Phân tích sắc ký Chương 3: Sắc ký lỏng hiệu nâng cao HPLC

13-Nov-18 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 13-Nov-18 High High Pressure Price Liquid Liquid Chromatography Chromatography High Perfomance Liquid Chromatography Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.1 Sắc ký pha thuận (normal phase mode) a Russian-Italian botanist 1903, Tswett Михаи́л Семёнович Цвет F: flow rate (mL/min) time (min) - Sắc ký pha thuận có pha tĩnh phân cực phaT:động 13-Nov-18 Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.1 Sắc ký pha thuận (normal phase mode) Pha tĩnh Silic dioxyd (silica) Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.1 Sắc ký pha thuận (normal phase mode) Pha tĩnh Silica mạch Cacbon R cyano (-CH2 – (CH2)2 – CN); amino (-CH2 – (CH2)2 – NH2); diol (-CH2CH2 – CH(OH)CH2OH) R nhánh có nhóm chức phân cực Độ phân cực tăng dần từ -cyano đến diol 13-Nov-18 Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.1 Sắc ký pha thuận (normal phase mode) Thành phần Dung môi chủ yếu (làm pha động ) Pha động Dung môi phụ Thay đổi tR Không phân cực Phân cực phân cực Các dung môi thường không hấp thu vùng UV Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 3.1 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1.1 Sắc ký pha thuận (normal phase mode) Cơ chế lưu giữ: sắc kí hấp phụ Cơ chế lưu giữ: Chất phân tích cạnh tranh với phân tử pha động hấp phụ tâm hoạt động pha tĩnh Lực liên kết pha tĩnh chất phân tích chủ yếu lực tương tác lưỡng cực – lưỡng cực, liên kết hidrogen 13-Nov-18 Chương SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CƠ SỞ THUYẾT SẮC KÝ 3.1 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1.1 Sắc ký pha đảo (Reverse phase mode) Sắc ký pha đảo có pha tĩnh phân cực pha động Áp dụng cho chất phân cực (háo dầu) Chất tan kỵ nước bị giữ lại mạnh Pha tĩnh Chế tạo từ silica, tác dụng với clorosilan tạo dẫn xuất siloxan cột pha thuận điều khác biệt R gốc HC no không phân cực, gốc phenyl - CH2 – (CH2)16- CH3 : gốc octadecyl Cột C18 (ODS) - CH2 – (CH2) 6- CH3 : gốc ocyl Cột C8 - CH2 – (CH2) 2- CH3 : gốc butyl Cột C4 - CH2 – (CH2) 2- C6H5 : gốc phenyl propyl Cột phenyl Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.1 Sắc ký pha đảo (Reverse phase mode) Pha động Dung môi hữu cơ, dung mội hữu nước, dung môi hưu đệm Các dung môi hữu thường sử dụng Methanol (MeOH), acetonitrile (ACN) hay THF (Tetrahydrofuran (CH2)4O ) Thành phân nước pha động tăng lực rửa giải giảm Khi sử dụng dung dịch đệm, thông số quan trọng: nồng độ đệm pH ; Thành phần dung dịch đệm dung môi hữu 13-Nov-18 Chương Chương 3CƠ SẮC SẮC KÝ KÝLÝ LỎNG LỎNG HIỆU HIỆU NĂNG NĂNG CAO CAO (HPLC) (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.1 Sắc ký pha đảo (Reverse phase mode) Cơ chế lưu giữ Pha tĩnh không phân cực , Liên kết pha tĩnh chất tan liên kết kị nước: phần phân cực chất phân tích gắn pha tĩnh Nếu phân tử chất tan có nhiều dây Cacbon, nhóm thơm tính kỵ nước mạnh hơn, Chất tan bi lưu giữ mạnh cột Nếu mẫu có nhiểu nhóm cacboxyl, nhóm amino, nhóm hydroxyl tính kỵ nước yếu Chất tan bị lưu giữ nhanh Chương 3CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.3 Sắc ký trao đổi ion a.Khái niệm Dựa vào lực hút trái dấu ion chất tan vị trí mang điện tích pha tĩnh Chất trao đổi cation chất trao đổi anion polymer không tan nước mang nhóm trao đổi ion gọi chất trao đổi ion (ion exchangers) nhựa trao đổi (ion exchange resins) Tương tác nhựa trao đổi ion ion tích điện trái dấu 13-Nov-18 Chương 3CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.3 Sắc ký trao đổi ion b Pha tĩnh pha động Pha tĩnh - Nhựa trao đổi cation Loại acid mạnh Loại acid yếu Nhựa trao đổi anion Base mạnh Base yếu Chương 3CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.3 Sắc ký trao đổi ion Pha Tĩnh Nhựa trao đổi Cation b Pha tĩnh pha động • Mang nhóm acid sulfonic (R-SO3- H+) phân ly hồn tồn , khơng phụ thuộc pH AXIT - + + • MẠNH R- C6H5-SO3 H → R- C6H5-SO3 + H AXIT YẾU • mang nhóm R-COOH • hoạt động khoảng pH>PKa để tồn dạng anion tham gia trao đổi ion • pH cationit mạnh tồn KHÁC dạng anion, cationit yếu mang điện tích NHAU pH>pKa lúc hoạt động 13-Nov-18 Chương SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CƠ SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.3 Sắc ký trao đổi ion b Pha tĩnh pha động Nhựa trao đổi Anion có nhóm base amin liên kết với phân tử polymer Chất trao đổi base mạnh có nhóm amin bậc bốn [RN(CH3)3+ OH- ] Dạng base yếu có nhóm amin bậc hai bậc ba Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.3 Sắc ký trao đổi ion b Pha tĩnh pha động R silica hay Polimer hữu Nhựa trao đổi cation silica Nhựa trao đổi cation polymer 13-Nov-18 Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.3 Sắc ký trao đổi ion b Pha tĩnh pha động Pha động Dung dịch có ion rửa giải pha nước đệm Ion rửa giải ion đẩy ion bị giữ pha tĩnh Dung dịch đệm giữ cho PH dung dịch rửa giải có giá trị ổn định chất phân tích tồn dạng ion cột yếu cột hoạt động (tồn nhóm chức mang điện tích) Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 1.7.3 Sắc ký trao đổi ion c Cơ chế lưu giữ Bản chất lực tương tác : Lực tĩnh điện Đầu tiên ion pha động tương tác với pha tĩnh bị giữ lại pha tĩnh Sau cho chất phân tích qua cột, ion cần phân tích có lực tương tác tĩnh điện mạnh đẩy ion pha động khỏi pha tĩnh 13-Nov-18 Chương SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CƠ SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 1.7.4 Sắc ký trao đổi ion c Cơ chế lưu giữ Sắc ký đồ phân tích nước sắc ký trao đổi ion Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 1.7.4 Sắc ký ghép cặp ion (Reversed phase ion pairing) a Khái niệm biến thể sắc ký pha đảo Điều khác biệt sắc ký ghép cặp ion phải tạo điều kiện để chất phân tích phải dạng ion hóa hồn tồn (bằng cách điều chỉnh pH) Nếu chất phân tích acid yếu HA HA phải phân ly hoàn toàn thành H+ A- Nếu chất phân tích baz yếu B B phải tác dụng với H+ để tạo thành BH+ Thêm chất đối ion Q+, hay Q- A- + Q+  [A-,Q+ ] BH+ + Q-  [BH+, Q- ] Đuôi kỵ nước Cặp ion có tính kỵ nước cao bị pha tĩnh giữ lại giống phân tử không điện tích 10 13-Nov-18 Ảnh hưởng pH pha động lên độ lưu giữ RP-HPLC 111 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.2 CHUẨN BỊ PHA ĐỘNG 3.3.2.1 Yêu cầu pha động Pha động phải trơ với pha tĩnh sử dụng Chất phân tích mẫu phải tan pha động Pha động phải bền vững theo thời gian dung mội khác pha động khác phải tan lẫn vào Khi thay đổi pha động Pha động phải có độ tinh khiết cao Phải nhanh đạt cân trình sắc ký Phải phù hợp với loại Detector rẻ tốt, thân thiện với môi trường tốt 56 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.2 CHUẨN BỊ PHA ĐỘNG 3.3.2.2 Làm dung môi a/ Các điều cần lưu ý b/ Các loại màng lọc c/ Lọc : Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.2 CHUẨN BỊ PHA ĐỘNG 3.3.2.2 Làm sach dung môi a/ Các điều cần lưu ý Luôn sử dụng dung môi loại HPLC Mua từ nhà cung cấp tin cậy Lọc dung môi 57 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.2 CHUẨN BỊ PHA ĐỘNG 3.3.2.2 Làm sach dung môi c/ Lọc : Thường dùng hệ thống lọc áp suất thấp Cellulose Acetate Membrane Filters are suitable for aqueous and many alcoholic media, low protein binding capacity, thermally stable up to 180℃ 58 13-Nov-18 Whatman 7404001 Nylon Membrane Circle, 0.45 um pore size, 13 mm, Whatman® PTFE membrane filters TE36 sheets, pore size 0.45 μm, 59 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.2 CHUẨN BỊ PHA ĐỘNG Chế độ đẳng dòng kênh -Phối trộn pha động theo tỷ lệ thành phần mong muốn, - lọc hệ thống lọc chân khơng với màng lọc có pore size thường 0.45µm 3.3.2.2 Làm dung mơi chế độ chế độ đẳng dòng nhiều kênh gradient lọc riêng loại dung môi Các loại dung mội phối trộn có khả tủa (đặc biệt đệm phốt phát môi trường hữu cơ)  phải phối trộn với tỷ lệ muối đệm cao (theo chương trình gradient nghiên cứu) trước ngày để quan sát Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.2 CHUẨN BỊ PHA ĐỘNG 3.3.2.3 Đuổi khí Nguyên nhân : Trong dung mội sau lọc khí Các bọt khí chạy vào cột tạo hạt khí làm ảnh hưởng đến q trình sắc ký (peak bị bành rộng ) Cách làm: đặt chai chứa pha động vào bể siêu âm khoảng 15 phút (đối với dung mội hữu cơ) 35 ‘ ( dung mội nước) 60 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.2 CHUẨN BỊ PHA ĐỘNG 3.3.2.3 Đuổi khí Lưu ý: khơng nên đánh siêu âm lâu thành phần pha động có chất dễ bay (ví dụ trifluoroacetic) Ảnh hưởng việc khử khí lên peak sắc ký Peak chuẩn amin sử dụng : a/ Pha động chuẩn bị xong 50H2O – 50MeOH -0.1 trifluoroacetic b/ sau h sục khí c/ sau 8h sục khí Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.3 Chuẩn bị hệ thống HPLC trước tiêm mẫu vào 3.3.3.1 Lắp pha động vào hệ thống u cầu bình chứa pha động -Ln ln đậy kín dùng chứa dung mơi -Khơng chứa chai plastic , chất plastic hợp chất có khối lượng phân tử thấp khuếch tán vào chất lỏng -Trong suốt để kiểm sốt mực chất lỏng bình thường xuyên (nên dùng chai thủy tinh ) - Nếu bình chứa nước , cần kiểm sốt thướng xuyên tránh vi khuẩn phát triển nhiễm bẩn nước 61 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.3 Chuẩn bị hệ thống HPLC trước tiêm mẫu vào 3.3.3.2 Lắp cột vào hệ thống Marvin C McMaster tác giả “ HPLC A Practical User’s Guide” xuất năm 2007 nhà xuất A John Wiley & Sons, Inc., Publication thống kê -80% trình tách thực cột pha đảo - 10% sắc ký loại cở (hầu hết cho mẫu polymer protein) , - 8% sắc ký trao đổi ion, - 2% sắc ký pha thuận silica zirconium alumina Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.3 Chuẩn bị hệ thống HPLC trước tiêm mẫu vào 3.3.3.2 Lắp cột vào hệ thống a Một số lưu ý sử dụng cột Duy trì pH cột silica pha liên kết -8 (tốt pH 2.5 ÷ 7.5) Luôn rửa cột với dung mội dung môi trung gian (bridging solvent) hai dung môi cũ không trộn lẫn) Không chuyển từ dm hữu sang dung dịch đệm ngược lại Không làm shock cột Bảo quản cột Vấn đề tăng áp suất Duy trì tuổi thọ cột 62 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.3 Chuẩn bị hệ thống HPLC trước tiêm mẫu vào 3.3.3.2 Lắp cột vào hệ thống b lắp cột Mội cột có mũi tên hướng dòng chảy qua, lắp cột vào hệ thống phải lắp hướng mũi tên trùng với hướng dòng chảy pha động, Nếu lắp ngược làm giảm hiệu tách cột Trước cột nên có cột bảo vệ Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.3 Chuẩn bị hệ thống HPLC trước tiêm mẫu vào 3.3.3.2 Lắp cột vào hệ thống c Cân cột Trước tiêm mẫu vào hệ thống sắc ký phải cân cột Cân cột đến tín hiệu đường ổn định Thời gian cân cột tùy thuộc nhiều vào chất pha động 63 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.4 Chuẩn bị mẫu tiêm vào vào hệ thống HPLC phenylalanine Ảnh hưởng thành phần dung môi pha mẫu lên dạng peak Mẫu hoà tan pha động với (a) 0%, (b) 30%, (c) 50%, (d) 70% ACN Pha động: đệm pH3.5 – ACN (92-8) , pha đảo, đầu dò UV 210nm In 33% ACN In 66% ACN In 100% ACN Caffeine at 0.75 mg ml 1, μl injection volume Column: Luna μm C18(2) 50×2.0 mm Mobile phase: gradient to 95% acetonitrile (with 0.1% formic acid) in 7.5 at a flow-rate of ml 64 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.4 Chuẩn bị mẫu tiêm vào vào hệ thống HPLC Lương mẫu lớn peak bị bành rộng không đối xứng, thời gian lưu thay đổi tiêm 2mg acetophenone (peak ) Veratrole Điều kiện sắc ký cột 25cm, 3.2mm i.d.; pha tĩnh LiChrosorb SI 60 mm; Pha động : hexane– diethyl ether : 1, tốc độ dòng ml/min Đầu dò UV, 290 nm, Tiêm 2µg acetophenone (peak ) Veratrole Caffeine 0.75 mg/ml in 100% ACN Column: Luna μm C18(2) 50x2.0 mm Mobile phase: gradient to 95% ACN (0.1% formic acid) in 7.5 Flow-rate: ml/min Effect of sample injection volume for a given injection solvent composition 65 13-Nov-18 Sample Solvent Strength Maximum Injection Volume 100% Strong Solvent ≤ 10 µL Stronger than mobile Phase ≤ 25 µL Mobile Phase ≤ 15% of Peak Volume Weaker than Mobile Phase Large Peak volume Baseline peak width (min.) x F mL/min Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.4 Chuẩn bị mẫu tiêm vào vào hệ thống HPLC Mẫu trước tiêm vào hệ thống HPLC phải lọc qua màng lọc 0.45µm nhỏ để tránh làm nghẹt cột Sau tiêm mẫu vào ta có sắc ký đồ Từ sắc ký đồ định lượng định tính 66 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.5 Chương trình isoractic gradient pha động, gradient bước sóng 3.3.5.1 Rửa giải isocractic Quá trình tách sắc ký lỏng mà thành phần pha động không thay đổi gọi rửa giải đẳng dòng (isocractic) Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.5 Chương trình isoractic gradient pha động, gradient bước sóng 3.5.2 Rửa giải gradient pha động Rửa giải gragient thay đổi liên tục thành phân pha động suốt trình tách cho lưu giữ peak sau giảm liện tục tức pha động có độ mạnh tăng đều suốt trình tách 67 13-Nov-18 %B/min = (100-5)/20 = 4.75 %B/min 12.8 21.2 Isocratic analysis possible when scouting gradient: ΔtG < 0.25tG 8.4 > 0.25*20 = Values of < k* < 10 are desired A good starting value for k* is 136 68 13-Nov-18 Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.5 Chương trình isoractic gradient pha động, gradient bước sóng 3.5.2 Rửa giải gradient bước sóng Đầu dò UV Nếu mẫu phân tích gồm nhiều chất khác số chất có hấp thu bước sóng khác ứng với nhóm chất phải cài đặt bước sóng tương ứng để tăng độ nhạy chất phân tích Đầu dò DAD : Có thể chọn nhiều bước sóng để chạy mẫu lúc Đầu dò huỳnh quang Nếu chất phát huỳnh quang có bước sóng phát xạ kích thích khác ứng với nhóm chất phải cài đặt bước sóng tương ứng để tăng độ nhạy chất phân tích Chương SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) 3.3 CÁCH THỨC TIẾN HÀNH SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 3.3.5 Chương trình isoractic gradient pha động, gradient bước sóng 3.5.2 Rửa giải gradient bước sóng Chương trình : Thời gian Chương trình ex/em: 324/366nm (OXO, NAL,FLU : -) - Bước sóng Bước sóng kích thích phát xạ (nm) (nm) 00.00 263 (OXO) 380 10.00 312 (NaL) 366 16.00 263 380 16.10 Stop 69 Flumequine Oxolinic Sarafloxacin Enrofloxacin Norfloxacin Ciprofloxacin 13-Nov-18 Quinolone NOR CIP ENRO SARA OXO FLU tR (phút) 5,925 6,726 7,892 8,707 10,396 14,054 70 ... 13-Nov-18 Chương SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CƠ SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 1.7.4 Sắc ký trao đổi ion c Cơ chế lưu giữ Sắc ký đồ phân tích nước sắc. .. 13-Nov-18 Chương SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) CƠ SỞ THUYẾT SẮC KÝ 3.1 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1.1 Sắc ký pha đảo (Reverse phase mode) Sắc ký pha đảo có pha tĩnh phân. .. - Sắc ký pha thuận có pha tĩnh phân cực phaT:động 13-Nov-18 Chương CƠ SẮC KÝLÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) SỞ THUYẾT SẮC KÝ 1.7 MỘT SỐ LOẠI SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO THÔNG DỤNG 3.1 3.1.1 Sắc ký