Kết quả xác định bệnh đốm chết hoại hình nhẫn gây hại thuốc lá

Bài viết nghiên cứu dựa trên cây thuốc lá đã thu thập được 15 mẫu bệnh với đầu bị vẹo sang một bên và vòng tròn hoại tử trên lá ở cây thuốc lá đang phát triển ở Bắc Giang; triệu chứng tại chỗ hoại tử ở Bắc Kạn và Cao Bằng; cong lá và vẹo đầu sang một bên ở Tây Ninh để chẩn đoán tại Trung tâm nghiên cứu bệnh lý thực vật nhiệt đới - Đại học Nông nghiệp quốc gia Việt Nam.

Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2019 (2) Ti ng Anh Ahmed D.B, Chaieb I., Salah K.B., Boukamcha H., Jannet H.B., Mighri Z and Daami-Remadi M.,2012 Antibacterial and antifungal activities of Cestrum parqui saponins: possible interaction with membrane sterols, International Research Journal of Plant Science, (1): 001-007 Banett H.L and Hunter B.B., 1998 Illustrated genera of imperfect fungi The American Phytopathological Society, St.Paul, Minnesota 218 Burgess L.W., Knight T.E., Tesoriero L and Phan H T., 2008 Diagnostic manual for plant diseases in Vietnam ACIAR Monograph, 129: 210 Firdousi, S A and Khan, T A.,2015 Two new fungal diseases of trees of manudevi forest of Jalgaon, district Flora and Fauna (Jhansi), 21( 2): 158-160 Koch, R.,1876 Untersuchungen über Bakterien: V Die Ätiologie der Milzbrand-Krankheit, begründet auf die Entwicklungsgeschichte des Bacillus anthracis" [Investigations into bacteria: V The etiology of anthrax, based on the ontogenesis of Bacillus anthracis] (PDF) Cohns Beitrage zur Biologie der Pflanzen (in German), (2): 277–310 Krishna Kumar; Singh, D R.; Natarajan Amaresan; Kuttum Madhuri, 2012 Isolation and pathogenicity of Colletotrichum spp causing anthracnose of Indian mulberry (Morinda citrifolia) in tropical islands of Andaman and Nicobar, India, Phytoparasitica, 40 (5): 485-491 10 Shi Xuerong, Chi Peikun, 1988 Identification of the pathogen causing wild disease of the medicinal herb Indian mulberry (Morinda officinalis How.), Acta Phytopathologica Sinica 04 11 Sneh B, Burpee L Ogoshi A.,1991 Identification of Rhizoctonia species St Paul, Mn, USA: APS press Phản biện: TS Trịnh Xuân Hoạt KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH BỆNH ĐỐM CHẾT HOẠI HÌNH NHẪN GÂY HẠI THUỐC LÁ Results of Diagnotic Necrotic Ring Spot Disease on Tobacco plant Nguyễn Văn Chín Hà Vi t Cƣờng Ngày nhận bài: 06.9.2019 Ngày chấp nhận 26.9.2019 Abstract In 2019, Tobacco instutute collected 15 disease samples with crooked tip to the side and necrotic ringspot on leaves in growing tobacco Bac Giang; necrotic spot symptom in Bac Kan and Cao Bang; leaf curl and crooked tip to the side in Tay Ninh to diagnose in Research centre for Tropical plant pathology – Vietnam national university of Agriculture Results of diagnosis showed that all disease samples in Bac Giang were caused by Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) Virus belong to Tospovirus genus and is spread by insect – thrips TNRV is a virus species that is detected the first times on tobacco plant in Vietnam Other disease samples of Bac Kan, Cao Bang and Tay Ninh provinces didn‟t infected with Tospovirus Keywords: Tobacco, virus, Tospovirus, Tomato necrotic ringspot virus, TNRV * ĐẶT VẤN ĐỀ Trong năm gần đây, thuốc có triệu chứng đốm chết hoại hình nhẫn có chiều hướng Viện Thuốc Học Viện Nông nghiệp Việt Nam tăng dần tỉnh phía Bắc, đặc biệt gây hại nặng Chi nhánh Viện Thuốc Bắc Giang vụ xuân 2019 Như năm 2017, chúng xuất rải rác đồng ruộng với mức độ gây hại không đáng kể; Đến năm 2018, bệnh xuất phổ biến với tỷ lệ bệnh 12,5%; Và năm 2019, chúng gây hại nặng với tỷ lệ bệnh dao động 39 Kết nghiên cứu Khoa học 60 - 100% nhiều ruộng thuốc bị tiêu hủy hoàn toàn Kết điều tra Chi nhánh Viện Thuốc Bắc Giang cho thấy bệnh lây lan nhanh, từ thời điểm điều tra với tỷ lệ bệnh 10% đến giai đoạn ruộng bị nhiễm bệnh 80 - 100% diễn khoảng 20 - 25 ngày, sử dụng tất biện pháp phòng trừ vệ sinh tiêu hủy bệnh, phun phòng trừ mơi giới,… (Nguyễn Văn Chín, 2019) Để xác định ngun nhân gây bệnh, Viện Thuốc kết hợp với Trung tâm nghiên cứu Bệnh nhiệt đới - Học Viện Nông nghiệp Việt Nam tiến hành kiểm tra đồng ruộng thuốc lá, bước đầu dựa triệu chứng đốm chết hoại hình nhẫn nghi ngờ bệnh Tospovirus gây Khi kiểm tra thuốc lá, bọ trĩ xuất nhiều Các virus thuộc chi Tospovirus gây thiệt hại nghiêm trọng cho nhiều loại trồng giới Trong đó, Mỹ có loài Tospovirus gây hại Tomato spotted wilt virus (TSWV), Impatiens necrotic spot virus (INSV), Iris yellow spot virus (IYSV), Groundnut ringspot virus (GRSV) Tomato chlorotic spot virus (TCSV) (Scott Adkins et al., 2013) Tại Thái Lan (năm 2008) Trung Quốc (2014) phát virus Tospovirus gây hại cà chua Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) (Yueyan Yin et al., 2014) Tospovirus truyền đồng ruộng từ sang khác qua số lồi bọ trĩ Trong đó, ba lồi bọ trĩ, Frankliniella occidentalis (Western flower thrips), F fusca (Tobacco thrips) Thrips tabaci (onion thrips) vectơ truyền virus chủ yếu Mỹ Bọ trĩ truyền bệnh chúng hấp thụ virus giai đoạn phát triển ấu trùng Cả ấu trùng trưởng thành truyền virus cho (Scott Adkins et al., 2013) Phổ ký chủ Tospovirus thay đổi tùy theo loài gây hại Tomato spotted wilt virus (TSWV) có phổ ký chủ rộng nhất, gây hại khoảng 800 loài trồng 80 họ Trong đó, thuộc họ cà hoa cúc bị nhiễm nặng Một số bị nhiễm TSWV nặng như: Cây cà chua, ớt, rau xà lách, khoai tây, đu đủ, đậu phụng, thuốc lá,…(Scott Adkins et al., 2005) Như vậy, để phịng trừ bệnh đốm chết hoại hình nhẫn thuốc lá, việc xác định nguyên 40 BVTV - Số 6/2019 nhân gây bệnh phương thức lan truyền chúng cần thiết sản xuất thuốc Việt Nam, sở để đưa biện pháp phòng trừ bệnh hiệu an toàn VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU - Thu thập mẫu bệnh: Mẫu bệnh đánh gốc đem trồng nhà lưới Trung tâm nghiên cứu Bệnh nhiệt đới - Học Viện Nơng nghiệp Việt Nam làm nguồn bệnh chẩn đốn - AND tổng số chiết tách từ mô phương pháp CTAB (Cetyl trimethyl ammonium bromide) theo mô tả Doyle & Doyle (1987) Sau đó, sản phẩm chiết tách kiểm tra điện di gel agarose 1% - Cặp mồi phản ứng sử dụng để phát virus giải trình tự gen Tospo-F3 Tospo-R3 Nó phát đặc điểm gen N Tospovirus nhóm I II với kích thước xấp xỉ 600 bp - Giải trình tự phân tích trình tự gen: Sản phẩm PCR, RT-PCR sau tinh chiết từ gel agarose giải trình tự trực tiếp mồi PCR, RT-PCR (Tospo-F3 Tospo-R3) Trình tự gen phân tích phần mềm thơng dụng như: BLAST, CLUSTAL 2.0, MEGA7.0 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 K t chạy RT-PCR Vụ xuân 2019, Viện thuốc kết hợp với Trung tâm nghiên cứu Bệnh nhiệt đới – Học viện Nông nghiệp Việt Nam tiến hành kiểm tra bệnh gây hại thuốc Bắc Giang, dựa vào triệu chứng đốm chết hoại hình nhẫn bọ trĩ xuất (hình 1), bước đầu nghi ngờ bệnh Tospovirus gây Để xác định có phải Tospovirus hay không, năm mẫu thuốc thu thập Bắc Giang gồm BG1, BG6, BG9, BG10 BG11 với triệu chứng đốm hình nhẫn chết hoại điển hình kiểm tra RT - PCR với cặp mồi đặc hiệu Tospovirus Tospo-F3 Tospo-R3 Ngồi ra, chúng tơi kiểm tra mẫu thuốc thu thập Cao Bằng, Bắc Kạn có triệu chứng vẹo ngọn, khảm đốm chết hoại Tây Ninh triệu chứng ne (hình 2) có nhiễm Tospovirus hay khơng, mẫu kiểm tra RT Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2019 - PCR Kết kiểm tra RT - PCR bảng hình cho thấy: + Tất mẫu thuốc thu thập Bắc Giang nhiễm Tospovirus chúng dương tính với cặp mồi Tospo-F3 Tospo-R3 Ba mẫu BG1, BG9 BG11 chọn để giải trình tự gen nhằm xác định xác danh tính virus + 10 mẫu thuốc thu Tây Ninh, Cao Bằng Bắc Kạn phản ứng âm tính với cặp mồi Tospo-F3 Tospo-R3 Điều chứng tỏ mẫu bệnh không nhiễm virus thuộc chi Tospovirrus Bảng RT-PCR phát Tospovirus thuốc năm 2019 TospoF3/-R3 Giải trình tự Đốm hình nhẫn chết hoại + + 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + BG10 Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + BG11 Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + TN1 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn - TN2 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn - TN3 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn - TN4 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn - 10 TN5 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn - 11 BK6 Bắc Kạn 6/5/2019 Khảm, đốm chết hoại - 12 TN7 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn - 13 CB8 Cao Bằng 6/5/2019 Khảm, đốm chết hoại - 14 CB9 Cao Bằng 6/5/2019 Khảm, đốm chết hoại - 15 TN10 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn - TT Mẫu Địa điểm Thời gian BG1 Bắc Giang 27/2/2019 BG6 Bắc Giang BG9 Triệu chứng + + Hình A: Triệu chứng vẹo đốm ch t hoại hình nhẫn; B: Bọ trĩ gây hại thuốc Bắc Giang 41 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2019 Hình C: Triệu chứng xoăn, khảm đốm ch t hoại Cao Bằng; D: Triệu chứng ne Tây Ninh Hình RT-PCR phát Tospovirrus thuốc Danh tính mẫu đƣợc trình bày bảng M thang DNA b (GenRuler b, Fermentas) Băng sản phẩm mũi tên 3.2 Định danh Tospovirus giải trình tự gen - Phản ứng PCR giải trình tự gen Dựa kết RT - PCR, mẫu chọn để giải trình tự gen BG1, BG9 BG11 Các mẫu thực phản ứng RT - PCR với cặp mồi đặc hiệu Tospovirus Tospo-F3 Tospo-R3 (Hình 4) Hình RT-PCR để nhân đoạn gen Tospo-F3/Tospo-R3 để giải trình tự M thang DNA b (GenRuler b, Fermentas) Băng sản phẩm mũi tên 42 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2019 Sản phẩm PCR tinh chiết từ agarose gel giải trình tự trực tiếp Sau loại bỏ trình tự nhiễu đầu, trình tự mẫu BG1, BG9 BG11 thu sau: >BG1 (568 bp) CTGCTTCTTGACATTCTGaAAATAAGCAAGGGAGAAAGCTATAGGTGCCATTGCAGGGAGACT GGACAATAAAGGTAAAGGTCCACCAACACACAACATCAGCCTGGTTGCACTGGAATCGAAATTGG GAGGTACATTTAACCCATAAGCAATAACCATAGGAAGTGACATAAGTTTTGAATACATGTCTTGCT GGAGTTTTTGAGTTGTGCATTCTTCAACCATCTTTGCCATGAGAACTCTGAGTACAGCTTCAGTTC TCTTAAATGTCCATGTTTTTTCATCAGCATTATCTGAGTTTTGTGCTATCTTTTTGCCGCAAAAAAC AAACTGATTGCTCTTGCAGGCTGCAAATATCTGCTTTCTACTCTTTAGTATAGTTATTCCATTATTG AATGTAAATTTTCCGAAGATGTCCTGTTTGTTTTCATCATAAAATTTAGAAAAGCTGAATCCCGGTG TAGCTTCATCAAGCTCTATTTCAATGTCTGCTTCTCCTCCAGCTAGCAATTCCTTGATTTTCTCGTT TGACAAGTTTTTCCTAACGGTAGACATGGTGTTTACGGGA >BG9 (568 bp) CTGCTTCTTGACATTCTGaAAATAAGCAAGGGAGAAAGCTATAGGTGCCATTGCAGGGAGACT GGACAATAAAGGTAAAGGTCCACCAACACACAACATCAGCCTGGTTGCACTGGAATCGAAATTGG GAGGTACATTTAACCCATAAGCAATAACCATAGGAAGTGACATAAGTTTTGAATACATGTCTTGCT GGAGTTTTTGAGTTGTGCATTCTTCAACCATCTTTGCCATGAGAACTCTGAGTACAGCTTCAGTTC TCTTAAATGTCCATGTTTTTTCATCAGCATTATCTGAGTTTTGTGCTATCTTTTTGCCGCAAAAAAC AAACTGATTGCTCTTGCAGGCTGCAAATATCTGCTTTCTACTCTTTAGTATAGTTATTCCATTATTG AATGTAAATTTTCCGAAGATGTCCTGTTTGTTTTCATCATAAAATTTAGAAAAGCTGAATCCCGGTG TAGCTTCATCAAGCTCTATTTCAATGTCTGCTTCTCCTCCAGCTAGCAATTCCTTGATTTTCTCGTT TGACAAGTTTTTCCTAACGGTAGACATGGTGTTTACGGGA >BG11 (568 bp) CTGCTTCTTGACATTCTGaAAATAAGCAAGGGAGAAAGCTATAGGTGCCATTGCAGGGAGACT GGACAATAAAGGTAAAGGTCCACCAACACACAACATCAGCCTGGTTGCACTGGAATCGAAATTGG GAGGTACATTTAACCCATAAGCAATAACCATAGGAAGTGACATAAGTTTTGAATACATGTCTTGCT GGAGTTTTTGAGTTGTGCATTCTTCAACCATCTTTGCCATGAGAACTCTGAGTACAGCTTCAGTTC TCTTAAATGTCCATGTTTTTTCATCAGCATTATCTGAGTTTTGTGCTATCTTTTTGCCGCAAAAAAC AAACTGATTGCTCTTGCAGGCTGCAAATATCTGCTTTCTACTCTTTAGTATAGTTATTCCATTATTG AATGTAAATTTTCCGAAGATGTCCTGTTTGTTTTCATCATAAAATTTAGAAAAGCTGAATCCCGGTG TAGCTTCATCAAGCTCTATTTCAATGTCTGCTTCTCCTCCAGCTAGCAATTCCTTGATTTTCTCGTT TGACAAGTTTTTCCTAACGGTAGACATGGTGTTTACGGGA - Kết phân tích trình tự phả hệ Phân tích trình tự cho thấy mẫu BG1, BG9 BG11 đồng trình tự 100% với điều chứng tỏ chúng thuộc loài virus Sử dụng phần mềm BLAST NCBI (National Center for Biotechnology Information), chúng tơi tìm kiếm virus gần gũi Genbank mẫu virus BG1, BG9 BG11 dựa trình tự thu Kết tìm kiếm bảng cho thấy mẫu virus GenBank gần gũi mẫu BG1, BG9 BG11 Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) với mức đồng trình tự từ 93,3 đến 93,5% Tương tự, phân tích phả hệ (Hình 4) cho thấy mẫu BG1, BG9 BG11 phân nhóm chặt cụm lồi TNRV Trong cụm này, mẫu virus thuốc nằm nhánh gồm mẫu TNRV phát thấy cà chua ớt Việt Nam Các mẫu Trung tâm nghiên cứu Bệnh nhiệt đới - Học Viện nông nghiệp Việt Nam phát chưa công bố 43 Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2019 Bảng Các mẫu virus GenBank gần gũi mẫu virus BG1, BG9 BG11 tìm ki m BLAST Virus Tomato necrotic ringspot virus Tomato necrotic ringspot virus Tomato necrotic ringspot virus Tomato necrotic ringspot virus Tomato necrotic ringspot virus Viết tắt Ký chủ Quốc Gia Mã GenBank Phần trăm đoạn so sánh (%) Mức đồng trình tự (%) TNRV Cà chua Thái Lan KM887842 100 93.46 TNRV Cà chua Thái Lan FJ946835 100 93.46 TNRV Ớt Thái Lan KM887841 100 93.29 TNRV Cà chua Thái Lan HM113532 100 93.29 TNRV Cà chua Thái Lan FJ489600 100 93.29 thu Bắc Giang đánh dấu Như vậy, kết chẩn đoán xác định triệu chứng đốm chết hoại hình nhẫn thuốc Bắc Giang Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) gây Đây virus phát lần Thái Lan cà chua năm 2008 phát thấy gần cà chua ớt Việt Nam Trên thuốc lá, TNRV lần phát thấy Việt Nam Virus TNRV thuộc chi Tospovirus lan truyền đồng ruộng từ sang khác nhờ côn trùng môi giới bọ trĩ theo phương thức bền vững tái sinh (Hà Viết Cường, 2011) KẾT LUẬN Hình Cây phả hệ dựa đoạn TospoF3/Tospo-R3 Nó xây dựng phương pháp Neighbough Joining (NJ) với khoảng cách di truyền xác định dựa mơ hình thay Kimura tham số Giá trị bootrap (%) với 1000 lần lặp lại rõ gốc nhánh (chỉ thể giá trị >50%), Thanh bar thể khoảng cách di truyền Các mẫu virus thuốc 44 Kết chẩn đoán bệnh thu thập vùng trồng thuốc cho thấy mẫu đốm chết hoại hình nhẫn thu thập Bắc Giang bị nhiễm Tospovirus, loài gây hại Tomato necrotic ringspot virus (TNRV) TNRV lần phát thuốc Việt Nam Các mẫu đốm chết hoại Cao Bằng, Bắc Kạn ne Tây Ninh không nhiễm Tospovirus TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Văn Chín, 2017 - 2019 Điều tra tình hình sâu bệnh hại thuốc làm sở dự báo tư vấn biện pháp phòng trừ phục vụ sản xuất nguyên liệu tỉnh trồng thuốc Việt Nam Báo cao tổng kết đề tài – cấp Tổng công ty Thuốc Việt Nam Kết nghiên cứu Khoa học BVTV - Số 6/2019 Ha, C., Coombs, S., Revill, P., Harding, R., Vu, M., & Dale, J., 2008 Molecular characterization of begomoviruses and DNA satellites from Vietnam: additional evidence that the New World geminiviruses were present in the Old World prior to continental separation Journal of General Virology, 89(1), 312-326 Hà Viết Cường, 2011 Virus thực vật, Phytoplasma Viroid Bài giảng bệnh hại trồng – Học Viện Nông nghiệp Việt Nam Revill, P A., Ha, C V., Porchun, S C., Vu, M T., & Dale, J L., 2003 The complete nucleotide sequence of two distinct geminiviruses infecting cucurbits in Vietnam Archives of virology, 148(8), 1523-1541 Scott Adkins, Tom Zitter and Tim Momol, 2013 Tospoviruses (Family Bunyaviridae, Genus Tospovirus) Plant Pathology Department, Florida Cooperative Extension Services, Institute of Food and Agricultural Sciences, University of Florida Published October 2005 Yueyan Yin, Kuanyu Zheng, Jiahong Dong, Qi Fang, Shiping Wu, Lishuang Wang Zhongkai Zhang, 2014 Identification of a new tospovirus causing necrotic ringspot on tomato in China Virology Journal 2014 Phản biện: TS Hà Minh Thanh HIỆU LỰC PHÒNG TRỪ CỦA VI KHUẨN PHÁT HUỲNH QUANG ĐỐI VỚI NHỆN GIÉ HẠI LÚA, Steneotarsonemus spinki Smiley (Acari: Tarsonemidae) Efficacy of Fluorescent Pseudomonas Bacteria Against Panicle Rice Mite, Steneotarsonemus spinki Smiley (Acari: Tarsonemidae) Lăng Cảnh Phú , Bùi Thị Huyền Trang Nguyễn Văn Huỳnh Ngày nhận bài: 02.10.2019 Ngày chấp nhận: 29.10.2019 Abstract The research was carried out in laboratory of the Department of Plant Protection, College of Agriculture, Can Tho University in the objectives of (1) finding fluorescent Pseudomonas bacteria isolates in both stem and root zone of rice plants and weeds in order to prevent the panicle rice mite, (2) assessing the controlling effects and (3) the ability of an isolate to produce enzyme and hydrogen cyanine of fluorescent Pseudomonas bacterial isolates against panicle rice mite as a biological agent in controlling the pest in order to reduce the use of chemicals for safe environment There were 03 (Ps.KG.HĐ-08, Ps.KG.HĐ-12 and Ps.KG.GR-05) per 29 isolates in total with high effect of controlling panicle rice mite in laboratory condition (62.33% to 67.40%) at days after testing (3 DAT) All three of fluorescent Pseudomonas bacterial isolates produced protease and hydrogen cyanine, although only Ps.KG.HĐ-08 and Ps.KG.GR-05 had potential chitinase action Keywords: Biological control, panicle rice mite, fluorescent Pseudomonas bacteria * ĐẶT VẤN ĐỀ Trên giới, loài nhện gié Steneotarsonemus Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông nghiệp, Trường Đại học Cần Thơ Học viên cao học ngành Bảo vệ thực vật, Trường Đại học Cần Thơ spinki Smiley (Acari: Tarsonemidae) loài dịch hại gây hại nguy hiểm Nam Mỹ Trung Quốc (Navia et al., 2005; Xu et al., 2001) làm giảm 30-90% suất lúa Trung Quốc (Xu et al., 2001) tới 70% Cu Ba (Navia et al., 2005 dẫn) Ở nước ta, loài nhện gié Ngơ Đình Hồ (1992), Nguyễn Văn Đĩnh (1994) ghi nhận 45 ... nhẫn chết hoại + Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + BG10 Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + BG11 Bắc Giang 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + TN1 Tây Ninh 6/5/2019 Xoăn -... trừ bệnh đốm chết hoại hình nhẫn thuốc lá, việc xác định nguyên 40 BVTV - Số 6/2019 nhân gây bệnh phương thức lan truyền chúng cần thiết sản xuất thuốc Việt Nam, sở để đưa biện pháp phòng trừ bệnh. .. chứng tỏ mẫu bệnh không nhiễm virus thuộc chi Tospovirrus Bảng RT-PCR phát Tospovirus thuốc năm 2019 TospoF3/-R3 Giải trình tự Đốm hình nhẫn chết hoại + + 27/2/2019 Đốm hình nhẫn chết hoại + Bắc