Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6652:2000 - ISO 13877:1998. Tiêu chuẩn trình bày về chất lượng đất - xác định các hydrocacbon thơm đa nhân - phương pháp sử dụng sắc ý lỏng cao áp. Hy vọng đây là tài liệu tham khảo cho các bạn.
tcvn tIªu chn vIƯt nam TCVN 6652 : 2000 ISo 13877 : 1998 chất lợng đất xác định hydrocacbon thơm đa nhân phơng pháp sử dụng sắc ký láng cao ¸p Soil quality − Determination of polynuclear aromatic hydrocarbons method using high - performance liquid chromatography Hµ nội -2000 Lời nói đầu TCVN 6652 : 2000 hoàn toàn tơng đơng với ISO 13877 : 1998 TCVN 6652 : 2000 Ban Kü thuËt Tiªu chuÈn TCVN/TC 190 Chất lợng đất biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lờng Chất lợng đề nghị, Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng ban hành Tiêu chuẩn việt nam tcvn 6652 : 2000 Chất lợng đất - Xác định hydrocacbon thơm đa nhân Phơng pháp sử dụng sắc ký láng cao ¸p Soil quality - Determination of polynuclear aromatic hydrocarbons Method using high - performance liquid chromatography Cảnh báo : số hợp chất hydrocacbon thơm đa nhân (PAH) có khả gây ung th cao, phải cẩn thận xử lý Không để chất rắn, dung môi chiết dung dịch PAH tiêu chuẩn tiÕp xóc víi c¬ thĨ PAH cã thĨ bay h¬i với dung môi đọng lại bên chai ®· ®ãng nót, ®ã vËn chun tÊt c¶ chai lọ có chứa dung dịch PAH cần luôn sử dụng găng tay chịu đợc dung môi tốt dùng lần Chai lọ đựng dung dịch PAH nên bảo quản để đứng cốc thuỷ tinh để chứa đợc chất đổ trờng hợp ®ỉ Sù « nhiƠm PAH ë chai lä cã thể đợc phát cách chiếu ánh sáng có bớc sóng 366 nm PAH thể rắn nguy hiểm gây hiểm hoạ bụi tinh thể chúng trở nên bị tích tĩnh điện Làm việc với chất nơi có sẵn phơng tiện phù hợp (ví dụ, tủ hút thích hợp, quần áo bảo hộ, mặt nạ che bụi ) Cần nhấn mạnh dung dịch chuẩn phải đợc chuẩn bị tập trung phòng thí nghiệm đợc trang bị thích hợp mua từ ngời cung cấp chuyên chuẩn bị dung dịch Thải bỏ dung dịch chứa PHA theo phơng pháp phù hợp chất thải độc Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn mô tả hai phơng pháp định lợng hydrocacbon thơm đa nhân (PAH) đất Tiêu chuẩn trÝch dÉn TCVN 6661-1 : 2000 (ISO 8466-1) - ChÊt lợng nớc Hiệu chuẩn đánh giá phơng pháp phân tích ớc tính đặc tính hiệu Phần - Đánh giá thống kê hàm hiệu chuÈn tuyÕn tÝnh bËc TCVN 6662-2 : 2000 (ISO 8466-2) - Chất lợng nớc Hiệu chuẩn đánh giá phơng pháp phân tích ớc tính đặc tính hiệu Phần Phơng pháp hiệu chuẩn cho hàm hiệu chuẩn thứ cấp không tuyến tính bËc TCVN 6652 : 2000 ISO 10381-5 - Chất lợng đất - Lấy mẫu - Phần - Hớng dẫn trình tự khảo sát ô nhiễm đất khu đất đô thị công nghiệp TCVN 6647 : 2000 (ISO11464) - Chất lợng đất - Xử lý sơ mẫu để phân tích lý - hoá TCVN 6648 : 2000 (ISO 11465) - Chất lợng đất - Xác định hàm lợng chất khô nớc sở khối lợng - Phơng pháp khối lợng ISO 14507 - Chất lợng đất - Xử lý sơ mẫu để xác định chất gây ô nhiễm hữu Nguyên tắc Đất tơi đợc chiết axêton (phơng pháp A) đợc chiết toluen sau làm khô (phơng pháp B) Chú thích - Khi ¸p dơng ph−¬ng ph¸p B, sù mÊt naphtalen cã thĨ xảy phơi khô đất không khí Phân tích dịch chiết đợc tiến hành sắc ký lỏng cao áp (HPLC).Dùng detector tử ngoại detector huỳnh quang có bớc sóng kích thích phát xạ Việc định lợng đợc tiến hành cách ghi lại tín hiệu detector (diện tích chiều cao) phơng pháp ngoại chuẩn 16 hợp chất đợc liệt kê 5.11 (gọi chất ô nhiễm - EPA PAH[5]) đợc xác định với PAH khác, tính hiệu lực phơng pháp phải đợc chứng minh Chú thích - Acenaphthylen đo đợc phép đo huỳnh quang Thiết bị, dụng cụ 4.1 Khái quát 4.1.1 Cân phân tích, với độ xác 0,01 g 4.1.2 Cân phân tích, với độ xác 0,01 mg Chú thích - Cân nên sử dụng cho việc chuẩn bị mẫu chuẩn 4.1.3 Buồng làm kh«, theo TCVN 6648 : 2000 (ISO 11465) 4.2 ThiÕt bị dùng cho việc chuẩn bị mẫu (phơng pháp A) 4.2.1 B×nh h×nh nãn, dung tÝch 500 ml 4.2.2 PhƠu lọc, dung tích 1000 ml 4.2.3 Máy lắc, chuyển động ngang với 200 lần lắc/phút TCVN 6652 : 2000 4.2.4 Máy cô đặc, ví dụ máy Kuderua - Danish máy li tâm 4.2.5 Nồi cách thuỷ, ®iỊu chØnh nhiƯt ®é ®Õn 1000C 4.2.6 Cét s¾c ký, ®Ó tinh chÕ, ®−êng kÝnh cm 4.3 ThiÕt bị dùng cho việc chuẩn bị mẫu (phơng pháp B) 4.3.1 Soxhlet, kho¶ng 30 ml, cã èng lãt b»ng giÊy sợi thuỷ tinh, bình có đáy tròn dung tích100 ml bình ngng Chú thích - Nếu giá trị mẫu trắng bị loại trừ, trớc sử dụng phải rửa ống lót toluen 4.3.2 Bình định mức, dung tích 50 ml 100 ml 4.4 Thiết bị dùng để phân tích 4.4.1 Máy sắc ký lỏng cao áp, đợc trang bị theo yêu cầu với hệ thống phát tia tử ngoại (với bớc sóng biến đổi) với hƯ thèng ph¸t hiƯn b»ng hnh quang (víi sù lùa chọn tự bớc sóng kích thích phát xạ).Nếu sử dụng hệ thống phát huỳnh quang cần loại bỏ khí ( bỏ oxi ) pha động, ví dụ helium 4.4.2 Cột tách có cột bảo vệ, sử dụng vật liệu pha đảo ®Ĩ ph©n tÝch PAH Chó thÝch - Trong ph©n tÝch đất,việc sử dụng cột bảo vệ giúp cho việc nâng cao tuổi thọ cột phân tích 4.4.3 Thiết bị ghi, tích hợp máy tính nối với máy in/máy vẽ điểm Khoảng đo phù hợp với tín hiệu đầu HPLC, tốt có biểu thị hình khả hiệu chỉnh đờng chuẩn liên tiếp Thuốc thử 5.1 Thuốc thử chung Những hoá chất thoả mãn yêu cầu cho việc phân tích chất tồn d không chứa PAH phù hợp cho việc chuẩn bị mẫu Việc xác định giá trị mẫu trắng định kỳ phải đợc tiến hành để kiểm tra độ tinh khiết hoá chất, thông thờng sau đa vào loại dự trữ Các loạt dung môi có chứa PAH phải đợc thay loại dung môi PAH phải đợc làm tinh khiết cách chng cất ( ví dụ qua cột vigreux dài m) 5.2 Axeton, loại p.a loại để phân tích chất tồn d (A) 5.3 Ete dầu hoả (giải nhiệt độ sôi từ 400C đến 600C),loại p.a loại để phân tích chất tồn d− (A) TCVN 6652 : 2000 5.4 Toluen, lo¹i p.a loại phân tích tồn d (B) 5.5 Natri sunfat (khan), loại p.a 5.6 Nhôm oxit, kiềm trung tính, diện tích bề mặt riêng đạt 200m2 /g, hoạt tính cao loại I theo Brockmann 5.7 Metanol axetonitrin, loại tinh khiết dùng cho HPLC 5.8 Nớc 5.8.1 Để chiết (A):nớc cất lần nớc loại bỏ ion 5.8.2 Dùng cho pha động HPLC: nớc siêu tinh khiết (loại tinh khiết dùng cho HPLC) 5.9 Heli, độ tinh khiết thích hợp cho việc loại bọ hình thành khí dung môi (xem 4.4.1) 5.10 Nitơ, độ tinh khiết thích hợp cho việc giảm thể tích Chú thích - Phải kiểm tra để đảm bảo tạp chất không lẫn vào, ví dụ lắp đặt thiết bị đờng ống dẫn chất dẻo 5.11 Chất ®èi chiÕu Chó thÝch - ChÊt ®èi chiÕu vµ dung dịch chuẩn PHA có sẵn đợc giới hạn số nhà cung cấp Số Chất Số CAS Naphthalen 91 - 20 - Acenaphthylen 208 - 96 - Acenaphthen 83 - 32 - Fluoren Phenanthren 85 - 01 - Anthracen 120 - 12 - 7 Flouranthen 206 - 44 - Pyrene 129 - 00 - Benz[a]anthracen 56 - 55 - 10 Chrysen 218 - 01 - 11 Benzo[b]fluoranthen 205 - 99 - 12 Benzo[k]fluoranthen 207 - 08 - 13 Benzo[a]pyren 50 - 32 - 14 Dibenz[ah]anthracen 53 - 70 - 15 Benzo[gh]perylen 191 - 24 - 16 Indeno[1,2,3-cd]pyren 193 - 39 - 86 - 73 - TCVN 6652 : 2000 5.12 Dung dÞch chuẩn Cảnh báo: Không đợc chuẩn bị chuẩn PAH từ vật liệu rắn trừ có sẵn phơng tiện phù hợp Sử dụng kỹ thuật xử lý thích hợp Cân khoảng mg chất đối chiếu (5.11 ) với độ xác 0.01 mg cho vào bình định mức 100 ml Cho metanol axetonitrin (5.7) tới vạch Từ dung dịch gốc dùng pipet ®· hiƯu chn lÊy ml, víi ®é chÝnh x¸c %, cho vào ampun nhỏ bịt ống lại cách nung chảy Sau làm lạnh nitơ lỏng, bịt ampun lại cách nung chảy Bảo quản ampun tủ lạnh chống tia lửa, chất chứa đợc để ổn định điều kiện năm Để sử dụng nh dung dịch hiệu chuẩn, chuyển lợng chất chứa ampun vào bình định mức 100 ml bù thêm axetonitrin (phơng pháp A) toluen (phơng pháp B) Nếu cho nồng độ PAH đất thấp, sử dụng detector huỳnh quang chuẩn bị dung dịch hiệu chuẩn axetonitrin pha loãng thêm với tỷ lệ 1:10 Chú thích - Nên sử dụng chuẩn sẵn có thị trờng trừ phòng thí nghiệm cã nhiỊu kinh nghiƯm xư lý c¸c vËt liƯu nguy hiểm 5.13 Những chuẩn đợc chuẩn bị sẵn thị trờng Những dung dịch gốc ví dụ nh axetonitrin có sẵn thị trờng Rất khuyến khích sử dụng dung dịch Để chuẩn bị dung dịch hiƯu chn, pha lo·ng dung dÞch gèc theo 5.12 Lấy mẫu, bảo quản xử lý sơ mẫu Lấy mẫu đợc tiến hành theo ISO 10381-5 kết hợp với phòng phân tích Giữ đất hộp không ảnh hởng đến hàm lợng PAH mẫu, ví dụ nh thuỷ tinh kim loại Khối lợng mẫu khoảng 500 g đến 1000 g Chú thích - Bản báo cáo lấy mẫu chi tiết cần có kèm với mẫu Thông tin chi tiết bảo quản xử lý sơ mẫu xem ISO 14507 Đá vật liệu khác có đờng kính lớn hơn10 mm rõ ràng không bị nhiễm bẩn nên đợc tách ra, cân ghi lại kết Những hạt lớn bị nhiễm bẩn nên đợc giảm cỡ phân tích riêng rẽ với vật liệu mẫu mịn Trong báo cáo kết quả, phải ghi rõ trình tiến hành để xác minh tình trạng ban đầu mẫu rõ phần kết qủa phân tích có liên quan Để hạn chế đến mức tối thiểu phân huỷ, cần giữ mẫu chỗ tối tốt nhiệt độ lạnh (40C + 20C) TCVN 6652 : 2000 Chó thÝch - MÉu phải đợc phân tích nhanh tốt Sự phân hủ mÉu vi sinh vËt cã thĨ x¶y đặc biệt khảo sát đất nông nghiệp Nếu sử dụng phơng pháp B, phơi khô mẫu không khí tr−íc ph©n tÝch, theo TCVN 6647 : 2000 ISO11464 Nếu đất có xu hớng kết thành khối trình phơi lại giã nhỏ cốc Mẫu đợc rây đến cỡ hạt mm theo TCVN 6647 : 2000 (ISO11464) Tiến hành xác định ghi lại phần trăm khối lợng cấp hạt có đờng kính < mm vµ > mm Chó thÝch - Sư dụng rây tốt Lấy mẫu từ cấp hạt nhỏ mm theo TCVN 6647 : 2000 (ISO11464) Nếu đất có hàm lợng chất cao ( ví dụ tro, gạch) chất cần đợc phân tích, nghiền toàn mẫu tới cỡ hạt nhỏ mm Quá trình thờng đợc chọn phải khảo sát đất lấy từ vùng công nghiệp bỏ hoang Cách tiến hành 7.1 Chiết theo phơng pháp A: đất không ô nhiễm ô nhiễm nhẹ 7.1.1 Tiến hành chiết Cân khoảng 20 g đất ( 4.2.1) xác đến 0,1 g cho vào bình tam giác dung tích 500 ml Thêm 200 ml axeton đóng bình lại Lắc mạnh máy lắc (4.2.3) vòng 15 phút Thêm 100 ml ete dầu hoả để trộn đất axeton, lắc thêm 15 phút Sau để lắng, gạn phần bề mặt vào phễu lọc dung tích 1000 ml (4.2.2) Loại bỏ axeton hợp chất phân cực từ phần cách lắc lần, lần với 800 ml nớc Thải bỏ nớc Làm khô dịch chiết lại natri sunphat khan, chuyển dịch chiết đợc làm khô vào máy cô (4.2.4) giảm thể tích đến khoảng 10 ml giai đoạn nhiệt độ nồi cách thuỷ phải giữ khoảng 400C đến 600C Cô nhiệt độ phòng đền khoảng ml b»ng mét lng khÝ nit¬ nhĐ 7.1.2 TiÕn hành tinh chế Tuỳ thuộc vào mục đích khảo sát giới hạn yêu cầu phát mà cần phải tinh chế Nếu cần tiến hành nh sau: Sấy khô nhôm oxit (5.6) qua đêm nhiệt độ1050C Làm nguội bình hút ẩm 89 g nhôm oxit thêm 11 g nớc Chuyển vào chai nút chặt Lắc đến tất phần rắn bị phân tán nhôm oxit c©n b»ng Ýt nhÊt 16 giê tr−íc sư dơng TCVN 6652 : 2000 KiĨm tra ®Ịu đặn hoạt tính nhôm oxit chuẩn bị cách tinh chế dung dịch chuẩn Chuẩn bị cột hấp phụ cách cân (2,0g 0,1 g) nhôm oxit không hoạt tính vào ống sắc ký (4.2.6), lắp đáy nút nhỏ làm thuỷ tinh Thêm vào đỉnh cột khoảng cm natri sunphat khan Chó thÝch - Còng cã thĨ sư dơng loại cột dùng lần có sẵn thị trờng thấy tơng đối phù hợp Chuyển dịch chiết cô đặc tới đỉnh cột pipet Pasteur Rửa ống cô lần, với ml ete dầu hoả thêm dịch rửa vào cột Rửa giải hấp ml ete dầu hoả tập trung hết phần nớc rửa giải hấp vào ống thử hiệu chuẩn có đầu chia độ, ví dụ ống cô Kuderna -Danish Thêm khoảng 0.8 ml axetonitril cô đặc nhiệt độ phòng luồng khí nitơ nhẹ toàn ete dầu hoả bay hết, nghĩa đạt tới thể tích 0,8 ml Thêm axetonitril tíi v¹ch 1,0 ml Chó thÝch - Tr−êng hợp cần thiết giai đoạn thêm 20 àl dung dịch chuẩn nội Chuẩn nội đợc sư dơng cho viƯc kiĨm tra thêi gian b¶o qu¶n Một dung dịch chuẩn nội phù hợp đợc chuẩn bị cách hoà tan 6-methylchrysen axetonitrin đạt tới nồng độ 15 àg/ml 7.2 Chiết theo phơng pháp B : đất bị ô nhiễm: Cân 15 g đến 30 g đất khô không khí xác đến 0,1 g, cho vào ống nhỏ chiÕt dơng Soxhlet (4.3.1) h ®Õn h 50 ml đến 100 ml toluen Xác định thời gian chiết thực tế cho trờng hợp riêng biệt Cá biệt, với loại đất có lợng lớn vật liệu hạt mịn bị ô nhiễm cao, cần thời gian chiết lâu Cho dịch chiết vào bình định mức, thêm toluen tới 50 ml 100 ml lấy ớc số để phân tích 7.3 Phân tích HPLC 7.3.1 Nhận định chung Những điều kiện tiến hành phân tích HPLC khác Để đa lời khuyên cho ngời sử dụng tiêu chuẩn này, có hai ví dụ phân tích HPLC đợc trình bày 7.3.2 Tuy nhiên, điều kiện thao tác thích hợp phải đợc lựa chọn tuỳ theo thiết bị cột đợc sử dụng Sắc ký đồ mẫu thực cho thấy nhiều đỉnh sắc ký đồ riêng PAH Vì việc tối u hoá điều kiện sắc ký không nên dựa vào dung dịch chuẩn Chú thích - Nhìn chung, yêu cầu tối thiểu 25 phút để đạt đợc phân ly thích hơp PAH thành phần khác mẫu TCVN 6652 : 2000 Tr−íc sư dơng c¸c cét míi, kiĨm tra phân ly trình tự giải hấp hỗn hợp hiệu chuẩn 7.3.2 Ví dụ ®iỊu kiƯn thao t¸c HPLC 7.3.2.1 Kh¸i qu¸t Hai vÝ dụ điều kiện thao tác đợc trình bày, dùng phép đo tia tử ngoại (hệ diốt) huỳnh quang để phát hiện, điều kiện hai hệ thống riêng biệt Những thông số sau đợc coi có lợi cho việc phân tích ®Êt: Kim tiªm kim tiªm tù ®éng ThĨ tÝch tiªm 10 àl Cột: pha đảo 250 mm x 4,6 mm, vật liệu C18 để phân tích PAH, cỡ hạt 5àm Pha động: methanon/nớc Tốc độ chảy: 1ml/phút Gradient: 50% methanol, 20 phút đạt đến 100% sau 10 phút đạt đến isocratic Thiết bị ghi: hệ thống liệu phòng thí nghiệm Chú thích - Dùng toluen làm dung môi dẫn đến việc tăng bề rộng giải chất rửa giải sớm Do thể tích tiêm thờng không nên vợt 10 àl Chú thích - Đối với số lô vật liệu đợc sử dụng, ®· chØ r»ng nh÷ng ®iỊu kiƯn ®· cho dibenz[ah]anthraxen benzo[ghi]perylen không bị phân ly Tăng phân ly cách thêm 10 % axetonitrin vào pha động 7.3.2.2 Qui trình sử dụng phép đo tia tử ngoại ( hệ diode) để phát Trong ví dụ sử dụng detector hệ diode (DAD).Tuy nhiên kết so sánh thu đợc detector tia tử ngoại thông thờng với bớc sóng biến đổi Detector hệ diode có khả lựa chọn bớc sóng thích hợp giải thích kết mà không gặp phải khó khăn gì, cần dịch chuyển đờng chuẩn bớc sóng đợc thay đổi cách học trình đo Thuận lợi thứ hai với detector hệ diode, việc xác nhận kết thu đợc từ phép đo, ví dơ b»ng viƯc sư dơng c¸c b−íc sãng kh¸c /hoặc kiểm tra toàn giải quang phổ Phép phát tia tử ngoại có thuận lợi dãy tuyến tính rộng Điều bất lợi độ nhạy thấp so với detector huỳnh quang ®é chän läc thÊp h¬n Detector hƯ diode cho phÐp chuyển bớc sóng trình đo Điều đợc sư dơng nh− sau: 10 TCVN 6652 : 2000 Detector: detector hƯ diode (UV) B−íc sãng: 280 nm (chun tr−íc fluorene) 254 nm (chun tr−íc fluoranthene) 270 nm Trong nh÷ng điều kiện này, xác định đợc tất 16 thành phần đợc liệt kê 5.11 Sắc ký đồ dung dịch chuẩn đợc thể hình Sắc ký đồ dung dịch chiết đất đợc thể hình Chú thích - Dung dịch chuẩn hình bao gồm hợp chất khác không nằm phạm vi chi tiết cuả tiêu chuẩn Chú thích - Để đánh số đỉnh tham khảo hợp chất liệt kê 5.11 Hình - Sắc ký đồ PAH dung dịch chuẩn (DAD) Chú thích - Để đánh số đỉnh xem hợp chất liệt kê 5.11 Hình - Sắc ký đồ PAH dịch chiết từ đất (DAD) 7.3.2.3 Qui trình sử dụng detector huỳnh quang để phát hiÖn 11 TCVN 6652 : 2000 Detector huúnh quang (FLD) có u điểm độ nhạy tính chọn lọc cao Những u điểm tính đến trờng hợp lựa chọn tự bớc sóng kích thích phát xạ, bớc sóng chuyển đợc sắc ký đồ Nhợc điểm nồng độ cao dãy tuyến tính bị vợt nhanh Các thông số vận hành thay đổi theo phạm vi ứng dụng theo nhà sản xuất Các điều kiện đợc sau đợc coi nh có lợi : Detector : detector huỳnh quang Các bớc sóng: kích thích /phát xạ, 218 nm /332 nm (chun tr−íc phenanthren) 260 nm/420 nm (chun tr−íc benzo[b]fluoranthen) 290 nm/420 nm (chun tr−íc indeno[1,2,3 - cd]pyren) 248 nm/500 nm Sắc ký đồ dung dịch chuẩn đợc thể hình Sắc ký đồ dịch chiết đất đợc thể hình Chú thích - Acenaphthylen xác định đợc detector huỳnh quang Chú thích - Để đánh số đỉnh tham khảo hợp chất liệt kê 5.11 Hình - Sắc ký đồ PAH dung dịch chuẩn (FLD) 12 TCVN 6652 : 2000 Chú thích - Để đánh số đỉnh tham khảo hợp chất liệt kê 5.11 Hình - Sắc ký đồ PAH dịch chiết đất (FLD) 7.4 Xây dựng chức hiệu chuẩn kiểm tra để xác nhận giá trị đo Sắc ký đồ HPLC biểu thông tin định lợng định tính Một chất đợc đặc trng thời gian lu Chỉ định tín hiệu đo (đỉnh) cho chất cụ thể đợc tiến hành cách so sánh với chất đối chiếu Chiều cao ®Ønh hay diƯn tÝch cđa pic tû lƯ víi khèi lợng chất đợc tiêm vào phạm vi khoảng tuyến tính Chú thích - Việc chọn cặp bớc sóng số lần chuyển đổi cần có cân nhắc cho phép phát tối u điều kiện thực hành Trong ví dụ đa ra, số lần chuyển phải hạn chế tốt Đối với cặp lựa chọn xem phụ lục A Để định lợng PAH đơn, cần phải ghi diện tích pic đợc qui định Việc phân tách đỉnh không đầy đủ, không đối xứng lớn đỉnh ( tạo đuôi), đờng chuẩn không phẳng (nhiễu loạn, biến động phức tạp, di chuyển mạnh đờng chuẩn) gây khó khăn cho tập hợp diện tích định sắc ký đồ, phải ý giữ cho thiết lập đờng chuẩn tích phân đợc đắn để đánh giá Các tích phân hệ thống liệu đại bao gồm việc hiệu chỉnh sau hành trình đờng chuẩn 13 TCVN 6652 : 2000 Chiều cao đỉnh đợc xét đến để định lợng, đặc biệt trờng hợp phân tách không hoàn chỉnh chất đơn Qui trình có lợi phân tích đất Trớc bắt đầu nh trình phân tích, hệ thống HPLC phải đợc hiệu chuẩn áp dụng chức hiệu chuÈn theo TCVN 6661 – : 2000 (ISO 8466-1 hc TCVN 6662 –2 : 2000 (ISO 8466-2) b»ng viƯc chuẩn bị đo độ pha loãng từ dung dịch gốc.Đồ thị kết hiệu chuẩn phải đờng tuyến tính Trong thực hành hàng ngày, kiểm tra hiệu chuẩn với nồng độ ®đ Khi sư dơng dơng lÊy mÉu tù ®éng, cần phải kiểm tra sau đến10 lần tiêm, tiêm tay lần ngày đủ Chú thích - Nếu hệ thống HPLC không đợc sử dụng liên tục, phải đợc kiểm tra điều kiện hoạt động trớc bắt đầu hiệu chuẩn phân tích Kinh nghiệm cho thấy rằng, phụ thuộc vào hệ thống đợc áp dụng lần tiêm lần tiêm thứ dung dịch hiệu chuẩn phải đợc loại bỏ, để cho lần tiêm thứ thứ ®−ỵc sư dơng ®Ĩ kiĨm tra hƯ thèng HPLC Chó thích - Trong loạt thao tác với thời gian thao tác dài, sai lệch thêi gian l−u cã thĨ xt hiƯn ThiÕt bÞ hiƯn đại đợc trang bị phần mềm thích hợp bù trừ sai lệch cách tự động nhờ việc sử dụng hỗn hợp hiệu chuẩn mẫu Khi phân tích mẫu, tín hiệu thành phần phải nằm dãy tuyến tính hệ thống phát sử dụng Nếu trờng hợp này, chuẩn bị pha loãng dịch chiết mẫu phân tích lại Tiến hành định lợng cách sử dụng phơng pháp chuẩn ngoại Khi hoàn thành việc thực phơng pháp phân tích, hoá chất, dung môi thiết bị phải đợc kiểm tra mặt PAH, bắt đầu cách chiết ống lót rỗng Các giá trị mẫu trắng không đợc vợt 10 % giới hạn áp dụng thấp Các giá trị mẫu trắng không đợc đa vào tính toán Chú thích - Cố gắng giữ giá trị mẫu trắng nhỏ 10% giới hạn dới Các giá trị mẫu trắng giải nồng độ PAH tồn mẫu thực không đợc chấp nhận Nguồn gốc chúng phải đợc xác định loại bỏ việc kiểm tra bớc qui trình Trong trờng hợp không chắn, nên xác nhận kết nhận đợc Điều nµy cã thĨ thùc hiƯn b»ng viƯc sư dơng b−íc sóng khác để hấp thụ tia tử ngoại; kết hợp khác bớc sóng với kü tht ph¸t hiƯn b»ng detector hnh quang (xem phơ lục A) dựa nguyên tắc khác nhau, ví dụ GC -MS đợc sử dụng cho việc xác nhận Tính toán kết Thừa nhận diện tích pic độ cao đỉnh dự kiến nằm giải đờng tuyến tính đo đợc, kết 14 TCVN 6652 : 2000 định lợng chất đợc nhận dạng nhận đợc cách sử dơng c«ng thøc sau: C1 = A i fi V m đó: Ci nồng độ chất i mẫu, tính mg/kg đất khô; Ai diện tích đỉnh chiều cao đỉnh chất i sắc ký đồ; fi hệ số hiệu chỉnh ( hệ số đáp ứng) chất i, tính àg/ml; V m thể tích dịch chiết, tính ml; khối lợng đất khô, tính g Kết đợc biểu thị mg/kg đất khô nồng độ nhỏ mg/kg, kết phải đợc biểu thị số thập phân, nồng độ cao phải đợc biểu thị đến chữ số có nghĩa Khối lợng đất khô đợc xác định trªn mÉu riªng rÏ theo TCVN 6648 : 2000 (ISO 11465) Các đặc trng tính 9.1 Khái quát Đất thực thể phức tạp bí ẩn Bởi phân bố không đồng PAH chất ô nhiễm khác đất, làm đồng mẫu hoàn toàn khó Thông thờng nên tránh việc làm giảm kích thớc đất học, đặc biệt nghiền nhỏ, mặt nguy ô nhiễm ô nhiễm chéo, mặt khác tổn thất xử lý (qua việc tăng nhiệt độ diện tích bề mặt) Trong số trờng hợp, việc giảm kích thớc tránh khỏi 9.2 Độ lệch chuẩn việc ph¸t hiƯn b»ng tia cùc tÝm ( hƯ diode) Trong tiểu mục sau, liệt kê độ lệch chuẩn độ lặp lại kết loạt phép đo bao gồm toàn qui trình theo điều kiện 7.2 (phơng pháp B) 7.3 Mẫu đợc nghiền trớc phân tích làm đồng nhanh 24 Bảng liệt kê đặc trng tính nồng độ cao hơn, dựa vào phép xác định toàn qui trình Các độ lệch chuẩn nằm từ 4% đến 10% 15 TCVN 6652 : 2000 Bảng - Các giá trị trung bình, (x), độ lệch chuẩn, S, nồng độ mg/kg 30 mg/kg (thử phòng thí nghiệm) Hợp chất X mg/kg Naphthalen S Srel mg/kg % kh«ng cã Fluorene 0,5 0,02 3,7 Phenanthrene 11,2 0,38 3,4 Anthracene 2,4 0,08 3,5 Flouranthene 26,7 0,91 3,4 Pyrene 18,2 0,70 3,8 Benz[a]anthracene 16,2 0,57 3,5 Chrysene 8,9 0,36 4,1 Benzo[b]fluoranthene 10,6 0,45 4,3 Benzo[k]fluoranthene 4,7 0,26 5,6 Benzo[a]pyrene 8,7 0,44 5,1 Dibenz[ah]anthracene 4,1 0,40 9,7 Benzo[ghi]perylene 5,1 0,48 9,5 Indeno[1,2,3-cd]pyrene 4,9 0,28 5,7 9.3 So sánh độ lệch chuẩn phép phát UV huỳnh quang Đặc trng tính sử dụng phơng pháp B cho hai phơng pháp phát mẫu đất "thực" đợc liệt kê bảng Các độ lệch chuẩn hai phơng pháp phát % 20 % (tới 46 % dibenz [ah]anthracene) 16 TCVN 6652 : 2000 Bảng - Các giá trị trung bình độ lệch chuẩn mẫu áp dụng Đo tia cực tím Hợp chất Đo b»ng huúnh quang Xm Srel Xm Srel m/kg % m/kg % 4,1 15 5,3 19 - - 0,8 10 Phenanthrene 9,0 11,4 10 Anthracene 2,2 1,8 11 Fluoranthene 11,4 10 14,4 Pyrene 13,5 13,4 Benz[a]anthracene 8,8 11 6,9 16 Chrysene 4,7 10 6,3 21 Benzo[b]fluoranthene 6,6 6,6 13 Benzo[k]fluoranthene 5,1 3,6 Benzo[a]pyrene 6,7 11 7,0 12 Dibenz[ah]anthracenea 1,1 46 1,7 15 Benzo[ghi]perylene 5,4 10 5,0 14 Indeno[1,2,3-cd]pyrene 4,6 11 3,7 11 Naphthalene Fluorene a Dibenz[ah]anthracene thờng có mặt nồng độ thấp không đợc tách rõ rệt với đỉnh bên cạnh.Do nên sử dụng huỳnh quang để phát nồng độ thấp 9.4 Giới hạn phép phát hiện/ giới hạn dới việc áp dụng Trong điều kiện mẫu, bao gồm chiết 20 g đất, cho dịch chiết đến 50 ml tiêm 10 àl mẫu, xác định đợc nồng độ 0,03 mg/kg chí thấp hợp chất cá biệt việc sử dụng detector UV Trong hoàn cảnh này, đảm bảo cho tất hợp chất giới hạn dới 0,1 mg/kg việc áp dụng Sử dụng phép phát huỳnh quang lựa chọn thích hợp cặp bớc sóng, giới hạn dới 0,01mg/kg cho PAH Chú thích - Vì nồng độ thấp cột, đạt đợc độ nhạy cao h¬n cđa detector hnh quang sau pha lo·ng mÉu để đạt đợc hiệu tách hơn; dùng một thể tích để tiêm nhỏ h¬n 17 TCVN 6652 : 2000 Chó thÝch - Đối với hợp chất benzo[a]pyrene điều quan trọng đạt đợc kết định lợng chí nồng độ đất thấp Một giới hạn dới cho việc áp dụng 0,02 mg/kg đợc thảo luận Tuy nhiên nên áp dụng phép phát hiƯn b»ng hnh quang Chó thÝch - ViƯc ph¸t với độ nhạy cao giới hạn dới phép đo rộng hơn, nhng kết không xác dãy nồng độ thấp, giá trị mẫu trắng đặc biệt tính không đồng ®Êt ®ãng vai trß quan träng 9.5 Sù thu håi Để xác định thu hồi phần đợc tách qua rây, đất cát đất lấy khu vờn đợc vô hiệu hoá với PAH (100 mg/kg ®Õn10 mg/kg cho PAH vµ 30 mg/kg ®Õn mg/kg cho PAH ) đợc phân tích theo qui trình qui định Dầu anthrancene nặng đợc hoà tan axeton cho vào đất, chất dung môi đợc loại bỏ máy quay làm bay nớc điều kiện chân không đất vô hiệu hoá đợc phân tích Dầu anthracene lại thành bình đợc hoà tan toluen sau đợc phân tích, lợng đợc trừ vào lợng chất bị vô hiệu hoá Việc phân tích đợc tiến hành theo phơng pháp B Các mức độ tìm thấy (trừ naphthalene) nh sau: Loại đất Tổng PAH Cát mm ®Õn mm 93,6 % C¸t mm ®Õn 0,1 mm 97,7 % Cát mm đến < 0,1 mm 93,4 % Đất vờn 83,3 % Độ tìm thấy loại đất không chứa chứa chất hữu khoảng 95 %, loại đất chứa nhiều chất hữu độ thu hồi thấp khoảng 10 % 9.6 Các độ lệch chuẩn phơng pháp A Các đặc trng tính phơng pháp A phải đợc thử Trong phép thử liên phòng thí nghiệm, mẫu ®· ®−ỵc thư ChØ cã tỉng cđa 16 hỵp chÊt ®· liƯt kª ë 5.11 (cã thĨ xem ë mơc 3) đợc sử dụng cho việc tính toán Các kết đợc trình bày bảng 18 TCVN 6652 : 2000 Bảng - Các giá trị trung bình, độ lặp lại độ tái lập mẫu sử dụng phơng pháp A Mẫu Giá trị trung bình mg/kg Độ lặp lại % Độ tái lập % 13 18,3 33,7 62 11,9 27,6 090 10,7 37,5 10 Báo cáo kết Báo cáo kết bao gồm thông tin sau: a) theo tiêu chuẩn này; b) nhận biết hoàn chỉnh cđa mÉu; c) c¸c chi tiÕt vỊ lÊy mÉu; d) chi tiết xử lý sơ mẫu; e) tham khảo phơng pháp đợc sử dụng (phơng pháp A hay B) f) kết phép xác định; g) số chi tiết không đợc qui định tiêu chuẩn chi tiết tuỳ ý nh số nhân tố ảnh hởng ®Õn kÕt qu¶ 19 TCVN 6652 : 2000 Phơ lơc A (tham khảo) Độ dài bớc sóng tia cực tím (UV) huỳnh quang dùng để phát Tối u ex/em nm 280/334 Naphthalene 220 Đề nghị ex/em nm 280/340 Acenaphthene 227 280/340 280/324 Acenaphthylene 229 - - Fluorene 261 280/340 268/308 Phenanthrene 251 280/340 292/366 Anthracene 252 305/430 253/402 Fluoranthene 236 305/430 360/460 Pyrene 240 305/430 336/376 Benz[a]anthracene 287 305/430 288/390 Chrysene 267 305/430 268/383 Benzo[b]fluoranthene 256 305/430 300/436 Benzo[k]fluoranthene 307 305/430 308/414 Benzo[a]pyrene 296 305/430 296/408 Benzo[ghi]perylene 299 305/430 300/410 Dibenz[ah]anthracene 297 305/430 297/398 Indeno[1,2,3-cd]pyrene 250 305/500 302/506 Hợp chất 20 Tối đa UV nm TCVN 6652 : 2000 Tài liệu tham khảo (1) G.D Mur (ed).Sự may rủi phònh thí nghiệm hoá học, the Chemical Society London, 2nd, 1977 (2) Lµm viƯc víi chất gây ung th, Viện an toàn lao động y tế Liên bang xuất bản, số 77- 206, 1977 (3) Qui tắc thực hành xử lý chất gây ung th phòng thí nghiệm y học vệ sinh lao động, Tổ chức an toàn y tế, Phòng thí nghiệm vệ sinh an toàn lao ®éng 1979, Her Majestys Stationery office (4) H−íng dÉn làm việc với chất hoá học gây ung th tổ chức MRC Tiểu ban Hội đồng nghiên cứu Y häc, Cell Biology and Disorders Board, th¸ng 10 – 1979 (tạm thời), (thông tin DR J Wilki, quan nghiªn cøu y häc, 20 Park Crescent, London, W1N 4AL) (5) Keith, L.H and Telliard, W.A : m«i tr−êng, khoa học công nghệ _ 21 ... - 20 - Acenaphthylen 208 - 96 - Acenaphthen 83 - 32 - Fluoren Phenanthren 85 - 01 - Anthracen 120 - 12 - 7 Flouranthen 206 - 44 - Pyrene 129 - 00 - Benz[a]anthracen 56 - 55 - 10 Chrysen 218 -. .. - 11 Benzo[b]fluoranthen 205 - 99 - 12 Benzo[k]fluoranthen 207 - 08 - 13 Benzo[a]pyren 50 - 32 - 14 Dibenz[ah]anthracen 53 - 70 - 15 Benzo[gh]perylen 191 - 24 - 16 Indeno[1,2,3-cd]pyren 193 -. .. (ISO1 1464) - Chất lợng đất - Xử lý sơ mẫu để phân tích lý - hoá TCVN 6648 : 2000 (ISO 11465) - Chất lợng đất - Xác định hàm lợng chất khô nớc sở khối lợng - Phơng pháp khối lợng ISO 14507 - Chất