Trong nghiên cứu n y, phương pháp quang phổ đã được sử dụng để xác định đồng thời bromhexin hydrochlorid và salbutamol sulfat trong siro thuốc. Nghiên cứu được thực hiện bằng cách biến đổi quang phổ hấp thụ UV của bromhexin và salbutamol sử dụng đạo hàm bậc hai. Kết quả phổ đạo hàm bậc hai cho thấy độ hấp thụ bằng 0 ở bước sóng 240,4nm và 365,4nm lần lượt cho bromhexin v salbutamol. Do đó, định lượng bromhexin ở bước sóng 365,4nm và salbutamol ở bước sóng 240,4nm. Phương pháp đã được thẩm định theo hướng dẫn của ICH. ác đường cong tuyến tính thu được bằng phương pháp quang phổ đạo hàm bậc hai cho thấy độ tuyến tính trong khoảng nồng độ 20 – 80µg/ml cho bromhexin và 10 – 40µg/ml cho salbutamol với độ nhạy tương ứng là 0,141µg/ml và 0,369µg/ml. Kết quả độ phục hồi, độ chính xác tốt cho cả bromhexin và salbutamol. Giá trị phân tích trong ng y có độ đúng từ 98,57 – 99,86%, RSD của độ lặp lại từ 0,25 – 0,94%. Giá trị phân tích khác ng y cho độ đúng từ 99,80 – 101,50% và RSD của độ lặp lại từ 0,15 – 0,66%. Thực nghiệm cho thấy phương pháp n y phù hợp để phân tích thường qui bromhexin và salbutamol ở dạng kết hợp trong siro thuốc.
94x + 0,0078 0,1094 0,0078 0,9999 0,0122 0,369 (µg/ml) 1,218 (µg/ml) Tạp chí Khoa học & Cơng nghệ Số 25 6.0 5.0 ạo h m bậc (=16 nm) ạo h m bậc (=16 nm) y = 0.063x - 0.0008 R² = 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 50 5.0 y = 0.1094x + 0.0077 R² = 0.9999 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 100 Nồng độ bromhexin (µg/ml) 10 20 30 40 50 Nồng độ salbutamol (µg/ml) Hình thị thể tính tuyến tính bromhexin 20 – 80µg/ml Hình 6: thị thể tính tuyến tính salbutamol 10 – 40µg/ml ộ v độ xác ngày khác ngày phương pháp phân tích xác định phương pháp thêm chuẩn Trong nghiên cứu, chuẩn bị mẫu thử thêm chuẩn mức nồng độ 10%, 20% v 30% tương ứng 4µg/ml, 8µg/ml 12µg/ml so với mức nồng độ định lượng (40µg/ml) bromhexin 2µg/ml, 4µg/ml 6µg/ml so với mức nồng độ định lượng (20µg/ml) salbutamol ộ v độ xác phương pháp phân tích tỉ lệ % (Rev) giá trị độ lệch chuẩn tương đối (RSD) lượng hoạt chất tìm so với lượng thêm vào Cơng thức tính tỉ lệ phục hồi (1) Kết trình bày Bảng (x2 -x0 ) Tỉ lệ phục hồi (%)= 100 (1) x1 Trong đó: x0 nồng độ chất phân tích mẫu; x1 nồng độ chất phân tích thêm chuẩn vào mẫu; x2 nồng độ tìm lại chất phân tích mẫu thêm chuẩn Bảng Kết thẩm định độ đúng, độ xác ng y v khác ng y Thuốc Salbutamol Bromhexin Nồng độ mẫu thử Nồng độ thêm vào (µg/ml) (µg/ml) 19,53 40,10 Trong ngày (n=9) Rev (%) 99,44 Khác ngày (n=18) 0,014 % RSD 0,25 Rev (%) 99,88 0,097 % RSD 0,15 98,68 0,007 0,57 101,50 0,299 0,66 99,25 0,013 0,94 101,60 0,197 0,32 99,57 0,003 0,27 99,79 0,257 0,41 98,57 0,002 0,85 99,80 0,154 0,20 12 99,86 0,003 0,88 100,33 0,126 0,18 Nhận xét: Phương pháp có độ đúng, độ xác tốt cho bromhexin salbutamol Giá trị phân tích ngày (n = 9) có độ từ 98,57 – 99,86%, RSD độ lặp lại từ 0,25 – 0,94% Giá trị phân tích khác ng y (n = 18) cho độ từ 99,80 – 101,50% v RSD độ lặp lại từ 0,15 – 0,66% Thực nghiệm cho thấy phục hồi bromhexin salbutamol cấp độ tìm thấy nằm giới hạn yêu cầu 98 – 102%; RSD < 2%[10] Kết luận: Kết thẩm định cho thấy qui trình định lượng bromhexin salbutamol siro thuốc phương SD SD pháp quang phổ đạo h m đạt tất yêu cầu độ chọn lọc, tính tuyến tính – khoảng xác định, độ xác v độ đúng, giới hạn định lượng theo qui định ICH 3.3 Kết định lượng bromhexin salbutamol siro Salmodil Expectorant Tiến h nh định lượng mẫu chế phẩm thuốc qui trình phân tích xây dựng song song với qui trình định lượng phương pháp sắc kí lỏng Kết thể Bảng Đại học Nguyễn Tất Thành Tạp chí Khoa học & Công nghệ Số 26 Bảng Kết định lượng siro Salmodil Expectorant STT TB SD RSD Hàm lượng bromhexin (µg/ml) Phương pháp Phương pháp để xuất HPLC 3,926 3,895 3,886 3,985 3,929 3,806 4,060 3,919 3,943 3,901 3,983 3,911 3,954 3,919 0,060 0,033 1,53 0,84 Phân tích ANOVA F-test < F (1,55 < 4,96); P = 0,240; Df = 10 Bảng cho thấy h m lượng bromhexin salbutamol đạt yêu cầu mức chất lượng qui định Dược điển Việt Nam V Theo kết phân tích ANOVA, h m lượng bromhexin salbutamol so với h m lượng ghi nhãn định lượng phương pháp: (i) phương pháp xây dựng (ii) phương pháp HPL cho thấy khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê với mức độ tin cậy 95% Kết luận ề t i nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng bromhexin salbutamol siro thuốc phương pháp quang phổ đạo h m Phương pháp Hàm lượng salbutamol (µg/ml) Phương pháp Phương pháp đề xuất HPLC 1,926 1,957 1,945 1,958 1,946 1,958 1,952 1,952 1,954 1,952 1,957 1,958 1,947 1,956 0,011 0,003 0,56 0,15 Phân tích ANOVA F-test < F (4,37 < 5,17); P = 0,069; Df = 10 thẩm định với thông số theo hướng dẫn I H v đạt yêu cầu Phương pháp có độ đặc hiệu, độ đúng, độ lặp lại ng y v khác ng y với độ lệch chuẩn tương đối