Nghiên cứu nhân giống cây oải hương lá xẻ (lavandula dentata l ) bằng kỹ thuật nuôi cấy mô và vi thủy canh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI === === NGUYỄN THỊ THÚY MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY OẢI HƢƠNG LÁ XẺ (LAVANDULA DENTATA L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ VÀ VI THỦY CANH LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI === === NGUYỄN THỊ THÚY MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY OẢI HƢƠNG LÁ XẺ (LAVANDULA DENTATA L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ VÀ VI THỦY CANH Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS LA VIỆT HỒNG HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Trƣớc hết tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS La Việt Hồng tận tình hƣớng dẫn, bảo tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn ban Lãnh đạo trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 2, Ban chủ nhiệm khoa Sinh - KTNN trƣờng Đại học Sƣ phạm Hà Nội 2, tạo điều kiện cho học tập hoàn thành luận văn Trong thời gian thực đề tài nhận đƣợc giúp đỡ tận tình Mai Thị Hồng - Phòng thí nghiệm Sinh lý thực vật giúp đỡ, đóng góp ý kiến để tơi hồn thành luận văn này, nhân xin chân thành cảm ơn Cuối cùng, tơi xin cảm ơn gia đình bạn bè động viên, tạo điều kiện giúp đỡ suốt thời gian tơi học tập nhƣ hồn thành luận văn Mặc dù cố gắng nhƣng điều kiện thời gian trình độ chuyên mơn nhiều hạn chế nên khơng tránh khỏi thiếu sót, tơi mong nhận đƣợc góp ý thầy để luận văn tơi hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 15 tháng 11 năm 2018 Học viên NGUYỄN THỊ THÚY MAI LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu nhân giống Oải hƣơng xẻ (Lavandula dentata L.) kỹ thuật nuôi cấy mô vi thủy canh” kết nghiên cứu riêng TS La Việt Hồng hƣớng dẫn Các số liệu, kết nghiên cứu trung thực chƣa đƣợc công bố Hà Nội, ngày 15 tháng 11 năm 2018 Học viên NGUYỄN THỊ THÚY MAI DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BAP: 6-Benzyl amino purin CT: Công thức ĐC: Đối chứng KI: Kinetin IAA: Indol-3-axit axetic IBA: Indol butyric acid MS: Murashige Skoog NAA: Napthlacetic acid Nxb, NXB: Nhà xuất TDZ: Thidiazuron MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục đích nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn NỘI DUNG Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung Oải hƣơng xẻ 1.1.1 Phân loại 1.1.2 Nguồn gốc phân bố 1.1.3 Đặc điểm thực vật học Oải hƣơng xẻ 1.1.4 Yêu cầu ngoại cảnh Oải hƣơng xẻ 1.1.5 Giá trị sử dụng Oải hƣơng xẻ 1.2 Giới thiệu phƣơng pháp nhân giống Oải hƣơng in vitro 1.2.1 Nhân giống Oải hƣơng từ mô phân sinh 1.2.2 Nhân giống Oải hƣơng thông qua phát sinh quan 12 1.3 Phƣơng pháp vi thủy canh 14 1.3.1 Sơ lƣợc phƣơng pháp vi thủy canh 14 1.3.2 Ƣu điểm phƣơng pháp vi thủy canh 15 1.4 Những nghiên cứu nuôi cấy mô Oải hƣơng xẻ Lavandula dentata L giới Việt Nam 16 1.4.1 Những nghiên cứu nuôi cấy mô Oải hƣơng xẻ Lavandula dentata L giới 16 1.4.2 Tình hình nghiên cứu Oải hƣơng xẻ Việt Nam 19 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 20 2.2 Thời gian điạ điểm nghiên cứu 20 2.3 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 20 2.3.1 Thiết bị 20 2.3.2 Dụng cụ 20 2.4 Môi trƣờng nuôi cấy 20 2.5 Điều kiện nuôi cấy 21 2.6 Phƣơng pháp nghiên cứu 21 2.6.1 Bố trí thí nghiệm 21 2.6.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 2.7 Phƣơng pháp xử lý số liệu 26 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Tạo vật liệu khởi đầu in vitro 27 3.2 Tái sinh nhân nhanh chồi in vitro 29 3.3 Ra rễ in vitro tạo hoàn chỉnh 31 3.4 Rèn luyện in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 34 3.5 Thiết kế, thử nghiệm hệ thống vi thủy canh để rèn luyện Oải hƣơng xẻ in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 36 3.5.1 Thiết kế hệ thống vi thủy canh, xác định thời gian tạo lỗ thống khí hệ thống vi thủy canh mơi trƣờng 36 3.5.2 Ảnh hƣởng tiền xử lý NAA, bổ sung NAA trực tiếp dung dịch dinh dƣỡng đến tỷ lệ rễ sinh trƣởng chồi Oải hƣơng 39 3.5.3 Chuyển huấn luyện Oải hƣơng từ hệ thống vi thủy canh thích nghi với điều kiện tự nhiên 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 42 Kết luận 42 Kiến nghị 42 DANH MỤC CƠNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1: Cơng thức thí nghiệm tạo vật liệu khởi đầu 22 Bảng 2.2: Các công thức nghiên cứu ảnh hƣởng BAP, Kinetin đến tái sinh nhân nhanh chồi in vitro từ đốt thân hoa Oải hƣơng 23 Bảng 2.3: Các công thức nghiên cứu ảnh hƣởng NAA, IAA đến rễ tạo Oải hƣơng hoàn chỉnh 24 Bảng 2.4: Ảnh hƣởng giá thể đến tỉ lệ sống Oải hƣơng 25 Bảng 3.1: Kết tạo vật liệu khởi đầu in vitro từ đốt thân Oải hƣơng xẻ 27 Bảng 3.2: Kết ảnh hƣởng BAP KIN đến trình nhân nhanh chồi Oải hƣơng in vitro sau tuần nuôi cấy 29 Bảng 3.3: Kết nghiên cứu ảnh hƣởng NAA IAA đến khả rễ chồi 32 Bảng 3.4: Rèn luyện in vitro tự nhiên 35 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng thời gian tạo lỗ thống khí hệ thống vi thủy canh môi trƣờng đến tỷ lệ sống (%) chồi Oải hƣơng 38 Bảng 3.6: Ảnh hƣởng tiền xử lý NAA, bổ sung NAA trực tiếp dung dịch dinh dƣỡng đến sinh trƣởng chồi Oải hƣơng 40 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cây hoa Oải hƣơng xẻ (Lavandula dentate L.) Hình 1.2: Hệ thống vi thủy canh (microponic) 15 Hình 2.1: Sơ đồ nghiên cứu 21 Hình 3.1: Kết tạo vật liệu khởi đầu in vitro từ đốt thân 28 Hình 3.2: Chồi hoa Oải hƣơng 31 Hình 3.3: Rễ Oải hƣơng xẻ in vitro 34 Hình 3.4: Rèn luyện Oải hƣơng xẻ in vitro 36 Hình 3.5: Thiết kế hệ thống vi thủy canh đơn giản để huấn luyện Oải hƣơng xẻ in vitro thích nghi với điều kiện tự nhiên 37 Hình 3.6: Sơ đồ quy trình nhân giống hoa Oải hƣơng xẻ Lavandula dentata L kỹ thuật nuôi cấy mô vi thủy canh 41 RÈ LUY CÂY GV OA OẢI g , Chu Đức Kho Si h - K h Nô g ghi V n D truyền Nông ng V ị ĐƠ GIẢ C O QUY RÌ ƢƠ G LÁ XẺ ( L.) ài Ng yễn ị úy Mai ọc Sư m Hà Nộ Kho học Nô g ghi p Vi N m xẻ ) có ứng dụng rộ rã tro đời sống co àm d ợc liệu, t u n ận tin dầu, tra trí… Tro qu trì cấy mơ, a đoạn rèn lu ện c i i ro t íc ng i vớ đ ều kiện tự ê nút t ắt, làm ạn c ế số ợng c cấ mô p ục vụ c s n xuất Tr ng ng iên cứu nà , ệ t ống vi t ủ c n đ đ ợc t iết kế để c i t iện tỷ lệ sống sót củ c xẻ a đoạn rèn lu ện Hệ t ống vi t ủ c n gồm ộp PE tr ng suốt (đ ờng kín miệ 6,0 cm, đ kí đ y 5,0 cm, cao 6,0 cm), t ể bọt biể (đ ờng kín cm, dà cm) có tạ k e n ỏ để gắn c ồi i i ro, dung dịc d d ỡng p ù ợp MS 10% có bổ sung trực tiếp NAA 0,25 mg/ , miệng ng ài củ ệ t ố đ ợc b p ủ màng PE bọc t ực p ẩm tr ng 10 ngà c tỷ lệ r rễ đạt 88,3%, số rễ c đạt 7,50 10 ngà tuổ đ ợc c u ển s ng giá t ể đất p ù sa + x dừ 1:1) có tỷ lệ sống sót 92% Kết qu ng iên cứu nà có tiềm ă ứng dụng c tr ng s n xuất c xẻ bằ p p p cấ mơ T khó : ệ t ống, xẻ, rèn lu ện, t iết kế, vi t ủ c n MỞ ĐẦU Cây oải hƣơng ( spp.) thực vật có hoa thuộc họ oa mơi (Lamiaceae), gồm có 39 lồi gần 400 giống lai (Goncalves & Romano, 3) Trong đó, nhiều lồi oải hƣơng đƣợc trồng để tách chiết lấy tinh dầu, làm dƣợc liệu nguyên liệu cho ngành công nghiệp khác (Argentieri, , ; ozics, , ) Đây lý loài đƣợc quan tâm nghiên cứu nhiều nhằm nhân rộng số lƣợng cải thiện chất lƣợng (Goncalves & Romano, 3) Phƣơng pháp nhân giống vơ tính i i ro đƣợc thực thành công nhiều năm qua, chủ yếu thông qua phát triển chồi nách chồi bất định phát sinh phôi soma (Goncalves & Romano, 3) Đến nay, kỹ thuật nhân giống i i ro đƣợc hoàn thiện nhằm sản xuất số lƣợng lớn chất lƣợng cao, đồng bệnh, nhiên, tỷ lệ chết cao i i ro thƣờng đƣợc ghi nhận chuyển điều kiện bán tự nhiên (Goncalves & Romano, 3) Vì vậy, khả thích nghi i i ro từ phòng thí nghiệm tự nhiên điểm mấu chốt sản xuất quy mô công nghiệp ệ thống vi thủy canh kết hợp ƣu điểm kỹ thuật nhân giống i i ro phƣơng pháp trồng thủy canh Gần đây, Việt am, hệ thống thủy canh kết hợp vi nhân giống đƣợc thiết kế thành công nhằm nhân nhanh hoa cúc với số lƣợng lớn ( ung , 8) Tuy nhiên, chƣa có ghi nhận hệ thống vi thủy canh phục vụ sản xuất hoa rong nghiên cứu này, hệ thống vi thủy canh đơn giản đƣợc thiết kế thành công để áp dụng cho công đoạn huấn luyện oải hƣơng xẻ ( ) i i ro thích nghi với điều kiện tự nhiên NGUYÊN LIỆU À P ƢƠNG P ÁP Ng yên li Cây hoa oải hƣơng xẻ i i ro tuần tuổi môi trƣờng thạch MS (Murashige & Skoog, ) đƣợc ni cấy Phòng thí nghiệm Sinh lý học thực vật, hoa Sinh - ỹ thuật ông nghiệp, Trƣờng Đại học Sƣ phạm ội Phƣơ g pháp giả , xá đị ạo lỗ ố í ữ g m i trườ ệ thống vi thủy canh đƣợc thiết kế từ vật liệu đơn giản, bao gồm hộp nhựa PE suốt (chiều cao cm × đƣờng kính miệng cm × đƣờng kính đáy cm), bơng thấm nƣớc, bọt biển, ống nhựa (đƣờng kính mm) ụ S T À QU 2018 đƣợc cắ đoạ ắ có kíc ƣớc cm s u xếp vào ộp PE bê dƣới có oặc k ló bơ Đ i với iá bọ bi ấm ỏ ì rò (đƣờ kí cm dày cm vừ với đáy ộp PE) rê mặ bọ bi ạo lỗ ỏ (k e ẹp) hệ th ng vi thủy canh khác gồm: ( ) ng nh a + bông; ( ) bọt bi n ( 3) ng nh a Bổ sung ml dung dịch khoáng MS (Murashige & Skoog, ) nồ độ 0%; miệng hộp PE đƣợc bao phủ kín màng bao th c phẩm ( ình b) Cắt chồi hoa oải ƣơ i i ro dài cm cấy vào hệ th ng vi thủy canh trên, sau 5, 0, ngày nuôi cấy, tạo - lỗ nhỏ màng PE bọc phía hệ th ng heo dõi tỷ lệ s ng sót (%) = s chồi s ng sót/tổng s chồi b đầu đặc m hình thái rễ oải ƣơ i i ro oải ƣơ vi ủy c đƣợc qu sá dƣới kính hi n vi quang học (C rl zeiss Đức) vật kính 0X c g c oải x lý NAA, b su NAA rực ếp du dịc di d ỡ g đế si tr c Chuẩn bị hệ th ng vi thủy canh chứa bọt bi n ml dung dịc di dƣỡng MS Các chồi hoa oải ƣơ i i ro cm đƣợc dùng làm ngun liệu thí nghiệm gồm cơng thức iền xử lý cách ngâm chồi dung dịch AA 0,5 mg/L phút, cấy vào hệ th ng chứa dung dịch MS 0% Chồi đƣợc rửa bằ ƣớc cất cấy vào hệ th ng ƣơ ứng dung dịc di dƣỡng (ii) MS 50% (iii) MS 0% C - C hệ th ng chứa MS 0% bổ sung AA (mg/L) lầ lƣợt: 0,0; 0, 0; 0, 0,50 heo dõi tiêu: tỷ lệ rễ (%), chiều cao (cm), s rễ/cây, chiều dài rễ (cm), chiều dài (mm), chiều o rộng (mm) sau tuần ni cấy Các thí nghiệm đƣợc tiến hành điều kiện phòng (nhiệ độ ± C độ ẩm ƣơ đ i 55 - 0%, ánh sáng giàn 000-3000 lux) C uyể uấ luyệ oải g từ ệ ố yc íc ới u ệ ự ê Cây oải ƣơ i i ro đƣợc huấn luyệ eo p ƣơ p áp Jordan có cải tiến (Jordan, , 998): đƣợc đặ r vƣờ ƣơm 2-5 ngày, mở lỏng bình, loại bỏ agar bám rễ ƣơm lê c ậu trồng đất phù s + xơ dừ đƣợc ƣới đủ ƣớc che phủ màng nilon su t Với làm ƣơ , oải ƣơ si rƣởng hệ th ng vi thủy canh tuần tuổi đƣợc lấy cấy lên chậu trồng đất phù sa + xơ dừa heo dõi tỷ lệ s ng sót (%) oải ƣơ s u uần huấn luyện P g p áp x lý số l ệu Các s liệu đƣợc phân tích theo tham s th ng kê: giá trị ru bì độ lệch chuẩn, giới hạn sai khác nhỏ LSD 0,05 bằ c ƣơ rì Excel ( guyễ Vă Mã, , 3) ất thí nghiệm đƣợc b trí theo ki u hoàn toàn ngẫu nhiên với lần nhắc lại K QU VÀ O LU N i tk t ng vi t môi trƣờng anh đơn giản, xá địn t ời gian tạ lỗ t k í Bảng nh hƣởng c a t ời gian tạ lỗ t k í t ng vi t môi trƣờng đ n tỷ l s ng (%) c a c ồi ải hƣơng H th ng Ống nhựa + Đặ điểm a mẫu (sa ngày) Hầu ế mẫu bị ũ Mẫu cò x ,5a ngày r rễ ,0a b ngày ,8b 88,0a ro g bả g giá rị r h os g bì h Thời gi khác h h hi ôi cấy: s Ống nhựa Hầu ế mẫu bị i ũ ,5a ,0b 85,0 y can y can 4,0b ,0 hà g, ký ng vi t a ngày Ghi chú: Tro g cù g m Số i i Bọt biển t ác có ý ng ĩ t ố g kê α=0,05 ầ heo nghiên cứu ung cộng s ( 8), ng giá th rò có đƣờ kí cm đƣợc tạo dù mà film ilo (kíc ƣớc cm × 30 cm) quấn xung quanh ng nghiệm (có đƣờng kính ngồi cm) vò rò ilo đƣợc c định lại nhiệt, ng nghiệm đƣợc loại bỏ ( ung, , 8) hằm giản hệ th ng vi thủy canh, nghiên cứu này, thiết kế hệ th ng vi thủy canh khác gồm ( ình b): ( ) ng nh a + bông; ( ) bọt bi n ( 3) ng nh a, chồi oải ƣơ i i ro ( ình a) S T đƣợc cắ đoạn dài cm cấy vào hệ th phẩm ( ình b) Tiếp eo c ú - lỗ ố k í rê mà V T p í rê đƣợc bao phủ màng PE bọc th c iệm uôi cấy c ồi oải ƣơ vào ệ bọc PE ỷ lệ s củ c ồi oải ƣơ đƣợc vi thủy canh, sau 5, 0, ngày ạo iệ Bả ết Bảng cho thấy hệ th ng vi thủy canh chứa giá th bọt bi n, thời m tạo lỗ thống khí ngày, ngày cho tỷ lệ s ng sót cao, lầ lƣợt 85% 88%, thời m này, rễ đƣợc ì đầy đủ ( ình d, e), tạo lỗ thời m ngày, tỷ lệ s ng thấp (chỉ đạt ,0%) ( ình C), hầu hết chồi hoa oải ƣơ hệ th ng lại có thân th i ũ éo rũ S éo rũ chồi oải ƣơ có ƣớc cung cấp bị giới hạn, tính dẫn rễ s kết n i thân rễ c ƣ t, nhiều mô bị chết thời kỳ huấn luyện (Fila, , 998) ìn i tk t ng vi t anh đơn giản để ấn l y n a ải hƣơng xẻ ro t íc ng i với điề ki n tự n iên a: chồi oải ƣơ i i ro làm nguyên liệu cho nghiên cứu b: hệ th ng vi thủy c iả đƣợc bao phủ màng PE bọc th c phẩm c: ƣơ ứng với chồi oải ƣơ rê ệ th ng vi thủy canh (hộp PE + bọt bi n) tạo lỗ thống khí ngày (bên trái) ngày (bên phải) d, e: rễ si rƣởng hệ th ng vi thủy c ƣơ ứng với ngày ngày tuổi f, g, h, i: rễ hình thành hệ th ng vi thủy canh chứa MS 0%, AA bổ su ƣơ ứng 0,0; 0, 0; 0, 0,50 (mg/L) j: rễ oải ƣơ i i ro k: oải ƣơ xẻ đƣợc chuy n từ hệ th ng vi thủy canh giá th đấ + xơ dừa ( : ) tr c c x lý NAA, b su c oải g NAA rực ếp du dịc di d ỡ g đế ỷ lệ r rễ s Bảng nh hƣởng c a tiền xử lý NAA bổ s ng NAA trực ti p d ng dị h dinh dƣỡng đ n sinh trƣởng c a c ồi ải hƣơng Công t ức C ỉ tiê ỷ lệ rễ (%) S rễ/ chồi C C iền xử lý NAA C MS 50% 35,3d 5,3e 3,33c c MS 0% mg/L 88,3a 54,0b ab ,50a 3,50c b a 0, 8c 4,00a 4,33a 4,33a a a 8,00a 5,50b c 0, c 0,40 4, a 8, a 8, ab 8,0ab ,0b 9,4a , ab a a a a 3, a 4, 0a a 0, ,00 , ab 3, a 0, , 8, 3,5 Ghi chú: ro g cù g m hà g, ký h o s khác h h hi s Số i ro g bả g giá rị r g bì h Thời gi cấy: ầ mg/L ,33c a 3, mg/L 55,3b c 4,80a Chiều rộng (mm) 3,33c a a 0 mg/L 44,0c 4,33a 8,0ab C d 34, Chiều cao (cm) Chiều dài (mm) C MS 0% + NAA 0, , C MS - NAA Chiều dài rễ (cm) S C 3, , 3,5 0,5 9,50 4,5 ác có ý ng ĩ t ố g kê α=0,05 S T À QU 2018 Các y u t m, CO sá g cũ g c ất bổ su g môi tr ờng nuôi cấy ều ả ởng trực ti p tới si tr ởng, quang hợp hực vật ợc nuôi cấy i i ro khác biệt so với ợc ni trồng gồi ồng ru ng Mức ch t cao ã ợc quan sát thấy trình chuyển vi chồi iều kiện x i ro thực vật i i ro có khí khổng khơng hoạt ng, hệ th ng rễ y u lớp cutin mỏng (Mathur, , 008) ệ rễ i i ro t ờng không thực chức ă g k i ợc chuyể môi tr ờng x i ro dẫ n trình hấp thụ ớc, khoáng thấp m t nguyên nhân làm cho tỷ lệ s ng cấy mô giai oạn huấn luyện thấp (Gonclaves, , 998) Việc xử lý chồi oải g với AA bằ g gâm tr ớc cấy vào dung dịch di d ỡng bổ sung trực ti p cũ g du g dịc di d ỡng dùng cho thủy canh có ả ởng tới tỷ lệ rễ si tr ởng ( ình f, g, h, i), t t C Cụ thể C (dung dịch MS 0% + AA 0, mg/L), tỷ lệ rễ s rễ/chồi cao ạt lầ l ợt 88,3% ,50 Ở công thức có dung dịch MS 0% AA, lơng hút hình thành nhiều (Hì d e) tro g k i ó rễ i i ro lông hút phát triển ( ình j) C uyể uấ luyệ oải g từ ệ ố yc íc ới u ệ ự ê T eo Pospišilova c ng ( 999), túi chứa cấy mô ê ể có sá g y u, nắp lọ ợc nới lỏng sau khoảng - tuần chuyển sang chậu chứa ất cát ã k trùng, chậu ày ợc che phủ túi nilon (Pospišilova, , 999) ỷ lệ s ng sót oải g xẻ i i ro giai oạn huấn luyện khác % (Echeverrigaray, , 005), 50 - 55% (Jordan, , 998) rong nghiên cứu ày ợc chuyển từ hệ th ng vi thủy canh ( ngày tuổi) giá thể ất + xơ dừa ( : ) cho tỷ lệ s g cao lê n %, chuyển ngày tuổi từ hệ th ng vi thủy canh giá thể tỷ lệ s ng giảm xu ng 5% hệ rễ ã p át triển vào khe nhỏ bọt biển, lấy ra, hệ th ng rễ bị tổ t g K t gợi ý sử dụng hệ th ng vi thủy ca ể rèn luyện/bán rèn luyện oải g xẻ cấy mô K LU N ệ th ng vi thủy ca giả ã ợc thi t k gồm h p PE (chiều cao cm × ờng kính miệng cm × g kí áy cm) giá t ể bọt biể ( ờng kính cm, dày cm) chứa ml dung dịc di d ỡng MS 0% bổ sung trực ti p AA 0, mg/L, bao phủ màng PE bọc thực ph m, tạo lỗ thống khí sau ngày cho tỷ lệ rễ cao ạt 88,3%, s rễ/chồi ạt ,50 Rễ phát triể a ặc biệt hệ th ng lông hút Cây ngày tuổi hệ th ng vi thủy canh chuyển giá thể ất p ù sa + xơ dừa cho tỷ lệ s g sót cao ạt % Nghiê c c ài r g ki h phí Kho học g ghệ Tr g ĐHSP H Nội cho ề t i “Nghiê c ác ị h v phâ t ch họ ge mã h a protei vậ ch ể g s crose hằm â g cao ă g s ấ í h chố g chị câ ậ g (Cicer Arieti m ” Mã số: C.2018-18-08 ÀI LI U AM K O Argentieri MP, De Lucia B, Cristiano G, Avatoa P ( Comm : (3) - 90 ) Compositional Analysis of Echeverrigaray S, Basso R, Andrade LB ( 005) Micropropagation of plants Bio ogi P r m 49: (3) 439-44 pi Essential Oils N from axillary buds of field-grown adult Fila G, Ghashghaie J, oarau J, Cornic G ( 998) Photosynthesis, leaf conductance and water relations of i grapevine rootstock in relation to acclimatisation Physio ogi P r m : (3) -4 Goncalves S, Romano A ( 3) Micropropagation of spp M ho s Mo Bio Pro i ro cultured 3: 89- 98 Gonclaves JC, Diogo G, Amâncio S ( 998) I i ro propagation of chestnut (C s s i and C cr ): Effects of rooting treatments on plant survival, peroxidase activity and anatomical changes during adventitious root formation Sci Hor : (3-4) 5- Jordan AM, Calvo MC, Segura J ( 998) Micropropagation of adult Sci c Bio ch o ogy 73: ( ) 93-9 ozics , Srancikova A, Sedlackova E, potential of essential oil from plants Th Jo r of Hor ic r orvathova E, Melusova M, Melus V, rajcovicova Z, Sramkova M ( ) Antioxidant g s ifo i in i i ro and x i o cultured liver cells N op sm 64: (4) 485-493 Mathur A, Mathur A , Verma P, Darokar M ( 008) Biological hardening and genetic fidelity testing of micro-cloned progeny of Ch orophy m bori i i m Afr J Bio ch o 7: 04 – 053 Murashige , Skoog F ( 3-49 guyễ Vă Mã La Việt i ) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture P Physio 5: ồng, Ong Xuân Phong ( 3) P ương p áp ng ên si h ý học h c ậ NXB Đại học Qu c gia J, T ch I, K d eček , H : 48 -49 Bio P ung , am B, production of chrys Sci i Hor ic r e D, z k Š (1999) Acc m t z t n f m cr r g ted nts to x i ro conditions uy P, Luan VQ, ien V , Phuong B, Le D , Loc , hut D ( 8) A system for large scale h m m using microponics with the supplement of silver nanoparticles under light-emitting diodes : 53 ES ABL S ME OF M CRO- YDROPO CS SYS EM FOR ACCL MA ZA O OF IN VITRO CUL URES OF AVANDU A DENTATA L La Viet ng H oi P Agric r * C D c a a i Ng yen i y Mai gogic U i rsi y N (HPU2) G ics I s i , Vi m Ac my of Agric r Sci c s (VAAS) ARY s been widel used s p rm ceutic l m teri l, fl v r ils, dec r tive r rn ment l pl nts In t e pr p g ti n, cclim tiz ti n st ge f r i i ro pl ntlets t d pt wit envir nment l c nditi ns is s kn t nd limited pr ducti n f t l rge sc le In t is stud , simple micr - dr p nics s stem w s successfull designed t impr ve t e surviv l r te f l vender during t e peri d f rdening T is s stem c nsisted f tr nsp rent p l et lene PE) b x t e t p di meter f b x cm, t e b tt m di meter f b x cm, t e eig t f b x cm), dis w s sp nge cm in di meter, cm in t ickness) w s prep red t fit t e b tt m f t e PE b x w ic w s m de fr m t sm ll g ps t tt c i i ro l vender s ts, t e t p f PE b x w s c vered b wr p f d PE film T e ppr pri te nutrient s luti n f r gr wt f l vender s t w s 10% MS supplemented directl 25 mg/ NAA, t e c vered film w s m de les fr m t f r g s exc nge between micr - dr p nics s stem wit extern l envir nment fter cultured 10 d s w ic incre sed t e surviv l r te nd t e r t number per s t f l vender, 88 3% nd 50, c rresp nding T e 10-d - ld pl ntlet w s tr nsferred t substr te mixture c nt ining c c nut fiber nd s il 1: 1) w ic d t e surviv l r te w s rec rded t be 92% Our stud str ngl suggests p tenti l pplic ti n in t e pr ducti n f l vender b tissue culture tec niques K ywor s: sys m, * , cc im iz io , s b ishm Author for corresspondence: el: +84-9 3 , micro-hy ropo ics 8; Email: laviethong.sp @gmail.com nt o Fax K OA G G Ho ng u V t, uG ,H P òng P át n P òng B n t p P òng u n l ng p Ema l nxb@vap ac W bs t www vap ac G m , R B mx b ng b n t S nh h Q ang g n h h n Ph oan b b Ph m h Anh ba Ph m h Anh S n 00 u a xá n u t n xong 978 604 759 n, k 27 m, t ng t P oa ng ng Ho ng u Ho ng u V t, uG ,H n ng k xu t b n 20 8/ B PH/0 / H V n xu t b n 2/ H , p ng t n m 20 n pl u u u V n m 20 V t 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Dƣơng Công Kiên (2002) Nuôi cấy mô thực vật Tp Hồ Chí Minh: Nxb Đại học Quốc gia Tp Hồ Chí Minh Đỗ Tiến Vinh, Mai Thị Phƣơng Hoa, Lê Bảo Ngọc, Trần Văn Minh (2016) Vi nhân giống Oải hƣơng (Lavandula angustifolia) Tạp chí khoa học trường Đại học An Giang, tập 86, 11, số 3, trang 42 - 49 Ngô Thị Giáng Uyên (2006) Ngón tay thơm mùi Oải hương NXB trẻ Nguyễn Văn Mã, La Việt Hồng (2013) Phương pháp nghiên cứu sinh lý học thực vật Hà Nội: NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Hoàng Hộ (2003) Cây cỏ Việt Nam TP HCM: NXB trẻ TP HCM Trần Văn Minh (2015) Công nghệ sinh học thực vật Giáo trình cao học – nghiên cứu sinh TP HCM: Trƣờng Đại học Nông Lâm TP HCM Tài liệu tiếng Anh Adaszyńska M., S M (2011) Skład chemiczny i mineralny różnych odmian lawendy wąskolistnej (Lavandula augustifolia Prog Plant Prot, 51(1), 15-20 Alnamer R, A K (2012) Sedative and hynotic acti-ities of the methanolic and aqueous extracts of Lavandula oficinaalis from Morocco 1-5 Andrade LB, E S (1999) The effect of growth regulators on shoot propagation and rooting of common lavender (Lavandula veraDC) Plant Cell Tissue Organ Cult , 56:79–83 10 Cavanagh HMA, W J (2002) Biological activities of lavender essential oil Phytother Res , 16:301–8 45 11 Calvo M.C and Segura J (1989) In vitro propagation of lavender HortScience, 24: 375-600 12 Costa P, G S (2011) Inhibitory effect of Lavandula viridison Fe2+ induced lipid peroxidation, and antioxidant and anti- cholinesteraseproperties Food Chem, 126:1779–86 13 Demissie ZA, S L (2011) Cloning and functional characterization of β-phellandrene synthase from Lavandula angustifolia Planta, 2011;233:685–96 14 Desautels A, B K (2009) Suppression of linalool acetate production in Lavandula×intermedia Nat Prod Commun , 4:1533–6 15 Dias M.C, A R (2002) Rapid clonal multiplication of Lavandula viridis L'Hér through in vitro axillary shoot proliferation Plant Cell Tissue Organ Cult, 68: 99 - 102 16 Dobránszki J, T d (2010) Micropropagation of apple—a review Biotechnol Adv , 28:462–88 17 Dris, F Tine-Djebbar, N Soltani (2017) Lavandula dentata essential oils: chemical composition and larvicidal activity against Culiseta longiareolata and Culex pipiens (Diptera: Culicidae) African Entomology , Vol 25, No 18 Dronne S, C M (1999b) Plant regeneration and transient GUS expression in a range of lavandin (Lavandula×intermedia Emeric ex Loiseleur) cultivares Plant Cell Tissue Organ Cult , 55:193–8 19 Dronne S, J F.-C (1999a) A simple and efficient method for in vitro shoot regeneration from leaves of lavandin (Lavandula×intermedia Emeric ex Loiseleur) Plant Cell Rep , 18:429–33 20 Duclercq J, S.-N B (2011) De novo shoot organogenesis: from art to science Trends Plant Sci , 16:597–606 46 21 Echeverrigaray S, B R (2005) Micropropagation of Lavandula dentata from ax-illary buds of field-grown adult plants Biol Plant, 49, 439- 42 22 Falk L, B K (2009) An efficient method for the micropropagation of lavenders: regeneration of a unique mutant J Essent Oil Res , 21:225– 23 Fila G, G J (1998) Photosynthesis, leaf conductance and water relations of in vitro cultured grapevine rootstock in relation to acclimatisation Physiologia Plantarum , 102: (3) 411-418 24 George EF, D P (2008) Micropropagation: uses and methods In: George EF, Hall MA, De Klerk GJ, editors Plant propagation by tissue culture Dordrecht: Springer 25 Ghiorghiţă G, M D.-E (2009 ) Some aspects concerning the in vitro reaction of Lavandula angustifolia L Propag Ornamental Plants , 9:47–9 26 Gonclaves JC, D G (1998) In vitro propagation of chestnut (Castanea sativa and C crenata): Effects of rooting treatments on plant survival, peroxidase activity and anatomical changes during adventitious root formation Sci Hort , 72: (3-4) 265-275 27 Gupta S.D., J B (2013) Fundamentals and application of lightemitting diodes (LEDs) in in vitro plant growth and morphogenesis Plant Biotechnology Reports, 7, pp 211-220 28 Hahn E.J., Lee Y.B., Ahn C.H (1996), A new method on massproduction of micropropagated Chrysanthemum plants using microponic system in plant factory, Acta Horticulturae, 440, pp 527532 29 Haig TJ, H T (2009) Lavender as a source of novel plant compounds for the development of a natural herbicide J Chem Ecol , 35:1129–36 47 30 Hallschmid M, B C.-L (2004) Manipulating central nervous Physiol Behav , 83:55–64 31 Jordan A.M, C M (1998) Micropropagation of adult Lavandula dentata plants The journal of Horticultural Sceince and biotechnology, 93- 96 32 Kovatcheva-ApostolovaEG, G (2008) Extracts of plant cell cultures of Lavandula vera and Rosa damascena as sources of phenolic antioxidants for use in foods Eur Food Res Technol , 227:1243–9 33 Kritsidima M, N T (2009) The effects of lavender scent on dental patient anxiety levels: a luster randomized-controlled trial Community Dent OralEpidemio, 38:83–7 34 Lane A, B A (2010) A genomics resource for investigating regulation of essential oil production in Lavandula angustifolia Planta, 231:835– 45 35 Machado, M., Silva, A., & Biasi, L (2011) Effect of plant growth regulators on in vitro regeneration of Lavandula dentata L shoot tips Journal of Biotechnology and Biodiversity, Gurupi and Plant Prot, v.2,p.28-31, 2011 51(1), 15-20 36 Margara J (1978) Mise au point d'une gamme de millieux mineraux pour les conditions delaculture in vitro C R S Acad Agric Fr , 64:654– 61 37 Maharana L., K D (2011) The emergence of hydroponics Yojana, 55, pp 39-40 38 Mathur A, M A (2008) Biological hardening and genetic fidelity testing of micro-cloned progeny of Chlorophytum borivilianum Afr J Biotechnol , 7: 1046–1053 39 Mensuali-Sodi A, P M (1995) Endogenous ethylene requirement for 48 adventitious root induction and growth in tomato cotyledons and lavandin microcuttings in vitro Plant Growth Regul , 17:205–12 40 Mishiba K-I, I K (2000) Efficient transformation of lavender (Lavandula atifolia Medicus) mediated byAgrobacterium J Hortic Sci Biotechnol , 75: 287–92 41 Murashige T, Skoog F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures Physiol Plant , 15:473–497 42 Naik SK, C P (2011) Tissue culture-mediated biotechnological intervention in pomegranate: a review Plant Cell Rep , 30:707–21 43 Nebauer SG, A I.-A (2000) J.Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of the aromatic shrub Lavandula latifolia Mol Breed, 6:539–52 44 Nhut D.T., D N (2005b) Microponic and hydroponic techniques in disease-free Chrysanthemum (Chrysanthemum sp.) production Journal of Applied Horticulture, 7(2), pp 67-71 45 Nobre J (1996) In vitro cloning and micropropagation of Lavandula stoechas from field-grown plants Plant Cell Tissue Organ Cult, 46:151-5 46 Oyen, N X (1999) Essential-oil plants, In Faridah Hanum, I & L.J.G Van der Maesen Plant Resources of Sounth- East Asia (PROSEA), 19 119-123 47 Panizza M, M.-S A (1997) Morphological differentiation in callus cultures of lavandin: a role of ethylene Biol Plant , 39:481–9 48 Pati PK, R S (2006) In vitro propagation of rose—a review Biotechnol Adv , 24:94-114 49 Perry N, E E (2006) Aromatheray in the management of psychiatric disorders clinical and neuropharmacological persectives CNS Drugs, 49 20; 257- 80 50 Pospišilova J, T I (1999) Acclimatization of micropropagated plants to ex vitro conditions Bio Plant , 42: 481-497 51 Rojas-Martínez L, V R.-J (2010) The hyperhydricity syndrome: waterlogging of plant tissues as a major cause Propag Ornamental Plants, 10:169–75 52 Sánchez-Gras C, C M (1996) Micropropagation of Lavandula latifolia through nodal bud culture of mature plants Plant Cell Tissue Organ Cult, 45: 259-61 53 Sandra Goncalves, A R (2012) In vitro culture of lavender ―Lavandula spp and the production of secondary metabolites‖ Biotechnology Advances, 54 Smallwood J, B R (2001) Aromatherapy and behavior disturbances in dementia: a randomized controlled tria Int J Geriatr Psychiatr , 16:1010–3 55 Tsuro M, I H (2011) Changes in morphological phenotypes and essential oil components in lavandin (Lavandula×intermedia Emeric ex Loisel) transformed with wild-type strains ofAgrobacterium rhizogenes Sci Hortic , 130:647–52 56 Tsuro M, K M (2000) Efficient plant regeneration from multiple shoots formed in the leaf-derived callus of Lavandula vera, using the ―open culture system″ Sci Hortic , 86:81–8 57 Tung HT, N N (2018) A system for large scale production of chrysanthemum using microponics with the supplement of silver nanoparticles under light-emitting diodes Scientia Horticulturae , 232: 153-161 58 Upson T, A S (2004) The genus Lavandula Timber Press , 123- 165 50 59 WangX, J (2007) Bioreactorcultureandplantregeneration from cell clusters of the aromatic plant, Lavandula angustifolia‗Munstead‘ JHorticSci Biotechnol , 82:781–5 60 Woronuk G, D Z (2011) Biosynthesis and therapeutic proper-ties of Lavandula essential oil constituints Planta Med, 77: 7-15 61 Zhou YuMei, C L (2009) ―Construction of rapid propagaation system for Anoectochilus formosanus‖, Journal of Northeast Forestry University, 37(12), pp 43-47 62 Zuzarte M.R, D A (2010) Esential oil and in vitro propagation of Lavandula pedunculata (Lamiaceae) 32: 580-7 Tài liệu từ Internet 63 https://vi.m.wikipedia.org/wiki/O%E1%BA%A3i_h%C6%B0%C6%A1n g 64 http://dulichdalat.city/cam-nang-du-lich/lavender-hoa-oai-huong-dalat.html 65 https://metunhien.vn/lam-vui/trong-hoa/hoc-cach-trong-oai-huonglavender-o-viet-nam-5410.html 66 https://www.sunset.com/garden/flowers-plants/best-perennials-fallplanting/lavender 67 http://www.lamdong.gov.vn/vi ... (Lavandula dentata L.) kỹ thuật nuôi cấy mô vi thủy canh. ” Mục đích nghiên cứu Nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân giống Oải hƣơng xẻ kỹ thuật nuôi cấy mô kỹ thuật vi thủy canh, nhằm góp phần đáp ứng cây. .. nghiên cứu nhân giống in vitro vi thủy canh đối tƣợng Oải hƣơng xẻ (Lavandula dentata L.) 3 5.2.Ý nghĩa thực tiễn Kết đề tài sở cho nhân giống Oải hƣơng xẻ kỹ thuật nuôi cấy mô kỹ thuật vi thủy. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI === === NGUYỄN THỊ THÚY MAI NGHIÊN CỨU NHÂN GIỐNG CÂY OẢI HƢƠNG LÁ XẺ (LAVANDULA DENTATA L.) BẰNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ VÀ VI THỦY CANH Chuyên