Dioxin là nhóm chất độc hóa học gồm 210 đồng phân, gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe con người với các bệnh như ung thư, các bệnh di truyền, dị tật bẩm sinh,... Trong đó, đồng phân 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) được xác định có hệ số độc cao nhất.
Nghiên cứu khoa học cơng nghệ NGHIÊN CỨU THĂM DỊ PHÁT HIỆN DIOXIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SANDWICH ELISA Trần Thị Thanh Quỳnh*, Nguyễn Khánh Hồng Việt, Nguyễn Thị Nhung, Tơ Lan Anh, Nghiêm Ngọc Hoa, Bùi Trung Hiếu Tóm tắt: Dioxin nhóm chất độc hóa học gồm 210 đồng phân, gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người với bệnh ung thư, bệnh di truyền, dị tật bẩm sinh, Trong đó, đồng phân 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) xác định có hệ số độc cao Trong nghiên cứu này, sử dụng phương pháp Sandwich ELISA với thụ thể Aryl Hydrocarbon từ người kháng thể đơn dòng đặc hiệu để phát TCDD pha loãng DMSO 1% Kết bước đầu cho thấy, xét nghiệm miễn dịch có khả phát TCDD tinh khiết với giới hạn phát pg/ml (1 ppt), độ nhạy 97,14% độ đặc hiệu 91,67% Từ khóa: Phát dioxin; Thụ thể Aryl Hydrocarbon; Sandwich ELISA; 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin MỞ ĐẦU Dioxin chất độc hóa học gây ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe người môi trường sinh thái Đặc biệt, Việt Nam, sau chiến tranh với quân đội Mỹ, chất độc nhiễm vào thể nhiều người gây loạt bệnh dị tật bẩm sinh hệ [10] Nhìn chung, nồng độ dioxin mẫu mơi trường Việt Nam trở mức thấp nằm ngưỡng an toàn Tuy nhiên, số sân bay quân nơi chứa, trung chuyển, tải nạp hóa chất chiến dịch phun rải chất diệt cỏ có nồng độ dioxin mẫu bùn, đất loài thủy sinh mức cao, nhiều khu vực vượt 1000 ppt chí lên đến 262.000 ppt [10] Bên cạnh đó, số hoạt động sản xuất cơng nghiệp tạo khí thải có chứa dioxin hợp chất tương tự dioxin [4] Dioxin hợp chất tương tự dioxin nghiên cứu phát nhiều phương pháp khác Trong đó, phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ với độ phân giải cao (HRGC/HRMS) phương pháp truyền thống, tiêu biểu phổ biến sử dụng rộng rãi phòng thí nghiệm Việt Nam (Trung tâm nhiệt đới Việt Nga ) giới (CDC, WHO ), với giới hạn phát theo phương pháp tiêu chuẩn EPA 1613 4,4 pg 2,3,7,8-TCDD/L [9] Ưu điểm phương pháp có tính đặc trưng mẫu hình dạng cấu trúc, tính tốn đương lượng chất độc theo tiêu chuẩn quốc tế Nhược điểm tốn nhiều thời gian (khoảng tuần) chi phí cao Tất mẫu phải chiết dung môi hữu làm Quá trình làm phức tạp diện chất gây nhiễu khơng mong muốn với nồng độ cao nhiều chất cần phân tích làm tín hiệu dioxin cho kết sai thiết bị phân tích Trong thập kỷ gần đây, số phương pháp phát triển thay bao gồm phân tích truyền thống phương pháp dấu ấn sinh học thể, xét nghiệm sinh học thể, xét nghiệm miễn dịch, cảm biến sinh học Mỗi phương pháp đạt hiệu định việc phân tích dioxin có ưu nhược điểm riêng Trong đó, xét nghiệm miễn dịch dùng đánh dấu phóng xạ (RIA), huỳnh quang (FI) hay enzyme (ELISA) xem xét số phương pháp thành cơng [5, 6] Ưu điểm xét nghiệm miễn dịch đơn giản, nhanh chi phí thấp Trước đây, xét nghiệm ELISA chưa sử dụng rộng rãi độ nhạy cao phương pháp khối phổ tầm quan trọng trình làm Tuy nhiên, ngày nay, với phát triển kháng thể đa dòng xét nghiệm sử dụng dung môi phù hợp (methanol DMSO) để tăng độ nhạy, phương pháp trở nên phổ biến [10] Hiện nay, giới có số nghiên cứu phát dioxin/các hợp chất tương tự dioxin phương pháp ELISA như: kit hãng Biosense (code D40000401) phát Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số 66, - 2020 123 Hóa học & Kỹ thuật mơi trường TCDD từ 1-64 pg/giếng, hay nghiên cứu khác có giới hạn phát pg/ml [1] Phương pháp miễn dịch cơng cụ giám sát bổ sung để đánh giá mức độ ô nhiễm dioxin trầm tích đất sử dụng phân tích để sàng lọc phân loại mẫu trước phân tích phương pháp HRGC/HRMS [1] Trong nghiên cứu này, việc thăm dò phát thiện dioxin phương pháp Sandwich ELISA thực NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu hóa chất - Nguyên vật liệu: Đĩa 96 giếng hãng Beckman Coulter, ống eppendorf 1,5 ml, ống falcon 50 ml, trang than hoạt tính chống độc 3B, đầu côn pipet loại (1 ml, 200 µl, 10 µl), găng tay cao su - Hóa chất: 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-ρ-dioxin (TCDD) hãng Sigma, Aryl Hydrocarbon Receptor (AhR_ABIN 1525356) kháng thể đơn dòng kháng dioxin từ chuột (anti-Dioxin antibody_ABIN 934378) hãng Antibody-online, kháng thể đa dòng cộng hợp HRP từ dê (Goat-antimouse IgG h&HRP_ab6789) hãng Abcam, poly-Llysine 3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine hãng Sigma, Bovine serum albumin (BSA) hãng Biobasic hóa chất thường dùng nghiên cứu sinh học phân tử hãng Sigma, Mecrk, Thermo Scientific, 2.2 Thiết bị Tủ ấm Hãng Memmert (Đức), hệ thống ELISA (Ý), máy vortex (Mỹ), máy short spin Hãng Hermle (Mỹ), tủ hút Hãng Bestlab (Mỹ), máy khuấy từ gia nhiệt Hãng Cole Palmer (Mỹ) 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Chuẩn bị mẫu dioxin kháng thể Dung dịch dioxin (TCDD) ban đầu có nồng độ 10 µg/ml toluene pha loãng với nồng độ từ pg/ml -1000 pg/ml DMSO 1%, BSA 1% Thụ thể AhR pha lỗng nồng độ µg/ml, µg/ml, µg/ml 10 µg/ml đệm Tris 20 mM, NaCl 150 mM, pH Kháng thể đơn dòng kháng dioxin pha lỗng nồng độ µg/ml, µg/ml, µg/ml 10 µg/ml đệm PBS 1X, BSA 1% Kháng thể đa dòng cộng hợp HRP pha lỗng nồng độ 0,4 µg/ml đệm 1X, BSA 1% 2.3.2 Đánh giá khả bắt cặp kháng thể đơn dòng kháng dioxin từ chuột với kháng thể đa dòng cộng hợp HRP từ dê 100 µl poly-L-Lysine 0,01% nhỏ vào giếng, ủ 37oC Sau đó, rửa 200 µl đệm rửa (PBS 0,01 M, pH 7,4; tween 20 0,05%) cho 100 µl kháng thể đơn dòng kháng dioxin (kháng thể sơ cấp) ủ oC qua đêm Tiếp theo, 200 µl BSA 1% bổ sung, ủ 37oC 100 µl kháng thể đa dòng cộng hợp HRP (kháng thể thứ cấp) 0,4 µg/ml cho vào giếng, ủ 37 oC Sau bước bổ sung kháng thể rửa giếng 200 µl đệm rửa, 5-10 lần Cuối cùng, bổ sung 50 µl chất TMB (3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine), ủ 60 phút 37 oC bóng tối từ 30 phút đến giờ, bổ sung tiếp 50 µl H2SO4 1N Enzyme HRP (Horse Radish Peroxidase) gắn với kháng thể thứ cấp xúc tác thủy phân chất tạo thành sản phẩm có màu xanh, sau bổ sung axit chuyển thành màu vàng, đo độ hấp thụ bước sóng 450 nm phân tích kết Lượng sản phẩm màu vàng tạo thành sau phản ứng thể khả bắt cặp kháng thể 2.3.3 Phát dioxin phương pháp Sandwich ELISA 100 µl poly-L-Lysine 0,01% nhỏ vào giếng, ủ 37oC Sau đó, rửa 124 T T T Quỳnh, …, B T Hiếu, “Nghiên cứu thăm dò … phương pháp Sandwich ELISA.” Nghiên cứu khoa học cơng nghệ 200 µl đệm rửa (PBS 0,01 M, pH 7,4; tween 20 0,05%) cho 100 µl protein AhR ủ oC qua đêm Tiếp theo, 200 µl BSA 1% bổ sung, ủ 37oC 100 µl dioxin với nồng độ khác bổ sung vào giếng, ủ 37oC Kháng thể sơ cấp kháng dioxin kháng thể thứ cấp cộng hợp HRP bổ sung vào giếng, bước cách đọc kết tương tự phương pháp mục 2.3.2 (hình 1) Hình Mơ chế phát dioxin phương pháp Sanwich ELISA 2.3.4 Xác định giới hạn phát xét nghiệm Mẫu dioxin với nồng độ khác từ 0-1000 pg/ml phân tích phương pháp Sanwich ELISA Nồng độ dioxin nhỏ mà xét nghiệm phát giới hạn phát xét nghiệm Thí nghiệm lặp lại 03 lần 2.3.5 Đánh giá độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm Độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm xác định tỷ lệ phần trăm dương tính thật tỷ lệ phần trăm âm tính thật tổng số xét nghiệm có cỡ mẫu lớn Cụ thể, độ nhạy xác định phân tích 36 mẫu có mặt dioxin với nồng độ giới hạn phát tính tỷ lệ phần trăm mẫu cho kết dương tính tổng số mẫu Tương tự, độ đặc hiệu xác định phân tích 36 mẫu khơng có mặt dioxin tính tỷ lệ phần trăm mẫu cho kết âm tính tổng số mẫu Cơng thức tính độ nhạy độ đặc hiệu cụ thể sau: - Độ nhạy = Số mẫu dương tính thật/(Số mẫu dương tính thật + Số âm tính giả); - Độ đặc hiệu = Số trường hợp âm tính thật/ (Số trường hợp âm tính thật + Số trường hợp dương tính giả) 2.3.6 Biện pháp đảm bảo an toàn Các thao tác phân tích thực tủ hút với trang bị bảo hộ găng tay, trang than hoạt tính phòng chất độc hóa học, Vệ sinh bề mặt khu vực dụng cụ sau làm thí nghiệm aceton toluene Các chất thải rắn lỏng quản lý nghiêm ngặt, gom vào thùng chứa than hoạt tính xử lý theo quy định chất thải nguy hại KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khả bắt cặp kháng thể đơn dòng kháng dioxin với kháng thể đa dòng cộng hợp HRP Kháng thể đa dòng cộng hợp HRP từ dê có khả bắt cặp tốt với kháng thể đơn dòng từ chuột, đánh giá nghiên cứu trước [7,8] Do vậy, nghiên cứu này, kháng thể cộng hợp HRP sử dụng để kiểm tra kháng thể đơn dòng kháng dioxin từ chuột trước tiến hành phương pháp Sandwich ELISA để phát Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số 66, - 2020 125 học & Kỹ thuật mơi tr trường Hóa học ờng trò lần lư ện dioxin Hai kháng thể nnày ày sẽ đóng vai tr ò ợt llàà kháng thể thể sơ sơ cấp cấp vvàà kháng thể thể thứ ứ cấp (hình (hình 1) Kháng thể thể kháng dioxin đđược ợc cố định lên lên đđĩa ĩa 96 giếng với nồng độ là µg µg/ml, /ml, µg/ml, µg/ml 10 µg/ml Sau ti tiến ến thành thành bước bước ủ với kháng thể cộng hợp khảả bắt cặp tốt với ợp HRP 0,4 µg/ml, kết cho thấy hai kháng thể nnày ày có kh cạnh đó, nồng độ µg/ml kháng thể kháng dioxin llàà nồng nồng độ thấp Bên cạnh nghiệm ệm m màà dùng xét nghi đảm bảo độ hấp thụ bbước ớc sóng 450 nm cao vvàà tương đương nồng nồng độ lớn hơn (hình (hình 2) Chính vậy, vậy, chúng tơi đã lựa lựa chọn sử dụng kháng thể thể kháng dioxin với nồng độ tối ưu µg/ml cho thí nghiệm nghiệm Nồng độ kháng th thể Nồng ể kháng dioxin (µg/ml) Hình 22 Kết ết đo độ hấp thụ quang với nồng độ kháng th thểể kháng dioxin khác Tối ưu nồng 3.2 Tối nồng độ thụ thể Aryl hydrocarbon (AhR) thểể đđược Tương tác giữa dioxin và AhR có th ợc khai thác cách hợp lý cho nhiều phương pháp phân tích khác đđểể phát ô nhiễm dioxin môi trư trường ờng Nhiều ứu đđãã thành cơng vi việc cơng trình nghiên ccứu ệc sử dụng AhR việc phát dioxin [2,11] Thụ Thụ thể AhR vvàà kháng thể th sơ ccấp ấp bắt cặp đặc hiệu với dioxin đã đư ợc thiết thiết kế sử dụng xét nghiệm miễn dịch Sanwich ELISA Nồng độ TCDD ng/ml đãã được phân tích thử nghiệm với AhR với nồng độ khác llà µg/ml, µg/ml, Kết µg/ml 10 µg/ml K ết cho thấy, nồng độ AhR tối ưu µg/ml (hình (hình 3) ồng độ AhR (µg/ml) N Nồng Hình 3 Kết ết đo độ hấp thụ quang với nnồng ồng độ AhR khác nhau 126 T T T Quỳnh Nghiên ccứu Quỳnh,, …, B T Hiếu Hiếu,, ““Nghiên ứu thăm dò d … phương pháp Sandwich ELISA.” ELISA.” Nghiên cứu cứu khoa học công nghệ Tối ưu thời 3.3 Tối thời gian ủ ccơ chất chất TMB thành Enzyme HRP cộng cộng hợp với kháng thể thứ cấp thủy phân ccơ chất chất TMB để tạo th ành sản màu Lượng ản phẩm có màu màu xanh, chuyển chuyển sang m àu vàng bbổ ổ sung axit H2SO4 Lư ợng sản phẩm tạo thành phẩm phản ượng thành sau ph ản ứng phản ánh llư ợng dioxin mẫu xét nghiệm ELISA thông độ hấp thụ bư qua độ bước ớc sóng 450 nm Do vậy, để đảm bảo kết đáng tin cậy, việc xác định chấ thừa ịnh thời gian ngừng phản ứng enzyme HRP với llượng ợng chấtt TMB dư th ừa ất quan trọng Các mẫu có nồng độ dioxin khác từ 00 1000 1000 pg/ml đã đư ợc phân tích độ hấp thụ OD 450 nm thời điểm khác từ 0,5 đến đo độ trịị đo đ ợc mẫu thấp, khoảng 0,05 Sau 30 phút, giá tr hầu kkhơng hơng có sự biệt, chứng tỏ llượng chất chưa ưa bbịị thủy phân đáng kể Độ hấp thụ mẫu khác biệt, ợng chất ch bắt đầu tăng dần sau vvàà đạt đạt đến mức cao sau 2,5 với mẫu có nồng độ dioxin ượt ợt ttương pg/ml, pg/ml, 10 pg/ml, 100 pg/ml 1000 pg/ml llần ần llư ương ứng ng 0,205; 0,276; 0,458; 0,652; 0,809 Sau gi giờ, ờ, độ hấp thụ mẫu ttương ương đương tại thời điểm 2,5 ((hình chất TMB hình 4) Vì vậy, vậy, đã lựa lựa chọn thời gian tối ưu đđểể ủ ccơ chất 2,5 gi chất TMB khác nhau Hình 4 Kết Kết đo độ hấp thụ quang thời gia gian ủ ccơ chất 3.44 Giới Giới hạn phát hi phương ện dioxin ph ương pháp Sandwich ELISA điều Sau tối tối ưu ều kiện, dãy dãy nnồng ồng TCDD từ pg/ml – 1000 pg/ml đđã đư ợc phân phương Cảả nồng độ TCDD có độ hấp thụ bbư tích phương pháp Sandwich ELISA C ước ớc mẫu sóng 450 nm cao m ẫu đối chứng âm vvàà tăng dần, dần, tỷ lệ thuận với nồng độ TCDD, từ 0,271 0,833 (hình 0,271-0,833 (hình 5) Như vậy, vậy, xét nghiệm Sandwich ELISA có khả phát dioxin với Tiếp ới nồng độ từ pg/ml – 1000 pg/ml Ti ếp đến, chia nhỏ dãy dãy nồng nồng độ TCDD từ 0,2 ,2 pg/ml-10 pg/ml 10 pg/ml thành điểm điểm để xác định giới hạn phát xét nghiệm Kết ra, nồng độ 0,2 pg/ml có độ hấp thụ bbước ớc sóng 450 nm xấp xỉ với mẫu đối chứng âm, lại có độ hấp thụ cao nồng nồng độ ccòn òn lại (hình (hình 6) Hình 55 Kết ết phân phân tích TCDD với ới nồng độ 00-1000 000 pg/ml g/ml Tạp KH&CN 2020 ạp chí Nghiên Nghiên cứu cứu KH& CN quân uân sự, sự, Số 666, - 2020 127 học & Kỹ thuật mơi tr trường Hóa học ờng 0,2 N Nồng ồng độ dioxin (pg/ml (pg/ml) pg/ml 10 Kết phân tích TCDD với Hình 66 Kết với nồng độ 00-10 10 pg/ml pg/ml Qua cho thấy, thấy, giới hạn phát phương phương pháp Sandwich ELISA nghiên cứu pg/ml (tương đương 0,1 pg/gi pg/giếng ơn m ứu ếng ppt) Giá trị này thấp thấp hhơn ột số thành nghiên cứu cứu đã áp dụng dụng th ành công phương pháp ELISA đđểể phân tích dioxin như: Harrison ccộng ộng đã nghiên ccứu ứu phát TCDD phương phương pháp ELISA cạnh cạnh tranh dựa trên ưỡng kháng thể thể đơn đơn dòng dòng ttừ chuột với ng ngư ỡng phát là 25 pg TCDD/giếng TCDD/giếng mẫu ên ccứu dioxin được tách chiết từ đất, tro trầm tích [3], nghi nghiên ứu Emon Emon ccộng ộng có giới mẫu ới hạn phát llàà pg/ml phân tích m ẫu dioxin đất vvàà trầm trầm tích [1] hay kit giếng thương mại mại phát TCDD hhãng ãng Biosense có gi giới ới hạn phát là pg/ gi ếng Ngoài ra, dựa dựa trên Quy chuẩn chuẩn Việt Nam hhàm àm lượng lượng tối đa cho phép phép của dioxin ột số loại đất (QCVN 45:2010/BTNMT) với nồng độ nằm khoảng 40 ppt – 1200 thể ppt giới giới hạn phát phương phương pháp Sandwich ELISA nghiên cứu cứu nnày ày sử lọc mẫu đất vvàà trầm trầm tích tr ước ằng ph phương dụng để phân tích ssàng àng lọc trư ớc phân tích bbằng ương pháp HRGC/HRMS, giúp ti tiết ết kiệm thời gian vvàà chi phí phân tích 3.55 Độ Độ nhạy và độ độ đặc hiệu xét nghiệm Sau xét nghiệm nghiệm 36 mẫu có mặt dioxin với nồng độ pg/ml, kết có 35 mẫu mẫu dương tính thật thật và m ẫu âm tính giả, tương ứng với độ nhạy llàà 97,14% Đối Đối với 36 mẫu mẫu ẫu ddương không chứa chứa dioxin, kết xét nghiệm cho thấy có 33 mẫu âm tính thật vvàà m ương giả, tương tính giả, tương ứng với độ đặc hiệu llàà 91,67% (bảng ( ảng 1) Trong nghiên cứu cứu Emon và cộng ợc sử dụng trầm ộng sự, phương phương pháp ELISA đã đư ụng để phân tích dioxin mẫu đất vvàà trầm với tỷ lệ âm tính giả giảả nhỏ Đối tích, với dương tính gi 10% Đ ối với ph phương ương pháp nghiệm nào, (tương xét nghiệm nào, tỷ tỷ lệ âm tính giả 0% (t ương đương độ độ nhạy 100%) v tỷ ỷ lệ dương dương tính giả giả nhỏ nhỏ 10% (tương đương độ ớn hhơn t ởng [1] độ nhạy nhạy llớn ơn 90%) được xem llàà lý tưởng B Bảng Kết ảng Kết đánh giá độ nhạy và đđộ ộ đặc hiệu hiệu Kết ết ết luận Xét nghiệm nghiệm K Kết Dương tính Âm tính Độ 35 ộ nhạy (n=36) 97,14% Độ 33 ộ đặc hiệu (n=36) 91,67% KẾT K ẾT LUẬN Đãã xây dựng phương dựng đ ợc ph ương pháp phát hi ện dioxin xét nghiệm miễn dịch Sandwich ơn ddòng ELISA với với nồng độ tối ưu ccủa thụ thể AhR vvàà ccủa kháng thể đđơn òng kháng dioxin µg/ml 128 T T T Quỳnh Nghiên ccứu Quỳnh,, …, B T Hiếu Hiếu,, ““Nghiên ứu thăm dò d … phương pháp Sandwich ELISA.” ELISA.” Nghiên cứu khoa học công nghệ Đã tối ưu thời gian phản ứng enzyme HRP chất TMB 2,5 Phương pháp Sandwich ELISA có giới hạn phát dioxin tinh khiết dung dịch DMSO 1% pg/ml, với độ nhạy 97,14% độ đặc hiệu 91,67% Đây kết bước đầu cho thấy triển vọng việc phân tích dioxin mẫu đất trầm tích phương pháp xét nghiệm miễn dịch Sandwich ELISA Để ứng dụng vào thực tiễn cần phải có nghiên cứu bổ sung để đảm bảo tính xác định lượng dioxin mẫu Lời cảm ơn: Cơng trình hồn thành với hỗ trợ kinh phí từ đề tài nghiên cứu khoa học định hướng cho cán trẻ năm 2019: "Nghiên cứu thăm dò phát dioxin kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch" TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Emon J M Van, Chuang J C., Lordo R A., Schrock M E., Nichkova M., et al (2008) “An enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of dioxins in contaminated sediment and soil samples,” Chemosphere, 72 (1), 95–103 [2] Faiad W., Hanano A., Kabakibi M M., Abbady A Q (2016) “Immuno-detection of dioxins using a recombinant protein of aryl hydrocarbon receptor (AhR) fused with sfGFP,” BMC Biotechnology, 16 (1) [3] Harrison, R.O.; Carlson, R.E (1997), “An immunoassay for TEQ screening of dioxin/furan samples:Current status of assay and applications development”, Chemosphere, 34, 915–928 [4] Sally S W and Linda S B (2009), “An Overview of the Effects of Dioxins and Dioxin-like Compounds on Vertebrates, as Documented in Human and Ecological Epidemiology”, Environmental Carcinogenesis and Ecotoxicology Reviews, 27(4), 197–211 [5] Samara F., Gullett B K., Harrison R O., Chu A., Clark G C (2009) “Determination of relative assay response factors for toxic chlorinated and brominated dioxins/furans using an enzyme immunoassay (EIA) and a chemically-activated luciferase gene expression cell bioassay (CALUX),” Environment International, 35 (3), 588–593 [6] Tian W., Xie H Q., Fu H., Pei X., Zhao B (2012) “Immunoanalysis methods for the detection of dioxins and related chemicals,” Sensors (Switzerland), 12 (12), 16710–16731 [7] Tô Lan Anh, Nguyễn Khánh Hồng Việt, Tơ Văn Thiệp, Nguyễn Văn Hồng, Nguyễn Ngọc Tùng, Lê Quang Hòa (2018), “Chế tạo que thử phát nhanh độc tố Shiga thực phẩm kỹ thuật sắc ký miễn dịch”, Tạp chí phân tích Hóa lý sinh học, 4(20), 9-19 [8] Trần Thị Thanh Quỳnh, Phạm Kiên Cường, Nguyễn Khánh Hoàng Việt, Phan Tuấn Nghĩa, Nguyễn Thị Tâm Thư (2018), “Tạo que thử phát nhanh Vibrio cholerae nước sinh hoạt”, Tạp chí Nghiên cứu KH&CN Quân sự, 55, 146-153 [9] U.S Environmental Protection Agency (1994), “Method 1613: Tetra- through OctaChlorinated Dioxins and Furans by Isotope Dilution HRGC/HRMS” [10] Văn phòng Ban đạo 33, Bộ Tài Ngun mơi trường (2013), “Báo cáo tổng thể tình hình nhiễm dioxin ba điểm nóng: sân bay Biên Hòa, Đà Nẵng Phù Cát” [11] Wang B J., Wu P Y., Lu Y C., Chang C H., Lin Y C., et al (2013) “Establishment of a cell-free bioassay for detecting dioxin-like compounds,” Toxicology Mechanisms and Methods, vol 23, no 6, pp 464–470 Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số 66, - 2020 129 Hóa học & Kỹ thuật môi trường ABSTRACT AN EXPERIMENTAL STUDY ON DETECTION OF DIOXIN USING SANDWICH ELISA Dioxin is a group of highly toxic chemical compounds including 210 congeners, causing serious diseases on human health such as cancer, genetic diseases, birth defects and others In particular, 2,3,7,8 -Tetrachlorodibenzo-ρ-dioxin (TCDD) was determined to have the highest toxic coefficient In this study, we used the Sandwich ELISA method based on Aryl hydrocarbon receptor and monoclonal antibody to detect TCDD in 1% DMSO The initial results showed that the immunoassay was capable of detecting TCDD with a detection limit of pg/ml (1 ppt), a sensitivity of 97,14% and a specificity of 91,67% Keywords: Detect dioxin; Aryl hydrocarbon receptor; Sandwich ELISA; 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin Nhận ngày 29 tháng 10 năm 2019 Hoàn thiện ngày 17 tháng 12 năm 2019 Chấp nhận đăng ngày 10 tháng năm 2020 Địa chỉ: Viện Công nghệ mới/Viện Khoa học Công nghệ quân *Email: tranthithanhquynhk55b2@gmail.com 130 T T T Quỳnh, …, B T Hiếu, “Nghiên cứu thăm dò … phương pháp Sandwich ELISA.” ... loại mẫu trước phân tích phương pháp HRGC/HRMS [1] Trong nghiên cứu này, việc thăm dò phát thiện dioxin phương pháp Sandwich ELISA thực NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu... 2.3.3 Phát dioxin phương pháp Sandwich ELISA 100 µl poly-L-Lysine 0,01% nhỏ vào giếng, ủ 37oC Sau đó, rửa 124 T T T Quỳnh, …, B T Hiếu, Nghiên cứu thăm dò … phương pháp Sandwich ELISA. ” Nghiên cứu. .. Nghiên ccứu Quỳnh,, …, B T Hiếu Hiếu,, “ Nghiên ứu thăm dò d … phương pháp Sandwich ELISA. ” ELISA. ” Nghiên cứu khoa học công nghệ Đã tối ưu thời gian phản ứng enzyme HRP chất TMB 2,5 Phương pháp