Nghiên cứu protease của virus gây suy giảm miễn dịch ở người (HIV) phân lập tại việt nam

f)Ạl IỈỌ( Ọl ()( Ỉ R l Ò \ ( D Ạ I MỌ( (,l \ HA \ Ọ I K I I O A I I Ọ( T Í Í N l) ỉ l ỊM llK N l A I: >G H IÊ N C Ử L P R O T E A S r: C l A V IR U S C Â Y S U Y C A Ầ M ỈM IR N D Ị C H ỏ NGL i (H IV ) PHÂN L Ạ P TẠ I V IỆ T N A M M Ã S Ó : K L E P r.09.01 iD e tà i từ ngỉíon kinh p h í fhư('nìỉi xun cắp cho Phòng Thí nghiệm írọH íỉ LỈiêm ( ơníỊ ngỉỉệ Enzvnì vu P rotein) C H Ủ l'R Ì ĐR TẢI: P íiS /rS Phan Tuấn Nghĩa ( ẢC C ẢN IỈỌ T H A M ( ; I A: I hS N g u y ề n ỉ'hị [ l n g Loan G S T S Đ ỗ N g ọ c Liên TS N g u y ễ n 'l'hị V â n A n h rs i^CiS.TS N g u y ễ n \ ' ù I runu TS lỉùi Thi Viêt Kia ì\ \ \ Ọ I , ( M N g u y ề n Q u a n g Fỉuy L Ờ I C Á M O N H o n th n h dê tài n g hi ê n u n a \ chiìnu lói xin c h â n th n h c ám ơn Bộ K h o a học C ô n g ngliệ dà c ấp kinh phí clio ỉ^hong Thí n g h i ệ m i r ọ n g điẻin C ô n g n g h ệ ỉ-nzyin ỈVolein dê Iriên khai cac hoại đ ộ n g c h u y ê n m ô n t r o n g c ỏ cac dê lài k h o a học C h ù n g lôi xin c m ơn Lãnh dạo Dại học Q u ố c G ia H N ộ i , B an G i m Hiệu r r n g Dại học K h o a học T ự nhiC'n (Ỉ ) H K Í Ỉ T N ) , B a n K h o a h ọ c - C ô n g ngliệ c u a Dại học Ọ u ố c G i a Hà Nội Phòníz Kế h o c h - ĩ i V ụ, P h ò n g K h o a họcC n g n g h ệ c u a T r n g D Ỉ I K H T N quan lâm, hồ trợ thu tục c ầ n ihiếl, tạo điều kiệ n i h u ậ n lợi c ho việc thự c dề tài C h ú n g c ũ n g xin c ám ơn líệ nh viộiì liệnli Nhiệt đới Trung LKYng hợ p lác thự c hiệ n đ ê tài c u n g câ p niộl sô mẫu nghiên cứu Ngo ài ra, i r o n g q u trinh thự c hiệii (lê tài c h ú n g c ũ n g đ ã n h ậ n đ ợ c sụ’ g i ú p đ ỡ c u a nh iề u cán k h o a học đông nghiệp ng o i T r n g N h â n dịp này, c h ú n g xin ch ân nh c ám ơn tất ca giú p d ỡ q u ý b u Tập thể đề tài v ir( iA j( I rang \1() D A t ' C l i r O N C Ì l O N Í Ì ỌI AN I AI 11 l 1.1 c.l()l Tll lHU CIU NC, VI: IIIV -1 ỉ ! í l i v nízu>ẻn nhân cua A ! i ) S 1.1.2.Tinh hinh nhicin lllV-1 1.1.3 1l i v \ phái sinh bệnh AIDS nhiềin \ i r u s 1.1.4 Các p h n s pháp diêu irị HIV A I D S .9 1.2 PF su\ uiaiii inicn dịch Iiíiưừi ( IIIV) pliãn lập Việt Nani Mã KI I P1 (W01 Chú nhiệm đề tài: PCíS.TS Phan I uấn Nghĩa ) Các cán tham gia thực hiện: I hS Ntíuvền 'I hị Hồng l o a n TS Nỉiu\ền Thị Vàn Anh PCỈS s Neuvễn Vũ I rung (ÌS r s í)ồ Ngọc ỉ iên TS Níỉu\ễn Ọuarm ỉluv TS ỉỉùi I hị Việt Hà l Mục tiêu nội dung nghiên cứu I Mục liêu Xác định trình tự een mã hỏa protease lỉlV-1 cua số bệnh nhân nhiễm ỉỉlV-1 dê tim sai khác trình tự gen mã hóa protease m V - có ý nghĩa Irong điều trị m v/A iD S Nhân dòníì biêu hiện, tinh protease HlV-1 đê từ tìm hiêu tác dụng số chất ức chế lên protease 1llV-1, làm sở cho ứng dụntỉ điều trị H í v / A i n s Nội d ung nghiên cứu I inh RNA tông hợp cDNA cua sổ mẫu ỉỉlV-1 từ bệnh nhân nhiềin I lIV-1 Việt Nam Nhân bản, nhân dòng dọc irình tự gen mã hóa prolease HỈV-1 cua mẫu virus phân lập dược, đánh giá sai khác vè Irinh ạr gcn mã hóa proteasc HIV-1 dơi tưtmg bệnh nhân nhiễm 1IlV-1 so với trình tự gen tươne ứne Irên giới 1hlêt kế hệ thông vector \ xác dịnh diều kiện hiêu gen mã hỏa cho protease 1II V -1 a E coli Xây dựne qu\ trình tinh prolease lllV-1 lai tò hợp Nghiên cứu sổ dặc irirnu \u c tác cua proteasc tái tỏ hợp thu dược I ini hiêu lác dụriíi ức chê cua rnội sô hợp chàt tône hợp \ tự nhiên lên protease l l V-1 lái tô hợp ( ác kêt qua đạl (Iiiọc Dà tinti sạcli RNA liệ UCII \a lơĩiíi hợp c D N A ciia lllV-1 lu' 50 hệnli Iiliâti nỉiiỗm m V - Việi Nam Dà Iiliàii han nhàn donu \ a \ac dịiih Innti tụ' cloạii ecii niã hóa protcase lllV-1 (2*')7 bp) lách dược từ mộl sò bệnh nhàn Việt Nam khác \ phát dirợc 19 clội hiên tha\ ihê nucleotidc irone dó có 10 dột hiên dần dên lha\ ihê axit amin ((j16ì IÍ35I) M36I R41K 1I69K V82I 89M I13V 115V N83T) Các trinh lự nà\ dã dược d ă n kv iroiiíi imân hàna íien tliê eiới với mã sô: 11Q317454 JF276387 ~ J1'276391 11Ọ890X81 va J1 276392 ỉ)ộl biến N83T thuộc loại đột biên kháng nhẹ thuốc ức chê protcase \ lần dầu tiên phát i)ã ihiêt kê biêu cỏna irone \ i khn E coli ÍÌL21 íien niã hỏa protease llIV-1 sư dụng vector pH128a p ir i a pH F43a dạng cấu trúc dung hợp proleasc HlV-1 số peptidc (His-tag, HA TFW) hay protcin ( rhioredoxin NusA) khác nhau, cấu trúc prolease IlIV-1 dạng gẳn với axit amin gag-pol (GrVS}'NF) đầu N epitope IIA 6x1 lis đầu c phân đoạn tủa tế bào ÍM.21 (DF3) Rll cliợn dê liép lục tinh nghiên cứu tinh chấl i)ã xây dựng thành cơng quy irình tinh protease m V - với bước đơn giản: i) rửa tủa tế bào tronẹ dệni Tris-llCI 20 mM pH7,9 có NaCl 100 mM urea IM Triton X-IOO %: ii) sắc kv qua cột mono Q-sepharose cột His-bind mấc nối tiêp đièu kiện biến tính trone đệm 1ris-í ICl 20 inM pỉ 7.9 có urea M chiết enzyme gắn với eel íỉis-bind đệm có chửa imidazol 250 niM Protease íllV-1 sau tinh cho hănu prolein duv với khối lượng phân tìr khống 13 kl)a S1)S-[’A(ÌH dược nhận bơi kháne thê dơn dòng kháng protcase i IlV-1 thâm lách miễn dịch dược khăng định bàng kỹ thuật phân tích khối phơ MAI Dl-TOI - K ) ỉ \ Dã xác dịnh dược số tinh chấi cua protcuse lllV-1 lái tỏ hi.rp: e n/ y m c hoạt động lơi thích lại pl I 4.5 nhiệl dộ 37‘’(' \ hoàn toàn hoạt tinh dược xir lý nhiệt 7()"C' Irong thơi gian 10 plnìl \ới circhâl tóim hợp c n / \ nie có tiiá irị K,„ v,„a, 0.0275 uM giâ> 2.86 61.3 (iM i)ã xác dịnh lac dụng ức chè cua indina\ ir pcpstalin A axil asiatic curcuniin catcchin cpicalcchin (x-inaniiostin y-manuostin 8-li\dr().\\quinolinc \ mcnadÌDne dơi \ớ i |iiotc;isc I I I V- I lai tỏ liợp n o n g (lo lìc c h è 5()'’o hoạt dọ lii o ng ứno ciiii cac ch/il na> la 0 ịiW\: ị i M: 16.25 ụM; 104 \;i I ,s. ftM; >2 p M 10 ụ M : }iM; U).X2 ụ M : I 14 26 ỊiM Niil \;i / n S O ị (T nồnu dộ lên t(Vi niM kliòim anli ỉiirong dcn hoiit clộ cua pro lcasc lllV-1 lai tô hợn T'IC dụng ức chc prolcasc IIIV-I hoi axil asiatic K-li\(lr()\\c|uinolinc mciiadionc dược phát hiọn lũn cliui liên tronii neh icn cử u I i \ , - í)à còng hò kêl C|ua dạl dượe Iroiig 02 hai báo clăiig tạp chi chuycn nuàiih iroiiu Iiirớc 02 háo cáo 1lội nglìỊ quổc Ic dăng ký 01 sáiìíi cliố lại Cục Sơ luìii Iri luệ Da cliio l;u) (hànli ct)iig 01 ièn sĩ 01 I liạc sT \ 03 c II' nhân troiiíi phạm \ ị nội Juiig \ kinh phi cua dề lài 'ình hình sii (lụng kinh phí ciia đề tài I) amino| tiaphtlialcnc-1-suIl'onic acid "D IA i-lh\lene Diaminc I ctraacctic Acid ■i)/ Cục Ọuan l\' thực phàm \ thuốc (Mv) ( ỉ o o d and Drim Adminislration) l.'\/ ỉ< I I iệu phap kliáíiu rcin n irus liiệu lirc cao (llÌLihl\ A c t i \ c Aiiti-KclroN iral 1hcrap\ ) \ ! c h ê Iiiới c ỏ hiệu l ự c c a o C h i n h \ i v ậ v , d ù c o n nlii ùu h n chc* n h n g lliLiôc ứ c c h è p r o t e a s c l ỉ ! \ ' \ ẫ n l.i n i ộ t t h n h p h ẩ n q u a n t r ụ i m c ủ a Ỉ I A A R ' ĩ (I k ' f í n i a n n \ t ậ p t , 0 ) Cì â n d â y , c c n g h i ê n c ứ u v ê p r o t c a s e c u a HIV' c h u y ê u t ậ p t r u n g v o c c h ò d ộ t biêi k h n ' i t h u ô c d ự a t r ê n s ự đ a h ì n h p r o t e a s e n h m p h t t r i c n c c c h ấ t ú c c h ế p r o t e a s e m i h i ệ u qu: (.•\ỉijhưis v t ậ p t h ể , 0 ) Việt Nam, protease trone số enzvme nghiên cứu nhiêu nhât tronị nhừn-^ thập kỷ qua nghiên cứu chủ yếu điều tra, tách chiết nghiên cứu số tínl chất irén đôi tượng vi sinh vật Tuy nhiên, protease HĨV tư bệah nhân Việt Nam ỉa vấn đ( nghiên cứu Các nghiên círu HIV chủ yếu tập trung vào xác định nhóm virus gâ' bệnh chù yếu người Việt Nam tìm số đột biến liên quan kháng thuốc Năm 2003 Nguvễn Hồng Lan tập thể tiến hành đọc trình tự gen mã hóa reverse transcriptase protease env bệnh nhân nhiễm HIV miên nam chủ yếu Thành phố Hồ Chí Minh 19! bệnh nhân 200 bệnh nhân nghiên cứu nhiễm HIV thuộc nlióm CRF01_AE Nghiên cứu cũriỊ xác định 6,5% đột biến kháng thuốc sừ dụng HAART đối tượng 200 bệnl nhân Ishizaki tập thể (2009) tiến hành đọc trình tự gen mã hóa protease reversi transcriptase đối tượng bệnh nhân nhiễm HIV-1 Hải Phòng Phân tích hình thái d truyền 1.000 bệnh nhân cho thấy ahóm HIV-1 gây bệnh chù yếu 1: CRF01_AE (chiếm 98,3%) Phân tích đột biến kháng thuốc 294 bệnh nhân chi có 0,3“/ đột biến liên quan đến kháng thuốc ức chế protease vị trí M46I Tuy nhiên, chưa có cơng trìnl cơng bổ biểu nghiên cứu tính chất protease HIV-1 mẫu virus phân lậ] từ bệnh nhân Việt Nam Lý chon đề tài: Tính thòi đề tài Hội chửng suy giảm miễn dịch mắc phải (AIDS) gây virus gây suy giảm miễn dịcl người (HIV) Đây virus thuộc họ Retroviridae có hai type HIV-1 HIV-2, tron] type xuất phổ biến nguyên nhân gây AIDS Cho đến nay, dù có nhữn] chưang trinh hành động toàn cầu với phát triển cùa phương pháp điều trị, AIDS vẫi đại dịch toàn nhân loại Khơng dừng lại đó, lây nhiễm HIV có xu hưómg tăng nhan] đặc biệt nước phát triển có Việt Nam Chính vậy, phải có biện pháp đ' khơng chê, kiểm soát lây lan bệnh dịch Thuốc ức chế protease HIV-1 chống HIV, AIDS bốn loại thuốc dùng ch( điêu trị bệnh nhân HIV, AIDS phổ biến giới nghiên cứu từ năn đâu thập kỳ 90 Tuy nhiên, Việt Nam bước đầu tập trung phát virus HIV huyê bệnh nhân chưa có nghiên cứu protease HIV-1 đối tượng bệnh nhân Việ ảnh hưírng cùa protease liệu pháp điều trị bệnh nhân HIV, AIDS Đề tà nghiên cứu protease mV-1 nhằm thiết !ập quy trinh nhân dòng, biểu protease HIV-1 ( 10 /■,, roii t đ ó n g h i ê n c ứ u t c d ụ n g ức c h é c u a M) h p c h t t ô n g h(Tp \ t ự n h i ê n l ê n e n / \ r n t d o n g g ó p c s x â y d ụ n g c c p h c d đ i u t!'Ị ỉ ỉ \ ' A l ỉ ) S c u a c c b ệ n h n h â n t r o n g n c Tính cấp thiết, khả thi dề tài Ihuôc ức chê protease làm giảm hàm lư(,mg ÍIIV-1 máu, tăng sổ lượng tế bà( lympho CD4 mang lại nhiều hội sống sót cho bệnh nhân HIV-1 Tuy vậv, tỳ lệ độ biến axil amin protease khà tạo chùng HIV-1 cao dẫn đến tìnl trạng kháng thuốc ức chế protease HIV-1 mức độ in vitro, đột biến axit amin nà’ không ánh hưởng quan trọng đến chất ức chế protease liệu pháp điều trị, độ biến lại ảnh hường từ 50-90% đến tăng hàm lưọng thuốc ức chế protease (Bossi tậ] thể, 1999) Vì vậy, cần thiết phải nghiên cứu đa hỉnh gen protease HIV-1 để có phá( đồ điều trị thích họrp cho bệnh nhân ỉ)ịíi bàn tiên hành nghiên cứu (xã, huyện, tỉnh, vùng): Khoa Sinh học Phòng thí nghiệm Trọng điểm Cơng nghệ Enzym Protein, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội - Hiểu biết thực tế tác giả địa bàn nghiên cứu? Địa chi nod chủ trì đề tài làm việc - Tính đại diện địa bàn nghiên cứu? Phòng thí nghiệm trọng điểm Công nghệ Enzym Protein, Trường Đại học Khoa học Tụ nliiên Hà Nội sở nghiên cứu trang bị hệ thống máy móc đồng bộ, đại cho phép tiến hành nghiên cứu khác trình độ tiên tiến thuộc lĩnh vực sinh học phân tử công nghệ sinh học Mục tiêu đề tài Xác định trình tự gen mã hóa protease HlV-1 số bệnh nhân nhiễm HIV-1 để tim ĩí sai khác trình tự gen mã hóa protease HIV-1 có ý nghĩa điều trị HIV/AIDS Nhân dòng, biểu hiện, tinh protease HIV-1 để từ tìm hiểu tác đụng số chất ứt chê lên protease HIV-1, làm sở cho ứng dụng điều trị HIV/AIDS 10 Tóm tắt nội dung nghiên cứu đề tài Phân lập tổng hợp cDNA 10 mẫu virus HIV type từ bệnh nhân nhiễm HIV tạ V;ệt Nam - Nhân dòng đọc trình tự gen mã hóa protease HIV-1 mẫu virus phânlập được, đáni' gia sai khác trình tự gen mã hóa protease HIV-1 đối tượng bệnh nhân nhiễrr so với trình tự gen tương ứng giới ■ Xảy dựng quy trinh biểu gen mã hóa cho protease HIV-1 E coli - Xảy dựng quy trinh tinh protease HIV-1 tái tổ hợp, Nghiên cứu số tính chất cua proteasc tái tơ h(Tp thu đirợc tìm iiiêu t d ụ n g ứ c c h ế m ộ t s ố h ọ p c h ấ t t ô i m h ự p \ t ụ n h i ê n l ê n p r o t e a s e Ỉ Ỉ I V - tái tồ h ợ p 11 C c c h u y ê n đề n g h iê n c ứ u d ự kiến c dề tài (tên nội d u n g c h ín h c từ n g chuy đề) j / / Nhân bán đoạn gen mã hóa cho protease 1IIV- ỉ bàng RT-PCR Tinh RNA lổng số từ huyết bệnh nhân nhiễm mV-1 theo kit Qiuagen, tổng h( cDNA từ RNA bàng mồi ngẫu nhiên enzyme phiên mã ngược Trên sở trình tự gen mã hóa cho protease HIV-1 công bố ngân hà: gen giới, thiết kế cặp mồi thích họp thích hợp để tách gcn proteasc từ cDNA tổng số c HlV-1 bàng PCR, lựa chọn điều kiện phản ứng thích hợp cho việc nhân gen 1ỉ Nhăn dòng, xác định trình lự thiết kế vector biếu gen protease HIV-! E col Sàn phâm PCR thu nhân dòng trực tiếp vào vector pCR2.1 theo kit T/A cùa Invitrogen vector pBlueT7 Xác định trinh tự gen mã hóa protease HIV-1 cùa số bệnh nhân nhiễm HIV-1 để tim sai khác trinh tự gen mã hóa protease HIV-1 có ý nghĩa điều trị HIV/AIDS IỈ.3 Xây dựng quy trình biếu genprotease HỈV-1 E coli Thiết kế hệ thống vector biểu gen protease HIV-1 hệ thống vector pET28a E coli Trường hợp khơng thành cơng sử dụng đến số hệ thống vector biểu khác Nghiên cứu điều kiện để tăng cao biểu gen protease HIV-1 tế bào vật chủ ì 1.4 Xây dựng quy trình tinh chế phẩm enryme Dùng siêu âm phá vỡ tế bào sử dụng hệ thống dung môi tách chiết để thu dịch ch thô Sử dụng hệ thống cột lực tưomg ứng với vector thiết kế ban đầu, kết hợp với phương pháp sắc ký trao đổi ion, sắc ký lọc gel nhằm đảm bảo thu chế phẩm tinh ÍCiểm tra độ tinh chế phẩm bàng điện di gel polyacrylamide Xác định hoạt tính C) protease HIV-1 tinh dựa khả thủy phân chất đặc hiệu tổng hợp C1 enzyme 11.5 Nghiên cứu sổ tỉnh chất protease HIV-1 tinh thu Nghiên cứu số tính chất protease HIV-1 tái tổ hợp thu tìm hiểu tác dụng I chế sổ hợp chất tổng hợp tự nhiên lên protease HIV-1 tái tổ hợp 12 Cấu trúc dự kiến báo cáo kết đề tài (chi tiết hoá chương mục) Báo cáo dự kiến ngồi phần tóm tắt phần tình hình sử dụng kinh phí đề tài có phần với nội dung sau Phân Ị Mở đâu, nêu tóm tắt tinh hình bệnh HIV/AIDS giới, nghiên cứu nước va qc tê vê protease HIV-1, qua nói lên tính cấp thiết đê tài nghiên cứu l’hân Tông quan vân đê liên quan đên đề tài nghiên cứu (Giới thiệu chung protease IỉlV-1, nghiên cứu nhân dòng biểu gen mã hóa enzyme protease HIV-1, thuốc úc chi prcncase HIV-1, nghiên cứu tính chất vai trò nghiên cứu protease HIV-1 liệu pháp điều trị bệnh nhân HIV/AIDS) Phàn : Nguyên liệu phương pháp -"•1 Nguyên liệu: Các mẫu máu nhiễm không nhiễm HIV thu nhận từ Viện Các bệr Nhiệt đới truyền nhiễm Quốc gia theo nguvên tấc an toàn, đạo đức mà Viện tuân th 12 p n zy n t‘ c h é p n g ợ c M -M u L V ^ a q I )N ' \ p o l y i n c r a s e cu;t l ' n z y n mi c s , t h a n g c h u â n D N ' A J ợ c m u a t ỉ l ã n g F e r m e n t a s , c c o l i g o n u c l e o t i d c \ c c t o r c u a I l ă n g I n v i t r o g c n b ộ kit l c h D N A A h u y ê i t h a n h v tách plasniid cua H ãng Q Ỉ A Í i H N , dN 'I'P c ủ a H ã n P ro n ic g a h ỏ a c i â t d ọ c t r i n h t ự c ủ a B e c k m a n CoLilter C a c h o ủ c h â t c ò n lại đ è u đ t đ ộ t i n h k h i ê t d ù n g c h o n g h i é i c ứ u s i n h h ọ c p h â n t Các phưcmg pháp nghiên cứu: phần trình bày kv thuật dùng để thục ‘iện đê tài, bao gôm cách thiêt kế primer dể dùng cho kỹ thuật PCR, phương pháp RT-PCR để rửàn đoạn gen mã hóa protease HlV-1, phương pháp biến nạp gen sàng lọc thề biến nạp kỳ thuật nhận dạng khuẩn lạc tráng-xanh, phương pháp xác định trinh tự nucleotide theo >anger Irên hệ ihơng máy đọc trình tự Becìcman Couỉter, phương pháp sàc ký, điện di dể tinh enzyme tái tổ hợp, phương pháp đánh giá độ tinh bàng điện di gel poỉya-Tylamide, phương pháp lai miễn dịch vvestern blotting số phương pháp khác Phẩn Kết nghiên cứu thảo luận Trong phần trình bày tồn kết nghiên cứu đề tài bàn luận niũmg kết thu với cơng trình cơng bố có liên quan, cụ thể về; 4.1 Nột số đột biến gen mã hóa protease HIV-1 bệnh nhân HIV/AIDS Việt Nam phát 4.2 Cen mã hóa protease HIV-1 nhân dòng biểu thành cơng 4.3 quy trình tinh protease HIV-1 tái tổ họp chế phẩm protease HIV-1 tinh 4.4 Nột bảng dẫn liệu tính chất protease íiĩV-1 tái tổ hợp, vềtác dụng ức chế m)t số chất tự nhiên tổng họrp lên protease HIV-1 tái tổ hợp Phẩn : Các kết luận kiến nghị Phần f Tài liệu tham khảo P h ầ n P h ụ lục 13 Tíih đa ngành liên ngành đề tài: - Đ f tài liê n q u a n đ ế n n g n h / c h u y ê n n g n h n o ? Đé tài liên quan đến chuyên ngành hoá sinh học, sinh học phân tử, vi sinh vật học y họ; - Tíih đa /liên ngành thể nội dung trình triển khai đề tài? Đề tài thực với phối hợp tham gia chuyên gia Sinh học phân tử troig việc thiết kế primer, vector nhân dòng vector biểu hiện, phân tích trình tự gei Các nhà Hoá sinh học tham gia thí nghiệm tinh xác định tính chất cùa ch: phẩm enzyme thu được, nhà Vi sinh vật học nghiên cứu điều kiện môi trường cho nuôi cấy vi khuẩn, biểu gen nhà y học với kiến thức thuốc liệu phip điều trị bệnh nhân HIV/AIDS 14 Phrtmg pháp luận phương pháp khoa học sử dụng đề tài: Dt tài sừ dụng phối hợp kỳ thuật nghiên cứu đại Sinh học phân từ, Hóa sir.h híC nhàm tách biểu thành cơng gen mã hố cho protease HIV-1 E coli Các piương pháp sử dụng cho đề tài bao gồm: - Thêt kê cặp môi đặc hiệu nhân đoạn gen mã hóa cho protease HIV-1 bàng RT-PCR, í ) i ệ n ' (1951) Đánh giá độ tinh cùa chê phâm thu băng phưooig pháp điện di ge polyacr>'lamide có SDS (SDS-PAGE) Laemmli (1970) Đánh giá hoạt tính phân cãt chât đặc hiệu (í^55 gag HlV-1) chât tông hợp 15 Khả s dụng s vật chất, trang thiết bị ĐHQGHN: (tên phòng thí nghiệm sứ dụng đề tài) - Phòng thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Enzym Protein, Trường Đại học khoa học Ti nhiên - Phòng thí nghiệm Bộ mơn Sinh lý thực vật Hóa sinh, Khoa Sinh học, Tmờng Đại họi khoa học Tự nhiên - Phòng thí nghiệm cùa Bộ mơn Vi sinh vật học, Khoa Sinh học, Trường Đại học khoa học Tì nhiên 16 Khả hợp tác quốc tế - Hợp tác đã/đang có (tên tổ c h ứ c v vấn đ ề hợp tá c ): o Viện Nghiên cứu Khoa học Công nghệ tiên tiến cúa Hàn Quốc (KAIST), hợp tái nghiên cứu enzyme, protein tái tổ hợp o Trung tâm Y học, Đại học Rochester, Hoa Kỳ hợp tác nghiên cứu chế tác dụng củ; chất kháng khuẩn o Trường Đại học Hoàng gia Hollovvay London, họp tác nghiên cứu sinh học phân ti HIV/AIDS, tạo vaccine hệ - Hợp tác có (tên tổ chức vấn đề họp tác): Viện Nghiên cứu Khoa học Công nghệ tiên tiến Hàn Quốc (KAIST) Hợp tác về: nghiên cứu sản xuất protein tái tổ hợp Các hoạt động nghiên cứu đề tài: - Nghiên cứu lý thuyết - Điều tra khảo sát - Xây dựng mơ hình thử nghiệm - Biên soạn tài liệu - Viết báo cáo khoa học - Hội thảo khoa học Ỹ- tì □ Tập h u ấn 14 Sản pliâni cua Dê tài u c-rai clìât liiọii” cần (ỉạt íLiệt ké theo dang san phúnu 18 18 {/nocìel makel): Dạng 1: San phâm (là hanịị hố có íhê đươc íịéu thu Irén thị tnrờngj vật n u ô i v c c loại V a t iiệu' h i ế t b ị , m y m ó c ; D â y c h u y ề n c ô n g n g h ệ ; ( i i ố n g c â v t r n g ; G i ố n g khác; _ Mức chất lượng cần đạt Tên sản phẩm cụ thể tiêu chất lưựng chủ yếu sản phâm Số TI Đon vị đõ Mâu tương tự (theo tiêu chuẩn nhai) Thế giói Trong nước Dự kiến S( lư ợ n g / qu mô sản phẩm tạo r Mức chất lượng sản phẩm (Dạng I) so vói sản phẩm tưoTig tự nước nước (Làm rõ sở khoa học thực tiên đê xác định chì tiêu vê chát lượng cân đạt sản phâm đê tài) 18.2 Dạng II: Báo cáo khoa học (báo cáo chuyên đề, báo cáo tổ n g họp kết q u ả nghiên ii Nguyên lý ứng dụng; Phương pháp; Tiêụ chuân; Quy phạm; Phần mềm máy tính; Bản vẽ thiết k Quy trình cơng nghệ; Sơ đồ, đơ; số liệu, Cơ sờ dừ liệu; Báo cáo phân tích; Tài liệu dự bí (phương pháp, quy trình, mơ hĩnh, )', Đe án, qui hoạch; Luận chứng kinh tế-kỹ thuật, Báo ci nghiên cứu khả thi sản phẩm khác 11 Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt G h i Trình tự gen mã hóa protease HIV-1 số bệnh nhân Việt Nam Trình tự nucleotide gen mã hóa protease HIV-1 số bệnh nhân Việt Nam Quy trình biểu gen mã hóa protease HIV-1 Quy trình cho phép biểu gen mã hóa cho protease HIV-1 E coỉi 18.3 Dạng III: Bài báo (tổng số); Sách chuyên khảo (tổng số); sàn phẩm khác dự kiến si công bố (tổng số) ■ ; "I! Số Dự kiên noi công bô 'Ị-J ; Tên sàn phâm Ghi ch Yêu cầu khoa học cần đạt (Tạp chí, Nhà xuất bản) p L ' ■ 02 Tạp chí chuyên ngành Tạp chí Khoa học có uy tín ĐHQGHN 15 1ạ p c h í C n g n g h ệ S i n li học Protcin E x p re ssio n and T p c h í q u ố c tố h o ặ c I lỘ! I.ghị q u ố c tế Purificatioa'' AIDS Research I lội n g h ị v ề s i a h h ọ c phân từ H IV /A ID S Trình độ khoa học sản phâm (Dạng II & III) so vói sản phâm tưoTig tự có (Làm rõ sở khoa học thực liên đê xác định yêu cầu khoa học cần đạt sản phẩm để tài) Quy trình biểu gen mã hóa cho protease HIV-1 xây dựng sở công nghệ ADN tái tô hợp, tham khảo quy trình có cơng trình quốc tế, quv trình cho phép biêu thành công protease MIV-1 E coli Trinh độ khoa học quy trình tương đương với trình độ qc tê Bài báo đăng tạp chí Đại học Quốc gia tạp chí Cơng nghệ sinh học tạp chí có chất lượng cao nước Các dẫn liệu hay kết qủa nghiên cứu số đột biến hay tính chất protease cso ý nghĩa việc điêu trị bệnh AIDS, phát với quy trình thí nghiệm chn sở đê cơng bơ tạp chí hay hội nghị qc tế Tạp chí Protein Expression and Puriĩication hay tạp chí AIDS Research tạp chí CSI 18.4 Kểt tham gia đào tạo khuôn kliổ đề tài Số n cấp đào tạo Số lượng Chuyên ngành đào tạo - Cử nhân 02 Hóa sinh học - Thạc sỹ 01 Hóa sinh học - Tièn sỹ 01 Hóa sinh học Ghi 18.5 San phâm dự kiến đăng ký bảo hộ quyên sở hữu cơng nghiệp, quyền đối vói giống trồng: 16 1') Nội d u n g , tiên độ t h ự c c đê tài (tức củng vic V r ắ n Iriển khai, ihời han thiic hién san phâm dạt được) TT i ; ! i I ỉoạt động nghiên cứu ■- Ị Thu thập viết tồng quan tài liệu Điều ira khảo sát, thí nghiệm, thu thâp số liêu Nội dung I Thời gian thực ! Đên Tư tháng tháng 7/2009 6/2009 Báo cáo tông quan vê vân đẻ nghiên cứu RNA 10 mẫu virus HIV type từ bệnh nhân nhiễm I'ỈIV tc Việt Nam phân lập tơn hợp thành cDNA Gen mã hóa protease HIV-1 mẫu virus phần lập nhân dòng, đọc trình tự đánh giá sai khác trinh tự gen mă hóa protease HIV-1 đối tượng bệnh nhân nhiễm HIV-1 so với trinh tự gen tương ứng thố giới Gcn mã hóa cho protease HIV-1 biểu E coli 8/2009 9/2009 Nội dung 11 10/2010 12/2009 Nội dung III 1/2010 6/2010 Nội dung IV 7/2010 12/2010 Quy trình tinh protease HIV1 thiết lập Nội dung V 1/2011 12/2011 Các tính chât protease HIV-1 lái tổ hợp nghiên cứu, tác dụng số hợp chất tổng hợp tự nhiên lên protease HIV1 tái tổ hợp thử nghiệm Xử lý kết 1/2012 2/2012 Bảng số liệu, hình ảnh, biểu đồ kết quà thu Viết báo cáo tổng họp 2/2012 3/2012 B ả n b o c o t ổ n g h ợ p to n b ộ kê í Ị ỉ Sản phâm khoa học i 1 nghiên cứu đê tài Nghiệm thu đề tài — 4/2012 ,.,i 5/2012 Đề tài Hội đồng nghiệm thi Tạp chí Cơng nghệ Sinh học n Tạp chí qc tẻ Hội nghị quốc tế Protcin Expression and Puriíìcationy' AIDS Research i ' Hội nghị sinh học phân tử HIV/AIDS Trình độ khoa học sản phâiĩi (Dạng II & III) so với sản phẩm tưoTig tự có (Làm rõ ca sở khoa học thực tiên đê xác định yểu cầu khoa học cần đạt sàn phẩm đề tài) - Quy trình biểu gen mã hóa cho protease HIV-1 xây dựng sở công nghệ ADN tái tô hợp, tham khảo quy trinh có cơng trình quốc tế, quy trìah cho phép biêu thành cơng protease HIV-1 E colì Trình độ khoa học quy trình tương đương với trình độ qc tê - Dài báo đăng tạp chí Đại học Quốc gia tạp chí Cơng nghệ sinh học tạp chí có chất lượng cao nước - Các dẫn liệu hay kết qủa nghiên cứu số đột biến hay tính chất protease cso ý nghĩa việc điêu trị bệnh AIDS, phát với quy trình thí nghiệm chn sở đê cơng bơ tạp chí hay hội nghị quốc tế Tạp chí Protein Expression íuid Puriĩication hay tạp chí AIDS Research tạp chí CSI 18.4 Ket tham gia đào tạo khuôn khổ đề tài Số TT Cấp đào tạo Số lirợng Chuyên ngành đào tạo - Cìr nhân 02 Hóa sinh học - Thạc sỹ 01 Hóa sinh học - Tiền sỳ 01 Hóa sinh học Ghi 18.5 Sán phẩm dự kiến đăng ký bảo hộ quyền sở hihi cơng nghiêp, quyền đối vói giống trồng: 16 19 N ộ i d u n g , tiến san p h m d ộ th ự c h iện củ a (lề tài ( c c k v iệ c c ầ n triến khai, ỉ h ò i hạn ih ự c hié đạí được) ĨT Hoạt động nghiên cứu Thu thập viết tổng quan tài liệu Điều tra khảo sát, thí nghiệm, thu thập số liệu Nội dung I CỎIIÍỊ Thời gian thực ; Đên Từ tháng tháng 7/2009 6/2009 ] i1 Sản phâm khoa học Báo cáo tổng quan vấn đề nghiên cứu RNA 10 mẫu virus HIV typi từ bệnh nhân nhiễm HIV Việt Nam phân lập tc hợp thành cDNA Gen mã hóa protease HIV-1 mẫu virus phân lập nhá dòng, đọc trình tự đánh giá sai khác trình tự gen mã hóa protease HIV-1 đối tượng bệnh nhân nhiễm HIV so với trinh tự gen tương ứng trê giới Gen mã hóa cho protease HlV-1 biểu E coỉi 8/2009 9/2009 Nội dung 11 10/2010 12/2009 Nội dung III 1/2010 6/2010 Nội dung IV 7/2010 12/2010 Quy trình tinh protease H I\ thiết lập Nội dung V 1/2011 12/2011 Các tính chất protease HIVtái tổ hợp nghiên cứu, tác dụng số hợp chất tổng hợp tự nhiên lên protease tái tổ hợp thừ nghiệm Xừ lý kết 1/2012 2/2012 Viết báo cáo tổng hợp 2/2012 3/2012 s Nghiệm thu đề tài 4/2012 5/2012 Bàng số liệu, hình ảnh, biểu kết thu Bản báo cáo tổng hợp toàn k nghiên cứu cùa đê tài Đề tài Hội đồng nghiệm tl í 17 21) iMiân h k i n h plií K inh p h í (triệu đơng) i 11 1 i í; , : ị Nội dung ' \ ă m thứ ! Năm thứ hai Ị Xây dựng đê cương chi tiêt i Thu thập viêt tồng quan tài liệu ! Điều tra, khảo sát, thí nghiệm, thu thập số liệu, nghiên cứu Chi phí tàu xe, cơng tác phí Chi phí th khóan hoạt động chun môn Năm thư ba 66 80 0 70 62 16 64 i 67 Thuê, mua sắm trang thiết bị, nguyên vật liệu 52 63 Thiêt bị, dụng cụ nhò Nguyên vật liệu, hóa chất 46 55 Hội nghị hội thảo, báo cáo nghiệm thu Viết báo cáo y Hội thảo/Hội nghị Kiểm tra đinh kỳ, nghiệm thu 2 Chi khác 8,0 11,0 Văn phòng phẩm 1,8 1,4 In ấn, photocopy 1,2 2,8 5,4 Quản lý phí 6,4 Tổng kinh phí 135 160 Tổng cộng (3 năm) 445.000,000 đ (bốn trăm bốn mươi iăm triệu đồng) 60 53 11,0 150 21 Tài liệu tham khảo viết đề cương Baum, E z., Bebemitz, G A and Gluzman, Y (1990) Isolation of mutants of huma ir rm u n o d e ficie n c y virus p ro tea se based on the to x icity o f the enz> m e in Escherichia coli, Proc Natl Acad S USA 87: 5573-5577 Bcssi, p., Mouroux, M., Yvon, A., Bricaire, P.O., Agut, []., Huraux, J., Katlama, c., and Calvez, \ |(H99) Poiymorphism of the human immunodeficiency virus tvpe (HIV-1) protease gene an r e > p o n s e o f H I V - l - i n f e c t e d p a t i e n t s t o a p r o t e a s e inhibitor.7 Clin M icrobiol : - C h i n , H , X u , z , Y in , X , C e n , p ( 0 ) C l o n i n g and expression o f t h e H IV p r o t e i n in Escherichia co ce’l- f r e e s y s t e m Appl M icroỉ Biotech 7 : - Dtrke, P.I., Leu, C.T., Davis, L.J., Heimbach, J.c., Diehl, R.E., Hill, w s„ Dixon, R.A.E and Siga l.s (1989) Hiiman immunodeficiency virus protease: baclerial expression and chacracterization of th ;pưified aspartic protease J Bioỉ Chem 264; 2307-2312 iD e r g o u s o v a , N L , A m e r i k , A Y , V o ly n s k a y a , A M and R u m s h , A D ( 9 ) H IV -1 proteas 'Cloning, e x p r e s s i o n , an d p u r i í l c a t i o n Appỉ Biochem Bioiech 61: -1 l:sh za k i, A „ C u o n g , N H , T h u c , P V , Trung, N V , Saijoh, K, K ageyam a, s , Ish igak i, K , T anum a, J ' * a , s , I c h i m u r a H ( 0 ) P r o f il e o f H Ĩ V t y p e iníection and g e n o t y p i c r e s i s t a n c e i mi ta t ion s t • ar : i r et r ovi r al d r u g s in t r e a t m e n t - n a i v e H I V t >p e l-infected i ndi vi dual s in H a i P h o n g , V i e t N a m , R(S Hum R e tro v ir 25: 175-182 í " ỉ c ' f m a n n , c , R o c k s t r o h , J K , K a m p s , B s , ( 0 ) ỈIỈV me di an e v v w w H l V M e d i c i n e c o m 18 íị K nhl , N.t-,., - n i i n i , K A , S c h l e i í , \ V A , D a v i s L J , l l e i n i b a c i i D i x o n , R A Ỉ ' S c o l n i c k [ ,M a n d Sigal l s ( 8 ) A c t i v o h u m a n i m m u n o d e t l c i c n c y \ i r u s prí>t(.-ase is r eq u i r ed for viral iníect ivity, Proc Sail Acud Sci USA 85: 4686-4690 K.raưslicht, Ỉ Í G , I n g r a h a m s , R H , S k o o g , M T , \ V i m m e n , Pallait, p v an d Ca r t er t, C A ( 19 9) Activirv o f p u r i í ì e d b i o s y n t h e t i c p ro t e i n a s e o f h u m a n i m i m i n o d e f i c i e n c y vi r us on natural s ub s t t es and s y n t h e t ic p e p t i d e s , Proc Nali Acad Sci USA 86: 80'^-81 !, 10 L a e m m l i , K ( ) C l e a v a g e o f str uct ural b a c t e n o p h a g e T4 N a íu r e 2 : - protcins during the a s s e m b l y o f the head of 11 L an, N T H , R e c o r d o n - P i n s o n , p., H u n g , P V , U yen , N 'I V., L ie n , T T X , T ie n , H T ,G a r r ig u e , 1., S c h iriv e , M i ỉ , P e l i e g m , ỉ., L a P o n , M E , A b o u lk e r , j.p ,, S in o u s s i, F B , a n d P ỉe u ry , H J ( 0 ) HIV t \ p c is o l a te s ír o m 0 u n tr e a te d in d iv id u a ls in Ho Chi M in h C ity ( V i e tn a m ) : A N R S 1257 study L a rg e p r e d o m i n a n c e o f C R F _ A E a n d p r e s e n c e o f niajor r e sis ta n c e m u t a t i o n s to a n tir e tr o v ir a l drugs, A I D S R e s H u m R e tr o v ir 19: - 12 L e u t h a r d t, A a n d R o e s e l , J L ( 9 ) C lo n in g , e x p re ssio n a n d p u r iíìc a ti o n o f a r e c o m b in a n t polyh is t id in e - li n k e d H IV -1 p r o te a s e , F E B S 36: -2 13 L o w r y O H , R o u s e n b r o u g h N J , F a A L & R a n d all RJ (1 ) P ro te in m e a s u r e m e n t w ith th e Polinphenol reagent J Biol Chem 193: 265-275 14 M a n a , M a n d M a r c e y , D ( 0 ) HIV-Ì protease C L U B io lo g y D e p a r t m e n t 15 N ijh u is , M , M a a r s e v e e n , N M , L a s t e r e , s , S c h ip p e r, p,, C o a k le y , E., G la s s , B., et al ( 0 ) A nove! s u b s l r a t e - b a s e d H I V - I p r o t e a s e in h ib i to r d r u g r e s is ta n c e m e c h a n is m , P ỉos Medicine 4: 152-163 16 R a o , M , T a n k s a l e , A , G h a t g e , M S , a n d D e s h p a n d e , v v ( 9 ) M o l e c u l a r a n d b io te c h n o l o g ic a l a s p e c ts o f m ic r o b ia l p r o te a s e s , M icrobial M oi Biol Rev 62: 0 - 17 V a le r , L , D e M e n d o z a , c , D e R e q u e n a , D G ( 0 ) I m p a c t o f HTV g e n o t y p i n g a n d d r u g le v els on th e r e s p o n s e t o s a lv a g e t h e r a p y w ith s a q u in a v ir/r ito n a v ir AIDS 16; - 6 18 W en sin g , A M , B o u ch er , C A ( 0 ) W o rld w id e transm ission o f d ru g-resistan t H IV , AIDS Res 5; 0-55 TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN TRƯỞNG TRƯỞNG ^ \KhOA\ TỊ C hủ trì đề tài I- Ml-n GS.TSiềrrĩ» -1 } - ; Ị - I Tơng kinh phí thực chi: 4 0 0 0 đông (Bôn trãm bôn mươi lăm triệu đơng) i T rong đó: - 'l nhân sách Nhà nước: 445.000.000 đồng - K in h phí c ù a T rư n g : - Vay tín dụng: - Vốn tự có: - rhu hồi Thòi gian thực hiện; 36 tháng Thời gian bắt đầu: tháng năm 2009 Thời gian két thúc: tháng năm 2012 Tên cán phối họp thực thực hiện: ThS Nguyễn Thị nồng Loan, TS Nguyễn Thị Vân Anh, PGS.TS Nguyễn Vũ Trung, rs Nguyễn Quang Huy TS Bùi Thị Việt lià So đăng ký đê tài Sô chứng nhận đăng ký kêt Bào mật: nghiên cứu a) Phổ biến rộng rãi: b) Phổ biến hạn chế; X c) Bảo mật: i róm tăt ket nghiên cửu: ! Tóm tắt kết sở khoa học !- Dã linh R N A hệ gen tôtiR hợp cDNA cùa HIV-1 từ 50 bệnh nhân : nhiễm HIV-1 Việt Nam I - Đă nhân bản, nhân dòng \ xác định trinh tự doạn gen mã hóa protease ỈIIV- (297 hp) tách (lược lir số bệnh nhân Việt Nam kliác \'à phát tìiệii clirợc dột hicn tíia\ Iiuclcotidc dó có 10 dột hieii dẫn dến sụ thav axit amin ( ( llỏ i; i;35I) M361 R41K 1169K V821 I.89M 113V 115V N83T) Các trình tự nàv dã đirực dăng ký Irong ngân hàng gen thô giới với mã số: ỈIQ I7 IF276387 ĩl-276391 IỈQ890881 JF276392 Dột biến N83 thuộc loại đột biển kháng nhẹ thuốc ức chế protease dầu tiên dược phát ỉ)ã thiết kế biểu thành công vi khuẩn E coỉi BL21 gcn mã hóa protcase IllV-1 sử dụng vector pET28a pET32a pET43a dạng cấu trúc dung hcrp protease HlV-1 số peplide (}]is-tag, HA, TEV) hay prolein ('I hioredoxin, NusA) khác nhau, c ấ u trúc protease HIV-1 dạng gấn với axit amin gag-pol (Cn'VSFNF) đầu N epitope HA, óxHis đầu c phân đoạn tủa tế bào BL21 (DE3) RIL chọn đế tiếp tục tinh nghiên cứu tính chất Đã xây dựng thành cơng quy trình tinh protease HIV-1 với bước dơn giản: i) rửa tủa tế bào đệm Tris-HGl 20 m M pH 7,9 có NaCl 100 inM, urea IM rriton X-100 %; ii) sắc ký qua cột m ono Q-sepharose cột His-bind niẩc nối tiếp điều kiện biến tính đệm Tris-HCl 20 m M pH 7,9 có urea M, chiết enzym e gắn với gel His-bind đệm có chứa imidazol 250 mM Protease HlV-1 sau tinh cho băng protein với khối lượng phân tử k hoảng 13 kDa SDS-PAGH, nhận kháng thể đơn đòng kháng protease HIV-1 thẩm tách miễn dịch khẳng định kỹ thuật phân tích khối phổ M ALDI- rOF-TOF Đã xác định số tính chất protease HIV-1 tái tổ hợp; enzyme hoạt động tối thích pH 4,5 nhiệt độ 37"c hoàn toàn hoạt tính xử lý nhiệt 70"c thời gian 10 phút, với chất tổng hợp, enzyme có giá trị = 61,3 ^M , V^ax == 0,0275 ụM/giây, Kea, = 2,86 s ' ' Dã xác định tác dụng ức chế cùa indinavir, pepstatin A, axit asiatic, curcumin, catechin, epicatechin, a-mangostin y-mangostin, 8-hydroxyquinoline m e nad io ne protease ỈỈIV-1 tái tổ hợp, nồng độ ức che 50% hoạt độ lư ng ứ n g chất 0,006 fiM; 0.4 ^iM; 18.9 fiM; 48.32 ỊiM 510 ụM : 960 ^ M ; 16,82 ụM : 16,25 ^M ; 104 ụ M 114,26 nM NaF Z n S nồng độ lên tới mM khô ng ảnh h ườ ng đến hoạt độ củ a protease HIV-1 tái tô hợp khôim bị ức chế bưi Tác d ụng ức chế pro lease ỉỉlV -1 bời axit asialic 8-lndrox>c]uin()linc nicnaciioiic hi (liiơc phat lầii dầu ticn nghiên cửu n \ 1óin tăt kct qua nghiên cứu ứng dụnu Một số kct qua ứng dụng tiềm cua dẽ tài ' Ọiiy trình tinh protease 111V-1 có thơ ap dụng dẻ thu nhận prolcase HIV-1 m ột số protcase dặc hiệu khác C ác chât ức chế protease ỉỉlV -1 tìm írone nghiên cứu này: acid asiatic, -h y d ro x y q u in o Iin e m eiiadione sớ dè tìm hiểu tác d ụ n g điều trị bệnh A ID S Chủ nhiệm hù trương đề tài c quan chu tri ị Cliù tịch I hú trường Hội đ ồng c quan quản lý nghiệm thu 1lọ tên Phan 7'uân Nguyễn ỉloàng Nghĩa Lưưng PGS.TS GS.TSKll đề tài vjcu^ 1ỉọc hàm, học vị K.ý tèn, đóng dâu Tfe.efẴM Đ ố c SẤN KHOA HỌC • C( JGNGI Ĩ TRƯỞNG IK U U N G BA ba M ... ((jreene 2007) Cùng ihời eian nà người ta cũne phân lập virus ĩâ y Phi đặt tên n i v lype (là virus £ốc cứa HlV-type 1) ỉiai loại virus làm suy giam hệ thống miền dịch cua người có số điểm giơng với... chemokine cua virus I rong ihời gian kháng thể hệ thống miễn dịch người san sinh có mặt kháng nguyên cua virus Tuy nhièn virus có phương Ihức đê chổng lại công cua hệ thống miễn dịch băng cách... trinh nhân lên virus số lượng tế bào Ivnipho T CD4* tăng lên dẫn tới hoại dộ ne khác thirimg hệ miễn dịch, khả kháng virus cua người bệnh tảng lên làm cho người bệnh lầm tưởng khoi lúc virus có khả