Nghiên cứu tạo chồi địa lan kiếm tứ thời (cymbidium ensifolium) từ mô rễ bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o - NGUYỄN THỊ KIM NGÂN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU TẠO CHỒI ĐỊA LAN KIẾM TỨ THỜI (CYMBIDIUM ENSIFOLIUM) TỪ MÔ RỄ BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY IN VITRO” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Ngành/chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2015 - 2019 Thái Nguyên - năm 2019 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o - NGUYỄN THỊ KIM NGÂN Tên đề tài: “NGHIÊN CỨU TẠO CHỒI ĐỊA LAN KIẾM TỨ THỜI (CYMBIDIUM ENSIFOLIUM) TỪ MƠ RỄ BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY IN VITRO” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Ngành/chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Lớp : K47 - CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khóa học : 2015 - 2019 Người hướng dẫn : TS Bùi Tri Thức GS.TS Ngơ Xn Bình Thái Ngun - năm 2019 i LỜI CẢM ƠN Lời em xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Sinh học cơng nghệ Thực phẩm, tồn thể quý thầy cô giáo Khoa Công nghệ Sinh học công nghệ Thực phẩm giảng dạy, hướng dẫn để em có kiến thức ngày hơm Em xin chân thành cảm ơn TS Bùi Tri Thức trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực tập, giúp em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn GS TS Ngơ Xn Bình tận tình dạy, hướng dẫn truyền đạt kinh nghiệm quý báu để em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Cuối em xin cảm ơn quý thầy, gia đình, bạn học lớp K47 - CNSH tồn thể gia đình giúp đỡ động viên tạo điều kiện mặt tinh thần cho em để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Mặc dù có nhiều cố gắng để hồn thiện tốt luận văn tốt nghiệp, song trình thực khơng thể tránh thiếu sót định Vì vậy, em mong góp ý q thầy, giáo bạn để khóa luận em hoàn chỉnh Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày tháng năm 2019 Sinh viên thực Nguyễn Thị Kim Ngân ii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Danh sách 30 loài lan kiếm đặc hữu Việt Nam Bảng 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA đến khả tái sinh mô rễ 34 Bảng 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả tái sinh mô rễ .36 Bảng 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng GA3 đến khả tái sinh mô rễ 38 Bảng 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA đến khả nhân nhanh mô rễ 40 Bảng 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả nhân nhanh mô rễ 42 Bảng 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA kết hợp với IBA NAA đến khả nhân nhanh mô rễ 44 Bảng 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin đến khả kich thích tạo chồi từ mơ rễ 46 Bảng 4.8 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ 48 Bảng 4.9 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin kết hợp với BA NAA đến khả tạo hoàn chỉnh từ rễ 50 iii DANH MỤC HÌNH Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu tạo chồi địa lan từ rễ phương pháp in vitro .27 Hình 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA đến khả tái sinh mô rễ .35 Hình 4.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả tái sinh mơ rễ 37 Hình 4.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng GA3 đến khả tái sinh mơ rễ .39 Hình 4.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA đến khả nhân nhanh mô rễ 41 Hình 4.5 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả năngnhân nhanh mơ rễ 43 Hình 4.6 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA kết hợp với IBA NAA đến khả nhân nhanh mô rễ 45 Hình 4.7 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin đến khả kích thích tạo chồi từ mô rễ 47 Hình 4.8 Kết nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ 49 Hình 4.9 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinetin kết hợp với BA NAA đến khả tạo chồi từ rễ 51 iv DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT Nghĩa đầy đủ từ, thuật ngữ Từ, thuật ngữ viết tắt BA Benzyladenine CITES Convention on International Trade in Endangered Species of wild fauna and flora - Công ước thương mại quốc tế loài động, thực vật hoang dã nguy cấp Cs Cộng CT Công thức CV Coeficient of Variation – Hệ số biến động Đ/c Đối chứng GA3 Gibberellin IAA Indole-3-acetic acid IBA Indole-3-butyric acid IUCN International Union for Conservation of Nature and Natural Resources - Liên minh Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế Kinetin 6-Furfurylaminopurine LSD Least Singnificant Difference Test – Sai khác nhỏ có ý nghĩa MS Murashige & Skoog’s, 1962 MT Môi trường NAA α-Naphthalene acetic acid ND Nước dừa THT Than hoạt tính TN Thí nghiệm VU Vulnerable – Nguy trở thành loài bị đe dọa tuyệt chủng MỤC LỤC v LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT iv DANH MỤC BẢNG .ii DANH MỤC HÌNH iii MỤC LỤC iv Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.2.1 Mục tiêu tổng quát 1.2.2 Mục tiêu cụ thể 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học đề tài 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn đề tài Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan lan Kiếm 2.1.1 Phân bố, phân loại đặc điểm địa lan 2.1.2 Hiện trạng Địa lan kiếm Việt Nam 2.1.3 Tình hình sản xuất, tiêu thụ sản phẩm từ loài địa lan kiếm giới 12 2.1.4 Tình hình sản xuất, tiêu thụ địa lan kiếm ở Việt Nam 14 2.1.5 Tình hình nghiên cứu nhân giống địa lan kiếm giới ở Việt Nam16 2.2 Giới thiệu giống địa lan kiếm Tứ Thời 18 2.2.1 Phân loại khoa học 18 2.2.2 Sự phân bố 19 2.2.3 Hình thái 19 2.3 Cơ sở khoa học nuôi cấy mô tế bào 19 2.3.1 Tính tồn tế bào thực vật 19 2.3.2 Sự phân hoá tế bào 20 2.3.3 Sự phản phân hoá tế bào 20 2.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình nuôi cấy mô tế bào thực vật 20 2.4.1 Vật liệu nuôi cấy 20 vi 2.4.2 Điều kiện nuôi cấy 21 2.4.3 Môi trường dinh dưỡng 21 2.5 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy mô địa lan Tứ Thời giới nước 24 2.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 24 2.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 25 Phần ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Đối tượng nghiên cứu phạm vi nghiên cứu 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.2.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời in vitro 26 3.2.2 Nội dung 2: Nghiên cứu môi trường nhân nhanh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 26 3.2.3 Nội dung 3: Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ địa lan kiếm Tứ Thời 27 3.2.4 Nội dung 4: Nghiên cứu mơi trường tạo hồn chỉnh từ mô rễ địa lan kiến Tứ Thời 27 3.3 Phương pháp nghiên cứu 27 3.3.1 Chuẩn bị môi trường nuôi cấy in vitro 27 3.3.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm 28 3.4 Các phương pháp xử lý số liệu 33 Phần KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 34 4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng đến khả tái sinh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 34 4.1.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA đến khả tái sinh mơ rễ 34 4.1.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng NAA kết hợp với than hoạt tính đến khả tái sinh mô rễ 36 4.1.3 Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng GA đến khả tái sinh mô rễ 38 4.2 Kết nghiên cứu môi trường nhân nhanh mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 40 4.2.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IAA đến khả nhân nhanh mô rễ 40 vii 4.2.2 Kết nghiên cứu ảnh hưởng IBA đến khả nhân nhanh mô rễ 42 4.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng IAA kết hợp với IBA NAA đến khả nhân nhanh mô rễ 43 4.3 Kết nghiên ảnh hưởng chất kích thich sinh trưởng đến khả kích thích tạo chồi từ mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 45 4.3.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinitine đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ 45 4.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả kích thích tạo chồi từ mô rễ 47 4.4 Kết nghiên cứu mơi trường tạo hồn chỉnh từ mơ rễ địa lan kiến Tứ Thời.49 4.4.1 Kết nghiên cứu ảnh hưởng kinitine kết hợp với BA NAA đến khả taọ hồn chỉnh từ mơ rễ 50 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 5.1 Kết luận 52 5.2 Kiến nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Địa lan kiếm (Cymbidium) gọi Địa Lan hay Thổ Lan, chi thuộc họ Lan (Orchidaceae), mệnh danh nữ hoàng lồi lan [15] Chúng có điểm bật kinh tế thẩm mỹ nhiều người quan tâm khai thác Ở Việt Nam, khí hâu nhiệt đới gió mùa phù hợp cho phát triển lồi thực vật nói chung hoa lan nói riêng Các khu rừng ở Việt Nam thường nhiều nhà khoa học nước giới đề cập tới nơi tập trung nhiều loài lan rừng đẹp quý như: lan Hồ Điệp, lan Vũ Nữ, lan Hoàng Thảo Giả Hạc, Quế Lan Hương, đặc biệt loài địa lan kiếm địa Các loài lan kiếm địa ở Việt Nam đa dạng có giá trị cao Chính vậy, chúng bị khai thác cách ạt, thiếu kiểm sốt quản lý Nhiều lồi kiếm địa bị đe dọa dần biến khỏi tự nhiên Hiện 52 loài Địa Lan Việt Nam rơi vào tình trạng nguy cấp lồi địa lan Tứ Thời loài bị báo động nguy tuyệt chủng gần Địa lan kiếm Tứ Thời (Cymbidium ensifolium) chưa Liên minh Bảo tồn Thiên nhiên Quốc tế (IUCN) phân hạng Tuy nhiên, đánh giá tạm thời dễ bị tổn thương (VU) theo tiêu chí Danh sách đỏ IUCN [13] Địa lan kiếm Tứ Thời liệt kê phụ lục II Công ước thương mại quốc tế loài động, thực vật hoang dã nguy cấp (CITES) [16] Việc nghiên cứu nhân giống với nhằm nhân nhanh bảo tồn giống lan quý trước bờ vực tuyệt chủng việc cần thiết Nhân giống lan thường sử dụng phương pháp gieo hạt không giữ đặc tính mẹ, địa Ngồi tỷ lệ nảy mầm loài lan thường thấp Việc tìm phương pháp nhân giống riêng cho loài địa lan nhà nghiên cứu thực phận khác chồi, mảnh Tuy nhiên nay, đa phần giống lan nhân giống thành công từ chồi đỉnh sinh trưởng Việc sử dụng chồi, đỉnh sinh trưởng ni cấy giữ đặc tính mẹ đồng thời tiêu diệt mẹ Việc nghiên cứu nhân giống vơ tính khó khăn với lồi bờ vực tuyệt trủng có số lượng 52 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Trong khn khổ thí nghiệm chúng tơi đưa số kết nghiên cứu sau: - Xác định nồng độ chất kích thích sinh trưởng NAA, GA3 than hoạt tính đến khả tái sinh mơ rễ địa lan Kiếm Tứ Thời invitro Chất kích thích sinh trưởng NAA cho hiệu cao bổ sung với nồng độ 0,5 mg/l, tỷ lệ mẫu phát sinh rễ đạt 70% Khả phát sinh rễ cao bổ sung NAA 0,5 mg/l kết hợp với than hoạt tính g/l Sự kết hợp làm tăng tỷ lệ mẫu rễ lên 83% Bên cạnh việc bổ sung GA3 1,5 mg/l làm tăng tỷ lệ mẫu rễ lên 91.1% - Xác định mơi trường có nồng độ chất kích thích sinh trưởng IAA, IBA,NAA đến khả nhân nhanh mô rễ địa lan Kiếm Tứ Thời invitro Chất kích thích sinh trưởng IAA cho hiệu cao bổ sung với nồng độ 1,0 mg/l, hệ số rễ đạt 1,6 lần Khả nhân nhanh rễ cao bổ sung IBA 2,0 mg/ làm hệ số nhân rễ tăng lên 3,1 lần Bên cạnh việc kết hợp IAA 1,0 mg/l, IBA 2,0 mg/l NAA 3,0 mg/l làm hệ số nhân rễ tăng 4,5 lần - Xác định ảnh hưởng chất kích thích tạo chồi kinitine BAP đến khả kích thích tạo chồi từ mơ rễ địa lan Kiếm Tứ Thời invitro.Chất kích thích tạo chồi kinitine cho hiệu cao bổ sung với nồng độ 0,5 mg/l,khi tỷ lệ tạo chồi đạt 60%.Khả kích thích chồi cao bổ sung bổ sung kinitine 0,5 mg/l kết hợp BAP 0,3 mg/l Sự kết hợp làm tăng tỷ lệ mẫu tạo chồi lên 62,2% - Xác định mơi trường có chất kích thích tạo chồi kinitine BAP NAA đến khả tạo hoàn chỉnh địa lan Kiếm Tứ Thời invitro Khả tạo hoàn chỉnh cao kết hợp kinitine 0,5 mg/l , BAP 0,3 mg/l NAA 0,5 mg/l Sự kết hợp làm tăng tỷ lệ mẫu tạo chồi lên 74,4% 5.2 Kiến nghị 53 - Tiếp tục nghiên cứu thêm ảnh hưởng số chất kích thích sinh trưởng khác đến khả tạo chồi địa lanTứ Thời - Ứng dụng mơi trường thích hợp vào nhân giống kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật để nhân nhanh địa lan Tứ Thời 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng Việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội(2002), Cơng nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, Nxb Khoa học Kỹ thuật Ngơ xn bình (2010) Nuôi cấy mô tế bào thực vật sở lý luận ứng dụng.Nxb khoa học kỹ thuật Võ Văn Chi – Lê Khả Kế (1969), Cây cỏ thường thấy ở Việt Nam Nhà xuất khoa học Tr 57 -80 Trương Thị Đẹp(2017), Thực vật dược, Nxb Y học, Hà Nội Nguyễn Hữu Huy – Phan Ngọc Cấp (1995), “Mấy nét cội nguồn phong lanĐặc sản quý nước nhiệt đới” Việt Nam hương sắc Số 1.Tr 15-16 Trần Hợp (1990), Phong lan Việt Nam, Tập 1,2, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật Tr 68 – 92 Đồng Văn Khiêm (2003), “Tiếp thị sinh vật cảnh, hoa cảnh Việt Nam thị trường giới”, Việt Nam hương sắc, Số 25.Tr 22 Nguyễn Thiện Tịch - Đoàn Thị Hoa, Trần Sĩ Dũng, Huỳnh Thị ngọc Nhân (1987), Kỹ thuật trồng hoa lan, Nhà xuất Đồng Nai Tr.72 – 89 Nguyễn Quang Thạch cộng (2005), Kỹ thuật chọn tạo, nhân giống nuôi trồng lan Hồ điệp, Nhà xuất Nông nghiệp Hà nội 10 Nguyễn Tiến Quảng (2012) Hoa phong lan Việt Nam II Tiếng Anh 11 David Du Puy and Phillip Cribb(2007), The Genus Cymbidium, Royal Botanic Gardens, Kew III Một số trang web 12.www.botanyvm.com 13.www.caykieng.farmvina.com 14.www.cites.org 15.www.hoasonla.com 16.www.hihiblog.com 17.www.ncbi.nlm.nih.gov 18.www.vuonhoalan.net 55 19.www.nguoiviet.com 20.www.hoalanvietnam.org 21.Vuonlan.net 22.Biomedia.vn 23.Visitech.vn 24.www.sbc.vietnam.com PHỤ LỤC 1: MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY Bảng 1: Thành phần môi trường MS (Muashige & Skoog) Chai Thành Phần NH4NO3 Hàm Lượng (g/l) 82,5 1650,0 KNO3 95,0 1900,0 MgSO4.7H2O 37,0 370,0 MnSO4.4H2O 2,23 22,3 10 II IV Nồng độ cuối (mg/l) 20 I III Nồng độ (ml) ZnSO4.7H2O 1,058 10,6 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 KI 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 KH2PO4 17 170,0 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 2,784 10 10 0,83 6,2 0,25 27,85 10 V Na2EDTA.2H2O 3,724 37,25 mg/100ml Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 Thiamine acid 100 0,1 0,1 Pyridocine HCl 100 0,5 0,5 Vitamin Sucrose 300000,0 Agar 5500,0 pH 5,6-5,8 PHỤ LỤC KẾT QUẢ XỬ LÝ SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL FILE 10/ 5/19 22:26 :PAGE VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 6233.06 1558.27 69.19 0.000 R 19.0923 9.54613 0.42 0.672 * RESIDUAL 180.160 22.5200 * TOTAL (CORRECTED) 14 6432.31 459.451 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 10/ 5/19 22:26 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF TL 8.89000 70.0000 53.3333 47.7667 35.5333 SE(N= 3) 2.73983 5%LSD 8DF 8.93431 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 44.6540 42.0000 42.6600 SE(N= 5) 2.12226 5%LSD 8DF 6.92048 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 10/ 5/19 22:26 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 43.105 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 21.435 4.7455 11.0 0.0000 |R | | | 0.672 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL FILE 10/ 5/19 22:31 :PAGE VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 446.549 111.637 10.45 0.003 R 76.9214 38.4607 3.60 0.076 * RESIDUAL 85.4587 10.6823 * TOTAL (CORRECTED) 14 608.929 43.4950 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 10/ 5/19 22:31 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF TL 67.8000 76.6667 83.3333 70.0000 73.3333 SE(N= 3) 1.88700 5%LSD 8DF 6.15333 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 77.3400 72.0200 73.3200 SE(N= 5) 1.46167 5%LSD 8DF 4.76635 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 10/ 5/19 22:31 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 74.227 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 6.5951 3.2684 4.4 0.0032 |R | | | 0.0761 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL FILE 11/ 5/19 22: :PAGE VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 789.369 197.342 7.27 0.009 R 58.2240 29.1120 1.07 0.388 * RESIDUAL 217.263 27.1578 * TOTAL (CORRECTED) 14 1064.86 76.0611 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 11/ 5/19 22: :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF TL 68.9000 84.4667 82.2333 91.1333 79.9667 SE(N= 3) 3.00876 5%LSD 8DF 9.81125 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 78.6600 82.0200 83.3400 SE(N= 5) 2.33057 5%LSD 8DF 7.59976 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 11/ 5/19 22: :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 81.340 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 8.7213 5.2113 6.4 0.0094 |R | | | 0.3884 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE HS FILE 10/ 5/19 22:39 :PAGE VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3.06889 767223 215.01 0.000 R 149200E-01 746000E-02 2.09 0.185 * RESIDUAL 285468E-01 356835E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 3.11236 222311 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 10/ 5/19 22:39 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF HS 0.366667 1.62333 1.45667 1.32333 0.900000 SE(N= 3) 0.344884E-01 5%LSD 8DF 0.112463 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 1.12600 1.10000 1.17600 SE(N= 5) 0.267146E-01 5%LSD 8DF 0.871136E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 10/ 5/19 22:39 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 1.1340 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.47150 0.59736E-01 5.3 0.0000 |R | | | 0.1853 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE HS FILE 10/ 5/19 22:49 :PAGE VARIATE V003 HS LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 3.99787 999467 219.34 0.000 R 161332E-02 806662E-03 0.18 0.841 * RESIDUAL 364538E-01 455673E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.03593 288281 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 10/ 5/19 22:49 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF HS 1.67333 2.90000 3.14667 2.51333 2.23333 SE(N= 3) 0.389732E-01 5%LSD 8DF 0.127088 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HS 2.50800 2.48600 2.48600 SE(N= 5) 0.301885E-01 5%LSD 8DF 0.984416E-01 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 10/ 5/19 22:49 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 2.4933 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.53692 0.67504E-01 2.7 0.0000 |R | | | 0.8414 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE HS FILE 10/ 5/19 22:49 :PAGE 1 CT 3.89804 974510 111.24 0.000 R 406533E-01 203267E-01 2.32 0.160 * RESIDUAL 700803E-01 876004E-02 * TOTAL (CORRECTED) 14 4.00877 286341 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 10/ 5/19 22:52 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 HS 3.07667 3.93333 4.34333 4.55667 3.83333 SE(N= 3) 0.540371E-01 5%LSD 8DF 0.176210 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 HS 3.88000 4.00600 3.96000 SE(N= 5) 0.418570E-01 5%LSD 8DF 0.136491 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 10/ 5/19 22:52 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE HS GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 3.9487 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 0.53511 0.93595E-01 2.4 0.0000 |R | | | 0.1596 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL FILE 88 12/ 5/19 20:11 :PAGE VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 5973.54 1493.39 20.66 0.000 R 1.63334 816668 0.01 0.990 * RESIDUAL 578.154 72.2692 * TOTAL (CORRECTED) 14 6553.33 468.095 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 88 12/ 5/19 20:11 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF TL 0.000000 41.1000 60.0000 38.9000 45.5333 SE(N= 3) 4.90813 5%LSD 8DF 16.0049 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 37.3400 36.6400 37.3400 SE(N= 5) 3.80182 5%LSD 8DF 12.3974 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 88 12/ 5/19 20:11 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 37.107 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 21.636 8.5011 22.9 0.0004 |R | | | 0.9898 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL FILE 999 12/ 5/19 21:20 :PAGE VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1548.36 387.089 17.12 0.001 R 10.7893 5.39467 0.24 0.795 * RESIDUAL 180.851 22.6064 * TOTAL (CORRECTED) 14 1740.00 124.286 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 999 12/ 5/19 21:20 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF TL 32.2333 53.3333 56.6667 62.2000 50.0000 SE(N= 3) 2.74508 5%LSD 8DF 8.95142 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 50.6600 52.0200 49.9800 SE(N= 5) 2.12633 5%LSD 8DF 6.93374 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 999 12/ 5/19 21:20 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 50.887 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 11.148 4.7546 9.3 0.0007 |R | | | 0.7947 | | | | THÍ NGHIỆM BALANCED ANOVA FOR VARIATE TL FILE 101 13/ 5/19 0:10 :PAGE VARIATE V003 TL LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT 1626.68 406.671 7.35 0.009 R 231.765 115.883 2.10 0.185 * RESIDUAL 442.388 55.2985 * TOTAL (CORRECTED) 14 2300.84 164.346 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE 101 13/ 5/19 0:10 :PAGE MEANS FOR EFFECT CT CT NOS 3 3 DF TL 43.3333 62.2333 64.4667 67.7667 74.4667 SE(N= 3) 4.29335 5%LSD 8DF 14.0002 MEANS FOR EFFECT R R NOS 5 TL 60.0000 59.3600 68.0000 SE(N= 5) 3.32561 5%LSD 8DF 10.8445 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE 101 13/ 5/19 0:10 :PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE TL GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 62.453 STANDARD DEVIATION C OF V |CT SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 12.820 7.4363 11.9 0.0091 |R | | | 0.1847 | | | | Thái Nguyên ngày… tháng….năm 2019 Người nhận xét phản biện Người hướng dẫn (chữ ký ghi rõ họ tên) chữ ký ghi rõ họ tên) ... tài: “NGHIÊN CỨU TẠO CHỒI ĐỊA LAN KIẾM TỨ THỜI (CYMBIDIUM ENSIFOLIUM) TỪ MÔ RỄ BẰNG KỸ THUẬT NI CẤY IN VITRO KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Ngành/chuyên ngành: Công nghệ Sinh... nhiên Xuất phát từ sở khoa học yêu cầu thực tế khách quan trên, tiến hành thực đề tài: Nghiên cứu tạo chồi địa lan kiếm Tứ Thời (cymbidium ensifolium) từ mô rễ kỹ thuật nuôi cấy in vitro 1.2 Mục... kích thích tạo chồi từ mô rễ địa lan kiếm Tứ Thời 27 3.2.4 Nội dung 4: Nghiên cứu mơi trường tạo hồn chỉnh từ mô rễ địa lan kiến Tứ Thời 27 3.3 Phương pháp nghiên cứu