Kết quả xác định bệnh đốm chết hoại hình nhẫn gây hại thuốc lá

Bài viết nghiên cứu dựa trên cây thuốc lá đã thu thập được 15 mẫu bệnh với đầu bị vẹo sang một bên và vòng tròn hoại tử trên lá ở cây thuốc lá đang phát triển ở Bắc Giang; triệu chứng tại chỗ hoại tử ở Bắc Kạn và Cao Bằng; cong lá và vẹo đầu sang một bên ở Tây Ninh để chẩn đoán tại Trung tâm nghiên cứu bệnh lý thực vật nhiệt đới - Đại học Nông nghiệp quốc gia Việt Nam.

Trang 1

(2) Ti ng Anh

4 Ahmed D.B, Chaieb I., Salah K.B., Boukamcha

H., Jannet H.B., Mighri Z and Daami-Remadi M.,2012

Antibacterial and antifungal activities of Cestrum parqui

saponins: possible interaction with membrane sterols,

International Research Journal of Plant Science, 3 (1):

001-007

5 Banett H.L and Hunter B.B., 1998 Illustrated

genera of imperfect fungi The American

Phytopathological Society, St.Paul, Minnesota 218

6 Burgess L.W., Knight T.E., Tesoriero L and

Phan H T., 2008 Diagnostic manual for plant

diseases in Vietnam ACIAR Monograph, 129: 210

7 Firdousi, S A and Khan, T A.,2015 Two new

fungal diseases of trees of manudevi forest of Jalgaon,

district Flora and Fauna (Jhansi), 21( 2): 158-160

8 Koch, R.,1876 Untersuchungen über Bakterien:

V Die Ätiologie der Milzbrand-Krankheit, begründet

auf die Entwicklungsgeschichte des Bacillus

anthracis" [Investigations into bacteria: V The etiology

of anthrax, based on the ontogenesis of Bacillus

anthracis] (PDF) Cohns Beitrage zur Biologie der

Pflanzen (in German), 2 (2): 277–310

9 Krishna Kumar; Singh, D R.; Natarajan Amaresan; Kuttum Madhuri, 2012 Isolation and pathogenicity of Colletotrichum spp causing

anthracnose of Indian mulberry (Morinda citrifolia) in

tropical islands of Andaman and Nicobar, India,

Phytoparasitica, 40 (5): 485-491

10 Shi Xuerong, Chi Peikun, 1988 Identification of the pathogen causing wild disease of the medicinal

herb Indian mulberry (Morinda officinalis How.), Acta

Phytopathologica Sinica 04

11 Sneh B, Burpee L Ogoshi A.,1991

Identification of Rhizoctonia species St Paul, Mn,

USA: APS press

Phản biện: TS Trịnh Xuân Hoạt

KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH BỆNH ĐỐM CHẾT HOẠI HÌNH NHẪN GÂY HẠI THUỐC LÁ Results of Diagnotic Necrotic Ring Spot Disease on Tobacco plant

Nguyễn Văn Chín 1 và Hà Vi t Cường 2

Ngày nhận bài: 06.9.2019 Ngày chấp nhận 26.9.2019

Abstract

In 2019, Tobacco instutute collected 15 disease samples with crooked tip to the side and necrotic ringspot on leaves in growing tobacco Bac Giang; necrotic spot symptom in Bac Kan and Cao Bang; leaf curl and crooked tip

to the side in Tay Ninh to diagnose in Research centre for Tropical plant pathology – Vietnam national university

of Agriculture Results of diagnosis showed that all disease samples in Bac Giang were caused by Tomato

necrotic ringspot virus (TNRV) Virus belong to Tospovirus genus and is spread by insect – thrips TNRV is a virus species that is detected the first times on tobacco plant in Vietnam Other disease samples of Bac Kan, Cao Bang and Tay Ninh provinces didn‟t infected with Tospovirus

Keywords: Tobacco, virus, Tospovirus, Tomato necrotic ringspot virus, TNRV

1 ĐẶT VẤN ĐỀ *

Trong 3 năm gần đây, cây thuốc lá có triệu

chứng đốm chết hoại hình nhẫn có chiều hướng

1 Viện Thuốc lá

2 Học Viện Nông nghiệp Việt Nam

tăng dần ở các tỉnh phía Bắc, đặc biệt gây hại nặng tại Chi nhánh Viện Thuốc lá Bắc Giang trong vụ xuân 2019 Như năm 2017, chúng xuất hiện rải rác trên đồng ruộng với mức độ gây hại không đáng kể; Đến năm 2018, bệnh xuất hiện phổ biến với tỷ lệ bệnh 12,5%; Và năm 2019, chúng gây hại rất nặng với tỷ lệ bệnh dao động

Trang 2

60 - 100% và nhiều ruộng thuốc lá bị tiêu hủy

hoàn toàn Kết quả điều tra tại Chi nhánh Viện

Thuốc lá tại Bắc Giang cho thấy bệnh lây lan rất

nhanh, từ thời điểm điều tra với tỷ lệ bệnh 10%

đến giai đoạn ruộng bị nhiễm bệnh 80 - 100% chỉ

diễn ra khoảng 20 - 25 ngày, mặc dù đã sử dụng

tất cả các biện pháp phòng trừ như vệ sinh tiêu

hủy cây bệnh, phun phòng trừ môi giới,…

(Nguyễn Văn Chín, 2019)

Để xác định nguyên nhân gây bệnh, Viện

Thuốc lá đã kết hợp với Trung tâm nghiên cứu

Bệnh cây nhiệt đới - Học Viện Nông nghiệp Việt

Nam tiến hành kiểm tra đồng ruộng thuốc lá,

bước đầu dựa trên triệu chứng đốm chết hoại

hình nhẫn đã nghi ngờ bệnh có thể do

Tospovirus gây ra Khi kiểm tra trên cây thuốc lá,

bọ trĩ xuất hiện khá nhiều

Các virus thuộc chi Tospovirus gây thiệt hại

nghiêm trọng cho nhiều loại cây trồng trên thế

giới Trong đó, tại Mỹ có 5 loài Tospovirus gây

hại là Tomato spotted wilt virus (TSWV),

Impatiens necrotic spot virus (INSV), Iris yellow

spot virus (IYSV), Groundnut ringspot virus

(GRSV) và Tomato chlorotic spot virus (TCSV)

(Scott Adkins et al., 2013) Tại Thái Lan (năm

2008) và Trung Quốc (2014) đã phát hiện virus

mới Tospovirus gây hại trên cây cà chua là

Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) (Yueyan

Yin et al., 2014) Tospovirus được truyền trên

đồng ruộng từ cây này sang cây khác qua một số

loài bọ trĩ Trong đó, ba loài bọ trĩ, Frankliniella

occidentalis (Western flower thrips), F fusca

(Tobacco thrips) và Thrips tabaci (onion thrips) là

những vectơ truyền virus chủ yếu tại Mỹ Bọ trĩ

chỉ có thể truyền bệnh nếu chúng hấp thụ virus

trong các giai đoạn phát triển của ấu trùng Cả ấu

trùng và trưởng thành đều có thể truyền được

virus cho cây (Scott Adkins et al., 2013)

Phổ ký chủ của Tospovirus thay đổi tùy theo

loài gây hại Tomato spotted wilt virus (TSWV) có

phổ ký chủ rộng nhất, gây hại khoảng 800 loài

cây trồng và trên 80 họ Trong đó, cây thuộc họ

cà và hoa cúc bị nhiễm nặng nhất Một số cây bị

nhiễm TSWV nặng như: Cây cà chua, ớt, rau xà

lách, khoai tây, đu đủ, đậu phụng, thuốc

lá,…(Scott Adkins et al., 2005)

Như vậy, để phòng trừ bệnh đốm chết hoại

hình nhẫn trên cây thuốc lá, việc xác định nguyên

nhân gây bệnh và phương thức lan truyền của chúng là rất cần thiết trong sản xuất thuốc lá ở Việt Nam, là cơ sở để đưa ra các biện pháp phòng trừ bệnh hiệu quả và an toàn

2 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

- Thu thập mẫu bệnh: Mẫu cây bệnh được đánh cả gốc đem về trồng trong nhà lưới của Trung tâm nghiên cứu Bệnh cây nhiệt đới - Học Viện Nông nghiệp Việt Nam làm nguồn bệnh chẩn đoán

- AND tổng số được chiết tách từ mô lá bằng phương pháp CTAB (Cetyl trimethyl ammonium bromide) theo mô tả của Doyle & Doyle (1987) Sau đó, sản phẩm chiết tách được kiểm tra bằng điện di trên gel agarose 1%

- Cặp mồi phản ứng được sử dụng để phát hiện virus và giải trình tự gen là Tospo-F3 và Tospo-R3

Nó phát hiện đặc điểm gen N của Tospovirus nhóm

I và II với kích thước xấp xỉ 600 bp

- Giải trình tự và phân tích trình tự gen: Sản phẩm PCR, RT-PCR sau khi tinh chiết từ gel agarose được giải trình tự trực tiếp bằng mồi PCR, RT-PCR (Tospo-F3 và Tospo-R3)

Trình tự gen được phân tích bằng các phần mềm thông dụng như: BLAST, CLUSTAL 2.0, MEGA7.0

3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 K t quả chạy RT-PCR

Vụ xuân 2019, Viện thuốc lá kết hợp với Trung tâm nghiên cứu Bệnh cây nhiệt đới – Học viện Nông nghiệp Việt Nam tiến hành kiểm tra bệnh gây hại thuốc lá tại Bắc Giang, dựa vào triệu chứng đốm chết hoại hình nhẫn trên lá và

bọ trĩ xuất hiện trên cây (hình 1), bước đầu nghi ngờ bệnh có thể là do Tospovirus gây ra Để xác định có phải Tospovirus hay không, năm mẫu thuốc lá thu thập tại Bắc Giang gồm BG1, BG6, BG9, BG10 và BG11 với triệu chứng đốm hình nhẫn chết hoại điển hình được kiểm tra RT

- PCR với cặp mồi đặc hiệu Tospovirus là Tospo-F3 và Tospo-R3 Ngoài ra, chúng tôi cũng kiểm tra các mẫu thuốc lá thu thập tại Cao Bằng, Bắc Kạn có triệu chứng vẹo ngọn, khảm

và đốm chết hoại trên lá và Tây Ninh là triệu chứng ne ngọn (hình 2) có nhiễm Tospovirus hay không, các mẫu này cũng được kiểm tra RT

Trang 3

- PCR cùng Kết quả kiểm tra RT - PCR tại bảng

1 và hình 1 cho thấy:

+ Tất cả 5 mẫu thuốc lá thu thập tại Bắc

Giang đều nhiễm Tospovirus do chúng dương

tính với cặp mồi Tospo-F3 và Tospo-R3 Ba mẫu

BG1, BG9 và BG11 đã được chọn để giải trình tự

gen nhằm xác định chính xác danh tính virus + 10 mẫu thuốc lá thu tại Tây Ninh, Cao Bằng

và Bắc Kạn đều phản ứng âm tính với cặp mồi Tospo-F3 và Tospo-R3 Điều đó chứng tỏ các mẫu bệnh này đều không nhiễm virus thuộc chi Tospovirrus

Bảng 1 RT-PCR phát hiện Tospovirus trên thuốc lá năm 2019

Tospo-F3/-R3

Giải trình

tự

1 BG1 Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + +

2 BG6 Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại +

4 BG10 Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại +

11 BK6 Bắc Kạn 6/5/2019 Khảm, đốm chết hoại lá -

13 CB8 Cao Bằng 6/5/2019 Khảm, đốm chết hoại lá -

14 CB9 Cao Bằng 6/5/2019 Khảm, đốm chết hoại lá -

Hình 1 A: Triệu chứng vẹo ngọn và đốm ch t hoại hình nhẫn;

B: Bọ trĩ gây hại thuốc lá tại Bắc Giang

Trang 4

Hình 2 C: Triệu chứng xoăn, khảm và đốm ch t hoại tại Cao Bằng;

D: Triệu chứng ne ngọn tại Tây Ninh

Hình 3 RT-PCR phát hiện Tospovirrus trên thuốc lá Danh tính mẫu đƣợc trình bày ở bảng 1

M là thang DNA 1 b (GenRuler 1 b, Fermentas) Băng sản phẩm được chỉ bằng mũi tên

3.2 Định danh Tospovirus bằng giải trình

tự gen

- Phản ứng PCR và giải trình tự gen

Dựa trên kết quả RT - PCR, 3 mẫu đã được

chọn để giải trình tự gen là BG1, BG9 và BG11 Các mẫu được thực hiện phản ứng RT - PCR với cặp mồi đặc hiệu Tospovirus là Tospo-F3 và Tospo-R3 (Hình 4)

Hình 4 RT-PCR để nhân đoạn gen Tospo-F3/Tospo-R3 để giải trình tự

M là thang DNA 1 b (GenRuler 1 b, Fermentas) Băng sản phẩm được chỉ bằng mũi tên

Trang 5

Sản phẩm PCR được tinh chiết từ agarose gel và giải trình tự trực tiếp Sau khi loại bỏ trình tự nhiễu 2 đầu, trình tự của 3 mẫu BG1, BG9 và BG11 thu được như sau:

>BG1 (568 bp)

CTGCTTCTTGACATTCTGaAAATAAGCAAGGGAGAAAGCTATAGGTGCCATTGCAGGGAGACT GGACAATAAAGGTAAAGGTCCACCAACACACAACATCAGCCTGGTTGCACTGGAATCGAAATTGG GAGGTACATTTAACCCATAAGCAATAACCATAGGAAGTGACATAAGTTTTGAATACATGTCTTGCT GGAGTTTTTGAGTTGTGCATTCTTCAACCATCTTTGCCATGAGAACTCTGAGTACAGCTTCAGTTC TCTTAAATGTCCATGTTTTTTCATCAGCATTATCTGAGTTTTGTGCTATCTTTTTGCCGCAAAAAAC AAACTGATTGCTCTTGCAGGCTGCAAATATCTGCTTTCTACTCTTTAGTATAGTTATTCCATTATTG AATGTAAATTTTCCGAAGATGTCCTGTTTGTTTTCATCATAAAATTTAGAAAAGCTGAATCCCGGTG TAGCTTCATCAAGCTCTATTTCAATGTCTGCTTCTCCTCCAGCTAGCAATTCCTTGATTTTCTCGTT TGACAAGTTTTTCCTAACGGTAGACATGGTGTTTACGGGA

>BG9 (568 bp)

>BG11 (568 bp)

- Kết quả phân tích trình tự và cây phả hệ

Phân tích trình tự cho thấy cả 3 mẫu BG1,

BG9 và BG11 đều đồng nhất trình tự 100%

với nhau và điều đó chứng tỏ chúng thuộc 1

loài virus

Sử dụng phần mềm BLAST trên NCBI

(National Center for Biotechnology

Information), chúng tôi đã tìm kiếm virus gần

gũi trên Genbank đối với 3 mẫu virus BG1,

BG9 và BG11 dựa trên trình tự thu được Kết

quả tìm kiếm tại bảng 2 cho thấy các mẫu virus

trên GenBank gần gũi nhất đối với 3 mẫu BG1,

BG9 và BG11 đều là Tomato necrotic ringspot

virus (TNRV) với mức đồng nhất trình tự từ 93,3 đến 93,5%

Tương tự, phân tích cây phả hệ (Hình 4) cho thấy cả 3 mẫu BG1, BG9 và BG11 đều phân nhóm chặt trong cụm loài TNRV Trong cụm này, 3 mẫu virus thuốc lá nằm trong nhánh gồm các mẫu TNRV được phát hiện thấy trên cây cà chua và cây ớt tại Việt Nam Các mẫu này do Trung tâm nghiên cứu Bệnh cây nhiệt đới - Học Viện nông nghiệp Việt Nam phát hiện và chưa công bố

Trang 6

Bảng 2 Các mẫu virus trên GenBank gần gũi nhất đối với 3 mẫu virus BG1, BG9 và BG11 trong tìm ki m BLAST

Virus Viết tắt Ký chủ Quốc Gia Mã

GenBank

Phần trăm đoạn so sánh (%)

Mức đồng nhất trình tự (%) Tomato necrotic

ringspot virus TNRV Cà chua Thái Lan KM887842 100 93.46 Tomato necrotic

ringspot virus TNRV Cà chua Thái Lan FJ946835 100 93.46 Tomato necrotic

ringspot virus TNRV Ớt Thái Lan KM887841 100 93.29 Tomato necrotic

ringspot virus TNRV Cà chua Thái Lan HM113532 100 93.29 Tomato necrotic

ringspot virus TNRV Cà chua Thái Lan FJ489600 100 93.29

Hình 5 Cây phả hệ dựa trên đoạn

Tospo-F3/Tospo-R3

Nó được xây dựng bằng phương pháp

Neighbough Joining (NJ) với khoảng cách di

truyền được xác định dựa trên mô hình thay thế

Kimura 2 tham số Giá trị bootrap (%) với 1000

lần lặp lại được chỉ rõ ở gốc các nhánh (chỉ thể

hiện các giá trị >50%), Thanh bar thể hiện

khoảng cách di truyền Các mẫu virus thuốc lá

thu tại Bắc Giang được đánh dấu

Như vậy, kết quả chẩn đoán đã xác định được triệu chứng đốm chết hoại hình nhẫn trên

cây thuốc lá tại Bắc Giang là do Tomato necrotic

ringspot virus (TNRV) gây ra Đây là virus được phát hiện lần đầu tiên tại Thái Lan trên cây cà chua năm 2008 và mới được phát hiện thấy gần đây trên cây cà chua và cây ớt ở Việt Nam Trên cây thuốc lá, TNRV lần đầu tiên được phát hiện thấy ở Việt Nam Virus TNRV thuộc chi Tospovirus và được lan truyền trên đồng ruộng

từ cây này sang cây khác nhờ côn trùng môi giới

là bọ trĩ theo phương thức bền vững tái sinh (Hà Viết Cường, 2011)

4 KẾT LUẬN

Kết quả chẩn đoán bệnh thu thập tại các vùng trồng thuốc lá cho thấy các mẫu đốm chết hoại hình nhẫn thu thập tại Bắc Giang đều bị nhiễm

Tospovirus, loài gây hại là Tomato necrotic

ringspot virus (TNRV) TNRV lần đầu tiên được phát hiện trên cây thuốc lá ở Việt Nam Các mẫu đốm chết hoại tại Cao Bằng, Bắc Kạn và ne ngọn tại Tây Ninh không nhiễm Tospovirus

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Nguyễn Văn Chín, 2017 - 2019 Điều tra tình hình sâu bệnh hại thuốc lá làm cơ sở dự báo và tư vấn biện pháp phòng trừ phục vụ sản xuất nguyên liệu ở các tỉnh trồng thuốc lá của Việt Nam Báo cao tổng kết

đề tài – cấp Tổng công ty Thuốc lá Việt Nam

Trang 7

2 Ha, C., Coombs, S., Revill, P., Harding, R., Vu,

M., & Dale, J., 2008 Molecular characterization of

begomoviruses and DNA satellites from Vietnam:

additional evidence that the New World geminiviruses

were present in the Old World prior to continental

separation Journal of General Virology, 89(1), 312-326

3 Hà Viết Cường, 2011 Virus thực vật,

Phytoplasma và Viroid Bài giảng bệnh hại cây trồng –

Học Viện Nông nghiệp Việt Nam

4 Revill, P A., Ha, C V., Porchun, S C., Vu, M T.,

& Dale, J L., 2003 The complete nucleotide sequence of

two distinct geminiviruses infecting cucurbits in Vietnam

Archives of virology, 148(8), 1523-1541

5 Scott Adkins, Tom Zitter and Tim Momol, 2013 Tospoviruses (Family Bunyaviridae, Genus Tospovirus) Plant Pathology Department, Florida Cooperative Extension Services, Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida Published October 2005

6 Yueyan Yin, Kuanyu Zheng, Jiahong Dong, Qi Fang, Shiping Wu, Lishuang Wang

và Zhongkai Zhang, 2014 Identification of a new tospovirus causing necrotic ringspot on tomato in China Virology Journal 2014

Phản biện: TS Hà Minh Thanh

HIỆU LỰC PHÒNG TRỪ CỦA VI KHUẨN PHÁT HUỲNH QUANG ĐỐI VỚI

NHỆN GIÉ HẠI LÚA, Steneotarsonemus spinki Smiley

(Acari: Tarsonemidae)

Efficacy of Fluorescent Pseudomonas Bacteria Against Panicle Rice Mite,

Steneotarsonemus spinki Smiley (Acari: Tarsonemidae)

Lăng Cảnh Phú 1 , Bùi Thị Huyền Trang 2 và Nguyễn Văn Huỳnh 1

Ngày nhận bài: 02.10.2019 Ngày chấp nhận: 29.10.2019

Abstract

The research was carried out in laboratory of the Department of Plant Protection, College of Agriculture, Can

Tho University in the objectives of (1) finding fluorescent Pseudomonas bacteria isolates in both stem and root

zone of rice plants and weeds in order to prevent the panicle rice mite, (2) assessing the controlling effects and

(3) the ability of an isolate to produce enzyme and hydrogen cyanine of fluorescent Pseudomonas bacterial

isolates against panicle rice mite as a biological agent in controlling the pest in order to reduce the use of chemicals for safe environment There were 03 (Ps.KG.HĐ-08, Ps.KG.HĐ-12 and Ps.KG.GR-05) per 29 isolates

in total with high effect of controlling panicle rice mite in laboratory condition (62.33% to 67.40%) at 3 days after

testing (3 DAT) All three of fluorescent Pseudomonas bacterial isolates produced protease and hydrogen

cyanine, although only Ps.KG.HĐ-08 and Ps.KG.GR-05 had potential chitinase action

Keywords: Biological control, panicle rice mite, fluorescent Pseudomonas bacteria

1 ĐẶT VẤN ĐỀ *

Trên thế giới, loài nhện gié Steneotarsonemus

1 Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp,

Trường Đại học Cần Thơ

2 Học viên cao học ngành Bảo vệ thực vật, Trường

Đại học Cần Thơ

spinki Smiley (Acari: Tarsonemidae) là loài dịch hại gây hại nguy hiểm tại Nam Mỹ và Trung Quốc

(Navia et al., 2005; Xu et al., 2001) đã làm giảm

30-90% năng suất lúa tại Trung Quốc (Xu et al.,

2001) và tới 70% tại Cu Ba (Navia et al., 2005

dẫn) Ở nước ta, loài nhện gié đã được Ngô Đình Hoà (1992), Nguyễn Văn Đĩnh (1994) ghi nhận

Định dạng
Số trang	7
Dung lượng	381,25 KB