Nghiên cứu về ảnh hưởng của một số yếu tố như loại thức ăn, hormone sinh dục, nhiệt độ và độ mặn đến kỹ thuật sản xuất giống và phát triển phôi của cá mao ếch Allenbatrachus grunniens (Linnaeus, 1758) trong điều kiện nhân tạo được tiến hành qua 3 thí nghiệm.
Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 THÔNG BÁO KHOA HỌC ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ YẾU TỐ LÊN SINH SẢN NHÂN TẠO CÁ MAO ẾCH Allenbatrachus grunniens (Linnaeus, 1758) TRONG ĐIỀU KIỆN NHÂN TẠO THE EFFECT OF SOME FACTORS ON BREEDING REPRODUCTION GRUNTING TOADFISH Allenbatrachus grunniens (Linnaeus, 1758) IN ARTIFICAL CONDITIONS Nguyễn Thị Phương Thảo¹*, Cao Văn Hùng¹, Nguyễn Phước Triệu¹ Ngày nhận bài: 01/08/2019; Ngày phản biện thông qua: 5/11/2019; Ngày duyệt đăng: 30/11/2019 TÓM TẮT Nghiên cứu ảnh hưởng số yếu tố loại thức ăn, hormone sinh dục, nhiệt độ độ mặn đến kỹ thuật sản xuất giống phát triển phôi cá mao ếch Allenbatrachus grunniens (Linnaeus, 1758) điều kiện nhân tạo tiến hành qua thí nghiệm Trong thí nghiệm 1, ni vỗ cá bố mẹ cho sinh sản gồm có nghiệm thức thức ăn khác tương ứng với công thức (CT) thức ăn: (i) CT1: sử dụng 70% thức ăn giáp xác, 20% cá tươi, 10% mực (cắt nhỏ); (ii) CT2: sử dụng 50% giáp xác 50% cá tươi (cắt nhỏ); (iii) CT 3: sử dụng 50% giáp xác 50% mực (cắt nhỏ); (iv) CT 4: sử dụng 100% thức ăn viên UP Thí nghiệm nhằm xác định liều lượng kích dục tố tốt cho sinh sản cá mao ếch gồm nghiệm thức, dùng HCG LHRHa, phối hợp ba loại LHRHa, domperidone (DOM) HCG Thí nghiệm nhằm xác định ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển phơi bố trí mức nhiệt độ 28oC, 30oC 32oC ảnh hưởng độ mặn đến phát triển phôi mức độ mặn 14‰, 17‰, 20‰, 23‰ 26‰ Kết nghiên cứu cho thấy sử dụng thức ăn 50% giáp xác 50% cá tươi cho tỷ lệ cá bố mẹ thành thục cao Kích dục tố LHRHa kết hợp với DOM HCG (liều lượng 50µg LHRHa + 5mg DOM +1000UI HCG )/ kg cá để kích thích sinh sản cá mao ếch có hiệu so với nghiệm thức lại Tỷ lệ trứng nở cao nhiệt độ 28oC độ mặn 20‰ Nghiên cứu cung cấp tiền đề quan trọng cho việc sinh sản nhân tạo loài cá Từ khóa: ảnh hưởng, ấp trứng, cá mao ếch, kích thích sinh sản, ni vỗ ABSTRACT Effect of food types, exogenous hormone, temperature and salinity on captive breeding and embryonic development of grunting toadfish Allenbatrachus grunniens (Linnaeus, 1758) was conducted with three experiments In the experiment 1, the effect of different food types on growout broodstock spawning includes four treatments with replicates, i.e., (i) Treatment 1: 70% crustacean, 20% trash fish, 10% squid; (ii) Treatment 2:: 50% crustacean and 50% trash fish; (iii) Treatment 3: 50% crustacean and 50%squid); (iv) Treatment 4: 100% UP pellets Experiment was to determine the suitable hormone (LHRHa, HCG) dose used in spawning of grunting toadfish, consisting of treatments Experiment was to examine the effect of temperature (28oC, 30oC, 32oC) and salinity (14‰, 17‰, 20‰, 23‰ and 26‰) on embryonic development of grunting toadfish Results showed that feeding of use 50% crustacea and 50% fresh was the most suitable for broodstock Combination of LHRHa with DOM and HCG at 50µg LHRHa + 5mg DOM +1000UI HCG kg-1 female fish resulted in good maturation The highest hatching rate was obtained at 28oC and 20‰, This study provides the important background for captive breeding of this species Keywords: effect, eggs of incubation, grunting toadfish, spawning, growout I ĐẶT VẤN ĐỀ Cá mao ếch (mang ếch, Allenbatrachus grunniens, Linnaeus 1758) thuộc họ cá cóc ¹ Phân Viện nghiên cứu Hải sản phía Nam Batrachoididae, phân bố từ vùng cửa sông thuộc sông Hằng theo hướng Đông xuống quần đảo Borneo (thuộc Malaysia), Philippin vịnh Thái Lan (Gudger, 1908) Cá mao ếch TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 115 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 A grunniens loài ưa chuộng tỉnh Bà Rịa - Vũng Tàu với giá trị kinh tế cao, phân bố nhiều khu vực ven biển vùng cửa sông địa bàn tỉnh Là đối tượng mới, cá mao ếch chưa nghiên cứu đặc điểm sinh học sinh sản nhân tạo để đưa vào sản xuất Hiện nay, nguồn giống cá mao ếch cho ni thương phẩm hồn tồn khai thác từ tự nhiên nên sản lượng không ổn định, phụ thuộc lớn vào nguồn lợi tức thời biến động theo mùa vụ Nhu cầu cung cấp cá mao ếch cho thị trường tiêu thụ ngày cao dẫn đến áp lực khai thác cá Mao ếch tự nhiên ngày tăng Mặt khác, khai thác cá Mao ếch sử dụng ngư cụ khơng có tính chọn lọc (lồng bẫy) dẫn đến cá thể non, chưa trưởng thành bị tận diệt Trước tình trạng nêu trên, nghiên cứu nhằm phục vụ cho thử nghiệm sinh sản nhân tạo cá mao ếch, sở khoa học cho việc chủ động nghiên cứu sản xuất giống hướng tới phát triển nghề nuôi thương phẩm cá mao ếch tỉnh Bà Rịa-Vũng Tàu Thử nghiệm thức ăn nuôi vỗ cá bố mẹ gồm nghiệm thức tương ứng với công thức (CT) thức ăn: (i) CT1: sử dụng 70% thức ăn giáp xác, 20% cá tươi, 10% mực (cắt nhỏ); (ii) CT2: sử dụng 50% giáp xác 50% cá tươi (cắt nhỏ); (iii) CT 3: sử dụng 50% giáp xác 50% mực (cắt nhỏ); (iv) CT 4: sử dụng 100% thức ăn viên UP Thành phần thức ăn viên UP Mã số M505 bao gồm: Độ ẩm 11%; Protein 44%, Béo thô 1014%, Tro 15%, Xơ 1,0% Mỗi nghiệm thức lặp lại lần, với 10 cặp cá bố mẹ/bể 4m³ Tiến hành nuôi chung cá đực cá theo tỷ lệ 1:1 Cho cá bố mẹ ăn lần/ngày, buổi sáng (67) buổi chiều (16-17) Khẩu phần ăn ngày chiếm khoảng 3,5% khối lượng thân Men tiêu hóa Biosubstyl (Cơng ty TNHH MTV vắc xin pasteur Đà Lạt) bổ sung định kỳ ngày/lần với lượng g/kg thức ăn Nước lọc qua hệ thống lọc tuần hồn (san hơ), định kỳ thay 30-50% lượng nước bể tuần Tốc độ sinh trưởng tuyệt đối cá bố mẹ tính theo cơng thức sau: II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu, thời gian địa điểm nghiên cứu Cá mao ếch thu gom khu vực cửa sông ven biển Bà Rịa - Vũng Tàu, tuổi 1+ trở lên, kích cỡ trung bình 150 g/con, đực kích cỡ trung bình 160g/con, khơng bị dị tật không xây sát Tiến hành nuôi vỗ cá bố mẹ từ tháng 9/2014 đến 10/2015 theo dõi phát triển phôi từ tháng 11/2015 đến 2/2016 Nghiên cứu tiến hành Phân viện nghiên cứu Hải Sản Phía Nam, Đường 3/2, Phường 11, Thành phố Vũng Tàu Phương pháp nghiên cứu 2.1 Thử nghiệm thức ăn nuôi vỗ cá mao ếch bố mẹ Trong đó: ADGW: Sinh trưởng tuyệt đối theo khối lượng Wtb2 Wtb1 (g): Khối lượng trung bình tồn thân thời điểm T2 T1; 2.2 Ảnh hưởng liều lượng kích dục tố đến sinh sản cá mao ếch Thí nghiệm ảnh hưởng liều lượng kích dục tố đến sinh sản cá mao ếch gồm nghiệm thức (trình bày cụ thể Bảng 1), nghiệm thức lặp lại lần Số cá bố mẹ bể 26 con/bể, bể thể tích có 4m³ Kích dục tố (LHRHa, công ty sản xuất; HCG, công ty sản xuất) tiêm vào lưng cá Đối với cá cái, khoảng cách lần tiêm 24 Đối với cá đực tiêm liều Bảng Liều lượng kích dục tố sử dụng kích thích sinh sản cá mao ếch Nghiệm thức Loại hormone HCG HCG HCG Liều Tính cho kg cá 500 UI 1.000 UI 1.000 UI 116 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tính cho kg cá đực 0 Liều Tính cho kg cá 2.000 UI 5.000 UI 7.500 UI Tính cho kg cá đực 1.000 UI 2.500 UI 3.750 UI Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Nghiệm thức Loại hormone LHRH-a LHRH-a LHRH-a HCG LHRH-a DOM HCG LHRH-a DOM HCG LHRH-a DOM Số 4/2019 Liều Tính cho kg cá 50 µg 50 µg 75 µg 500 UI 50 µg mg 1.000UI 50 µg mg 2.000 UI 50 µg mg Liều Tính cho kg cá đực 0 0 0 0 0 0 Tính cho kg cá 75 µg 100 µg 150 µg 2.000 UI 100 µg mg 4.000 UI 100µg mg 5.000 UI 100 µg mg Tính cho kg cá đực 50 µg 50 µg 75 µg 1.000 UI 50 µg 2,5 mg 2.000 UI 50 µg 2,5 mg 2.500 UI 50 µg 2,5 mg Cơng thức tính tiêu sinh sản: - Kiểm tra xác định mức độ thành thục cá định kỳ hàng tháng, kiểm tra vào ngày đầu tuần tuần tháng năm Định kỳ hàng tháng thu từ 3-4 cá thể mổ sinh học xác định mức độ thành thục cá Mao ếch bố mẹ Bên cạnh việc quan sát mắt thường kính lúp tuyến sinh dục cố định nghiên cứu theo phương pháp tổ chức học thông thường Tuyến sinh dục cố định Bouin, sau đóng parafin cắt mơ học 5-10 µm Tinh sào nhuộm theo phương pháp Hematoxylin – Sắt Hedenhai Buồng trứng nhuộm theo phương pháp Azan Heidenhai Đọc tiêu theo Xakun Buskaia (1982) Cá bố mẹ thành thục tiêm kích dục tố đưa vào bể đẻ theo dõi (thể tích 2m3) Sau tiêm liều định (lần 2) cá theo dõi đến cá có tượng rụng trứng đẻ bắt cá lên vuốt trứng vào bát, đồng thời vuốt tinh vào bát chứa trứng, thêm nước muối (20‰) trộn dùng lông gà khuấy để tăng khả tiếp xúc trứng tinh trùng thời gian khoảng 30 giây 2.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển phơi - Thí nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển phơi Thí nghiệm bố trí mức nhiệt độ: 28ºC; 30ºC 32ºC nghiệm thức lặp lại lần, 300 trứng cho nghiệm thức ấp điều kiện độ mặn 20‰ Để bố trí TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG • 117 Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 thí nghiệm nhiệt độ cá mao ếch cho ấp trứng phòng có điều hồ để điều chỉnh nhiệt độ cho thí nghiệm theo dõi phát triển phôi Các tiêu theo dõi gồm thời gian phát triển phôi, thời gian ấp nở, tỷ lệ nở trứng tỷ lệ ấu trùng dị hình lơ thí nghiệm Trứng thụ tinh sau cá đẻ 20 phút Cách bố trí thí nghiệm trình bày chi tiết Bảng 2.4 Ảnh hưởng độ mặn đến phát triển phơi - Thí nghiệm ảnh hưởng độ mặn đến phát triển phơi Thí nghiệm bố trí độ mặn: 14 ‰, 17‰, 20‰, 23‰, 26‰ nghiệm thức 300 trứng lặp lại lần điều kiện nhiệt độ (30 ± 1)ºC Một số tiêu theo dõi: thời gian phát triển phôi, thời gian ấp nở, tỷ lệ nở trứng tỷ lệ ấu trùng dị hình lơ thí nghiệm Trứng thụ tinh sau cá đẻ 20 phút - Tỷ lệ trứng nở tính cơng thức: Phương pháp xử lý số liệu Các số liệu xử lý phần mềm SPSS 16.0 Sử dụng phân tích ANOVA nhân tố, kiểm định Duncan để xác định ảnh hưởng cơng thức thí nghiệm mức ý nghĩa p0,05) Kết nghiên cứu cho thấy công thức CT2 cá có tốc độ sinh trưởng trung bình cao cơng thức CT4 có tốc độ sinh trưởng thấp III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Kết thử nghiệm thức ăn nuôi vỗ cá bố mẹ Tốc độ sinh trưởng cá nuôi bể composite với loại thức ăn khác tương ứng với nghiệm thức (CT1 đến CT4) thể Hình Tốc độ sinh trưởng cá mao ếch nuôi bể composite 118 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG Tạp chí Khoa học - Cơng nghệ Thủy sản Số 4/2019 So sánh kết nghiên cứu tốc độ sinh trưởng cá mao ếch nuôi lồng bể compossite cho thấy tốc độ sinh trưởng cá mao ếch bố mẹ thử nghiệm sinh trưởng nhanh kết thí nghiệm tác giả Trần Thị Bảo Uyên (1997) Nghiên cứu tác giả Trần Thị Bảo Uyên (1997) tiến hàng nhóm đối tượng có kích thước nhỏ, mơi trường dưỡng chậu nhỏ nên khả sinh trưởng cá thấp bể Cụ thể, cá mao ếch có khối lượng tang khoảng 1,2-1,5 g/tháng thức ăn trùn chỉ, 2,93,6 g/tháng tép bò 2,7-3,3 g/tháng cá - Tỷ lệ thành thục cá mao ếch bố mẹ Chất lượng sản phẩm sinh dục công thức nuôi vỗ loại thức ăn thí nghiệm cho tỷ lệ thành thục cá mao ếch bố mẹ, cá đực đạt 1,12% ÷ 67,76%, cá đạt 1,01% ÷ 88%, cơng thức thí nghiệm có sai khác ý nghĩa thống kê (p 0,05) Tỷ lệ nở đạt cao nghiệm thức 28ºC (57,6%); thấp nghiệm thức 32ºC (44,8%) khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) Tương tự, tỷ lệ dị hình bắt gặp cao nghiệm thức 32ºC đạt 9,5%; thấp nhiệt độ 28ºC (4,3%) 30oC (5,9%) khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) nghiệm thức 28ºC 32ºC (Bảng 4) Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ đến trình phát triển phôi cá mao ếch Nhiệt độ Chỉ tiêu 28°C 30°C 32°C Tỷ lệ thụ tinh (%) 86,2 ± 2,0a 84,1 ± 2,5ab 81,9 ± 1,7b Thời gian nở (giờ) 367 ± 2,6a 336 ± 1,0ab 319 ± 1,7b Tỷ lệ nở (%) 57,6 ± 2,8a 50,9 ± 0,3ab 44,8 ± 2,7b Tỷ lệ cá dị hình (%) 4,3 ± 0,7a 5,9 ± 2,5a 9,5 ± 1,0b Ghi chú: Các chữ hàng khác khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) Nhiệt độ ảnh hưởng trực tiếp đến q trình phát triển phơi cá giai đoạn phân cắt phôi (Vũ Văn Sáng ctv., 2013) Nhiệt độ thấp làm chậm q trình phát triển phơi (Small and Bates, 2001; Lin et al., 2006) Khi nghiên cứu thời gian phát triển phơi cá cóc (Opsanus tau), Gudger (1908) cho cho có khác biệt nhiệt độ nước nên có khác biệt thời gian nở, nơi có nhiệt độ cao phơi phát triển nhanh Độ mặn có ảnh hưởng đến trình thụ tinh trình phát triển phơi cá mao Hình Cá mao ếch bình thường dị hình 120 • TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG ếch Tỷ lệ trứng thụ tinh đạt cao độ mặn tinh trùng có độ hoạt hóa tốt 20‰ thấp độ mặn 23‰; 26‰; 17‰ 14‰ Tương tự, tỷ lệ trứng nở cao độ mặn 20‰ (59,4%) giảm dần mức độ mặn 23‰, 26‰, 17‰, thấp độ mặn 14‰ (36,6%) khác biệt có ý nghĩa (p < 0,05) với nghiệm thức lại (Bảng 5) Độ mặn ảnh hưởng đến thời gian nở trứng cá mao ếch tỷ lệ cá nở dị hình khơng đáng kể Thời gian nở nhanh độ mặn 26‰ (14,7 ngày) chậm dần độ mặn giảm từ 23‰ - 14‰ Tỷ lệ dị hình đạt cao độ mặn 14‰ (4,2%) thấp 26‰ (4,1%); 17‰ (3,7%); thấp 20‰ (3,3%) khác biệt khơng có ý nghĩa (p > 0,05) mức độ mặn (Bảng 5) IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Trong điều kiện nuôi vỗ nhân tạo, tốc độ sinh trưởng cá mao ếch cho ăn cá giáp xác tươi trung bình 6,2 g/con/tháng; tỷ lệ thành thục cá đạt cao 88,0% cá Tạp chí Khoa học - Công nghệ Thủy sản Số 4/2019 Bảng Ảnh hưởng độ mặn đến trình ấp nở trứng cá mao ếch Chỉ tiêu Nghiệm thức 14‰ 17‰ 20‰ 23‰ 26‰ Thời gian nở (ngày) 14,7 ± 0,6 14,7 ± 0,6 14,3 ± 0,6 14,3 ± 0,6 14,7 ± 0,6a Tỷ lệ thụ tinh (%) 65,7 ± 1,7a 73,0 ± 1,5a 84,7 ± 1,5b 82,3 ± 2,7b 80,3 ± 2,5ab Tỷ lệ nở (%) 36,6 ± 2,7c 45,2 ± 1,3a 59,4 ± 6,3b 53,4 ±3,3ab 50,7 ± 1,7ab Tỷ lệ cá dị hình (%) 4,2 ± 0,3a 3,7 ± 0,4a 3,3 ± 0,4a 3,5 ± 0,3a 4,1 ± 0,6a a a a a Ghi chú: Các ký hiệu hàng khác khác biệt có ý nghĩa thống kê (p