các phương pháp phân tích hóa lý sắc ký lỏng hiệu năng cao(hplc)

SEMINAR SҲC KÝ LӒNG HiӊU NĂNG CAO(HPLC) CÁC PP PHÂN TÍCH HÓA LÝ TRƯӠNG ĐҤI HӐC BÁCH KHOA TP. HӖ CHÍ MINH KHOA KӺ THUҰT HÓA HӐC GIÁO VIÊN HƯӞNG DҮN: TiӃn sĩ NguyӉn Thӏ Lan Phi SINH VIÊN THӴC HIӊN: 1. Bùi Tài 2. Phan Kim Anh 3. Trҫn Thӏ Ngӑc 4. Phan Thӏ Thiên Trang 5. Đӛ Đһng Thuұn 6. HuǤnh Thӏ Mai Trang 7. Phҥm Thӏ Hoàng Oanh I.Giӟi thiӋu kӻ thuұt sҳc ký lӓng Chҩt hӳu cơ khó bay hơi?? Quá trình tách y Quá trình tách dӵa vào tính chҩt hóa hӑc, vұt lý và hóa lý cӫa các chҩt. y Dӵa trên 2 quá trình: +Hҩp phө +Giҧi hҩp phө Pha tĩnh Pha đӝng Phân lo̹i HPLC dΉa b̻n ch̽t tương tác:  Sҳc ký phân bӕ (partition chromatography)  Sҳc ký hҩp phө hoһc lӓng-rҳn (adsorption or liquid- solid chromatography)  Sҳc ký trao đәi ion (ion exchange chromatography) Phân o̹ HPLC SKL chia thành 2 nhóm: -SK lӓng áp suҩt thưӡng (sҳc ký cә điӇn) -SK lӓng áp suҩt cao (SKL hiӋu năng cao: HPLC) (High Performance Liquid Chromatography) Phân lo̹i HPLC y Phân loҥi HPLC dӵa vào trҥng thái pha tĩnh y Pha đӝng: Lӓng y Pha tĩnh:Lӓng SK lӓng Ȃ lӓng (LLC) y Pha đӝng: lӓng SK lӓng Ȃ rҳn y Pha tĩnh:Rҳn Đӏnh tính và đӏnh lưӧng y Khi nӕi vӟi đҫu do (detector), HPLC cho phép: -Đӏnh tính: dӵa vào thӡi gian lưu -Đӏnh lưӧng: dӵa vào chiӅu cao hoһc diӋn tích peak Ưu điӇm cӫa phương pháp HPLC: -Có thӇ phân tích đӗng thӡi nhiӅu hӧp chҩt -Không cҫn làm bay hơi mүu -Đӝ phân giҧi cao nhӡ quá trình tách trên cӝt -Đӝ nhҥy cao (nhӡ đҫu dò - ThӇ tích mүu phân tích nhӓ (1-100mL) Degasse Pump Tiím mүu Column Detector II. HӋ thӕng H L  Loҥi bӓ hoàn toàn khí hòa tan và cһn trong dung môi ( tránh làm hӓng cӝt sҳc ký hay nhiӉu đưӡng nӅn, tҥo ra các Peak tҥp trong quá trình phân tích và ҧnh hưӣng đӃn chҩt lưӧng detector.  Trang bӏ các loҥi valves tӹ lӋ (proportionating valves) cho phép đưa dung môi tӯ hai bình chӭa vӟi các lưu lưӧng thay đәi liên tөc 1. Bình đ͹ng dung môi 2. Bӝ khӱ khí (Degasse) -Mөc đích cӫa bӝ khӱ khí nhҵm loҥi trӯ các bӑt nhӓ còn sót lҥi trong dung môi pha đӝng. -NӃu trong quá trình phân tích mà dung môi pha đӝng còn sót các bӑt khí thì mӝt sӕ hiӋn tưӧng: -Tӹ lӋ pha đӝng cӫa các đưӡng dung môi lҩy không đúng sӁ làm cho thӡi gian lưu cӫa P ak thay đәi . - Trong trưӡng hӧp bӑt quá nhiӅu bӝ khӱ khí không thӇ loҥi trӯ hӃt đưӧc thì có thӇ pump sӁ không hút đưӧc dung môi, khi đó áp suҩt không lên và máy sҳc ký sӁ ngӯng hoҥt đӝng . [...]... tӱ phân tích, pha đӝng, pha tĩnh Quy tҳc chung: đӝ phân cӵc (polarity) cӫa cҩu tӱ cҫn phân tích và pha tĩnh là tương đương còn pha đӝng có đӝ phân cӵc sai biӋt Khi đӝ phân cӵc cӫa cҩu tӱ và pha tĩnh quá giӕng nhau: tương tác mҥnh giӳa cҩu tӱ cҫn phân tích và pha tĩnh   thӡi gian phân tích kéo dài CHӐN ĐIӄU KIӊN SҲC KÝ Sҳc ký lӓng pha thưӡng và pha đҧo Pha thưӡng Pha đҧo Pha tĩnh Phân cӵc Không phân. .. đӝng Không phân cӵc Phân cӵc CHӐN ĐIӄU KIӊN SҲC KÝ 1 Lӵa chӑn đk pha tĩnh: y Cӝt pha thuұn ( NP) Cӝt này là loҥi cӝt dùng đӇ tách các chҩt không phân cӵc hay ít phân cӵc Trên bӅ mһt hoҥt đӝng cӫa nó có chӭa các nhóm OH phân cӵc ưa nưӟc y Cӝt pha đҧo ( RP) : ( Silicagel đã Alkyl hóa ) Dùng đӇ tách các chҩt không phân cӵc, ít phân cӵc ,các chҩt phân cӵc có thӇ tҥo cһp Ion Trên bӅ mһt hoҥt đӝng các nhóm... chҩt phân tích (đӏnh tính và đӏnh lưӧng) y Có nhiӅu loҥi detector khác nhau, tùy mөc đích phân tích và tính chҩt cӫa các chҩt cҫn phân tích mà ngưӡi ta sӱ dөng loҥi detector phù hӧp 7 Bͱ phͅn ghi tín hi͟u và in k͗t qu̻ y ĐӇ ghi tín hiӋu phát hiӋn do detector truyӅn sang y Trong các máy thӃ hӋ cũ thì sӱ dөng máy ghi đơn giҧn có thӇ vӁ sҳc ký đӗ, thӡi gian lưu, diӋn tích cӫa Peak ,chiӅu cao « Ngu ên lý. .. Đưa mүu vào cӝt phân tích Vӟi dung tích 5 - 100Ql y Có 2 cách lҩy mүu vào trong cӝt: -Bҵng tiêm mүu thӫ công( tiêm bҵng tay ) -Tiêm mүu tӵ đӝng( Autosample) 5 Cͱt s͇c ký : y Cӝt sҳc ký thông thưӡng làm bҵng thép y y y y y không rӍ ChiӅu dài cӝt khoҧng: 10 -30cm Đưӡng kính trong: 1-10mm Hҥt chҩt nhӗi cӥ J: 5-10 Qm NhiӋt đӝ gҫn 150°C vӟi sai sӕ < 0,05°C Đӕi vӟi mӝt sӕ phương pháp phân tích đòi hӓi phҧi... ĐIӄU KIӊN SҲC KÝ y Muӕn có mӝt kӃt quҧ tách tӕt nhҩt ta phҧi tìm đưӧc các điӅu kiӋn sҳc ký tӕt nhҩt cho mӝt hӛn hӧp mүu y Các điӅu kiӋn đó bao gӗm : y Pha tĩnh : y y y y - Loҥi pha tĩnh - Kích thưӟc cӝt Pha đӝng Loҥi Detector Van tiêm mүu,thӇ tích tiêm Các yӃu tӕ khác : nhiӋt đӝ ,đӝ nhҥy cӫa detector bưӟc sóng phân tích CHӐN ĐIӄU KIӊN SҲC KÝ LΉa chͥn pha đͱng và pha tĩnh Chӫ yӃu dӵa vào sӵ phân cӵc cӫa... Alkyl hóa Vì thӃ nó ít phân cӵc hay phân cӵc rҩt ít CHӐN ĐIӄU KIӊN SҲC KÝ 2 Lӵa chӑn pha đӝng y Pha đӝng có thӇ làm thay đәi : + Đӝ chӑn lӑc E + Thӡi gian lưu + HiӋu năng tách cӫa cӝt + Đӝ phân giҧi + Tính đӕi xӭng cӫa Peak Lӵa chӑn pha đӝng + Pha đӝng phҧi trơ vӟi pha tĩnh đã có Không đưӧc làm cho pha tĩnh bӏ biӃn đәi hóa hӑc ( vd giá trӏ pH : 2.5< pH . đã Alkyl hóa ) Dùng đӇ tách các chҩt không phân cӵc, ít phân cӵc ,các chҩt phân cӵc có thӇ tҥo cһp Ion .Trên bӅ mһt hoҥt đӝng các nhóm OH đã bӏ Alkyl hóa. Vì thӃ nó ít phân cӵc hay phân cӵc rҩt. giӳa cҩu tӱ cҫn phân tích và pha tĩnh  thӡi gian phân tích kéo dài Sҳc ký lӓng pha thưӡng và pha đҧo Pha thưӡng Pha đҧ o Pha tĩnh Phân cӵc Không phân cӵc Pha đӝng Không phân cӵc Phân cӵc CHӐN. SEMINAR SҲC KÝ LӒNG HiӊU NĂNG CAO(HPLC) CÁC PP PHÂN TÍCH HÓA LÝ TRƯӠNG ĐҤI HӐC BÁCH KHOA TP. HӖ CHÍ MINH KHOA KӺ THUҰT HÓA HӐC GIÁO VIÊN HƯӞNG DҮN: TiӃn sĩ NguyӉn