Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7731:2008 - EN 14573:2004

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7731:2008 - EN 14573:2004. Tiêu chuẩn trình bày về sản phẩm thực phẩm - xác định 3-monoclopropan-1,2-diol bằng sắc ký khí/phổ khối (GC/MS). Mời các bạn cùng tham khảo để nắm bắt nội dung của tiêu chuẩn này.

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7731 : 2008 EN 14573 : 2004 SẢN PHẨM THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH 3-MONOCLOPROPAN-1,2-DIOL BẰNG SẮC KÝ KHÍ/PHỔ KHỐI (GC/MS) Foodstuffs - Determination of 3-Monochloropropane-1,2-diol by GC/MS Lời nói đầu TCVN 7731 : 2008 hoàn toàn tương đương với EN 14573 : 2004; TCVN 7731 : 2008 Tiểu ban kỹ thuật tiêu chuẩn TCVN/TC/F4/SC1 Gia vị biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố SẢN PHẨM THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH 3-MONOCLOPROPAN-1,2-DIOL BẰNG SẮC KÝ KHÍ/PHỔ KHỐI (GC/MS) Foodstuffs - Determination of 3-Monochloropropane-1,2-diol by GC/MS Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp sắc ký khí đầu dò phổ để xác định hàm lượng 3Monoclopropan-1,2-diol (3-MCPD) protein thực vật thủy phân sản phẩm thực phẩm khác [1] Phương pháp đánh giá hiệu lực nghiên cứu liên phòng thử nghiệm dịch chiết malt, bột xúp, bánh mỳ vụn, xúc xích, salami, phomat protein thực vật thủy phân Nguyên tắc Mẫu trộn với chuẩn nội đồng vị với dung dịch natri clorua chất nhồi rắn Hỗn hợp chuyển vào cột sắc ký chiết, hỗn hợp n-hexan ete dietyl để loại bỏ cấu tử khơng phân cực Sau 3-MCPD giải hấp ete dietyl, dịch rửa giải cô tạo dẫn xuất heptaflobutirylimidazon Dung dịch phân tích sắc ký khí dầu dò khối phổ [2] Thuốc thử 3.1 Yêu cầu chung Chỉ sử dụng thuốc thử thuộc loại tinh khiết phân tích nước sử dụng nước cất nước loại khống, trừ có quy định khác Tránh nhiễm bẩn nước, dung môi, muối vô cơ… sử dụng dụng cụ chất dẻo cao su Chỉ sử dụng dụng cụ thủy tinh để đựng thuốc thử nước CẢNH BÁO - Khi áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn để an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an toàn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn qui định trước sử dụng tiêu chuẩn 3.2 n-Hexan, chưng cất dụng cụ thủy tinh 3.3 Ete dietyl, chưng cất dụng cụ thủy tinh 3.4 2,2,4-Trimetylpentan 3.5 Etyl axetat 3.6 Hỗn hợp dung môi, n-hexan (3.2) ete dietyl (3.3) 9+1 (phần thể tích) 3.7 Dung dịch Natri clorua, hòa tan 290 g natri clorua l nước 3.8 Natri sulfat, khan 3.9 Heptaflobutyrylimidazon 3.10 Chất nhồi cột, Extrelut®1, đóng gói khoảng 20 g 3.11 3-Monoclopropan-1,2-diol (3-MCPD) 3.12 d5-3-Monoclopropan-1,2-diol (d5-3-MCPD), độ tinh khiết đồng vị tối thiểu 98 % Độ ổn định d5-3-Monoclopropan-1,2-diol (d5-3-MCPD) bị hạn chế nên cần kiểm tra 3.13 Dung dịch gốc 3-MCPD, ρ(3-MCPD) = mg/ml Cân 25 mg 3-MCPD (3.11) pha loãng tới vạch etyl axetat (3.5) bình định mức 25 ml 3.14 Dung dịch chuẩn 3-MCPD Pha loãng 10 ml dung dịch gốc 3-MCPD (3.13) bình định mức 100 ml etyl axetat (3.5) tới vạch Từ dung dịch này, chuyển thể tích μl; 12,5 μl; 25 μl; 125 μl; 250 μl 500 μl vào bình định mức 25 ml, pha lỗng 2,2,4-trimetylpentan (3.4) tới vạch, dung dịch thu có nồng độ 3-MCPD tương ứng μg/ml; 0,05 μg/ml; 0,10 μg/ml; 0,50 μg/ml; 1,0 μg/ml 2.0 μg/ml 3.15 Dung dịch gốc d5-3-MCPD, ρ(d5-3-MCPD) = mg/ml Cân 25 mg d5-3-MCPD (3.12) cho vào bình định mức 25 ml pha loãng etyl axetat (3.5) tới vạch 3.16 Dung dịch chuẩn d5-3-MCPD, ρ(d5-3-MCPD) = 10 μg/ml Pha loãng 1,0 ml dung dịch gốc d5-3-MCPD (3.15) bình định mức 100 ml etyl axetat (3.5) tới vạch 3.17 Nitơ Thiết bị, dụng cụ 4.1 Yêu cầu chung Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể sau: 4.2 Thiết bị siêu âm 4.3 Máy lắc vortex 4.4 Máy trộn tốc độ cao 4.5 Máy ly tâm, có vận tốc tối thiểu 3500 vòng/min, ống ly tâm dung tích 100 ml 4.6 Giấy lọc nhanh 4.7 Cột sắc ký, đường kính cm, dài 40 cm, có đĩa thủy tinh thiêu kết khóa vặn 4.8 Bộ cất quay, có nồi cách thủy bình dung tích 250 ml 4.9 Xyranh, dung tích ml, kín khí 4.10 Hộp nhôm gia nhiệt 4.11 Lọ thủy tinh nhỏ, dung tích ml ml có nắp vặn  Extrelut® tên thương mại sản phẩm thích hợp có sẵn từ Ε.Merck, Darmstadt (Đức) Thơng tin đưa tạo thuận lợi cho người sử dụng tiêu chuẩn EN khơng ấn định phải sử dụng sản phẩm này.  4.12 Máy sắc ký khí, có phận bơm mẫu chia dòng/ khơn chia dòng nối với phổ khối, có khả kiểm sốt chọn lọc ion quét toàn phần với độ nhạy cao Cách tiến hành 5.1 Chuẩn bị mẫu thử Nghiền mẫu khô loại hạt nêm ngũ cốc đến mịn Xay thái mẫu bánh mỳ, phomat, xúc xích salami thủy sản thành hỗn hợp đồng Trộn kỹ tất mẫu trước phân tích Nếu khơng tiến hành phân tích phải bảo quản mẫu bao bì kín, làm lạnh đơng cần 5.2 Chiết mẫu 5.2.1 Protein thực vật thủy phân, nước tương, bột xúp dịch chiết malt Cân g bột xúp, g mẫu protein thực vật thủy phân nước tương 10 g dịch chiết malt xác tới 0,01 g thêm 100 μl dung dịch chuẩn nội d5-3-MCPD (3.16) Thêm dung dịch natri clorua (3.7) để thu tổng khối lượng 20 g (mẫu thêm dung dịch natri clorua) Trộn thành hỗn hợp đồng nhất, dùng dao trộn tán mịn tất cục nhỏ Đặt hỗn hợp vào thiết bị siêu âm (4.2) 10 5.2.2 Bột, tinh bột, ngũ cốc bánh mỳ Cân 10 g mẫu thử xác tới 0,01 g thêm 100 μl dung dịch chuẩn nội d5-3-MCPD (3.16) Thêm dung dịch natri clorua (3.7) để thu tổng khối lượng 40 g (mẫu thêm dung dịch natri clorua) Trộn tất thành phần tới thu hỗn hợp đồng nhất, dùng dao trộn nghiền mịn tất cục nhỏ Đặt hỗn hợp vào thiết bị siêu âm (4.2) 10 Đậy hỗn hợp mặt kính đồng hồ ngâm qua đêm 5.2.3 Xúc xích salami phomat Cân 20 g mẫu thử xác tới 0,01 g thêm 100 μl dung dịch chuẩn nội d5-3-MCPD (3.16) Thêm dung dịch natri clorua (3.7) để thu tổng khối lượng 70 g (mẫu thêm dung dịch natri clorua) Trộn tất thành phần tới thu hỗn hợp đồng nhất, thêm tiếp 10 g dung dịch natri clorua, cần Chuyển hỗn hợp vào ống ly tâm (4.5) ly tâm tốc độ 3500 vòng/min 20 Gạn lớp dịch phía vào cốc có mỏ, tránh chuyển thành phần rắn chất béo thấy Cân 20 g phần dịch vào cốc có mỏ 250 ml 5.2.4 Kem, bơ, magarin loại chất béo màu vàng khác Cân 20 g mẫu thử xác tới 0,01 g thêm 100 μl dung dịch chuẩn nội d5-3-MCPD (3.16) Thêm dung dịch natri clorua (3.7) để thu tổng khối lượng 50 g (mẫu thêm dung dịch natri clorua) Đun nóng hỗn hợp đến 45 oC chất béo tan chảy hoàn toàn Trộn máy trộn tốc độ cao (4.4) để yên tủ lạnh h để lớp chất béo đông lại Gạn dung dịch natri clorua phía cân 20 g phần dung dịch vào cốc có mỏ 250 ml 5.3 Cột sắc ký Lấy 20 g hỗn hợp thu 5.2.1 5.2.2 dung dịch thu 5.2.3 5.2.4, thêm chất nhồi Extrelut gói (3.10) trộn kỹ tất thành phần dao trộn Cho hỗn hợp vào cột sắc ký (4.7), lắc cột nhanh tay để nhồi chặt, đổ lên lớp natri sulfat (3.8) cm để yên từ 15 đến 20 Chiết thành phần không phân cực 80 ml hỗn hợp dung mơi (3.6) với tốc độ dòng khơng hạn chế, ngoại trừ với mẫu xúp chuyển thành bột, với loại sản phẩm tốc độ dòng hạn chế khoảng ml/min đến 10 ml/min Đậy nắp cột dung môi chạm tới lớp natri sulfat loại bỏ dịch rửa thu Tiếp theo, rửa giải cột 250 ml ete dietyl (3.3) với tốc độ dòng khoảng ml/min thu dịch rửa giải vào bình định mức 250 ml Pha lỗng dịch rửa giải tới vạch ete dietyl thêm 15 g natri sulfat (3.8) vào bình để yên khoảng từ 10 đến 15 Lọc dịch rửa giải qua giấy lọc (4.6) vào bình cầu đáy tròn dung tích 250 ml Cơ dịch chiết tới khoảng ml cất quay (4.8) với nhiệt độ nồi cách thủy khoảng 35 oC Không để đến khơ Chuyển dịch chiết vào bình định mức 10 ml, tránh bình cầu đáy tròn pha lỗng ete dietyl Thêm lượng nhỏ natri sulfat (dùng đầu dao trộn), lắc kỹ để yên từ đến 10 5.4 Tạo dẫn xuất 5.4.1 Tạo dẫn xuất dung dịch mẫu Dùng xyranh kín khí (4.9) chuyển ml dịch chiết thu từ 5.3 vào lọ thủy tinh ml (4.11) cho bay dung dịch vừa tới khơ dòng khí nitơ nhẹ (3.17) CHÚ THÍCH: Một số người sử dụng phương pháp cho thấy việc sử dụng 2,2,4trimetylpentan (3.4) làm chất giữ tránh thất Thêm ml 2,2,4-trimetylpentan (3.4) 0,05 ml heptaflobutyryllimidazon (3.9) vào lớp cặn gắn kín nắp lọ Lắc lọ vài giây máy lắc vortex(4.3) làm nóng lọ 20 hộp gia nhiệt nhôm (4.10) 70oC Để hỗn hợp nguội tới 40oC Thêm ml nước cất, lắc máy lắc vortex 30 s, để pha phân tách sau lắc lại Chuyển pha 2,2,4trimetylpentan phía vào lọ nhỏ ml (4.11), thêm lượng nhỏ natri sulfat (dùng đầu dao trộn),lắc để yên từ đến Chuyển dung dịch vào lọ nhỏ (2 ml) để phân tích sắc ký khí 5.4.2 Tạo dẫn xuất dung dịch chuẩn Chuyển 100 μl dung dịch chuẩn 3-MCPD (3.14), 10 μl chuẩn nội d5-3-MCPD (3.16), 0,9 ml 2,2,4-trimetylpentan (3.4) vào dãy sáu lọ nhỏ ml (4.11) Thêm 0,05 ml heptaflobutyryllimidazon gắn kín nắp lọ Lắc lọ vài giây máy lắc vortex (4.3) làm nóng lọ 20 hộp gia nhiệt nhôm (4.10) 70 oC Để hỗn hợp nguội tới 40 oC Thêm ml nước cất, lắc máy lắc vortex 30 s, để tách pha lắc lại Chuyển pha 2,2,4-trimetylpentan phía vào lọ nhỏ (2 ml) (4.11), thêm lượng nhỏ natri sulfat (dùng đầu dao trộn),lắc lọ để yên từ đến Chuyển dung dịch vào lọ nhỏ (2 ml) để phân tích sắc ký khí Tiến hành thử mẫu trắng gồm 20 g dung dịch natri clorua (3.7) đồng thời với loạt mẫu 5.5 Sắc ký khí/phổ khối Tiêm thể tích dung dịch mẫu thử thu từ 5.4.1 dung dịch chuẩn thu 5.4.2 vào máy sắc ký khí (4.12) Các điều kiện vận hành sắc ký khí thích hợp nêu Phụ lục A Để định lượng, cho chạy máy sắc ký chế độ SIM sử dụng 253 m/z cho 3-MCPD 257 m/z cho d5-3-MCPD Để khẳng định, sử dụng 453 m/z, 291 m/z, 289 m/z, 275 m/z 253 m/z cho 3-MCPD CHÚ THÍCH 1: Khối lượng phân tử M 502 g/mol 3-MCPD-diheptanflobutiryl-este 507 g/mol dẫn xuất d5-3-MCPD Đối với phân mảnh, 453 m/z từ [M-CH 2Cl], 289 m/z 291 m/z từ [M-C3F7COO, Cl-35/Cl-37], 275 m/z từ [M-C3F7COOCH2] 253 m/z từ [MC3F7COO-HCl] Với dẫn xuất d5-3-MCPD, 257 m/z từ [M-C 3F7COO-DCl] CHÚ THÍCH 2: Có thể dùng 456 m/z d5-3-MCPD Nếu để khẳng định việc nhận dạng pic, chạy sắc đồ dung dịch chuẩn có nồng độ thích hợp chế độ qt phổ tồn phần với dải từ 100 m/z đến 500 m/z CHÚ THÍCH 3: GC-MS/MS thích hợp để định lượng khẳng định việc nhận dạng pic Đánh giá kết 6.1 Tính tốn Từ sắc đồ dung dịch chuẩn chế độ SIM, đo diện tích pic 3-MCPD (253 m/z) d5-3-MCPD (257 m/z) tính tỷ số diện tích pic 253 m/z 257 m/z Dựng đường chuẩn biểu thị tỷ số diện tích pic với khối lượng theo microgam 3-MCPD lọ Tính độ dốc đường chuẩn Tính phần khối lượng w(3-MCPD) 3-MCPD, theo miligam kilogam mẫu, sử dụng công thức (1): W(3-MCPD) = A 10 x A' b x m (1) A diện tích pic 3-MCPD 253 m/z thu từ dung dịch mẫu thử; A' diện tích pic d5-3-MCPD 257 m/z thu từ dung dịch mẫu thử; b độ dốc đường chuẩn; m khối lượng mẫu thử, tính gam; 10 hệ số pha loãng Độ thu hồi chất chuẩn nội 3-MCPD cần kiểm tra thường xuyên 6.2 Khẳng định việc nhận dạng pic Từ sắc đồ thu dung dịch chuẩn dung dịch mẫu thử, tính tỷ số diện tích pic cộng hưởng 291 m/z, 289 m/z, 275 m/z, 253 m/z 453 m/z tương ứng với pic Tối thiểu hai bốn tỷ số làm giàu ion mẫu phân tích phải nằm khoảng ± 20 % trung bình tỷ số làm giàu ion mẫu chuẩn Trong trường hợp phổ quét toàn phần phổ quét trừ nền, phải đảm bảo tách vừa khớp với chuẩn Độ chụm 7.1 Khái quát Chi tiết phép thử nghiệm liên phòng độ chụm phương pháp nêu Phụ lục B Giá trị thuđược từ phép thử nghiệm liên phòng khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với dải nồng độ chất nêu Phụ lục B 7.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử nghiệm hai phép thử đơn lẻ, độc lập thu sử dụng phương pháp vật liệu thử, người thực hiện, sử dụng thiết bi, thực khoảng thời gian ngắn nhất, không % trường hợp vượt giới hạn độ lặp lại r Các giá trị là: Protein thực vật thủy phân x = 0,029 mg/kg r = 0,006 mg/kg Dịch chiết malt x = 0,055 mg/kg r = 0,008 mg/kg Bột xúp x = 0,045 mg/kg r = 0,011 mg/kg Vụn bánh mỳ khô x = 0,030 mg/kg r = 0,007 mg/kg Xúc xích salami x = 0,016 mg/kg r = 0,005 mg/kg Một số loại phomat x = 0,043 mg/kg r = 0,013 mg/kg 7.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối hai kết hai phép thử đơn lẻ, độc lập thu vật liệu thử, báo cáo hai phòng thử nghiệm, khơng q % trường hợp vượt giới hạn độ tái lập R Các giá trị là: Protein thực vật thủy phân x = 0,029 mg/kg R = 0,010 mg/kg Dịch chiết malt x = 0,055 mg/kg R = 0,021 mg/kg Bột xúp x = 0,045 mg/kg R = 0,022 mg/kg Vụn bánh mỳ khô x = 0,030 mg/kg R = 0,018 mg/kg Xúc xích salami x = 0,016 mg/kg R = 0,017 mg/kg Một số loại phomat x = 0,043 mg/kg R = 0,027 mg/kg Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin sau đây: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - viện dẫn tiêu chuẩn này; - kết đơn vị tính; - ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu, biết; - ngày nhận mẫu phòng thử nghiệm; - ngày thử nghiệm; - điểm đặc biệt quan sát trình thử nghiệm; - chi tiết thao tác không quy định phương pháp điều coi tùy chọn ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (tham khảo) Ví dụ điều kiện vận hành GC/MS thích hợp Kích thước cột Dài 30 cm, đường kính 0,25 mm Pha tĩnh cột DB 5-MS tương đương (metyl silicon có % nhóm phenyl), độ dày màng phim 0,25 μm Nhiệt độ cột 50oC min, đặt chương trình để tăng nhiệt từ 50 oC đến 90oC o với vận tốc C/min từ 90oC đến 270oC tốc độ gia nhiệt tối đa, trì nhiệt độ 270 oC 10 Nhiệt độ đầu tiêm 270oC Thể tích tiêm μl chế độ khơng chia dòng với thời gian khơng chia dòng 40 s Khí mang Heli, ml/min Nhiệt độ chuyển đổi 270oC Ion hóa Va đập điện tích dương Quét Chế độ SIM (kiểm tra ion chọn lọc) 453 m/z, 291 m/z, 289 m/z, 275 m/z 253 m/z (3-MCPD) 257 m/z (d5-3-MCPD) Chú giải Y chiều cao pic t thời gian (min) Hình A.1 - Sắc ký dòng ion tổng d5-3-MCPD 3-MCPD Chú giải Y chiều cao pic t phân mảnh (m/z) Hình A.2 - Khối phổ d5-3-MCPD 3-MCPD ... khoảng 20 g 3.11 3-Monoclopropan-1,2-diol (3-MCPD) 3.12 d 5-3 -Monoclopropan-1,2-diol (d 5-3 -MCPD), độ tinh khiết đồng vị tối thiểu 98 % Độ ổn định d 5-3 -Monoclopropan-1,2-diol (d 5-3 -MCPD) bị hạn chế... (3-MCPD) 257 m/z (d 5-3 -MCPD) Chú giải Y chiều cao pic t thời gian (min) Hình A.1 - Sắc ký dòng ion tổng d 5-3 -MCPD 3-MCPD Chú giải Y chiều cao pic t phân mảnh (m/z) Hình A.2 - Khối phổ d 5-3 -MCPD... cho 3-MCPD CHÚ THÍCH 1: Khối lượng phân tử M 502 g/mol 3-MCPD-diheptanflobutiryl-este 507 g/mol dẫn xuất d 5-3 -MCPD Đối với phân mảnh, 453 m/z từ [M-CH 2Cl], 289 m/z 291 m/z từ [M-C3F7COO, Cl-35/Cl-37],