Đang tải... (xem toàn văn)
Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7900:2008 về Sữa – Ước tính vi sinh vật ưa lạnh – Kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở 21 0C (phương pháp nhanh) qui định phương pháp ước tính nhanh số lượng vi sinh vật ưa lạnh bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở 210C. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7900 : 2008 ISO 8552 : 2004 SỮA – ƯỚC TÍNH VI SINH VẬT ƯA LẠNH – KỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC Ở 21 0C (PHƯƠNG PHÁP NHANH) Milk – Estimation of psychrotrophic microorganisms – Colony-count technique at 21 0C (Rapid method) Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp ước tính nhanh số lượng vi sinh vật ưa lạnh kỹ thuật đếm khuẩn lạc 210C Tiêu chuẩn áp dụng cho sữa nguyên liệu sữa trùng Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi TCVN 6261 (ISO 6730), Sữa – Định lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc từ vi sinh vật ưa lạnh – Kỹ thuật đếm khuẩn lạc 6,5 0C TCVN 6263 (ISO 8261), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn chung chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Yêu cầu chung hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật ISO/TS 11133-1, Microbiology of food and animal feeding stuffs – Guidelines on preparation and production of culture media – Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory (Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Hướng dẫn chuẩn bị tạo môi trường cấy – Phần 1: Các hướng dẫn chung đảm bảo chất lượng cho việc chuẩn bị mơi trường cấy phòng thử nghiệm) ISO/TS 11133-2; Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media – Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture media (Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Hướng dẫn chuẩn bị tạo môi trường cấy – Phần 2: Các hướng dẫn thực hành thử tính mơi trường cấy) Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn áp dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Vi sinh vật ưa lạnh (psychrotrophic microorganisms) Các vi khuẩn, nấm men, nấm mốc hình thành khuẩn lạc đếm ủ điều kiện hiếu khí 6,5 0C 10 ngày, điều kiện qui định TCVN 6261 (ISO 6730) Nguyên tắc 4.1 Chuẩn bị đĩa thạch, sử dụng môi trường cấy qui định môi trường xác định dung dịch pha lỗng thích hợp từ mẫu thử 4.2 Ủ ấm đĩa điều kiện hiếu khí 21 0C 25h 4.3 Tính số lượng vi sinh vật mililit mẫu thử từ số lượng khuẩn lạc thu đĩa chọn mức pha loãng thích hợp cho thu kết có nghĩa 5 Mơi trường ni cấy dịch pha lỗng 5.1 Yêu cầu chung Xem TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007) ISO/TS 11133-1 5.2 Dung dịch pha loãng Xem TCVN 6263 (ISO 8261) 5.3 Môi trường nuôi cấy – Thạch sữa đếm đĩa 5.3.1 Thành phần Dịch chiết nấm men 2,5 g Sản phẩm thủy phân casein enzym 5,0 g Bột sữa gầy a 1,0 g Glucoza, khan (C6H12O6) 1,0 g Thạch g đến 18 g b Nước 000 ml a Bột sữa gầy không chứa chất gây ức chế b Tùy thuộc vào sức đông thạch 5.3.2 Chuẩn bị 5.3.2.1 Chuẩn bị từ mơi trường khơ có bán sẵn Theo hướng dẫn nhà sản xuất, trường hợp nên bổ sung bột sữa gầy nhà sản xuất cho không cần thiết Chỉnh pH cho sau khử trùng pH 7,0 0,2 25 0C, cần 5.3.2.2 Chuẩn bị từ thành phần khơ Hòa tan nước theo thứ tự sau: dịch chiết nấm men, dịch thủy phân casein enzym, glucoza cuối bột sữa gầy Để hòa tan nên đun nóng nước Thêm thạch đun đến sôi khuấy thạch tan hết Chỉnh pH cho sau khử trùng pH 7,0 0,2 25 0C, cần 5.3.2.3 Phân phối, khử trùng bảo quản Phân phối môi trường chuẩn bị vào ống nghiệm (6.6) với lượng từ 12 ml đến 15 ml vào bình cầu chai (6.7) có dung tích khơng 500 ml Khử trùng 15 nồi hấp áp lực (6.10) 121 0C Nếu môi trường sử dụng ngay, làm nguội nồi cách thủy (6.4) nhiệt độ từ 44 0C đến 47 0C Nếu không, bảo quản môi trường nơi tối 30 0C 0C không qua ba tháng [xem TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 ; 2007)] Trước kiểm tra vi sinh để tránh chậm trễ rót mơi trường, nên làm tan chảy hồn tồn mơi trường bảo quản, làm nguội nồi cách thủy (6.4) nhiệt độ từ 44 0C đến 47 0C trước sử dụng (xem 8.2.4) Về việc kiểm tra nhiệt độ môi trường yêu cầu khác, xem TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007) 5.3.3 Kiểm tra hiệu việc đảm bảo chất lượng môi trường cấy Kiểm tra hiệu môi trường theo ISO/TS 11133-2 Thiết bị dụng cụ thủy tinh Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm vi sinh thông thường [xem TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007)], cụ thể sau: 6.1 Dụng cụ thủy tinh Có thể dùng dụng cụ sử dụng lần thay cho dụng cụ thủy tinh sử dụng nhiểu lần đáp ứng yêu cầu tương tự Dụng cụ thủy tinh sử dụng nhiều lần phải chịu việc khử trùng nhiểu lần phải trơ mặt hóa học 6.2 Tủ ấm, trì nhiệt độ 21 0C 0C 6.3 Máy đo pH, có độ xác hiệu chuẩn 0,1 đơn vị pH 25 0C 6.4 Nồi cách thủy, có khả trì nhiệt độ từ 44 0C đến 47 0C 6.5 Dụng cụ đếm khuẩn lạc, ví dụ: gồm có chiếu sáng với phơng đen, gắn với thấu kính khuếch đại với độ phóng đại hai lần đếm đếm điện tử, tùy chọn 6.6 Ống nghiệm, dung tích khoảng 20 ml, có nắp đậy thích hợp 6.7 Bình cầu chai, có dung tích thích hợp khơng lớn 500 ml, có nắp đậy thích hợp 6.8 Pipet chia vạch, dung tích danh định ml 6.9 Đĩa Petri, thủy tinh chất dẻo, đường kính từ 90 mm đến 100 mm 6.10 Thiết bị khử trùng khô (tủ sấy) thiết bị khử trùng ướt (nồi hấp áp lực) Xem TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007) Lấy mẫu Điều quan trọng mẫu gửi đến phòng thử nghiệm mẫu đại diện khơng bị hư hỏng thay đổi q trình vận chuyển bảo quản Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị dung dịch pha loãng ban đầu dung dịch pha loãng thập phân Chuẩn bị dung dịch pha loãng ban đầu (10-1) dung dịch pha loãng thập phân mẫu thử, theo TCVN 6263 (ISO 8261) Các mẫu lạc thu phương pháp nhanh lồi nhỏ khơng dễ dàng phát đĩa khơng pha lỗng mờ đục không rõ ràng môi trường Do đó, cần pha lỗng mẫu thử 10 lần (tốt 100 lần lớn hơn) để quan sát khuẩn lạc nhỏ 8.2 Nuôi cấy ủ ẩm 8.2.1 Lấy hai đĩa Petri vô trùng (6.9) Dùng pipet vô trùng (6.8) lấy ml dung dịch pha loãng ban đầu (8.1) cho vào đĩa 8.2.2 Nếu cần, lặp lại quy trình với dung dịch pha loãng thập phân tiếp theo, sử dụng pipet vơ trùng cho độ pha lỗng 8.2.3 Nếu thích hợp có thể, chọn bước pha lỗng tới hạn (ít hai dung dịch pha loãng thập phân liên tiếp) để cấy lên đĩa Petri mà cho số đếm khuẩn lạc từ 15 khuẩn lạc đến 300 khuẩn lạc đĩa 8.2.4 Rót vào đĩa Petri khoảng 12 ml đến 15 ml môi trường đếm đĩa (5.3.2.3) 44 0C đến 47 C Thời gian tính từ kết thúc chuẩn bị dung dịch pha loãng ban đầu đến rót mơi trường đĩa khơng 15 8.2.5 Trộn cẩn thận dịch cấy với môi trường cách xoay đĩa Petri Để hỗn hợp đông để đĩa Petri mặt phẳng nằm ngang, mát 8.2.6 Lật úp đĩa chuẩn bị đặt vào tủ ấm (6.2) 21 0C 25 h h Không chồng cao sáu đĩa Để chồng đĩa cách xa cách xa thành đỉnh tủ 8.3 Đếm khuẩn lạc 8.3.1 Sau thời gian ủ ấm qui định (8.2.6), sử dụng đếm khuẩn lạc (6.5) để đếm khuẩn lạc đĩa Kiểm tra đĩa ánh sáng dịu Xác định xác khuẩn lạc, người thực tránh đếm nhầm hạt khơng hòa tan chất kết tủa đĩa với khuẩn lạc đích thực Kiểm tra cẩn thận đối tượng nghi ngờ, cần sử dụng độ phóng đại lớn để phân biệt khuẩn lạc với chất lạ 8.3.2 Các khuẩn lạc mọc lan coi khuẩn lạc đơn lẻ Nếu có phần tư đĩa mọc dày khuẩn lạc mọc lan, đếm khuẩn lạc phần đĩa khơng bị ảnh hưởng tính số lượng tương ứng với tồn đĩa Nếu có nhiều phần bốn đĩa có khuẩn lạc mọc lan loại bỏ đĩa khơng đếm Tính tốn biểu thị kết Tính tốn biểu thị kết theo TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007) 10 Độ chụm 10.1 Yêu cầu chung Thông tin giới hạn tin cậy việc ước tính số lượng nhỏ vi sinh vật, xem TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007) CHÚ THÍCH: Khơng có sẵn số liệu chi tiết độ chụm thu nghiên cứu liên phòng thử nghiệm Các số đưa kết thực nghiệm 10.2 Độ lặp lại Kinh nghiệm cho thấy hai kết thử nghiệm độc lập riêng lẻ mẫu thử cao 1000 CFP/ml, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, tiến hành phòng thử nghiệm, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, kết cao thường xuyên vượt kết thấp 50 %, người phân tích cần kiểm tra lại quy trình để xác định nguồn gốc sai 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải ghi rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) chi tiết thao tác không qui định tiêu chuẩn này, tùy ý lựa chọn, với chi tiết bất thường khác ảnh hưởng tới kết quả; e) kết thử nghiệm thu THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] OLIVERIA, J.s., PARMELEE, C.E Rapid enumeration of psychrotrophic bacteria in raw milk and pasteurized milk J.Milk Food Tchnol 39, 1976, pp.269-272 [2] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn lấy mẫu [3] TCVN 7904 (ISO 17410), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Phương pháp định lượng vi sinh vật ưa lạnh ... Mơi trường ni cấy dịch pha lỗng 5.1 Yêu cầu chung Xem TCVN 6404 : 2008 (ISO 7218 : 2007) ISO/ TS 1113 3-1 5.2 Dung dịch pha loãng Xem TCVN 6263 (ISO 8261) 5.3 Môi trường nuôi cấy – Thạch sữa đếm đĩa... chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị dung dịch pha loãng ban đầu dung dịch pha loãng thập phân Chuẩn bị dung dịch pha loãng ban đầu (1 0-1 ) dung dịch pha loãng... and pasteurized milk J.Milk Food Tchnol 39, 1976, pp.26 9-2 72 [2] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn lấy mẫu [3] TCVN 7904 (ISO 17410), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi –