Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7082-1:2010 - ISO 3890-1:2009

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7082-1:2010 - ISO 3890-1:2009 giới thiệu nội dung về sữa và sản phẩm sữa - xác định dư lượng hợp chất clo hữu cơ (thuốc bảo vệ thực vật) – phần 1: xem xét chung và phương pháp chiết. Hy vọng đây là tài liệu tham khảo hữu ích cho các bạn.

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7082-1:2010 ISO 3890-1:2009 SỮA VÀ SẢN PHẨM SỮA - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG HỢP CHẤT CLO HỮU CƠ (THUỐC BẢO VỆ THỰC VẬT) – PHẦN 1: XEM XÉT CHUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP CHIẾT Milk and milk products – Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) Part 1: General considerations and extraction methods Lời nói đầu TCVN 7082-1:2010 thay TCVN 7082-1:2002; TCVN 7082-1:2012 hoàn toàn tương đương với ISO 3890-1:2009/IDF 75-1:2009 TCVN 7082-1:2010 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công Nghệ công bố Bộ TCVN 7082 (ISO 3890) Sữa sản phẩm sữa - Xác định dư lượng hợp chất clo hữu (thuốc bảo vệ thực vật) bao gồm phần sau: - TCVN 7082-1:2010 (ISO 3890-1:2009), Phần 1: Xem xét chung phương pháp chiết; - TCVN 7082-2:2010 (ISO 3890-2:2009), Phần 2: Phương pháp tinh dịch chiết thô khẳng định Sữa sản phẩm sữa – Xác định dư lượng hợp chất Clo hữu (thuốc bảo vệ thực vật)Phần 1: Xem xét chung phương pháp chiết Milk and milk products - Determination of residues of organochlorine compounds (pesticides) Part 1: General considerations and extraction methods CẢNH BÁO - Việc áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn không đưa tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn đưa xem xét chung quy định phương pháp chiết để xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhóm clo hữu sữa sản phẩm sữa Phụ lục A quy định phương pháp chiết sản phẩm có hàm lượng chất béo cao Phụ lục B đưa hướng dẫn cho phép phân tích có mặt bipenyl polyclo hóa (PCB) Các phương pháp áp dụng cho: -HCH, -HCH, -HCH, aldrin/dieldrin, heptaclo heptacloepoxit, chất đồng phân DDT, DDE, TDE, clodan oxy-clodan, endrin Các phương pháp cụ thể áp dụng cho -ketoendrin HCB Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố, áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 3890-2 (ISO 3890-2), Sữa sản phẩm sữa -Xác định dư lượng hợp chất clo hữu (thuốc bảo vệ thực vật) - Phần 2: Phương pháp tinh dịch chiết thô khẳng định TCVN 6910-1:2001 (ISO 5725-1:1994), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 1: Nguyên tắc định nghĩa chung TCVN 6910-2 (ISO 5725-2), Độ xác (độ độ chụm) phương pháp đo kết đo - Phần 2: Phương pháp xác định độ lặp lại độ tái lập phương pháp đo tiêu chuẩn Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau: 3.1 Hàm lượng hợp chất clo hữu (contents or organochlorine compounds): Phần khối lượng chất xác định quy trình quy định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH: Hàm lượng hợp chất clo hữu biểu thị miligam kilogam chất béo theo chất khô sản phẩm (đối với sản phẩm có hàm lượng chất béo thấp) Nguyên tắc CHÚ THÍCH: Các phương pháp dựa quy trình bốn giai đoạn; đơi hai giai đoạn kết hợp tồn phần Các dư lượng chất mẫu chiết dung mơi thích hợp, cho thu tối đa dịch chiết phần dư lượng lượng tối thiểu chất khác bị chiết mà gây nhiễu cho phép xác định Loại bỏ chất gây nhiễu khỏi dịch chiết để thu dung dịch chiết chứa phần dư lượng dung môi thích hợp cho việc kiểm tra định lượng phương pháp chọn Hàm lượng hợp chất clo hữu xác định phương pháp sắc ký khí lỏng (GLC) có detector bắt giữ điện tử Khẳng định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nhận viết được, đặc biệt trường hợp dư lượng thuốc bảo vệ thực vật vượt mức tối đa cho phép Sự gây nhiễu hợp chất PCB thuốc bảo vệ thực vật vấn đề thường gặp cột nhồi mức độ ảnh hưởng cột mao quản Đối với mức PCB tương đối cao, nên xác định PCB theo TCVN 8101 (ISO 8260) [8] Khả áp dụng phương pháp khác nêu Bảng Bảng 1- Khả áp dụng phương pháp hợp chất khác Heptaclo Heptaclo epoxit DDTb DDEc TDEd lzome Clodan Oxyclodan Endrin + + + + + - - + + + + + + - - + + + + + + + - + + + + + + + + + - + E + + + + + + + + - + F + + + + + + + + + + G + + + + + + + + + + Phương pháp HCHa HCHa HCHa Aldrin/dieldrin A + + + B + + C + D -keto- HCBe endrin H + + + + + + + + - + Ký hiệu: + có khả áp dụng - khơng có khả áp dụng a HCH = 1,2,3,4,5,6-haxecloxyclohexan b DDT = 1,1,1-triclo-2,2-bis (4-clophenyl)etan c DDE = 1,1 -diclo - 2,2 bis (4-clophenyl)eten d TDE = 1,1-diclo-2,2 bis (4-clophenyl)etan e HCB = hexaclobenzen Yêu cầu thuốc thử vật liệu 5.1 Yêu cầu chung Chỉ sử dụng loại thuốc thử loại tinh khiết phân tích sử dụng nước cất nước khử khống nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác Chưng cất lại nước dung môi sử dụng kiểm tra độ tinh khiết chúng (xem 5.2) Giới hạn tạp chất loại thuốc thử sử dụng không vượt giới hạn quy định 14.4 Tuy nhiên, tổng lượng tạp chất tất thuốc thử sử dụng phương pháp lớn giới hạn Tinh định kỳ hoạt hóa chất hấp phụ theo yêu cầu phương pháp phân tích khác Kiểm tra độ tinh khiết chúng (xem 5.2.5) Chú ý không để nước, dung môi, chất hấp thụ v.v bị nhiễm bẩn vật liệu chất dẻo cao su Bảo quản tất thuốc thử, chất hấp phụ v.v tinh chai lọ thủy tinh có nắp thủy tinh nút polytetrafloroetylen (PTFE) Khơng để chúng ngồi khơng khí sau tinh Trong nhiều trường hợp, nhôm rửa axeton có khả bảo vệ thích hợp 5.2 Kiểm tra độ tinh khiết thuốc thử 5.2.1 Dung môi Cô đặc dung môi với hệ sống tương ứng phương pháp sử dụng Kiểm tra độ tinh khiết phương pháp sắc ký khí lỏng (GLC) Sắc đồ khơng có tín hiệu tạp chất với nồng độ vượt giới hạn xác định theo 14.4 Chiết cô đặc axetonitril, dimetylformamit (DMF) metylen clorua đến thể tích giống sử dụng phương pháp kiểm tra dung dịch tạo thành sắc ký khí 5.2.2 Nước Chiết 10 phần thể tích nước với phần thể tích n-hexan dầu nhẹ Tách pha hữu Cô đặc với hệ số tương ứng phương pháp sử dụng kiểm tra độ tinh khiết phương pháp GLC (xem 6.2) Sắc đồ tín hiệu tạp chất với nồng độ vượt giới hạn xác định theo 14.4 5.2.3 Muối vô Dùng n-hexan dầu nhẹ để chiết muối vơ (ví dụ: natri clorua), sau tinh theo yêu cầu phương pháp phân tích khác tất dung dịch lỏng sử dụng Cô đặc dịch chiết với hệ số tương ứng phương pháp sử dụng thử nghiệm sắc ký khí lỏng (GLC) (xem 6.2) Sắc đồ khơng có tín hiệu tạp chất với nồng độ vượt giới hạn xác định theo 14.4 5.2.4 Bông vải, thủy tinh thạch anh Sử dụng chiết Soxhlet để chiết chất n-hexan axeton chúng khơng chứa chất gây nhiễu 5.2.5 Chất hấp phụ Rửa giải lượng chất hấp phụ lượng sử dụng phương pháp phân tích thể tích hỗn hợp dung mơi tương ứng Cô đặc dịch rửa giải theo hướng dẫn phương pháp phân tích kiểm tra độ tinh khiết phương pháp GLC (xem 6.2) Sắc đồ tín hiệu tạp chất với nồng độ vượt giới hạn xác định theo 14.4 Thường xuyên kiểm tra hoạt tính chất hấp phụ 5.2.6 Dung dịch chuẩn Sử dụng vật liệu có độ tinh khiết 95 % phần khối lượng để chuẩn bị dung dịch chuẩn dùng cho phân tích dư lượng thuốc bảo vệ thực vật Nếu bảo quản -20 oC nhìn chung chúng bền năm đến năm Các dung dịch gốc có nồng độ mg/ml, bảo quản tủ lạnh nhiệt độ khoảng oC thường bền vòng từ tháng đến tháng Chuẩn bị dung dịch pha loãng ngày CHÚ THÍCH: Sự thay đổi thể tích dung mơi bay hơi, ví dụ qua khe hở nắp cổ bình ngun nhân gây sai số Bảo quản dung dịch chuẩn lọ thủy tinh tủ lạnh tránh nhiễm bẩn xảy vật liệu chất dẻo cao su Không để dung dịch chuẩn tiếp xúc với ánh sáng mặt trời tia cực tím thời gian dài Có thể sử dụng phương pháp phổ khối lượng sắc ký khí - lỏng để kiểm tra độ nhiễm bẩn chất chuẩn dùng phân tích Kinh nghiệm cho thấy sai sót q trình chuẩn bị, xử lý bảo quản chất chuẩn dung dịch chuẩn nguyên nhân gây sai số Yêu cầu thiết bị, dụng cụ 6.1 Yêu cầu chung Làm kỹ tất dụng cụ thủy tinh dùng phép phân tích dư lượng Có thể dùng dung dịch axit cromic axit sunphuric nóng để làm Nếu sử dụng dung dịch này, cần rửa dụng cụ thủy tinh, sau tráng lại nước cất axeton trước sấy khô Ngay trước dùng, phải tráng lại dụng cụ thủy tinh dung môi sử dụng Không sử dụng loại nút chất dẻo thơng thường [ví dụ: nhựa poly (vinyl clorua) (PVC)] cho bình chứa chất chuẩn chúng làm nhiểm bẩn chất chuẩn Cần dùng nút thủy tinh polytetrafloroetylen (PTFE) Tương tự, không dùng phễu chiết có nút van khóa chất dẻo Chai rửa phải thủy tinh Thay nút thông thường nút thủy tinh nút PTFE Hầu hết phương pháp quy định loại cột sắc ký riêng, chúng chế tạo đặc biệt có khóa thủy tinh PTFE Tại đỉnh cột sắc ký phải có khớp nối thủy tinh mài để nối với bình chứa dung mơi phận điều chỉnh áp lực Đôi khi, khớp nối thủy tinh mài phía vòi có tác dụng việc ứng dụng sức hút dùng bình Buchner thích hợp Có thể sử dụng hai loại thiết bị cô dung môi Loại thứ nhất, thiết bị cô quay Kuderna - Danish 1) (hoặc tương tự), xem tài liệu tham khảo [13]), thiết bị có khơng có cột phân đoạn gia nhiệt nồi Loại thứ hai, loại thiết bị quay màng mỏng (có bán sẵn thị trường), loại thiết bị cần có nguồn chân không, tốt bơm chân không sử dụng nước gia nhiệt đến nhiệt độ 50 oC Cần kiểm tra định kỳ ảnh hưởng loại thiết bị cô dung môi thất thoát thuốc bảo vệ thực vật dễ day bơi Có thể sử dụng "chất hãm" (propylen glycol, n-undecan hexadecan) để giảm thiểu thất thoát thuốc bảo vệ thực vật Nếu sử dụng thiết bị đồng hóa, ý đảm bảo thiết bị không bị nhiễm bẩn Kiểm tra phận đáy truyền động để phát khe hở xung quang đĩa Các mối làm kín nguồn gây nhiễm bẩn Các ống hình gắn với khớp nối thủy tinh mài chuẩn 14 mm có dung tích khoảng 15 ml (nghĩa dài từ 80 mm đến 90 mm) cần cho giai đoạn cô đặc cuối Các ống gắn khít với cột micro-Snyder1) (xem tài liệu tham khảo [14]) Các dung dịch thường giảm đến thể tích nhỏ cuối cách thổi luồng khơng khí khí nitơ Không dùng ống caosu chất dẻo PVC cho mục đích này, ống PTFE nylon thường cho thấy có nguy bị nhiễm bẩn Có thể làm giấy lọc dung môi, cần 1) Đây ví dụ sản phẩm phù hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận lợi cho người sử dụng phần tiêu chuẩn này, ISO khơng ấn định phải sử dụng sản phẩm Bồn nồi cách thủy cần có giá đỡ tương thích với thiết bị sử dụng Đôi cần sử dụng máy ly tâm có khả xử lý khoảng vài trăm mililit nhũ tương với tần số quay từ 2000 r/min đến 4000 r/min 6.2 Thiết bị sắc ký khí lỏng (GLC) Cần sử dụng hệ thống sắc ký khí lỏng thích hợp, tốt trang bị gia nhiệt cho bơm, detector lò cột Nhìn chung, thiết bị bơm mẫu trực tiếp lên cột sắc ký khí lỏng (GLC) thích hợp Cho dù lựa chọn phận khác hệ thống sắc ký khí lỏng (GLC) phụ thuộc vào kinh nghiệm người phân tích, cần xem xét khuyến cáo sau đây: a) Các detector bắt giữ electron (3H, 63Ni), chứng minh phù hợp để xác định hợp chất clo hữu Chỉnh detector theo dẫn nhà sản xuất Định kỳ kiểm tra lệch độ nhạy detector cách kiểm tra độ tuyến tính đồ thị hiệu chuẩn dùng dung dịch chuẩn thuốc bảo vệ thực vật (xem 5.2.6) Không dùng detector 3H yêu cầu nhiệt độ 225oC b) Tốt dùng cột silica nung chảy cột thủy tinh dài từ 1,5 m đến m đường kính từ mm đến mm c) Sử dụng vật liệu phụ trợ thích hợp, có chất lượng tốt (Các vật liệu phụ trợ thích hợp Gaschrom Q2), Chromosorb W-HP2), Anachrom Q2) phạm vi cỡ 60/80, 80/100 100/120 mesh ứng dụng có hiệu quả) d) Nhiều pha tĩnh hỗn hợp pha tĩnh sử dụng có hiệu phụ thuộc vào lượng chủng loại thuốc bảo vệ thực vật clo hữu cơ, ví dụ: - hydrocacbon Apiezon L2) - metysilicon DC-112), DC-2002), OV-12), QC-1012), SP-21002), SE-302) - metylphenylsilicon: - trifloropropylmetylsilicon OV-172), OV-612), OV-252), SP-22502), SE-522) QF-12), OV-2102), SP-24012) - Phenylxyanopropylmetylsilicon OV-2252), XE-602) Làm lắng cẩn thận pha tĩnh cột phụ, tỷ lệ pha tỉnh phụ thuộc vào kết hợp vật liệu phụ trợ kết hợp pha chọn Trong trường hợp, ổn định cột nhồi đầy 24 h nhiệt độ gần với nhiệt độ tương thích tối đa loại pha tĩnh sử dụng Kiểm tra hiệu tính chọn lọc chúng nhiệt độ hoạt động yêu cầu, sử dụng hỗn hợp chuẩn hợp chất clo hữu Sắc ký khí mao quản kỹ thuật quan trọng có khả chiết tách tốt so với cột nhồi Kỹ thuật mao quản khuyến nghị sử dụng đặc biệt chất chiết phức tạp Tuy nhiên, ý sử dụng ống mao quản thủy tinh khử hoạt tính, mặt khác, với mức nồng độ picogam, hợp chất quan tâm thất thoát bị hấp phụ lên bề mặt thủy tinh Để tránh tương này, nên sử dụng cột silica nung chảy Sử dụng nitơ khô, tinh khiết (không chứa oxy, sử dụng detector bắt giữ electron), hỗn hợp khí argon/metan (khi dùng detector hóa điện dạng xung) dùng làm khí mang cho cột nhồi, với tốc độ dòng phụ thuộc vào cỡ kiểu loại cột sử dụng Kiểm soát tốc độ dòng theo đặc tính cột detector Nhìn chung, phải đảm bảo tốc độ dòng khí kiểm sốt xác tốt [ (0,5 đến 1,0) % tốc độ dòng khí] Lắp lọc rây phân tử mạch nguồn định kỳ phục hồi chúng Nói tóm lại, cần đảm bảo điều kiện sắc ký khí lỏng (GLC) (nghĩa chiều dài cột, loại pha tĩnh, bơm, detector, nhiệt độ cột tốc độ dòng khí v.v ) cho việc tách hợp chất clo hữu gần với lượng thực có mặt tốt Lấy mẫu 2) Đây ví dụ sản phẩm phù hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận lợi cho người sử dụng phần tiêu chuẩn này, ISO khơng ấn định phải sử dụng sản phẩm Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện Mẫu không bị hỏng biến đổi trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) [1] Chuẩn bị mẫu thử 8.1 Sữa Điều chỉnh nhiệt độ mẫu thử đến khoảng từ 35 oC đến 40 oC, sử dụng nồi cách thủy, cần Trộn kỹ mẫu thử nhẹ nhàng cách đảo chiều hộp chứa mẫu thử nhiều lần mà không tạo bọt đánh kem làm nguội nhanh đến nhiệt độ khoảng 20 oC 8.2 Sữa cô đặc Lắc đảo chiều hộp chứa Mở nắp hộp, rót từ từ mẫu thử sang hộp chứa thứ hai (có nắp đậy kín khí) trộn cách chuyển qua chuyển lại mẫu thử, ý không để chất béo hay thành phần khác mẫu sót lại thành đáy hộp thứ Cuối cùng, chuyển triệt để mẫu tốt sang hộp chứa thứ hai Trường hợp mẫu thử đựng hộp kín, đặt hộp chưa mở nồi cách thủy nhiệt độ khoảng từ 40 oC đến 60 oC, cần Cứ 15 min, lấy hộp lắc mạnh Sau h, lấy hẳn hộp để nguội đến nhiệt độ phòng Mở hẳn nắp hộp, dùng thìa dao trộn để trộn kỹ mẫu đựng hộp 8.3 Sữa đặc có đường Mở nắp hộp chứa trộn kỹ lượng chứa hộp thìa dao trộn Vừa lắc vừa tạo chuyển động lên-xuống cho lớp với phần góc đáy hộp trộn lẫn với Không để chất béo thành phần khác mẫu sót lại thành đáy hộp Chuyển triệt để mẫu tốt sang hộp chứa thứ hai (có nắp đậy kín khí) Đậy nắp hộp Trường hợp mẫu thử đựng hộp kín, đặt hộp chưa mở nồi cách thủy nhiệt độ khoảng từ 30 oC đến 40 oC, cần Mở nắp hộp, chuyển toàn lượng sữa bên đĩa, có kích thước đủ rộng để trộn kỹ, trộn đồng Trường hợp mẫu thử đựng ống gấp lại được, mở ống chuyển mẫu thử sang bình chứa Sau cắt mở ống, vét tồn lượng mẫu dính lại ống vào bình chứa 8.4 Sản phẩm sữa bột Trộn kỹ mẫu thử cách quay đảo ngược vật chứa mẫu nhiều lần Chuyển toàn mẫu thử vào vật chứa kín khí có dung lượng đủ lớn, cần 8.5 Bơ butterfat Làm nóng mẫu thử đến khoảng 60 oC chất béo tách Gạn mẫu nút thủy tinh vào phễu thủy tinh làm nóng trước 8.6 Phomat Tách chất béo khỏi mẫu thử theo quy định TCVN 7082-2 (ISO 3890-2) 8.7 Các sản phẩm sữa khác Đảm bảo rẳng mẫu thử đồng Cách tiến hành 9.1 Yêu cầu chung Những người thực phải tự làm quen với phương pháp phân tích trước bắt đầu phân tích Cho chạy phép thử trắng thuốc thử đáp ứng yêu cầu Đồng thời tiến hành thử nghiệm phục hồi "bổ sung chuẩn" mức phù hợp với mức cho phép tối đa chúng thỏa mãn yêu cầu (xem Điều 13) Tuân thủ cách xác quy trình phép phân tích mà khơng có biến động Nếu khơng thể hồn thành phép phân tích vòng ngày phải dừng ban đêm, bảo quản dịch chiết mẫu dạng dung dịch dung mơi khan đựng bình có nắp đậy kín, đặt tủ lạnh nhiệt độ từ oC đến oC Khơng dừng q trình chiết, sắt ký cột v.v Cần phải liên tục xem xét áp dụng kỹ thuật cập nhật hay kỹ thuật cho kết chí cho kết xác 9.2 Chiết Cân lượng mẫu thử quy định, tốt tính gam ( % phần khối lượng) Để mẫu đơng lạnh rã đơng trước ngâm số trường hợp mẫu đơng lạnh gây khó khăn cho q trình chiết Thời gian ngâm mẫu 9.3 Làm Tiến hành q trình tách phễu chiết lần min, lắc mạnh phễu phải cân áp suất cách mở van khóe phễu chiết đảo ngược Nếu lắc mạnh tạo thể nhũ tương bền tốt nên lắc nhẹ khoảng thời gian dài Có thể phá vỡ thể nhũ tương cách thêm từ ml đến ml dung dịch natri clorua natri sulfat bão hòa, cách làm ấm vòi nước vóng, hay cho ly tâm (xem Điều 6) Khi lớp tách, lấy lớp bị nhũ hóa để chiết lại loại bỏ Tốc độ rửa giải cột sắc ký thường quy định cụ thể nhìn chung phải nằm khoảng ml/min đến ml/min Ở giai đoạn nên bổ sung lượng biết pentaclobenzen dễ bay (hoặc 1,7 -dibromoheptan) chất chuẩn nội bay (ví dụ: mirex: 1,2,3,4 - tetracloronaphtalen izodrin) Sử dụng petaclorobenzen làm chất thị thất thoát thuốc bảo vệ thực vật giai đoạn bay cách so sánh chiều cao (diện tích) pic với chiều cao (diện tích) pic thu sử dụng chất chuẩn nội bay Có thể sử dụng chất chuẩn nội cho mục đích nhận biết (thời gian lưu tương đối) định lượng Không để bay dung mơi hữu đến khơ hồn tồn, trừ quy định 10 Phép thử sơ Bơm vào máy sắc ký khí (xem 6.2) thể tích thích hợp từ 1,0 l đến 10 l, tùy thuộc vào hệ thống dịch chiết làm thu theo phương pháp phân tích sử dụng Sắc đồ thu hiển thị chất nồng độ gần hợp chất có mặt dịch chiết 11 Thử định lượng Nếu phép thử sơ cho thấy dư lượng đạt tới vượt mức cho phép, kiểm tra lại kết thu cách sử dụng thêm cột sắc ký khí lỏng, có độ phân cực khác Nếu kết thu cột giống lần trước, kiểm tra hai dịch chiết mẫu Đối với phép thử định lượng, chuẩn bị hai dung dịch chuẩn (xem 5.2.6) hợp chất clo hữu nhận biết (xem Điều 10) dung môi sử dụng cho dịch chiết cuối cùng, thường dầu nhẹ n-hexan Nồng độ chúng phải bao trùm nồng độ dự kiến có dịch chiết cuối (xem Điều 10) Sau bơm hai dung dịch chuẩn dịch chiết cuối với thể tích vào máy sắc ký khí (xem 6.2) Tiến hành bơm phần dịch chiết mẫu thử làm trước sau bơm hai dung dịch chuẩn Đo chiều cao diện tích pic Các kết thu từ hai lần bơm dung dịch chuẩn phải khoảng % Việc sử dụng chất chuẩn nội có ích cho phép xác định (xem 9.3) 12 Phép thử khẳng định Sử dụng quy trình thử khẳng định nhận biết hợp chất clo hữu phát được, đặc biệt trường hợp hàm lượng chúng vượt giới hạn dư lượng tối đa (MRL) Phương pháp nêu TCVN 7082-2 (ISO 3890-2) cho phép nhận biết dư lượng thông qua thời gian lưu hợp chất cột sắc ký khí lỏng (GLC) Sử dụng hai cột sắc ký có độ phân cực khác Ngồi ra, quy trình sắc ký mao quản thủy tinh, sắc ký lớp mỏng, phổ khối lượng, -value (hệ số phân tách), sắc ký khí lỏng sản phẩm oxi hóa chuyển hóa khác kỹ thuật tương tự có giá trị khác Xem thêm TCVN 7082-2 (ISO 3890-2) 13 Đánh giá kết 13.1 Tính kết Tính nồng độ hợp chất clo hữu mẫu thử từ tỷ lệ phần tương ứng sắc đồ mẫu chất chuẩn dãy chất chuẩn Biểu thị nồng độ theo mẫu thử chuẩn chất béo chuẩn (xem 13.2.1), tùy theo quy trình, sản phẩm lượng mẫu thử Độ thu hồi 80 % không kết phải hủy bỏ 13.2 Trình bày biểu thị kết 13.2.1 Thông thường, hàm lượng thuốc bảo vệ thực vật clo hữu sản phẩm sữa biểu thị theo chất béo chuẩn Tuy nhiên, trường hợp sản phẩm sữa có hàm lượng chất béo thấp nên biểu thị mẫu thử chuẩn tốt hàm lượng chất béo sản phẩm sữa chất béo dao động hơn, phụ thuộc vào phương pháp chiết chất béo sử dụng (xem phụ lục A) 13.2.2 Nên xác định hàm lượng chất béo phương pháp thích hợp (xem tài liệu tham khảo) ghi lại kết với hàm lượng thuốc bảo vệ thực vật clo hữu Tiếp theo, nêu rõ hàm lượng thuốc bảo vệ thực vật clo hữu biểu thị theo cách nào, ví dụ miligam kilogam tính theo chất béo tính theo mẫu thử CHÚ THÍCH: Điểm ngưỡng % phần khối lượng chất béo giá trị thực tiễn thỏa thuận 13.2.3 Khi giá trị dư lượng không đạt hay vượt mức cho phép, phải ghi lại giá trị thu từ phép xác định đơn lẻ 13.2.4 Nếu có nhiều giá trị dư lượng đạt hay vượt mức cho phép, cần tiến hành sau: a) Nêu rõ phần khối lượng trung bình dải nồng độ hợp chất clo hữu Không hiệu chỉnh phần khối lượng trung bình phần trăm độ thu hồi hợp chất clo hữu b) Nêu rõ phần trăm thu hồi phần khối lượng trung bình giới hạn xác định hợp chất clo hữu tương ứng c) Nêu chi tiết độ lặp lại thường thu mức độ khác kết đo phòng thử nghiệm từ phép phân tích mẫu bổ sung chuẩn sản phẩm mẫu có dư lượng d) Nêu chi tiết độ tái lập thường thu nồng độ trung bình đo mẫu ngoại suy từ liệu cho 13.2.2 14 Độ chụm 14.1 Đánh giá độ chụm Đánh giá độ chụm phương pháp phân tích theo yêu cầu TCVN 6910-1 (ISO 5725-1) TCVN 6910-2 (ISO 5725-2) Theo kinh nghiệm có vài tiêu chí chung, nêu 14.2 14.3 dùng để hướng dẫn cho người phân tích 14.2 Độ lặp lại Mỗi phòng thử nghiệm nên định kỳ xác định độ lặp lại cách phân tích mẫu bổ sung hợp chất clo hữu thích hợp, tốt sử dụng mẫu chứa dư lượng tương tự, nồng độ gần với mức cho phép tối đa Các mẫu nên lấy từ sản phẩm nên dùng để làm mẫu thơng thường khơng có dấu hiệu chất đặc biệt, Chênh lệch giá trị lớn giá trị nhỏ ba kết thử phải nhỏ hơn, giá trị đưa Bảng Xác định giá trị trung gian cách nội suy từ đồ thị logarit-logarit Bảng - Độ lặp lại Mức dư lượng Chênh lệch mg/kg mg/kg 0,01 0,005 0,1 0,025 0,125 CHÚ THÍCH: Trong ví dụ mức 0,01 mg/kg gần với giới hạn xác định 14.3 Độ tái lập Sử dụng Bảng 3, số liệu dựa thực nghiệm Xác định giá trị trung gian cách nội suy từ đồ thị logarit-logarit Bảng - Độ tái lập Mức dư lượng Chênh lệch mg/kg mg/kg 0,01 0,01 0,1 0,05 0,25 CHÚ THÍCH: Trong ví dụ mức 0,01 mg/kg gần với giới hạn xác định 14.4 Giới hạn xác định Về lý thuyết, giới hạn xác định sản phẩm có liên quan xác định phần khối lượng hợp chất clo hữu tính theo miligam kilogam, tương ứng với độ cao h pic thấp đo được, sắc đồ dịch chiết sản phẩm, xác định theo: h=hB1 + 2WB1 Trong HB1 chiều cao pic thử mẫu trắng phía đường chuẩn thời gian lưu tương ứng wB1 biên độ trung bình tín hiệu thử mẫu trắng thời gian lưu tương ứng (w B1 xác định đồ thị theo độ rộng tín hiệu trung bình mẫu trắng) Giới hạn phép xác định phụ thuộc vào độ tinh sạch, chất chất điều kiện sắc ký khí lỏng (cụ thể kiểu loại cột nhiệt độ cột, khí mang độ nhạy detector) Vì điều kiện khơng thể quy định cách xác, nên giới hạn xác định phải thiết lập cho quy trình phòng thử nghiệm Về nguyên tắc chung, giới hạn xác định dư lượng thuốc bảo vệ thực vật nên nhỏ 10 % giới hạn dư lượng tối đa Tuy nhiên, giới hạn dư lượng tối đa 0,05 mg/kg nhỏ hơn, giới hạn xác định 20 % giá trị phù hợp, trừ trường hợp giới hạn dư lượng tối đa gần mức xác định 15 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử dùng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) tất chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết quả; e) việc hiệu chỉnh thực hiện, lớn 2,5 mg thu phép thử trắng phương pháp f) kết thu được, kiểm tra độ lặp lại nêu kết cuối thu Phụ lục A (Quy định) Chiết chất béo hợp chất clo hữu xác định hàm lượng chất béo A.1 Yêu cầu chung Các hợp chất clo hữu liên kết với pha chất béo thường biểu thị miligam kilogam chất béo, sản phẩm chứa hàm lượng chất béo cao (lớn 2%) Trong trường hợp này, không cần phải xác định hàm lượng chất béo mẫu cần xác định dư lượng clo hữu khối lượng biết chất béo chiết Nếu hàm lượng chất béo mẫu thấp (dưới % phần khối lượng), ngồi việc ghi lại hàm lượng clo hữu theo mẫu chuẩn, cần xác định phần trăm chất béo có mẫu A.2 Xác định hàm lượng chất béo Tiến hành xác định hàm lượng chất béo mẫu có hàm lượng chất béo thấp (nhỏ % phần khối lượng) theo tiêu chuẩn thích hợp với sản phẩm tương ứng (xem tài liệu tham khảo) theo phương pháp biết cho kết tương đương Phương pháp chiết soxhlet không phù hợp để xác định chất béo sữa bột Có thể dùng phương pháp phân tích sử dụng thiết bị hấp thụ hồng ngoại ứng dụng rộng rãi sữa sản phẩm sữa sử dụng để xác định chất béo mẫu có hàm lượng chất béo thấp A.3 Chiết chất béo hợp chất clo hữu Các phương pháp chiết bao gồm: a) Chiết Soxhlet, áp dụng cho sản phẩm sữa không dạng lỏng; b) Chiết cột, áp dụng cho tất sản phẩm sữa; c) Phương pháp chiết theo AOAC, áp dụng cho sữa sản phẩm dạng lỏng CHÚ Ý - Không làm bay dung môi hữu đến khơ hẳn, vỉ làm thất hợp chất clo hữu A.4 Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích sử dụng nước cất, nước khử khoáng nước có độ tinh khiết tương đương, trừ có quy định khác A.4.1 Celit 5453) Trước sử dụng, đốt nóng đến 600oC h, Bảo quản bình có nắp kín khí A.4.2 Natri sulfat, khan (Na2SO4) Trước sử dụng, đốt nóng đến 600oC h sau làm nguội bình hút ẩm A.4.3 Cát biển, rửa axit [(ví dụ Merk No 7712) 3)] 3) Đây ví dụ sản phẩm phù hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận lợi cho người sử dụng phần tiêu chuẩn này, ISO khơng ấn định phải sử dụng sản phẩm Trước sử dụng, đốt nóng đến 600oC h sau làm nguội bình hút ẩm A.4.4 Dầu nhẹ, nhiệt độ sơi khoảng từ 40 oC đến 60 oC Trước sử dụng, cho hồi lưu ngược hạt natri hydroxit chưng cất A.4.5 Metanol, (CH3OH) etanol (CH3CH2OH) A.4.6 Dietyl ete (C2H5OC2H5), không chứa peroxit Chưng cất lại trước sử dụng A.4.7 n-Hexan [CH3(CH2)4CH3] Chưng cất lại hạt natri hydroxit trước sử dụng A.4.8 Axeton (CH3COCH3) Chưng cất lại hạt thủy tinh trước sử dụng A.4.9 Natri oxalat (Na2C2O4) kali oxalat (K2C2O4) A.5 Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường, cụ thể sau: A.5.1 Tủ sấy, có khả trì nhiệt độ khoảng 102 oC oC đến 250 oC 25 oC A.5.2 Máy ly tâm, loại chống nổ, trang bị ống thủy tinh dung tích 200 ml đến 300 ml, có khả quay với tần số 2000 r/min đến 4000 r/min A.5.3 Thiết bị chiết Soxhlet, bao gồm: a) Bình cầu đáy tròn, dung tích 500 ml; b) Bình chiết, dung tích khoảng 200 ml; c) Bộ sinh hàn ngược; d) Nguồn nhiệt (ví dụ đèn măng sơng đốt nóng) A.5.4 Bể cát, dầu nước, công suất 400 W A.5.5 Xylanh, chứa khí trơ khơ, gắn với loại xylanh có đường PTFE A.5.6 Pipet A.5.7 Cân, có độ xác đến 0,001 g dải đo từ 0,01 g đến 1000 g A.5.8 Bộ quay, có bình bay dung tích 500 ml A.5.9 Thiết bị làm nhỏ thực phẩm có nguồn gốc động vật (ví dụ máy trộn, máy khuấy, máy xay hình cầu) A.5.10 Cột chiết, bao gồm ống thủy tinh có đường kính 12 mm chiều dài tổng cộng 300 mm, có cấu trúc thoát mao quản chiều dài phần đỉnh 100 mm đường kính 50 mm mm A.5.11 Mặt kính đồng hồ, đường kính 100 mm A.5.12 Cối giã, có chảy A.5.13 Giấy lọc gấp nếp, đường kính khoảng 300 mm ,đã rửa dung môi A.5.14 Bầu chiết (tùy chọn), chiết sơ dung môi tinh khiết bảo quản hexan đựng bình thủy tinh CHÚ THÍCH: Sử dụng bầu chiết hướng dẫn đến có mặt tạp chất dịch chiết mẫu (có pic nhiễu sắc đồ) A.5.15 Bông thủy tinh vải, tinh khiết thành phần hóa học Trước sử dụng chiết hỗn hợp dung mơi hexan/axeton bảo quản bình chứa hexan A.5.16 Phễu thủy tinh, loại thân dài ngắn A.5.1.7 Phễu chiết A.5.18 Bi thủy tinh đũa thủy tinh, rửa dung môi A.5.19 Cốc có mỏ, cỡ khác A.5.20 Bình định mức A.5.21 Dao kẹp A.5.22 Bơm nước A.6 Quy trình chiết A.6.1 Chiết Soxhlet Làm nóng bình đáy tròn dung tích 500 ml (A.5.3) chứa năm viên thủy tinh (A.5.18) tủ sấy (A.5.1) đến 102 o 30 Làm nguội đến nhiệt độ phòng cân Lặp lại trình sấy thu khối lượng bình khơng đổi, nghĩa chênh lệch kết hai lần cân liên tiếp không 0,01 g Cân trực tiếp mẫu mặt kính đồng hộ (A.5.11) Đối với phomat cắt mẫu thành miếng nhỏ Chuyển mẫu vào cối giã (A.5.12) nghiền kỹ hỗn hợp cát (A.4.3) natri sulfat (A.4.2) (1 + phần theo khối lượng) để thu dạng bột khơ Cũng sử dụng celit 545 (A.4.1) Lượng natri sulfat (A.4.2) cát (A.4.3) yêu cầu phụ thuộc vào số lượng hàm lượng nước thực phẩm Chuyển lượng bột thu sang giấy lọc (A.5.13) Lau khơ cối giã, chày mặt kính đồng hồ miếng vải (A.5.15) tẩm dầu nhẹ (A.4.4) Đặt miếng vải vào giấy lọc chứa (A.5.13) chuyển toàn chúng (đã gói lại) vào bình chứa thiết bị chiết Soxhlet Sau cho 250 ml dầu nhẹ (A.4.4) lượng dịch chiết mẫu sau h dòng đối lưu vào bình (A.5.3) cân trước Loại bỏ dung môi cô quay (A.5.8) nhiệt độ khoảng 50 oC áp suất giảm sử dụng bơm nước (A.5.22) cân bình Lặp lại quy trình thu khối lượng bình không đổi, nghĩa chênh lệch kết hai lần cân liên tiếp không 0,01g A.6.2 Chiết cột Trộn kỹ lượng mẫu thích hợp với lượng cát (A.4.3) vừa đủ natri sulfat (A.4.2) (1+1 phần khối lượng) cối giã (A.5.12) máy xay hình cầu (A.5.9) để thu sản phẩm dạng khô Đối với trường hợp chiết sữa bột, hoàn nguyên hoàn toàn chúng nước cất (9+1 phần khối lượng) trước trộn Chuyển hỗn hợp vào cột chiết (A.5.10) trước nhồi lớp natri sulfat dày cm đậy nút nhỏ thủy tinh (A.15.5) Rửa giải cột khô hỗn hợp n-hexan (A.4.7) axeton (A.4.8) (2+1 phần thể tích) Lượng dung mơi phụ thuộc vào khối lượng chất mẫu Thu lấy dịch rửa giải để qua đêm cô đặc chúng cô quay (A.5.8) A.6.1 A.6.3 Phương pháp chiết theo AOAC A.6.3.1 Lắc 100 ml sữa với 100 ml metanol (A.4.5) g natri oxalat (A.4.9) khoảng phễu chiết dung tích 500 ml (A.5.17) Thêm 50 ml dietyl ete (A.4.6) lắc thêm khoảng Lặp lại thao tác với 50 ml dầu nhẹ (A.4.4) A.6.3.2 Cách khác, lượng mẫu thuốc thử nói giảm nửa, thêm 50 ml hỗn hợp dietyl ete (A.4.6) dầu nhẹ (A.4.4) (1+1 phần thể tích) Trong trường hợp này, hỗn hợp cần khuấy trộn mạnh Bước tiến hành theo cách tương tự A.6.3.3 Sau tách pha ly tâm với tần số quay 1500 r/min min, chuyển pha hữu sang phễu chiết khác (A.5.17) chiết pha lỏng hai lần phần 50 ml hỗn hợp dietyl ete (A.4.6) dầu nhẹ (A.4.4) (1+1 phần thể tích) Rửa pha dung mơi hỗn hợp 400 ml nước loại bỏ lớp dịch lỏng Làm khô dung dịch dung môi qua natri sulfat (A.4.2) làm bay đến khối lượng không đổi trung bình biết khối lượng quay (A.5.8) A.6.4 Phương pháp chiết bơ Gia nhiệt mẫu đến khoảng 50 oC gạn qua lọc ấm khơ Hòa tan butterfat dung mơi thích hợp Phụ lục B (Tham khảo) Phép phân tích có mặt polyclobiphenyl (PCB) B.1 Yêu cầu chung Dư lượng polyclobiphenyl (một hỗn hợp đồng phân thu clo hóa biphenyl) thường tìm thấy thực phẩm, chủ yếu thực phẩm có nguồn gốc từ động vật, số vật liệu bao gói Cho đến giai đoạn chiết tách theo phương pháp đề cập, chúng thể nhiều đặc điểm giống với hợp chất bảo vệ thực vật clo hữu Trên sắc ký khí đồ, pic hợp chất biphenyl polyclo hóa (PCB) chồng lên pic số hợp chất bảo vệ thực vật clo hữu (đặc biệt pic sắc ký nhóm DDT) điều làm cho việc định lượng loại thuốc bảo vệ thực vật khó Ví dụ, biphenyl polyclo hóa cao hàm lượng PCB mg/kg giống với mức dư lượng 0,1 mg/kg thuốc bảo vệ thực vật , ’ - DDT B.2 Tách PCB khỏi hợp chất bảo vệ thực vật clo hữu sắc ký cột tạo dẫn xuất Có vài phương pháp xây dựng để tách PCB khỏi hợp chất bảo vệ thực vật clo hữu cơ, tách silicagel, Florisil, nhôm oxit/than củi than củi Các hợp chất PCB bị tách khỏi hợp chất bảo vệ thực vật clo hữu cách sử dụng dung mơi có độ phân cực khác Đầu tiên hợp chất PCB rửa giải, sau q trình rửa giải thuốc bảo vệ thực vật clo hữu dung môi phân cực Việc tách PCB khỏi , ’ - DDE đơi gặp khó khăn Các vết dung mơi phân cực thay đổi hoạt tính silicagel dẫn đến tách đồng thời phần , ’ - DDT với hợp chất PCB Hợp chất PCB aldrin thường rửa giải khỏi cột silicagel dầu nhẹ, tiếp đến hợp chất bảo vệ thực vật clo hữu rửa giải hỗn hợp dung mơi axetonitril/hexan/diclorometan (1 + 90 + 80 phần thể tích) Trong trường hợp có mặt , ’ - DDT gây khó khăn cho việc định lượng, tách DDT cách tạo dẫn xuất tách sản phẩm chuyển hóa Crom trioxit (Cr2O3) axit axetic oxi hóa , ’ - DDT thành , ’ - diclorobenzophenon Các hợp chất PCB lại khơng bị ảnh hưởng Xử lý dịch chiết dung dịch rượu kiềm tính trước thực oxi hóa axit anhydric cromic khẳng định , ’ - DDT có mặt hợp chất PCB Trong quy trình này, , ’ - DDT phản ứng với kiềm tạo thành , ’ DDE, sau tiếp tục oxi hóa thành , ’ - diclorobenzophenon Sử dụng phương pháp sắc ký khí cột mao quản khơng cần đến việc tách cột sắc ký có tác dụng tích cực đến định lượng hợp chất bảo vệ thực vật clo hữu có mặt hợp chất PCB Thư mục tài liệu tham khảo [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] TCVN 6508 (ISO 1211), Sữa - Xác định hàm lượng chất béo - Phương pháp khối lượng (phương pháp chuẩn) [3] TCVN 7084 (ISO 1736), Sữa bột sản phẩm sữa bột - Xác định hàm lượng chất béo Phương pháp khối lượng (phương pháp chuẩn) [4] TCVN 8109 (ISO 1737), Sữa cô đặc sữa đặc có đường - Xác định hàm lượng chất béo Phương pháp khối lượng (phương pháp chuẩn) [5] ISO 1854, Whey cheese - Determination of fat content - Gravimetric method (Reference method) [6] ISO 2450, Cream - Determination of fat content - Gravimetric method (Refence method) [7] TCVN 6833 (ISO 7208), Sữa gầy, whey buttermilk Xác định hàm lượng chất béo - Phương pháp khối lượng (phương pháp chuẩn) [8] TCVN 8101 (ISO 8260), Sữa sản phẩm sữa - Xác định thuốc bảo vệ thực vật nhóm clo hữu polyclobiphenyl - Phương pháp sắc ký khí-lỏng mao quản có detector bắt giữ electron [9] TCVN 6668-1 (ISO 8262-1), Sản phẩm sữa thực phẩm từ sữa - Xác định hàm lượng chất béo phương pháp khối lượng Weibull-berntrop (phương pháp chuẩn) - Phần 1: Thực phẩm dành cho trẻ nhỏ [10] TCVN 6668-2 (ISO 8262-2), Sản phẩm sữa thực phẩm từ sữa - Xác định hàm lượng chất béo phương pháp khối lượng Weibull-berntrop (phương pháp chuẩn) - Phần 2: Kem lạnh kem lạnh hỗn hợp [11] TCVN 6668-3 (ISO 8262-3), Sản phẩm sữa thực phẩm từ sữa - Xác định hàm lượng chất béo phương pháp khối lượng Weibull-berntrop (phương pháp chuẩn) - Phần 3: Trường hợp đặc biệt [12] TCVN 6687 (ISO 8381), Thực phẩm từ sữa dùng cho trẻ sơ sinh - Xác định hàm lượng chất béo - Phương pháp khối lượng (Phương pháp chuẩn) [13] Gunther, FA, Blinn, R.C., Kolbezen, M.J., Barkley, J.H., Harris, W.D Simon, H.S Microestimation of 2-( -tert-buty1phenoxy)isopropyl-2-chloroethyl sulfite residues Anal Chem, 1951, 23, pp 1835-1842 [14] Burke, J.A Mills P.A., Bostwick, D.C Experiments with the evaporation of solutions of chlorinated pesticides J AOAC 1966, 49, p 999-1003  ... dụ: - hydrocacbon Apiezon L2) - metysilicon DC-112), DC-2002), OV-12), QC-1012), SP-21002), SE-302) - metylphenylsilicon: - trifloropropylmetylsilicon OV-172), OV-612), OV-252), SP-22502), SE-522)... + + + + + + - + Ký hiệu: + có khả áp dụng - khơng có khả áp dụng a HCH = 1,2,3,4,5,6-haxecloxyclohexan b DDT = 1,1,1-triclo-2,2-bis (4-clophenyl)etan c DDE = 1,1 -diclo - 2,2 bis (4-clophenyl)eten.. .TCVN 389 0-2 (ISO 389 0-2 ), Sữa sản phẩm sữa -Xác định dư lượng hợp chất clo hữu (thuốc bảo vệ thực vật) - Phần 2: Phương pháp tinh dịch chiết thô khẳng định TCVN 691 0-1 :2001 (ISO 572 5-1 :1994),