Nghiên cứu sản xuất bộ protein chuẩn dùng cho xác định trọng lượng phân tử protein enzym bằng phương pháp sắc ký và điện

r ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HOC T ự NHIÊN ■k~k★X-k-k-ị:-k'k * ĩ! ị NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT BỘ PROTEIN CHUẨN Ị ĐỪNG CHO XÁC ĐỊNH TRỌNG LƯỢNG I PHÂN TỬ PROTEIN-ENZYM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ VÀ ĐIỆN DI I I Mã số : QGTD.G1G5 Ị OAI HOC QOÓC -:-v- HA ' T R U N G i ' — ' TH ỏ r j G TI N Ĩ H Ư VIfc"r-« í Q ~ r/ ^J c INguyênQuốcKhang HẢ NỘI - 2004 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN NGHIEN c ư SAN XUAT BỌ PROTEIN CHƯAN DÙNG CHO XÁC ĐỊNH TRỌNG LƯỢNG PHÂN TỦ PROTEIN-ENZYM BANG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ VÀ ĐIỆN DI Mã số: QGTD.0106 - Chủ trì: GS TS.Nquyễn Quốc Khang - Những người tham gia: TS Phan Tuấn Nghĩa NCV Trần Thị Long TS Nguyễn Bích Nhi GS.TS Lê Dỗn Diên TS Nguyễn Liêu Ba HÀ NÔI - 2004 Phần thứ TÓM TẮT BÁO CÁO BÁO CÁO TÓM TẮT TÊN ĐỀ TÀI: Nghiên cún sản xuất protein chuẩn dùng cho xác định trọng lượng phân tử protein-enzym phưong pháp sắc ký điện di Mã số: QGTĐ.01.06 CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI: GS TS Nguyễn Quốc Khang CÁC CÁN BỘ THAM GIA: TS Phan Tuấn Nghĩa NCV Trần Thị Long ĨS.Nợuyễn Bích Nhi GS.TS Lê Doãn Diên TS Nguyễn Liêu Ba MỤC TIỀU ĐỀ TÀI - Nghiên cứu hoàn thiện phương pháp quy trinh sản xuất protein chuẩn:: - Bộ thứ gồm 5-6 protein, có khối lượng phân tử từ 14-97 kDa - Bộ thứ hai gồm 5-6 protein, có khối lượng phân tử từ 45-280 kDa dùno xác định khối lượng phân tử sắc kỷ điện di 5.TÓM TẮT NỘI DUNG NGHIÊN c ứ u CỦA ĐỀ TÀI: -Điều tra, phát hiên nguồn nguyên liệu động thực vật vi sinh vật giầu protein cần khai thác - Nghiên cứu Quy trình phương pháp tối ưu để khai thác loại protein chuẩn dạng tinh khiết -Thành lập protein chuẩn (Kit-Protein-Standai1s) có thành phần, tỷ lệ hợp lý írona phạm vi khối lượng phân tử từ 14-97 kDa 45-280 kủa - Kiểm tra, so sánh với protein chuẩn thươnq trường - Điều chỉnh thành phần, tỷ lệ hoàn thiện protein chuẩn cần sản xuất - Tiến tới hoàn thiện protein chuẩn theo tiêu chuẩn quốc tế - Xây dựng hoàn chỉnh quy trình sản xuất protein chuẩn , protein chuẩn, nguồn nguyên liệu, quy mô sản xuất, CÁC KẾT QUẢ ĐẠT ĐUỢC: a Sản phẩm tinh sạch: - - Lysozym Lectin cá chạch Chất kìm hãm Trypsin từ đậu tương Lectin từ hạt dẻ Trùng khánh Lectin nhị hoa sen Lectin Muổng tròn Lectin từ đậu Trạch lai Albumin từ trứng gà Aibumin từ huyết bò p-Galactosidase RNA polymerase (EC 2.7.7.6) Myosin ốc vặn Phvcocyanine Muổng tròn Urease Glutamat-Dehydrogenase 14 kDa 20 kDa 20 kDa 20 kDa 25 kDa 30 kDa 30 kDa 45 kDa 67 kDa 116 kDa 155 kDa 212 kDa 220 kDa 240 kDa 320 kDa b Đã có nhiều sản phẩm tham gia triển lãm Hội trọ’ kỹ th u ậ t “ Techm ark “ Giảng võ 10 / 2003 c Các kết có triển vọng úmg dụng thực tiễn: Bô P rotein chuẩn I (Dùng cho điện di S D S -polyacryiam id) 1- Lysozym 2- Chất kìm hãm Trypsin từ đậu tương 3- Lectin Muổng trịn 4- Aibumin từtrứna ầ 5- Albumin từ huyết máu bị í]-Galacíosidase 14,3 kDa 20 kDa 30 kDa 45 kDa 67 kDa 116 kDa Bô P rotein chuẩn II (dùng cho phương pháp sắc ký) Albumin trứng gà 45 kDa Albumin huyết máu bò 67 kDa 3.-p-Galactosidase 116 kDa RNA polymerase (EC 2.7.7.6) 155 kDa 210 kDa Myosin ốc vặn 320 kDa Glutamat-Dehydrogenase d Đào tạo: 07 Sinh viên bảo vệ Khoá luận tốt nghiệp theo hương đề tài 02 Cao học tốt nghiệp theo hương đề tài e Công bố: Đã công bố: + 05 Táp chi Quốc gia + 03 bác cáo Hội nghị Quốc tế + 01 Hội nghị nước TÌNH HÌNI-I KINH PHÍ : Được cấp : Đã chi K H O A QUẢN LÝ (Ký ghi rõ họ tên ) 300 Triệu 300 Triệu C H Í1TR Ì ĐÊ TÀ I (Ký ghi rõ họ tên) NGUYỄN QUỒC KHANG SUM M AR Y OF REPORT a Title of P ro je c t: Studies preparations o f the Kit- protein- Standarts using fo r determ inaties m olecular weights o f protein-enzymes by chrom atography and electrophoresis Code: QGTĐ.0106 b Coordinator: Prof Dr NGUYEN QUOC KHANG c Menbers of Project: Dr Phan Tuan Nghia Res Tran Thi Long Dr Nguyen Bich Nhi Prof Drsc Le Doan Dien Dr Nguyen Lieu Ba 10, Main results: a- Results in Science and technology: + Make known very much Plants, Animals and Microoraanisms have contained content of proteins high + Perfecting methods for Purifications proteins as: - Lysozym 14 kDa - Lectin cá chạch 20 kDa - Chất kìm hãm Trypsin từ đậu tương 20 kDa - Lectin từ hạt dẻ Trùng khánh 20 kDa - Lectin nhị hoa sen 25 kDa - Lectin Muồng tròn 30 kDa - Lectin từ đậu Trạch lai 30 kDa - Albumin từ trứng gà 45 kDa - Aibumin từ huyết bò 67 kDa - [3-Galacíosidase 116 kDa - RNA polymerase (EC 2.7.7.6) 155 kDa - Myosin ốc vặn 212 kDa - Phycocyanine Muồng tròn 220 kDa - Urease 240 kDa - Glutamat-Dehydrogenase 320 kDa 15 Lectin Artocarpus, Soybean, b- Results in practical application: Obtained: MOLECULAR WEIGHT PROTEIN STANDARDS AND KITS Individual Proteins incluted in the MW-SDS-116 Kit I 1- Lvsozym, Egg 2- Trypsin-lnhibitor from Soybean 3- Lectin from Crotalaria striata 4- Albumin, Egg 5- Albumin from Bovine Plasma p-Galactosidase 14,3 kDa 20 kDa 30 kDa 45 kDa 67 kDa 116 kDa Individual Proteins incluted in the MW-320 Kit II Albumin , Egg Albumin, Bovine Plasma ’-p-Galactosidase RNA polymerase (EC 2.7.7.6) Myosin, Helix (Snail) Gìamat-Dehydrogenase 45 kDa 67 kDa 116 kDa 155 kDa 210 kDa 320 kDa c- Results in training: Seven B Sc students have successfully fulfilled their graduating theses under this project d~ P ublications: + 05 papers on Journals -I- 03 International Conferences + 01 National Conference Phẩn íhứ hai NỘị DUNG BÁO CÁO MỤC LỤC Tl I■ 2.1 2.2 2.3 2.3.1 2.3.2 2.3.3 2.3.4 2.3.5 2.3.6 2.3.7 2.3.8 2.3.9 2.3.10 2.3.11 TIÊU ĐỂ ĐẶT VẤN ĐỀ CƠNG VIỆC CHÍNH ĐÃ THựC HIỆN Đề tài Cơng việc chuẩn bị Triển khai công việc Tinh iectin từ cá chạch Tinh ỉectin hạt muồng tròn Tinh lecíin nhị hoa sen Tinh chế albumin trứng gà Tinh chế Lysozym lòng trắng trứng gà Tinh chế albumin từ huyết máu bò Tinh chất ức chế trypsin (TI) từ hạt đậu tương Tinh p- Galactosidase RNA-poỉymerase Tinh lectin từ hạt đậu trạch lai Tinh glutamat-dehydrogenase từ thận lợn Tinh chế phycocyanin từ hạt muồng tròn SẢN PHẨM KHOA HỌC ĐÃ HOÀN THÀNH a Sản phẩm tinh b Các sản phẩm tham TechMark Giảng v ỏ 10/2003 c Các cơng trình cơng bố CÁC KẾ'r QUẢ ĐÀO TẠO CÁC KẾT QƯẢ CĨ TRIỂN VỌNG ÚNG DỤNG KINH PHÍ NHẬ N X É T VA Đ Á N H GIÁ K Ê T QUÁ THỰC MIỆN ĐẺ TÀI 10 KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC II 12 TĨM TẮT CƠNG TRÌNH NCKH CÁ NHÂN SCIENTÌIC PRỌECT Trang 2 4 12 14 17 22 27 33 36 37 37 38 43 44 44 47 48 48 49 52 158 191 37 Nguyen Thị Lan Anh, Tran Thị Long and Nguyen Quoc Khang (2004) Investigate effect of some natural products from leaves of eupatorium fortunei Proceedings: The 2004'h National Conference on Life Sciences, Thainguyen University, September 23, 2004, pp 296 - 299 The polyphenols and flavonoids from leaves of tree Eupatorium fortunei have stimulated serum amylase and protease for four blood groups A, B, o, AB of human The preparates extractions from leaves of Eupatorium fortunei are anti-bacterials such as Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, and anti-fungals Aspergillus, niger, and anti-yeasts as Candida albicans and Saccharomyces cerevisiae The preparates extractionss have controlled oryzae-worms (Sitophillus oryzae L.) 38 Nguyen Quốc Khang Trần thị long (2004) Một vài đồng phân enzym hạt dẻ trùng khánh (Castanea mollissiamaz) Tuyến tập Hội nghị Khoa học toàn quốc vấn đế nghiên cứu khoa học sống, định hướng Lâm nghiệp Thái nguyên 23/9/2004, tr 442 - 446 Thành phần protein hồ tan hạt dẻ khơng phức tạp, đa số có khối lượng phân tử phạm vi từ vài chục đến 100 kDa phân ly SDS 2mercaptoethanol, protein phân ly thành đơn vị có khối lượng phân tử ỉừ 10 - 60 kDa chủ yếu có nhân hạt Hạt dẻ Trùng khánh có enzym amylase, catalase, esterase peroxidase phân bố chủ yếu nhân hạt hoạt động mạnh, tập trung chủ yếu nhân hạt Còn protease hạt dẻ hoạt động yếu, trừ nấm móc xâm nhiễm làm tăng hoạt tính hàm lượng protease đáng kể Hạt dẻ Trùng khánh có chứa đầy đủ thành phần axitamin đường hồ tan thường gặp phổ biến vơí hàm lượng cao so với hạt dẻ ta, nhiều ngũ cốc khác 38 Nguyen Quoc Khang and Tran Thi Long (2004) Some isozymes in seeds of chesnuts Trung- khanh (Castanea mollisssiamaz L) Proceedings: The 2004th National Conference on Life Sciences, Thainguyen University, September 23, 2004, pp 442 - 446 Components of dissolve proteins in seeds of chesnut tree m ollissiam az) w ere no com plicated and m olecular mass (Castanea between from 10 to 100 kDa, but these solved by SDS contained 2-mercaptoethanol, so were into subunits between at 10 to 60 kDa The seeds of chesnut tree (Castanea mollissiamaz) Trung-khanh having enzymes such as: Amylase, Catalase, Esterase, Peroxidase and Protease They have activities very high 187 The seeds of chesnut tree (Castanea mollissiamaz) Trung-khanh contained very full components of aminoacid 3nd sugars fliberties and they have content very high 39 Nguyễn Quốc Khang, Nguyễn Thị Lan Anh Trần Thị Long (2004) Hoạt tính chống oxy hố gây độc tế bào hợp chất polyphenol Từ mần tưới (Eupatorium fortune!, Turez) Tuyển tập : Hội nghị Khoa học toàn quốc vấn đê nghiên cứu khoa học sống, Định hướng Y-Dược học, Hà nôi 28/10/2004, tr (đang in) Các chê phâm polyphenol flavonoid mần tưới có khả chơng oxy hố thơng qua tác dụng kìm hãm enzym peroxydase catalase huyết nhóm máu người, chế phẩm flavonoid có hiệu lực kìm hãm mạnh Đánh giá hoạt tính chống oxy hố thơng qua hệ DPPH Ethanol invitro , chế phẩm flavonoid mần tưới có hoạt tính chống oxy hoá cao (66.4%) giá trị IC5Ũià 75,09% Thử khả gây độc tế bào (Cytotoxicity) invitro hai chế phẩm flavonoid alcaloid mần tưới cho kết đáng quan tâm kháng hai dòng tế bào ung thư Hep-2 (tế bào ung thư gan người) RD (tế bào ung thư màng tim người) 39 Nguyen Quoc Khang, Nguyen Thi Lan Anh and Tran Thi Long Possibilities anti-oxydant and cytotoxicity of polyphenols from leaves of tree Eupatorium fortunei Proceedings: The 2004lh National Conference on Life Sciences Medical Arme University, Hanoi, October 28 2004 (in press) The preparates polyphenols and flavonoids from leaves Ò tree Eupatorium fortunei having possibilities anti-oxydants by inhibities activity of serum catalase and peroxydase for four blood groups A, B, o , AB of human The possibility anti-oxydant by systeme DPPH (1,1 -Diphenyi-2-pi'crylhydrazyl) invitro of polyphenols and flavonoids from leaves of tree Eupatorium fortunei are very hight (66,4% The preparates flavonoids and alcaloids from leaves of tree Eupatorium fortunei having cytotoxicity invitro for Hep-2 cell and RD cell very strongly 40 Nguyen Quốc Khang, Trần Thị Long Nguyễn Thu Thuý (2004) Ảnh hưởng nước thải Hà nội đến hoạt động vài enzym ốc bươu vàng Tạp chí Khoa học ĐHKHTN Hà nội (đang in ) Thực tế cho thấy, lạm dụng nhiều chất kích thích sinh trưởng tổng hợp hố học để làm tăng suất trổng mà không ý tới chât lượng nông sản mức độ an toàn cho người sủ dụng chệ phảm hoa học Các chế phẩm kích thích hố học hay nhiều ảnh hưởng đến sức khoẻ 188 cộng đồng Để góp phần lảm giảm thiểu việc sử dụng phòng tránh tác hại sử dụng chât kích thích hố học, chúng tơ tiến hành đề tai nêu Các kết phân tích tre, cúc tần rau muống cho thấy: - Trong số iá thí nghiệm tre có tác dụng kích thíchhạt thóc nẩy mầm mạnh - Nồng độ kích thích hạt thóc nẩy mầm tre tốt dịch chiết tre có tỷ lệ g tre cho 10 g thóc có độ pha lỗng dịch chiết từ 10 đến 100 lần, có nghĩa g tre kích thích 100 - 1000 g thóc nẩy mầm - Các chất kích thích có ảnh hưởng sâu sắc đến hoạt tính amylase trình nẩy mầm hạt thóc Do sử dụng amylase để theo dõi vàđánh giámức đọ kích thích nẩy mầm hạt thóc chất kích thích sinh học 40.Nguyen Quoc Khang, Tran Thị Long and Nguyen Thu Thuy (2004) Influence of wastewater in Hanoi into activity of some enzymes of snails Pomacea canaliculata Journal Scientific of VNU, Hanoi (in press) The leaves of Bambusa have stimulated for germinate of seeds rices (Oryza sativa) strong healthy Stimulate proportion of germinate rices were from g leaves Bambusa for 10 g rice and stimulate concentrations of leaves Bambusa were at degree dilute from 10 to 100 time The stimulants have influenced very strongly for activities of amylase in process of germinate Therefore could use amylase for following and evalued degree of stimulate germinations by stimulants 41 Trần Thị Long, Hà Văn Huân Nguyễn Quốc Khang (2004) Thử nghiệm sử dụng thảo mộc làm tăng nẩy mần hạt thóc Tạp chí Khoa học ĐHKHTN Hà knee (đang in) Để góp phấn đánh giá xử lý mơi trường nước đáp ứng nhu cẩu nước cho sinh hoạt phát triển sản xuất, tiến hành đề tài “ Ảnh hưởng nước thải Hà nội đến hoạt động vài enzym ốc Bươu vàng (Pomacea canaiiculaỉa) " Qua nghiên cứu thu số kết sau: Các nguồn nước thải Hà Nội bị nhiêm Trong đó, nước hồ Hồn Kiếm sơng Kim Ngưu chủ yếu nhiễm hữu có mức độ yếm khí nặng Cịn nước thải nhà máy Sơn nhà máy Pin chủ yếu bị ô nhiêm nước thải công nghiệp Các enzym catalase peroxydase enzym phân giải H20 lạo thành ỉrong thể ốc Chúng cảm ứng mạnh với thay đổi môi trường sống Trong môi trường ô nhiễm hữu nặng yếm khí mà ni ốc enzym hoạt động tăng lên Do đó, dựa vào hoạt độ chúng để đánh giá mức độ tính chất nhiễm nguồn nước thải Căn cứu vào kết phân tích hoạt độ enzym ốc Bươu vàng protease amyiase, peroxydase catalase ni nguồn nước nước sơng Kim Ngưu có mức độ nhiễm trầm trọng nước thải sinh hoạt ca vê nước thải cơng nghiệp xếp mức độ ô nhiễm nguỏn nước: sông kim Ngưu > nước thải nhà máy Sơn > 189 nước thải nhà máy Pin > nước Hồ Hoàn Kiếm 41 Trần Thị Long, Hà Văn Huân Nguyễn Quốc Khang (2004) Test use of leaves vegetals for germinate of rices Journal Scientific of VNU, Hanoi (in press) The sources of wastewater from Hoan Kiem lake, Kim Nguu river, Van Dien battery factory and Hanoi lacquer factory were pollution, inthere wastewater from Hoan Kiem lake and Kim Nguu river were pollution of organic substances and those have degree powerful Remain the wastewater from battery factory and lacquer factory were pollution of the industrial wastewater The snails Pomacea canaliculata have contained enzymes, among them have the oxidoreductase enzymes as catalase and peroxidase, its have inducties healthy for the conditions of the environment Correspondingly could have on activities of these enzymes for valued degree of pollution and characteristic of the environment Basic of the analytic results on activity of protease, catalase and peroxidase in snails Pomacea canaliculata feeding in wastewater from Hoan Kiem lake, Kim Nguu river, Van Dien battery factory and Hanoi lacquer factory were inhibited different That is why could based on these standarts for discriminate natures and degree of the sources of water pollution, as follows: Kim Nguu river > Hanoi lacquer factory > Van Dien battery factory > Hoan Kiem 190 SCIENTIFIC PROJECT BRANCH: BIOLOGY, HANOI NATIONAL UNIVERSITY Title: Studies preparations of the Kit- protein- Standarts using for determ inates m olecular weights of protein-enzymes by chrom atography and electrophoresis Code: QGTĐ.01.06 Managing intitution: Vietnam National University of Hanoi Implementing Institution: University of Science Collaborating Institution: Faculty of Biology Coordinator: Nguyen Quoc Khang Key implementors: Dr Phan Tuan Nghia Res Tran Thi Long Dr.Nguyen Bich Nhi Prof Drsc Le Doan Dien Dr Nguyen Lieu Ba Duration : from Decem ber 2001 to june 2004 Budqet: 300 million VND 10 Main results: a- Results in Science and technology: + Make known very much Plants, Animals and Microorganisms have contained content of proteins high + Perfecting methods for Purifications proteins as: 1- Lysozym 2- Trypsin-lnhibitor from soyabean 3- Lectin from chestnut 14 kDa 20 kDa 20 kDa 191 4- Lectin from Crotalaria striata 30 kDa 5- Lectin from Phaseolus sp 30 kDa 6- Album in from eggs 45 kDa 7- Album in from Bovine Serum 67 kDa protein 68 kDa 9- p-Galactosidase 116 kDa 10 RNA polymerase 155,kDa 11 Myosin 212 kDa 12 Phycocyanine 220 kDa 13 Urease 240 kDa 14 G lutamat-Dehydrogenase pig kidney320 kDa 15 Lectin Artocarpus, Soybean, b- R esuits in p c tic a l ap p lica tio n : Obtained: M OLECULAR W EIGHT PROTEIN STANDARDS AND KITS Individual Proteins incluted in the MW-SDS-116 Kit i 123456 Lysozym, Egg Trypsin-lnhibitor from Soybean Lectin from Crotalaria striata Albumin, Egg Albumin from Bovine Plasma [3-Galactosidase 14,3 kDa 20 kDa 30 kDa 45 kDa 67 kDa 116 kDa Individual Proteins incluted in the MW-320 Kit II Albumin , Egg Albumin, Bovine Plasma 3,-,8-Galactosidase RNA polym erase (EC 2.7.7.6) Myosin, Helix (Snail) Gỉutamat-Dehydrogenase C“ 45 kDa 67 kDa 116 kDa 155 kDa 210 kDa 320 kDa R esults in tra in in g : Seven B Sc students have successfully fulfilled their graduating theses under this project 192 d- Publications: Nguyen Lieu Ba, L Van Nhuong, N Quốc Khang N T Dự (2001) Obtaining and purification alkaline protease from the cultủe of a Bacillus brevis B isolated in Hanoi, Proceeding of International workshop on Biology 2001, Hanoi, Vol,2, pp 26 - 30 The enzyme may be obtained from the culture of a Bacillus brevis B1 by filtration or using (NH4)2S The preparation alkaline protease with specific activity incrased 8.7 times, yield 38.2% by enzyme activity has been defined by application of combination of purifications methods Nguyen Quoc Khang (2002) Some molecular characterizations of lectin from chestnuts at Trungkhanh (Castanea mollissiamaz) Journal Genetics and Applications, N - 3, pp 27 - 33 The lectin from Chestnuts Trung khanh (Castanea mollissiamaz) was extracted by phosphate- buffer 0,05 M at pH 6,0 and purified by ionexchange on CM-Ceilulose, gel-Filtrationchromatography on the Sephadex-G.75 and ion-exchange Rechromatography on the DEAECellulose column The products of lectin have high purity (20480 lU/ng protein) The subunit m olecular weight of purified lectin were determinded by SDS-polyacrylamid gel electrophoresis such as of 25 ± kDa for Chestnuts Trung khanh Molecular sieving on a superose column Sephadex-G.75 indicated a moleculwr mass of 100 ± kDa for Chestnuts Trung khanh, sugesting the tetram eric nature of the native protein It was noted that le ctin fro m Chestnuts Trungkhanh have not sp e cificity for blood groups, but have s p e c ific ity fo r sugars (galactosids groups) and proteins from serum very d iffe re n t, and p H -O p tim u m o f the lectin from Chestnuts Trungkhanh is pH 8.6 Nguyen Thi Huong Thuy, N.Q.Khang,L.D.Dien and V.T.Hoàng (2003) Evaluation o f biochemical criteria of rice hibrid p produced from the father clone iR.64 and the mother clone IET.29.38 Proceedings of the 8th Asean food conference 8-11/10/2003, Hanoi Vo! 1, pp.111-116 193 The content of soluble protein in paddy grains of IR.64 variety is 18.674 mg/g; that of IET.2938 variety is 17.466 mg/g and that of P.4 variety is 23.164 mg/g The main fractions of rice protein are albumine, globuline, prolamine and g!uteline which may be extracted by the successive use of buffer solutions of phosphate with pH 6.8; NaCI < 10%; Ethanol 80% and NaOH 0.2% cr totally extracted with these solutions The protein content extracted by these two methods is similar; but the protein content of p is often 3.5-4.0% higher compared with its father IR.64 and its mother IET.2938 (the same kind of protein) The extraction efficiency of protein by NaOH solution is highest, and that by Ethanol is lowest This shows that the solubility of protein fraction depends on the solubility of each kind of protein in ihe appropriate solution Among the com pounds of paddy grains, besides starch, the content of protein is highest: 23.164 mg/g (P.4); 18.674 mg/g (IR.64) and 17.466 mg/g (IET.2938); the content of phenol is lowest: 2.149 mg/g (IR.64); 2.476 mg/'g (P.4) and 2.545 mg/g (IET.2938) This shows that all these rice varieties reach the commercial standards, especially the hybrid p.4, and this hybrid is superior than its parents Studies have been conducted on the activity of enzymes constantly available in paddy grains such as amylase, catalase, peroxidase and protease The resuits of studies have showed that the superiority of the hybrid p over its parents is noticeable: among which such enzymes as amylase, caialase and protease are obviously active with trend to the maternal characteristics Le.Doan Dien, N T.H.Thuy,N.Q.Khang and V.T.Hoàng (2003) Studies on isozyme o f some enzymes in the rice variety p with high protein content Proceedings of the 8th Asean food conference 8-11/10/2003, Hanoi Vol 2, pp.800-805 The samples of rice varieties p 4, ỉR.64 and IET.2938 are available in 18 electrophoretic protein bands on SDS-Polyacrylamide electrophoregram s and mainly concentrated in zones including the first zones of protein m onom er with molecular mass from 45 to 31kDa, the second zone of protein with molecular mass from 24 to 21kDa, and the third zone of protein with m olecular mass from 18 to lOkDa; each zone has 3-4 obvious protein bands The superiority in protein content and 194 protein bands of the sample p in the two phases-tiilering and flowering is clearer com pared with its parents In the electrophoretic diagram, amylase and catalase are similar each to the other in m olecular mass Concretely the molecular mass of isoenzymes of p sample is smallest, then the isoenzymes of the mother, whereas that of IR.64 is biggest Amylase and catalase of germinated paddy grains show the superiority of the mother clone The isoenzyme pattern and activities of esterase of the rice samples are very complicated All samples have main isoenzyme bands and numerous dim isoenzyme bands which are relatively analogous Especially in the hybrid p 4, the isoenzyme bands in the two phases tillering and flowering are biggest and most far reaching The molecular mass of the second major isoenzyme band is equal to the biggest isoenzyme band of the mother clone, but until the flowering phase this isoenzyme band disappears, and new isoenzyme band occurs near-by the most out-reaching isoenzyme band of p This also shows the superiority of the hybrid with its mother’s characteristics The isoenzyme pattern and activities of peroxidase are also very complicated, that of IR.64 and p are simpler and less active than ỈET.2938 The peroxidase of all samples is less active in the tillering phase than in the flowering phase Tran Thi Long, Lưu Ngọc Hai and Nguyen Quoc Khang (2004) Purification and characterisation of lectin from seeds of Trach lai (Phaseolus sp L) Proceedings of Conference on Medical and Pharmaceutical Biochem istry Hanoi / 2004, pp 99-107 The lectin from seeds of Trach-lai (Phaseolus sp L) was extracted good by 0.05 M phosphate-buffer-salts (PBS) at pH 7.0 and % NaCI The lectin in extractende solution from seeds of Trach-lai (Phaseolus sp.) was purified by prepicipities with 60 % acetone - ion exchange on CM - Cellulose - Gelfiltration on Sephadex-G.75 The products of lectin having high purity The lectin from seeds Trach-lai having specificity for sugars: aGlucose, p-G!ucose, Glucosamine, NaoGlucosam ine, Galactose, Galacỉosamine, Nac-Gaỉactosamine, Metyl-Galactoside, D-Mannose, M etyl-M annoside, p-Fructose, L-Fucose, D-Xylulose, L-Sorbose, Maltose, 195 Saccharose; but no very high This lectin was inhibited by the proteins in serumes of animaux Phan Tuan Nghia and Dang Quang Hung (2004) Phurification of trypsin inhibitor (Tl) from soybeans (Glycine max) Journal Science of VNU, Hanoi, N - 4, pp 19-25 A modified protocol for purification of the soybean trypsin inhibitor (SBTỈ) or Kunitz inhibitor (Ki) has been developed The ground powder was extracted with ethyiic ether to remove fat, then resuspended and magnetically stirred in 20 mM Tris-HCI buffer, pH 7.5 containing 50 mM KCL followed by centrifugation to collect the clear supernantant fluid The extract then underwent through steps of purification: i) anion exchange column chrom atography on DE-52 cellulose, ii) gel filtration on Sephadexx G-100 and iii) affinity chromatography on trypsin- Sepharose 4B The obtained Tl preparation contained only a single protein of a molecular weight of 20 kDa as shown at the same position of the standard Kl present in the m olecular weight markers on SDS-PAGE The purified protein also exhibited trypsin inhibitory activity on the active gel The protocol allows to obtain 6.4 mg Kl from 20 g of soybean ground powder and the purification factor of the Kl after the steps increased 37 fold 11 EVALUATION GRADE: 196 PHIẾU ĐÃNG KÝ KẾT QUẢ NGHIÊN u PHIEU ĐẢNG KÝ KẾT QUẢ NGHIÊN c ứ u KH-CN Tên đề tài: Nghiên củu sản xuất protein chuẩn dùng cho xác định trọng lượng phân tửproteirĩ-enzym phuong pháp sắc ký điện di Mã sổ: Q GTĐ.OỊ 06 _ Cơ quan chủ trì đề tài: Trường Đại học K h o a học T ự n h iê n Địa chỉ: 334 Nguyễn Trãi - Thanh xuân - Hà nội Tel: (04).858.4-287 Cơ quan quản iý đề tài: Đại học Quốc gia Hà nội Địa chỉ: 144 Đường Xuân Thuỷ, Quận cầ u giấy, Hà nội Te! (04).834.0564 Tổng kinh phí thực chi: 300 Triệu Việt nam Trong đó: - Từ ngân sách Nhà nước: - K in h phí Đ i học Q u ố c gia: 0 T riệ u V N Đ - Vay tín dụng: Khơng - Vốn í ự có: _ - Thu hổi: Không _ Thời gian nghiên cứu: năm tháng Thời gian bắt đầu: Tháng 01 năm 2002 Thời gian kết íhúc: Tháng 06 năm 2004 Tên cán phối hợp nghiên cứu: TS Phan Tuấn Nghĩa NCV Trần Thị Long T s Nguyễn Bích Nhi GS.TS Lê Dỗn Diên TS Nguyễn Liêu Ba Số đăng ký đề tài Số chứng nhận đăng ký Ngày Kết nghiên cứu: Bảo mật: a.Phổ biến rộng: b.Phổ biến hạn chế: c Bảo mât: X 197 Tóm tắt kết nghiên cứu: a Sản phẩm tin h sạch: - Lysozym - Lectin cá chạch - Chất kìm hãm Trypsin từ đậu tương - Lectin từ hạt dẻ Trùng khánh - Lectin nhị hoa sen - Lectin Muống trịn - Lectin từ đậu Trạch lai •• Albumin từ trứng gà - Albumin từ huyết bò - p-Galactosidase - RNA polymerase (EC 2.7.7.6) - Myosin ốc vặn - Phycocyanine Muống tròn - Urease - Glutamat-Dehydrogenase 14 kDa 20 kDa 20 kDa 20 kDa 25 kDa 30 kDa 30 kDa 45 kDa 67 kDa 116 kba 155 kDa 212 kDa 220 kDa 240 kDa 320 kDa * Nhiều iectin enzym khác b Đã có n h iề u sản phẩm tham gia triển lam Hội trợ kỹ th u ậ t “ T e ch m a rk “ Giảng võ 10 / 2003 c, Cốc kết có triể n vọ n g ứng dụng thực tiễn: Bỏ P ro te in chuẩn l (Dùng cho điện di S D S -po!yacryỉam iđ) 1- Lysozym 2- Chất kim hãm Trypsin từ đ ậ u tương 3- Lectin Muồng tròn 4- Album in từ trứng gà 5- Aibum in từ huyết máubò s B-Galactosidase 14,3 kDa 20 kDa 30 kDa 45 kDa 67 kDa 116 kDa Sô Protein chuẩn II (dùng cho phương pháp sắc ký) Albumin trứng gà 45 kDa Albumin huyết máu bị 67 kDa 3.-Ị3-Gaiacíosỉdase 116 KDa RNA poiym erase (EC 2.7.7.6) 155 kDs Myosin ốc vặn 210 kDa Glutam at-Dehydrogenase 320 kDa 198 d Đào tạo: 07 Sinh viên bảo vệ Khoá luận tốt nghiệp ĩheo hương đề tài 02 Cao học tốt nghiệp theo hướng đề tài e Công bố: Đã cơng bố + 05 báo: tạp chí Quốc gia: + 03 báo cáo Hội nghị Quốc tế + 01 báo cáoHội nghị Quốc gia Đề nghị nhà trường cho phép đề tài tiếp tục hướng nghiên cứu Đề nghị chào hàng sản xuấí chế phẩm sinh học Sản xuất protein iàm nguồn thức ăn chăn nuôi Sản xuất enzym để làm sinh phẩm cho đánh giá thực phẩm nguồn nước ô nhiễm lân hữu Thủ trưởng Chủ tịch hội quan chủ tri đề đánh giá thức tài Chủ nhiệm đề tài : Thủ trưởng quan quản ! lý đề tài ! Họ tên [ư i‘ĩn j í Học hàm I Học vị ÙÍ.K CĨ / J ì Ký tên Ví