceratocystis sp gây thối (Dewa cộng (2001) Tinh dầu 12 thuốc có húng quế, bạc hà, cúc vạn thọ ảnh hƣởng đến tăng trƣởng sản xuất độc tố nấm Aspergillus flavus, A parasiticus (Solimana, 2002) Tinh dầu từ quế, nụ đinh hƣơng có hoạt tính kháng nấm Botrytis cinerea (Wlisoon, 1997) Trung tâm nghiên cứu trồng chế biến thuốc Hà Nội - Viện Dƣợc Liệu Trung tâm nghiên cứu nguồn gen giống dƣợc liệu - Viện Dƣợc Liệu Nấm Sclerotium rolfsii lồi nấm đa thực có nguồn gốc đất Nấm đƣợc biết đến nhƣ tác nhân gây mùa nhiều kỉ Cho đến có 2000 báo cáo xác nhận xuất gây hại nấm Sclerotium rolfsii tồn giới Dịch chiết có nguồn gốc thực vật đƣợc nƣớc giới nghiên cứu phòng trừ nấm S rolfsii Hai loại dầu đinh hƣơng bạc hà nồng độ 50 ppm hoàn toàn ức chế tăng trƣởng S rolfsii ống nghiệm.Trong tinh dầu đinh hƣơng (Syzygium aromaticum) có hợp chất nhƣ kháng sinh (eugenol, eugenol acetate, isoeugenol caryophyllene) Các hợp chất ức chế tất trình trao đổi chất nấm gây bệnh Trong bạc hà có chứa :tinh dầu bạc hà, menthone, 1,8- cineole, methyl acetate, furan metho, isomenthone, limonene, b-pinen, mộtpinen, germacrene-d, trans, sabinene hydrate pulegone Các chất ức chế sinh trƣởng nấm S rolfsii Cũng theo nghiên cứu khác nấm S rolfsii bị kiểm soát hợp chất kháng nấm tự nhiên có chiết xuất từ cà độc dƣợc nồng độ 0,5; 1,0; 1,5; , 4% (Jabeen cộng sự, 2009) Nghiên cứu cho thấy chiết xuất từ trái là, hạt cỏ cà ri, hạt đậu nành, lục bình có hiệu chống lại Rhizoctonia solani, Sclerotium rolfsii, Fusarium moniliforme Macrophomina phaseolina (Ismaild Ahmed, 2000) 31 Kết nghiên cứu Khoa học Ở Việt Nam Nấm Sclerotium rolfsii nấm có phổ ký chủ rộng, có khả lây nhiễm 500 loài ký chủ thuộc lớp mầm hai mầm, đặc biệt thuộc họ đậu đỗ, bầu bí, cà số loài rau trồng luân canh với họ đậu Bên cạnh đó, năm gần theo điều tra Trung tâm nghiên cứu trồng chế biến thuốc Hà Nội, nấm S rolfsii gây hại số thuốc sinh địa, cúc hoa, mã đề, gấc, nghệ đặc biệt sinh địa điều tra Bắc Giang năm 2014 cho thấy tỷ lệ bệnh lên đến 50% (Ngơ Quốc Luật cs, 2005) Trong nghiên cứu ứng dụng dich chiết thảo mộc phòng trừ nấm bệnh dƣợc liệu chƣa đƣợc quan tâm nghiên cứu Bài báo công bố kết khảo sát bƣớc đầu tác dụng dịch chiết từ số dƣợc liệu phòng trừ nấm Sclerotium rolfsii gây bệnh héo rũ gốc mốc trắng địa hoàng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu, thời gian, địa điểm nghiên cứu Lá tƣơi loài dƣợc liệu cà độc dƣợc, hao hoa vàng, khổ sâm, long não, tỏi, bạc hà đƣợc thu thập vùng trồng dƣợc liệu Hà Nội, Vĩnh Phúc năm 2016 đƣợc rửa dƣới vòi nƣớc sau rửa nƣớc cất vơ trùng 2, lần đƣợc phơi khơ dƣới bóng râm Cuối nguyên liệu đƣợc nghiền nhỏ thành dạng bột mịn để tạo dịch chiết Tất thí nghiệm đƣợc thực năm 2016 – 2017 phòng thí nghiệm bệnh Trung tâm nghiên cứu trồng chế biến thuốc Hà Nội, Viện Dƣợc liệu 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Phương pháp chuẩn bị dịch chiết từ b t dược liệu Sử dụng bột dƣợc liệu thu thập loại pha với nƣớc cất vơ trùng điều kiện nhiệt độ phòng để tạo loại dịch chiết với nồng độ 5% (5 gram bột dƣợc liệu / 100 ml nƣớc), 10% (10 g bột dƣợc liệu/ 100 ml), 15% (15g bột dƣợc liệu/ 100ml) 20% (20 g bột dƣợc liệu/ 100ml) Lọc lấy phần nƣớc vải lọc lớp sau lọc giấy lọc thu đƣợc dịch chiết thô Dịch chiết đƣợc bảo quản nhiệt độ o C Hoặc tạo dung dịch mẹ với 100g bột dƣợc liệu/100ml Lọc lấy phần nƣớc vải lọc lớp sau lọc giấy lọc thu đƣợc dịch chiết thơ Sau pha loãng dịch chiết với nƣớc cất - Pha loãng dịch chiết loại với nƣớc cất 32 BVTV - Số 6/2018 để thu đƣợc dịch chiết 5%, 10%, 15%, 20% cách lấy tƣơng ứng 5ml, 10ml, 15 ml 20ml dịch chiết + 95 ml, 90 ml, 85ml 80ml nƣớc để thu đƣợc nồng độ mong muốn (Jalender cộng sự, 2012) Phương pháp chuẩn bị dịch chiết từ dược liệu tươi (đối với tỏi) - Lấy 100g tỏi đƣợc làm nghiền nát ngâm 100ml nƣớc tinh khiết Lọc lấy phần nƣớc vải lọc lớp sau lọc giấy lọc thu đƣợc dịch chiết thô Dịch chiết o đƣợc bảo quản nhiệt độ C (Jalender cộng sự, 2012) - Pha loãng dịch chiết loại với nƣớc cất để thu đƣợc dịch chiết %, 10%, 15%, 20% cách lấy tƣơng ứng 5ml, 10ml, 15 ml 20ml dịch chiết tỏi + 95 ml, 90 ml, 85ml 80ml nƣớc để thu đƣợc nồng độ mong muốn Phương pháp chuẩn bị nguồn nấm Sclerotium rolfsii Nguồn nấm S rolfsii gây bệnh héo rũ gốc mốc trắng đƣợc phân lập từ mẫu bệnh địa hoàng đƣợc thu thập Dĩnh Trì, Bắc Giang năm 2016 Sau đƣợc làm nuôi cấy môi trƣờng PDA Phương pháp nghiên cứu ác định loại dịch chiết dược liệu nồng đ dịch chiết dược liệu có khả ức chế nấm S.rolfsii Phƣơng pháp đƣợc tiến hành phòng thí nghiệm qua thử nghiệm khả ức chế dịch chiết dƣợc liệu với nấm S rolfsii mơi trƣờng PDA có bổ sung streptomycin sunphat neuomycin sunphat để ức chế phát triển vi khuẩn mơi trƣờng ni cấy, sau định lƣợng loại dịch chiết đƣợc vô trùng (bằng phƣơng pháp ly tâm) theo nồng độ bổ sung vào môi trƣờng nuôi cấy môi trƣờng không bổ sung dịch chiết để làm đối chứng (lấy 5ml, 10ml, 15 ml 20ml dịch chiết + 95 ml, 90 ml, 85ml 80ml môi trƣờng sau hấp khử trùng để thu đƣợc nồng độ mong muốn) Cấy miếng thạch chứa sợi nấm S rolfsii đƣợc làm với đƣờng kính 5mm lên đĩa mơi trƣờng Đặt đĩa ni cấy mơi o trƣờng có nhiệt độ 25 C theo dõi phát triển tản nấm thơng qua đƣờng kính tản nấm số lƣợng hạch nấm đƣợc hình thành sau 25 ngày Thí nghiệm đƣợc thực lần nhắc lại, lần nhắc lại đĩa (Burgess, 2008) KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Thu thập số dƣợc liệu có tác dụng phòng trừ nấm bệnh bảo vệ thực vật Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 Trong q trình nghiên cứu chúng tơi thu thập đƣợc dƣợc liệu cà độc dƣợc, tỏi, bạc hà, khổ sâm, long não, hao hoa vàng Các loại dƣợc liệu đƣợc chiết phƣơng pháp chiết nguội sử dụng nƣớc cất Thành phần hoạt chất dƣợc liệu đƣợc thể bảng Bảng Dƣợc liệu có tác dụng phòng trừ nấm bệnh đƣợc thu thập STT Cây dƣợc liệu sử dụng Tên khoa học Cà độc dƣợc Datura metel L Khổ sâm Long não Croton tonkinensis Gagnep Cinnamomum camphora (L.) Sieb Thanh hao hoa vàng Artemisia annua L Tỏi Allium sativum L Bạc Hà Mentha arvensis L 3.2 Ảnh hƣởng dịch chiết hao hoa vàng đến phát triển tản nấm S rolfsii Ảnh hƣởng dịch chiết hao hoa Hoạt chất Alcaloid, scopolamine, hyoscyamin, atropine, norhyoscyamin Bộ phận sử dụng Lá, Flavonoid, alcaloit tannin Tinh dầu gồm thành phần d-camphor,α pinen, cineol, safrol, campherenol Ancaloit, tinh dầu cam (23,75%), Chứa hợp chất lƣu huỳnh chất kháng sinh allicin Tinh dầu Bạc hà Menthol Lá Lá Lá Củ Toàn thân, vàng nồng động 5%, 10%, 15%, 20% đến phát triển tản nấm S.rolfsii môi PDA sau 24 h đến 72h đƣợc thể qua bảng 3.2 hình Bảng Ảnh hƣởng dịch chiết hao hoa vàng đến phát triển tản nấm S rolfsii môi trƣờng PDA (Trung t m nghiên cứu trồng chế biến c y thuốc Hà N i, tháng năm 2016) Công thức Đối chứng THHV 5% THHV 10% THHV15% THHV 20% CV LSD0,05 24h 21,37 8,36 6,53 5,31 0,4 0,06 Đƣờng kính tản nấm (mm) 48h 44,36 21,35 18,4 15,65 0,3 0,12 72h 88,63 74,33 37,36 33,59 0,2 0,15 THHV: dịch chiết hao hoa vàng Hình Ảnh hƣởng dịch chiết hao hoa vàng đến phát triển nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA sau 24h: a: đối chứng, b: môi trƣờng hao hoa vàng 5%; c: Môi trƣờng hao hoa vàng 15%; d: môi trƣờng hao hoa vàng 20% 33 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 Qua bảng số liệu hình ảnh cho thấy dịch chiết hao hoa vàng chiết nƣớc cất nồng độ 5%, 10%, 15% 20% có tác dụng ức chế nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA, sau 24 h cấy nấm so với đối chứng, đƣờng kính tản nấm tƣơng ứng 8,56 mm, 6,53 mm, 5,31 mm mm, công thức đối chứng 21,37 mm Sau 72 h theo dõi dịch chiết hao nồng độ 10%, 15%, 20% có tác dụng ức chế nấm S rolfsii cụ thể với bán kính tản nấm nồng độ lần lƣợt 37,36 mm, 33,59 mm mm công thức đối chứng dịch chiết hao hoa vàng nồng độ 5% tản nấm mọc gần kín đĩa Nhƣ dịch chiết hao hoa vàng nồng độ 10%, 15%, 20% có tác dụng ức chế nấm S.rolfsii sau 72 h nuôi cấy so với đối chứng, đặc biệt dịch chiết từ hao hoa vàng nồng độ 20% có tác dụng ức chế hồn tồn phát triển tản nấm S.rolfsii sau 72 theo dõi 3.3 Ảnh hƣởng dịch chiết khổ sâm đến phát triển tản nấm S rolfsii Dịch chiết từ khổ sâm nồng độ 5%, 10%, 15% 20% đƣợc thử đánh giá khả ức chế phát triển nấm S rolfsii Ảnh hƣởng dịch chiết khổ sâm đến phát triển tản nấm S rolfsii môi PDA đƣợc thể qua bảng hình Bảng Ảnh hƣởng dịch chiết khổ sâm đến phát triển tản nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA (Trung t m nghiên cứu trồng chế biến c y thuốc Hà N i, tháng 10 năm 2016) Công thức Đối chứng KS 5% KS 10% KS 15% KS 20% CV LSD0,05 24h 21,37 21,79 13,3 10,4 7,0 0,4 0,09 Đƣờng kính tản nấm (mm) 48h 44,36 52,2 40,3 37,4 2,15 0,2 0,12 72h 88,63 89,8 75,26 72,35 66,41 0,1 0,94 Ghi chú: KS: dịch chiết khổ s m Hình Ảnh hƣởng dịch chiết khổ sâm đến phát triển nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA sau 72h: a: đối chứng, b: môi trƣờng khổ sâm 5%; c: Môi trƣờng khổ sâm 15%; d: môi trƣờng khổ sâm 20% Qua bảng số liệu hình ảnh cho thấy mơi trƣờng có bổ sung dịch chiết khổ sâm nồng độ 5%, 10%, 15%, 20% nhìn chung có tác dụng ức chế phát triển tản nấm S rolfsii môi trƣờng PDA Sau 72h ni cấy đƣờng kính tản nấm tƣơng ứng 89,8 mm, 72,26 mm 72,35mm 66,41 mm nhƣng nồng 34 độ 15% 20% tản nấm bắt đầu phát triển bất thƣờng so với đối chứng, tản nấm mọc dày xốp (hình c, d) 3.4 Ảnh hƣởng dịch chiết long não đến phát triển tản nấm S.rolfsii Ảnh hƣởng dịch chiết long não Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 nồng độ 5%, 10%, 15% 20% đến phát triển tản nấm S rolfsii môi PDA theo dõi qua 72 h đƣợc thể qua bảng 3.4 hình Bảng Ảnh hƣởng dịch chiết long não đến phát triển tản nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA (Trung t m nghiên cứu trồng chế biến c y thuốc Hà N i, tháng 11 năm 2016) Cơng thức Đƣờng kính tản nấm (mm) 24h 48h 72h 21,38 44,36 88,64 LN 5% 0,62 42,59 84,56 LN 10% 6,4 28,5 49,3 LN 15% 4,02 25,6 45,14 LN 20% 3,37 17,54 35,27 Đối chứng CV 0,3 0,4 0,2 LSD0,05 0,08 0,20 0,89 Ghi chú: LN: dịch chiết long não Hình Ảnh hƣởng dịch chiết long não đến phát triển nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA sau 72h: a: đối chứng, b: môi trƣờng 5%; c: Môi trƣờng 15%; d: môi trƣờng 20% Qua bảng số liệu hình ảnh cho thấy loại nồng độ dịch chiết long não 5%, 10%, 15% 20% bổ sung vào môi trƣờng PDA có tác dụng ức chế phát triển tản nấm S.rolfsii nhƣng nồng độ 10%, 15% 20% có tác dụng ức chế nấm tốt hơn, làm đƣờng kính tản nấm giảm 50% so với cơng thức đối chứng (đƣờng kính tản nấm lần lƣợt 49,3 mm, 45,14 mm 35,27 mm) Trong đƣờng kính tản nấm cơng thức mơi trƣờng không bổ sung dịch chiết long não bổ sung nồng độ 5% có đƣờng kính tản nấm 84mm Nhƣ dịch chiết nong lão nồng độ 20% có tác dụng ức chế nấm nấm S rolfsii sau đến nồng độ 15% 10% Dịch chiết long não nồng độ 5% khơng có tác dụng ức chế nấm S rolfsii 3.5 Ảnh hƣởng dịch chiết cà độc dƣợc đến phát triển tản nấm S rolfsii Dịch chiết từ cà độc dƣợc đƣợc nghiên cứu nhiều giới có tác dụng phòng trừ nấm bệnh hại trồng chiết dịch chiết từ Do vậy, đánh giá ảnh hƣởng phận cà độc dƣợc dùng làm dịch chiết đến khả ức chế nấm S.rolfsii a Ảnh hưởng dịch chiết từ cà đ c dược đến phát triển tản nấm S.vrolfsii Dịch chiết từ cà độc dƣợc nồng độ 5%, 10%, 15% 20% đƣợc đánh giá khả ức chế phát triển nấm S rolfsii Ảnh hƣởng dịch chiết cà độc dƣợc đến phát triển tản nấm S rolfsii môi PDA đƣợc thể qua bảng hình 35 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 Bảng Ảnh hƣởng cà độc dƣợc đến phát triển tản nấm S rolfsii môi trƣờng PDA (Trung t m nghiên cứu trồng chế biến c y thuốc Hà N i, tháng 11 năm 2016) Công thức Đối chứng LCĐD 5% LCĐD 10% LCĐD 15% LCĐD 20% CV (%) LSD0,05 24h 21,37 a 21,35 a 13,2 b 11,2 c 7,8 d 0,4 0,12 Đƣờng kính tản nấm (mm) 48h 44,36 51,75 40,26 37,15 31,11 0,2 0,12 72h 88,63 89,51 73,26 70,17 51,8 0,1 0,13 Ghi chú: LCĐD: Dịch chiết từ cà đ c dược Hình Ảnh hƣởng dịch chiết cà độc dƣợc đến phát triển nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA sau 72h: a: đối chứng, b: môi trƣờng 5%; c: Môi trƣờng 15%; d: môi trƣờng 20% Qua bảng 4.5 hình ảnh cho thấy dịch chiết cà độc dƣợc nồng độ nghiên cứu 5%, 10%, 15% có tác dụng ức chế nấm S rolfsii với đƣờng kính tản nấm sau 72 h lần lƣợt 89,51 mm, 73,26 mm 70,17 mm Dịch chiết 20% bổ sung vào môi trƣờng PDA làm giảm phát triển đƣờng kính tản nấm 50% so với đối chứng sau 72h theo dõi Tuy nhiên ức chế khơng phải q cao để ứng dụng ngồi đồng ruộng Do đó, dịch chiết từ cà độc dƣợc phƣơng pháp chiết nguội chƣa cho hiệu ức chế nấm S.rolfsii cao b Ảnh hưởng dịch chiết từ cà đ c dược đến phát triển tản nấm S.rolfsii Dịch chiết từ cà độc dƣợc nồng độ 5%, 10%, 15% 20% đƣợc đánh giá khả ức chế phát triển nấm S rolfsi môi trƣờng PDA Sự phát triển tản nấm đƣợc đánh giá qua 72 h Kết thử nghiệm đƣợc thể bảng hình Bảng Ảnh hƣởng cà độc dƣợc đến phát triển tản nấm S.rolfsii môi trƣờng PDA (Trung t m nghiên cứu trồng chế biến c y thuốc Hà N i, tháng 11 năm 2016) Công thức Đối chứng QCĐD 5% QCĐD10% QCĐD 15% QCĐD 20% CV (%) LSD0,05 24h 21,37 19.23 14,26 11,46 7,77 0,5 0,13 Đƣờng kính tản nấm (mm) 48h 44,36 55,3 42 36,40 22,06 0,2 0,13 Ghi chú: QDĐD: Dịch chiết từ cà đ c dược 36 72h 88,63 88,36 78,4 74,71 42,8 0,1 0,11 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 Hình Ảnh hƣởng dịch chiết cà độc dƣợc đến phát triển nấm S rolfsii môi trƣờng PDA sau 72h: a: đối chứng, b: môi trƣờng 15%; c: mơi trƣờng 20% Qua bảng hình cho thấy giống nhƣ dịch chiết cà độc dƣợc dịch chiết cà độc dƣợc nồng độ nghiên cứu ảnh hƣởng đến phát triển tản nấm S.rolfsii Sau 72 h nuôi cấy đƣờng kính tản nấm S.rolfsii mơi trƣờng có bổ sung dịch chiết cà độc dƣợc nồng độ 5%, 10%, 15% có đƣờng kính tƣơng ứng 88,36 mm, 74,8 mm, 74,71 mm; đƣờng kính gần với đƣờng kính tản nấm cơng thức đối chứng (88,63mm) Riêng nồng độ 20% có tác dụng ức chế phát triển tản nấm (42,8mm) 3.6 Ảnh hƣởng dịch chiết tỏi đến phát triển tản nấm S rolfsii Ảnh hƣởng dịch chiết tỏi đến phát triển tản nấm S rolfsii môi PDA đƣợc thể qua bảng hình Bảng Ảnh hƣởng dịch chiết tỏi đến phát triển tản nấm S rolfsii môi trƣờng PDA (Trung t m nghiên cứu trồng chế biến c y thuốc Hà N i, tháng 01 năm 2017) Công thức Đối chứng Tỏi 5% Tỏi 10% Tỏi 15% Tỏi 20% CV (%) LSD0,05 24h 21,3 0 0 0.8 0,68 Đƣờng kính tản nấm (mm) 48h 44,36 20,4 0 0,3 0,84 72h 88,63 38,8 0 0,2 0,86 Hình Ảnh hƣởng dịch chiết tỏi đến phát triển nấm S rolfsii môi trƣờng PDA sau 72h: a: đối chứng, b: môi trƣờng 5%; c: Môi trƣờng 15%; d: môi trƣờng 20% 37 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 Dịch chiết tỏi có tác dụng ức chế mạnh phát triển tản nấm S rolfsii Ngay nồng độ 5% ức chế phát triển tản nấm 50% so với đối chứng nồng độ 10%, 15% 20% ức chế hoàn toàn phát triển tản nấm sau 72 h nuôi cấy 3.8 Ảnh hƣởng tinh dầu bạc hà đến phát triển tản nấm S rolfsii Ảnh hƣởng tinh dầu bạc hà nồng độ 0,1 %; 0,5% 1% đƣợc dùng để nghiên cứu ức chế bạc hà đến sinh trƣởng nấm S.rolfsii mơi trƣờng PDA Đƣờng kính tản nấm đƣợc ghi nhận sau 72 h theo dõi Kết thể bảng hình Bảng Ảnh hƣởng dịch chiết tỏi đến phát triển tản nấm S rolfsii môi trƣờng PDA (Trung t m nghiên cứu trồng chế biến c y thuốc Hà N i, tháng 02 năm 2017) Công thức Đối chứng BH 0,1% BH 0,5% BH 1% CV (%) LSD0,05 24h 21,37 0 1,1 0,11 Đƣờng kính tản nấm (mm) 48h 44,36 20,3 0 0,3 0,08 72h 88,63 38,73 0 0,1 0,07 Ghi chú: BH: tinh dầu bạc hà Hình Ảnh hƣởng tinh dầu bạc hà đến phát triển nấm S rolfsii môi trƣờng PDA sau 72h: a: đối chứng, b: môi trƣờng 0,1%; c: Môi trƣờng 0,5%; d: mơi trƣờng 1% Tinh dầu bạc hà có tác dụng ức chế tốt phát triển tản nấm S rolfsii môi trƣờng PDA sau 72h nuôi cấy Ngay nồng độ 0,1% sau 72 h nuôi cấy đƣờng kính tản nấm S rolfsii 38,7 mm đƣờng kính tản nấm cơng thức đối chứng 88,63 mm, nồng độ 0,5% 1% ức chế hoàn toàn phát triển tản nấm KẾT LUẬN Các loại dịch chiết dƣợc liệu nghiên cứu, nồng độ khác có tác dụng ức chế nấm S rolfsii Các loại dịch chiết tỏi nồng độ 10%, 15% 20%, dịch chiết hao hoa vàng 15% 20%, tinh dầu bạc hà 0,5% 1%, dịch chiết long não 20% có tác dụng ức chế nấm S 38 rolfsii cao có trƣờng hợp ức chế hồn tồn nấm mơi trƣờng PDA sau 72 h theo dõi Sau đến loại dịch chiết tỏi 5%, hao hoa vàng 10%, long não 15% Các dịch chiết từ cà độc dƣơc khổ sâm nồng độ nghiên cứu ức chế không ức chế phát triển tản nấm S rolfsii Các nồng độ đƣợc nghiên cứu có tác dụng tốt phòng thí nghiệm đƣợc tiếp tục thử nghiệm phạm vi nhà lƣới phòng thí nghiệm để đánh giá hiệu thực tế loại dịch chiết TÀI LIỆU THAM KHẢO Ngô Quốc Luật cộng sự, 2005 Nghiên cứu biện pháp phòng trừ s u bệnh m t số c y thuốc Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2018 quan trọng Báo cáo kết nghiên cứu khoa học đề tài cấp Y tế Burgess L W., Knight T E., Tesoriero L and Phan H T., 2008 Diagnostic manual for plant diseases in Vietnam, ACIAR Monograph, 210 ACIAR: Canberra, 129 Dewa Ngurah Suprapta and Khamdan Khalimi, 2009 Efficacy of plant plant extract formulation to suppress stem rot disease on vanilla seedlings, J Issaas vol 15, 2:34-41 Dissanayake, M L M C and J A N Jayasinghe, 2013 Antifungal activity of selected medicinal plant extracts against plant pathogenic fungi; Rhizoctonia solani, Colletotrichum musea and Fusarium oxysporum Int J Sci Inven Today, 2(5):421-431 K.M Solimana, R.I Badeaab, 2002 Effect of oil extracted from some medicinal plants on different mycotoxigenic fungi, Food and Chemical Toxicology, 40: 1669–1675 Nadia Jabeen, Arshad Javaid, Ejaz Ahmed, Ahsan Sharif, 2014 Managment of casual organism of collar rot of bell pepper (sclerotium rolfsii) by organic solvents ectracts of datura metel fruit, Park J Phytopathol., Vol 26 (01) 15-20 Ismail, A.A., and Ahmed, F.A., 2000 Antifungal activites of some plant extracts on damping- off and root- rot diseases of cotton seedlings J Agri Res Tanta Univ., 26 (4): 728- 738 V Jalander BD Gachande, 2012, "effect of aqueous leaf extract of datura sp against two plant pathogenic fungi", International journal of food, agriculture and veterinary sciences, vol (3), pp 131 – 134 Wilson, C L., Solar, J M., El Ghaouth, A., and Wisniewski, M E., 1997 Rapid evaluation of plant extracts and essential oils for antifungal activity against Botrytis cinerea Plant Dis 81:204-210 Phản biện: TS Nguyễn Thị Nhung XÁC ĐỊNH TÁC NHÂN GÂY BỆNH LEM LÉP HẠT LÚA TRÊN ĐỒNG RUỘNG TẠI THỪA THIÊN HUẾ Identify the Cause of Grain Discoloration Disease on Rice in Thua Thien Hue Province 1 Cái Văn Thám , Huỳnh Thị Tâm Thúy , Lê Minh Trí Hà Minh Thanh Ngày nhận bài: 20.8.2018 Ngày chấp nhận: 30.11.2018 Abstract Identification of pathogens caused grain discoloration disease was carried out in 2017 at laboratories of Cultivation and Plant Protection Sub-departement of Thua Thien Hue and Plant Protection Research Institute Samples were collected in the delta (Huong Tra, Huong Thuy and Phu Vang districts), the lagoon areas (Phu Loc, Phong Dien and Quang Dien dist.) in the Winter-spring crop 2016-2017 and Summer-autumn crop 2017 Microorganisms were diagnosed and identified basing on classified key of Barnett and Hunter (1973); Agrawal et al., (1989); Mew and Misra, (1994); Miguel and Richard (2006) Harmful spider was viewed under microscope The results showed that five fungal species were found to be the cause of grain discoloration such as Fusarium sp., Alternaria sp., Curvularia spp., Bipolaris oryzae and Sarocladium oryzae Keywords: grain discoloration disease, pathogens * ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh lem lép hạt lúa bệnh gây hại quan trọng nƣớc trồng lúa giới (Ou, 1985) Từ năm 1991- 1995, Nguyễn Văn Tuất ctv nghiên cứu bệnh biến màu hạt lúa xác định nguyên nhân bao gồm Chi cục Trồng trọt Bảo vệ thực vật Thừa Thiên Huế Viện Bảo vệ thực vật nhóm gây bệnh vi khuẩn gây thối đen hạt (Bukholderia glumae) nấm gây đen lép hạt (Bipolaris oryzae, Curvularia sp., Fusarium sp., Alternaria sp., Cecospora oryzae, Pyricularia grisea, Rhizoctonia solani…) Hai loại nấm Bipolaris oryzae Curvularia lunata gây tƣợng đốm nâu xám đen hạt lúa, gây lép, làm giảm phẩm chất gạo Bệnh nấm phát sinh gây hại tất thời vụ gieo cấy 39 ... pháp nghiên cứu ác định loại dịch chiết dược liệu nồng đ dịch chiết dược liệu có khả ức chế nấm S .rolfsii Phƣơng pháp đƣợc tiến hành phòng thí nghiệm qua thử nghiệm khả ức chế dịch chiết dƣợc liệu. .. 2005) Trong nghiên cứu ứng dụng dich chiết thảo mộc phòng trừ nấm bệnh dƣợc liệu chƣa đƣợc quan tâm nghiên cứu Bài báo công bố kết khảo sát bƣớc đầu tác dụng dịch chiết từ số dƣợc liệu phòng trừ nấm. .. Nhƣ dịch chiết nong lão nồng độ 20% có tác dụng ức chế nấm nấm S rolfsii sau đến nồng độ 15% 10% Dịch chiết long não nồng độ 5% khơng có tác dụng ức chế nấm S rolfsii 3.5 Ảnh hƣởng dịch chiết