Trong nghiên cứu này, khuôn định dạng ứng dụng trong kỹ thuật mô xương được chế tạo từ vật liệu vô cơ hydroxyapatit trên nền chitosan. Sự kết hợp giữa hydroxyapatit và chitosan sẽ làm tăng khả năng tương thích sinh học của khuôn định dạng. Khuôn định dạng tổng hợp bằng phương pháp đổ dung môi rửa hạt. Hoạt tính sinh học được đánh giá thông qua các thí nghiệm in vitro trong dung dịch giả plasma (SBF).
Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 140 (2020) 056-060 Tổng hợp thử hoạt tính sinh học khn định dạng hydroxyapatit chitosan Synthesis and Evaluation of the Biological Activity of Hydroxyapatite/Chitosan-based Scaffold Trần Thanh Hoài, Nguyễn Kim Ngà * Trường Đại Học Bách khoa Hà Nội – Số 1, Đại Cồ Việt, Hai Bà Trưng, Hà Nội Đến tòa soạn: 17-3-2019; chấp nhận đăng: 20-01-2020 Tóm tắt Trong nghiên cứu này, khuôn định dạng ứng dụng kỹ thuật mô xương chế tạo từ vật liệu vô hydroxyapatit chitosan Sự kết hợp hydroxyapatit chitosan làm tăng khả tương thích sinh học khn định dạng Khn định dạng tổng hợp phương pháp đổ dung môi rửa hạt Hoạt tính sinh học đánh giá thơng qua thí nghiệm in vitro dung dịch giả plasma (SBF) Kết nghiên cứu cho thấy khuôn định dạng HAp/chitosan có cấu trúc lỗ xốp liên thơng, với kích thước lỗ trung bình khoảng 200 µm độ xốp khoảng 79 %, tạo lớp khoáng apatit sau 10 ngày ngâm dung dịch SBF Tuy nhiên, khuôn định dạng chitosan sau 10 ngày ngâm không tạo lớp khống apatit Kết cho thấy, khn định dạng HAp/chitosan có khả tương thích sinh học tốt khn định dạng chitosan Từ khóa: khn định dạng, chitosan, apatit, SBF Abstract In this study, porous scaffolds were fabricated using inorganic material-hydroxyapatite and chitosan for bone-tissue engineering The combination of hydroxyapatite and chitosan may result in increasing biocompatibility of the scaffolds The scaffolds were prepared by solvent casting and paticulate leaching method Bioactivity of the scaffolds was evaluated through in vitro experiments by soaking scaffold samples in simulated body fluid (SBF) The scaffolds obtained were highly porous and interconnected with a mean pore size of around 200 µm and porosity about 79 % The apatite-mineral layer was produced on the HAp/chitosan after 10 days of soaking in SBF, however, it was not observed on the chitosan scaffold after 10 days soaking The results revealed that the HAp/chitosan scaffold showed better bioactivity than the chitosan scaffold Keywords: scaffold, chitosan, apatite, SBF bào [1] Bên cạnh đó, việc lựa chọn polyme kết hợp với HAp đóng vai trò quan trọng đến tính tương thích sinh học khn định dạng Mở đầu1 Khuôn định dạng (scaffold) khuôn tạm thời để tế bào bám dính, sinh trưởng, phát triển hình thành khung ngoại bào trình hình thành cấu trúc mô ứng dụng cấy ghép điều trị tổn thương xương Khn định dạng chế tạo từ vật liệu polyme phân hủy sinh học, vật liệu vơ có hoạt tính sinh học composite Vật liệu composite với liên kết hydroxyapatit (HAp) polyme, xem phương pháp hiệu để tăng cường hoạt tính sinh học tính chất học khn định dạng HAp có thành phần tương tự thành phần khống xương nên có tính tương thích sinh học cao Hơn nữa, bị phân hủy, HAp giải phóng ion canxi photpho có lợi cho việc hình thành phát triển xương Các nghiên cứu trước công bố kết khuôn định dạng composite với có mặt nano HAp làm tăng khả tương thích sinh học khn định dạng với tế Chitosan (Cs) polysacarit mạch thẳng cấu tạo từ D-glucosamine N-acetyl-D-glucosamin có cấu trúc gần giống với cấu trúc protein bao xung quanh mô quan nên có khả tương thích tốt với tế bào [2] Hơn nữa, Chitosan nghiên cứu ứng dụng nhiều lĩnh vực y sinh như: chất dẫn thuốc, thành phần da nhân tạo Các nghiên cứu cho thấy chitosan chất khơng độc hại, gây phản ứng miễn dịch, có tính kháng khuẩn, có khả thúc đẩy q trình chữa lành mơ mềm, mơ cứng có khả phân hủy sinh học [3] Với ưu điểm nêu trên, nghiên cứu lựa chọn chitosan làm chất tổng hợp khuôn định dạng Khuôn định dạng dùng kỹ thuật mơ nói chung cần có ba u cầu sau: phải có khơng gian xác định để mơ tái sinh; phải có tính chất phù hợp để đảm nhiệm chức phần tổn thương q trình mơ tái tạo cho * Địa liên hệ: Tel.: (+84) 913.097.079 Email: nga.nguyenkim@hust.edu.vn 56 Tạp chí Khoa học Công nghệ 140 (2020) 056-060 phép mô phát triển dễ dàng khuôn tế bào cấy lên, protein hay tín hiệu kích thích tạo xương [4] Cấu trúc 3D khuôn định dạng phải có độ xốp cao, lỗ xốp có độ liên thơng cao Các nghiên cứu cho thấy với kích thước lỗ tối thiểu 100 µm thích hợp cho tế bào di chuyển trình trao đổi chất tế bào với môi trường [5] [6] Cấu trúc vi mô khuôn định dạng yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hoạt tinh sinh học khuôn định dạng Các đặc điểm cấu trúc khuôn định dạng phụ thuộc vào phương pháp chế tạo Khuôn định dạng tổng hợp theo phương pháp đổ dung môi rửa hạt thực nghiên cứu trước [10] Phương pháp thực cách hòa tan 0,48g Cs lọ thủy tinh chứa 24 ml dung dịch CH3COOH 3% máy khuấy từ, điều chỉnh tốc độ khuấy 450 vòng/phút, nhiệt độ phòng, Cân 0,096 g HAp ống falcon dung tích 15 ml, thêm vào 1,5 ml nước deion siêu âm Sau dung dịch Cs khuấy trộn 2-3 giờ, nhỏ từ từ huyền phù HAp vào dung dịch Cs, tiếp tục khuấy trộn hỗn hợp Sau giờ, hỗn hợp trộn với 16 g NaCl (kích thước hạt muối 405- 450 µm), hỗn hợp Cs/HAp muối đổ đĩa thủy tinh kích thước 5,5 cm Dùng que khuấy đảo trộn cho hạt muối bao phủ lớp gel Cs Hỗn hợp thu được, để tủ hút giờ, sau sấy o 60 C 36 Sau sấy, đĩa vật liệu ngâm dung dịch NaOH 10% 30 phút, sau rửa lại nhiều lần nước cất lần Sau đó, sản phẩm đem sấy khô, cuối thu miếng vật liệu xốp HAp/Cs Hiện nay, giới có số nghiên cứu chế tạo khn định dạng HAp/CS với nhiều phương pháp khác Jayachandran Venkatesan cộng chế tạo khuôn định dạng HAp/CS phương pháp đông lạnh Kết tạo mẫu khn định dạng có kích thước lỗ xốp khoảng 200 nm [7], độ xốp 70% Trong đó, Chia-Cherng Yu cộng dùng phương pháp electrospining để chế tạo khuôn định dạng HAp/Cs [8] Phương pháp có ưu điểm tạo khn định dạng có độ xốp cao khó điều chỉnh kích thước lỗ hình dạng khn định dạng Trong nước, có số nghiên cứu chế tạo composite HAp/Cs [9], nghiên cứu chế tạo vật liệu dạng 2D ứng dụng kỹ thuật y sinh dạng 3D chưa có nghiên cứu công bố Từ tài liệu tổng hợp thấy nghiên cứu chế tạo khuôn định dạng 3D HAp/Cs sử dụng nhiểu phương pháp khác nhau, phương pháp có ưu nhược điểm riêng Trong nghiên cứu này, sử dụng phương pháp đổ dung môi rửa hạt Phương pháp đổ dung mơi rửa hạt có ưu điểm đơn giản hiệu cao, dễ dàng tạo hình cho khn định dạng dễ kiểm sốt độ xốp, kích thước lỗ khn định dạng kích thước số lượng hạt tạo lỗ Phương pháp thực thành công nghiên cứu chế tạo khuôn định dạng HAp/PDLLA công bố [10] Vì vậy, chúng tơi tiếp tục sử dụng phương pháp đổ dung môi rửa hạt với hạt tạo lỗ NaCl để chế tạo khuôn định dạng 3D composite HAp/Chitosan 2.3 Phương pháp nghiên cứu hình thái học đặc trưng khuôn định dạng Giản đồ XRD đo máy Siemens D5005 sử dụng xạ CuKα (λ= 0,15406 nm), góc quay từ 10-70o Phổ FT-IR đo máy Impact-410, Nicolet-Hoa Kỳ theo phương pháp ép viên KBr Hình thái học mẫu tổng hợp xác định thiết bị hiển vi điện tử truyền qua SEM (S4800, Hitachi, Nhật Bản) Kích thước lỗ khn định dạng đo phần mềm ImageJ ảnh SEM Độ xốp mẫu đo theo phương pháp bão hòa chất lỏng [12] Chất lỏng sử dụng nước cất Mẫu sấy khô đến khối lượng không đổi cân khối lượng Wi Mẫu ngâm vào ống nước tích V1 Nước hút vào lỗ xốp đến tất lỗ bão hòa nước Tổng thể tích nước nước bão hòa khn định dạng V2 Khi thể tích đặc khn định dạng HAp/Cs (V2 – V1) Sau đó, khn định dạng bão hòa nước nhấc khỏi ống nước thể tích nước lại ống V3 Thể tích tổng cộng khn định dạng V = (V2 – V1) + (V1 – V3) = (V2 – V3) Khối lượng khuôn định dạng trước sau ngâm nước Wi Wf Thể tích lỗ khn định dạng (Wf – Wi)/ Độ xốp khn định dạng tính theo cơng thức sau: Thực nghiệm 2.1 Hóa chất Các hóa chất sử dụng hóa chất Merck: CH3COOH, NaCl, CaCl2.2H2O, Na2HPO4.2H2O, NaOH, NaHCO3, KCl, K2HPO4.3H2O, MgCl2.6H2O, Na2SO4, CH2(OH)3CNH2, Chitosan Bột nano HAp (dtb = 28 nm ± 5, ltb = 120 nm ± 32, tỉ lệ Ca/P = 1,66, tỷ lệ bề mặt = 4,29) Bột HAp tổng hợp theo [11] 2.2 Chế tạo HAp/Chitosan khuôn định dạng Độ xốp = Các kết đo lần lấy giá trị trung bình Sử dụng Anova để phân tích thống kê với giá trị P < 0,05 giá trị có khác biệt mẫu composite 57 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 140 (2020) 056-060 FTIR XRD cho phép khẳng định pha Cs HAp tồn mối tương tác phân tử, giúp cho pha HAp phân tán pha Cs 2.4 Thử nghiệm khả tạo apatit khuôn định dạng HAp/Chitosan Dung dịch giả plasma người SBF chuẩn bị theo tài liệu [13] Các hóa chất bổ sung theo quy trình để đảm bảo dung dịch cuối thu không bị kết tủa pH đạt 7,4 Các mẫu khuôn định dạng HAp/Cs cắt nhỏ với đường kính 10 mm ngâm 15 ml dung dịch SBF nhiệt độ 37oC Sau 3, 6, 10 ngày, mẫu lấy tráng rửa nhiều lần nước khử ion sấy khô nhiệt độ 40-45oC Mẫu sau sấy khô quan sát qua hiển vi điện tử quét (SEM) để xác định hình thái lớp apatit tạo thành Tỉ lệ Ca/P lớp apatit hình thành bề mặt khn định dạng HAp/Cs phân tích thiết bị đo phổ tán xạ lượng tia X (EDX) Lượng Ca2+ bám bề mặt khuôn định dạng đánh giá thông qua thay đổi nồng độ Ca2+ dung dịch SBF Hình Phổ FT-IR mẫu HAp, (Cs), HAp/Cs Kết thảo luận 3.1 Kết phân tích hình thái học đặc trưng khuôn định dạng Sự tương tác hai loại vật liệu chitosan pha tinh thể HAp việc tổng hợp khuôn định dạng đánh giá phổ FT-IR (Hình 1) giản đồ XRD (Hình 2) mẫu HAp, Cs HAp/Cs Trên phổ hồng ngoại Cs có dải hấp thụ nằm vùng 3200÷3500 cm-1 đặc trưng cho dao động hóa trị nhóm –OH liên hợp nhóm NH2 Hai đỉnh hấp thụ 2930 cm-1, 2860 cm-1 đặc trưng cho dao động hóa trị bất đối xứng đối xứng nhóm -CH2, đỉnh hấp thụ 1660 cm-1 đặc trưng cho dao động biến dạng nhóm amin bậc –NH2 Trên phổ hồng ngoại HAp có dải hấp thụ vùng 3400÷3600 cm -1 đặc trưng cho nhóm –OH Đặc biệt hai đỉnh bật 1090 cm1 629 cm-1 thể dao động hóa trị dao động biến dạng nhóm PO43- Phổ hồng ngoại Cs/HAp thể đầy đủ dải phổ, đỉnh nhóm chức quan trọng hai chất nguyên liệu ban đầu (dải 3200÷3600 cm-1 nhóm OH NH2, đỉnh 2935 cm-1 2855 cm-1 nhóm -CH2, đỉnh 1670 cm-1 nhóm NH2 (của pha CS), đỉnh 1050 cm-1 646 cm-1 nhóm PO43- HAp [14] Hình Giản đồ XRD mẫu Cs, HAp/Cs, HAp a b c d Hình Ảnh SEM mẫu khn định dạng tạo thành: a, b – mẫu Cs, c,d-mẫu HAp/Cs Trên giản đồ XRD mẫu Cs cho thấy xuất đỉnh góc quay 2θ = 20°, đặc trưng cho pha vơ định hình Cs Trên giản đồ mẫu bột HAp thấy xuất đỉnh góc 2θ =25.9°, 31.55°, 32.15°,32.62°, 39.4° đặc trưng cho tinh thể HAp [11] Trên giản đồ XRD khn định dạng HAp/Cs, ngồi đỉnh rộng xuất góc 2θ =20o, tương ứng với CS thấy đỉnh góc 2θ = 25.99°, 31.62°, 32.62°, 32.68° 39.43°, tương ứng với pha tinh thể HAp (các đỉnh dịch phía giá trị cao so với mẫu bột HAp) Từ kết Kết phân tích giản đồ XRD cho phép khẳng định kết IR tồn pha tinh thể HAP khuôn định dạng composit HAp/Cs Hơn nữa, hai loại vật liệu Cs HAp hòa trộn khơng xảy phản ứng hóa học mà phân tán vào giữ nguyên đặc tính lý hóa Hình thái học, cấu trúc lỗ xốp khuôn định dạng Cs HAp/Cs tổng hợp thể 58 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 140 (2020) 056-060 hình 3.Các ảnh SEM cho thấy, khuôn định dạng Cs HAp/Cs tổng hợp có cấu trúc xốp, kích thước lỗ xốp lớn khả liên thông lỗ xốp cao Các kết đo đạc tính tốn phần mềm ImageJ cho thấy, kích thước lỗ xốp khn định dạng Cs đạt 209 ± 60 µm (Hình 3: a b), khuôn định dạng HAp/Cs đạt 196 ± 30 µm (Hình 3: c d) Đây điều kiện thuận lợi cho việc thực trao đổi chất việc di chuyển tế bào vào vật liệu q trình cấy ghép, kích thước tế bào nhân thực vào khoảng 10÷100 µm Tuy nhiên, hai mẫu vật liệu, kích thước hình dạng lỗ xốp biến động nhiều Chưa đạt đồng mong muốn thành lỗ xốp thứ cấp cao Khuôn định dạng HAp/Cs bổ sung pha phân tán HAp làm tăng độ bền học, giảm độ biến dạng học tác nhân bên tác động đến vật liệu 3.2 Kết thử nghiệm hình thành apatit khn định dạng HAp/chitosan Tính chất quan trọng vật liệu sinh học khả liên kết với tế bào sống thông qua lớp apatit giống với xương bề mặt vật liệu Vì vậy, hoạt tính sinh học vật liệu đánh giá thơng qua thí nghiệm ngâm vật liệu dung dịch SBF Quan sát ảnh SEM mẫu sau khoảng thời gian ngâm dung dịch SBF cho thấy, khuôn định dạng Cs không thấy xuất apatit tất mốc thời gian ngày, ngày 10 ngày (Hình 4: a, b) Với khn định dạng Cs/HAp, mốc ngày khó để tìm vùng phát triển khoáng apatit, điểm khoáng mọc nằm rải rác Ở mốc ngày, khoáng apatit phát triển lớn hơn, hình thành nên đám lớn bắt đầu liên kết lại với Ở mốc thời gian 10 ngày (Hình 4: c,d), dễ dàng tìm thấy khống apatit kích thước chúng đạt lớn Điều phản ánh theo suy giảm nồng độ Ca2+ dung dịch SBF q trình ni cấy (Bảng 2) Mặt khác, độ phóng đại lớn cho thấy thành , vách lỗ xốp lớn hình thành nên lỗ xốp thứ cấp có kích thước nhỏ hơn, đạt mức 3,5 ± 1.6 µm Có thể giải thích hình thành lỗ xốp thứ cấp nhờ vào bay dung môi trình sấy Sự xuất lỗ xốp thứ cấp làm tăng diện tích bề mặt khn định dạng, từ làm tăng khả trao đổi chất khả bám dính tế bào khống ni cấy, giúp cải thiện tính tương thích sinh học vật liệu [15] Bảng Độ xốp khuôn định dạng Cs HAp/Cs Độ xốp trung bình (%) 78,96 ± 3,18 84,32 ± 3,93 Mẫu khuôn định dạng HAp/Cs Cs a c Bảng Nồng độ Ca2+ dung dịch SBF sau ngâm Mẫu Cs HAp/Cs b Nồng độ Ca2+ (mM) 10 ngày 1,42± 0,04 1,40 ± 0,02 1,30± 0,02 1,28 ± 0,01 0,94 ± 0,01 0,92± 0,09 Ở độ phóng đại cao hơn, hình dạng apatit thể rõ ràng với cánh xếp lại với thành bông, đồng thời có cấu trúc xốp giống đám san hơ, cấu trúc thành phần khống xương tự nhiên Kết đo tính tốn phần mềm ImageJ cho thấy kích thước bơng apatit 1,8 ± 0.4 µm Kích thước cánh apatite đạt 190 ± 31 nm Từ việc phân tích ảnh SEM, thấy vật liệu đơn pha chitosan khơng có khă hình thành khống apatit Ngược lại, vật liệu HAp/Cs thể khả dẫn mọc khống apatit Có thể giải thích điều thơng qua chế kết tủa tạo apatit Thông thường, hợp chất kết tủa, tích nồng độ ion chất dung dịch phải lớn tích số tan hợp chất Trong trường hợp này, tích số tan HAp 2,12.10-118, tích số tan nhỏ tích số ion Ca2+ PO43- có dung dịch Tuy nhiên, trạng thái bình thường, HAp có cấu trúc phức tạp nên ion tự tổ chức xếp lại để tạo thành tinh thể HAp Nhưng khả dẫn tạo khống tốt d Hình Ảnh SEM mẫu Cs (a, b) HAp/Cs (c, d) sau 10 ngày ngâm dung dịch SBF Kết đo thể độ xốp hai mẫu vật liệu tương đối cao Cụ thể, khuôn định dạng Cs có độ xốp đạt 84,32 ± 3.93 (%), khn định dạng HAp/Cs có độ xốp đạt 78.96 ± 3.18 (%) Nguyên nhân việc độ xốp mẫu Cs cao so với HAp/Cs vật liệu đơn pha chitosan có độ bền học hơn, trình sấy dễ bị co kéo lỗ xốp rộng hơn, đặc biệt khả hình 59 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 140 (2020) 056-060 HAp composit HAp/Cs, khoáng hình thành.Trong dung dịch SBF tồn ion có khả kết tủa tạo khơng HAp Ca10(PO4)6(OH)2 mà tạo loại khoáng khác Để xác định thành phần nguyên tố có khống apatit phát triển vật liệu q trình ni cấy xác định xem khống có hydroxyapatit hay khơng, mẫu vật liệu HAp/Cs sau nuôi cấy 10 ngày phân tích EDX [2] [3] [4] Kết phân tích EDX cho thấy, mẫu vật liệu chứa đầy đủ thành phần nguyên tố chủ yếu Ca, O, P Sự xuất thành phần nguyên tố Na, Cl q trình rửa vật liệu tồn đọng Thành phần C có Cs Mặt khác, tỷ lệ Ca/P = 1,52 Tỷ lệ gần với tỷ lệ Ca/P = 1,6 chứng tỏ khoáng mọc vật liệu hydroxyapatit [5] [6] [7] [8] [9] Hình Giản đồ thành phần nguyên tố EDX mẫu HAp/Cs sau 10 ngày ngâm dung dịch SBF [10] Kết luận Khuôn định dạng HAp/Cs tổng hợp thành công phương pháp đổ dung môi rửa hạt Khuôn định dạng tổng hợp phương pháp có độ xốp 83%, liên thơng lỗ cao kích thước lỗ phù hợp cho phát triển tế bào (khoảng 200 µm) Kết thử hoạt tính cho thấy mẫu khn định dạng HAp/Cs có hoạt tính sinh học tốt khn định dạng Cs Do mẫu HAp/Cs có hình thành lớp khoáng apatit ngâm dung dịch giả plasma người Trong mẫu khn định dạng Cs khơng có hình thành lớp khống [11] [12] [13] Lời cảm ơn [14] Các tác giả cảm ơn Quỹ Phát triển Khoa học Công nghệ Quốc gia hỗ trợ kinh phí cho nghiên cứu thơng qua Đề tài 104.03-2015.25 [15] Tài liệu tham khảo [1] T.T Hoai, N.K Nga, L.T Giang, T.Q Huy, P.N.M Tuan, B.T.T Binh Hydrothermal Synthesis of 60 Hydroxyapatite Nanorods for Rapid Formation of Bone-Like Mineralization Journal of Electronic Materials 46(8) (2017) 5064-5072 Rinaudo, M., Chitin and chitosan: properties and applications Progress in polymer science 31(2006) 603-632 Kumar, M.R., et al., Chitosan chemistry and pharmaceutical perspectives Chemical reviews 104 (2004) 6017-6084 Karp, J.M., M.S Shoichet, and J.E Davies, Bone formation on two‐ dimensional poly (DL‐ lactide‐ co‐ glycolide)(PLGA) films and three‐ dimensional PLGA tissue engineering scaffolds in vitro Journal of Biomedical Materials Research Part A: An Official Journal of The Society for Biomaterials, The Japanese Society for Biomaterials, and The Australian Society for Biomaterials and the Korean Society for Biomaterials 64 (2003) 388-396 Mano, J and R Reis, Osteochondral defects: present situation and tissue engineering approaches Journal of tissue engineering and regenerative medicine (2007) 261-273 Mikos, A.G and J.S Temenoff, Formation of highly porous biodegradable scaffolds for tissue engineering Electronic Journal of Biotechnology 3(2)2000 23-24 Venkatesan, J., et al., Preparation and characterization of carbon nanotube-grafted-chitosan–natural hydroxyapatite composite for bone tissue engineering Carbohydrate Polymers 83(2) (2011) 569-577 Yu, C.-C., et al., Electrospun scaffolds composing of alginate, chitosan, collagen and hydroxyapatite for applying in bone tissue engineering Materials Letters 93 (2013) 133-136 Vương, B.X., Tổng hợp đặc trưng vật liệu composite hydroxyapatite/chitosan ứng dụng kỹ thuật y sinh Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Tự nhiên Công nghệ Tập 34(Số 1) (2018) 9-15 Nga, N.K., T.T Hoai, and P.H Viet, Biomimetic scaffolds based on hydroxyapatite nanorod/poly (D, L) lactic acid with their corresponding apatiteforming capability and biocompatibility for bonetissue engineering Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 128 (2015) 506-514 Nga, N.K., et al., Surfactant-assisted size control of hydroxyapatite nanorods for bone tissue engineering Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 116 (2014) 666-673 Kothapalli, C.R., M.T Shaw, and M Wei, Biodegradable HA-PLA 3-D porous scaffolds: effect of nano-sized filler content on scaffold properties Acta biomaterialia 1(6) (2005) 653-662 Kokubo, T and H Takadama, How useful is SBF in predicting in vivo bone bioactivity? Biomaterials, (2006) 2907-2915 Koutsopoulos, S., Synthesis and characterization of hydroxyapatite crystals Journal of Biomedical Materials Research 62(4)(2002) 600-612 Hoai, T.T and N.K Nga, Effect of pore architecture on osteoblast adhesion and proliferation on hydroxyapatite/poly (D, L) lactic acid-based bone scaffolds Journal of the Iranian Chemical Society 15 (2018) 1663-1671 Tạp chí Khoa học Cơng nghệ 140 (2020) 056-060 61 ... Thể tích tổng cộng khuôn định dạng V = (V2 – V1) + (V1 – V3) = (V2 – V3) Khối lượng khuôn định dạng trước sau ngâm nước Wi Wf Thể tích lỗ khn định dạng (Wf – Wi)/ Độ xốp khuôn định dạng tính theo... Khn định dạng tổng hợp phương pháp có độ xốp 83%, liên thông lỗ cao kích thước lỗ phù hợp cho phát triển tế bào (khoảng 200 µm) Kết thử hoạt tính cho thấy mẫu khn định dạng HAp/Cs có hoạt tính sinh. .. Khuôn định dạng HAp/Cs bổ sung pha phân tán HAp làm tăng độ bền học, giảm độ biến dạng học tác nhân bên tác động đến vật liệu 3.2 Kết thử nghiệm hình thành apatit khn định dạng HAp /chitosan Tính