Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8425-2:2010 về Thực phẩm không chứa chất béo - Xác định dư lượng bromua - Phần 2: Xác định bromua vô cơ qui định phương pháp sắc ký khí để xác định các dư lượng bromua vô cơ trong các loại thực phẩm không chứa chất béo.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8425-2:2010 EN 13191-2:2000 THỰC PHẨM KHÔNG CHỨA CHẤT BÉO - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG BROMUA - PHẦN 2: XÁC ĐỊNH BROMUA VÔ CƠ Non-fatty food - Determination of bromide residues - Part 2: Determination of inorganic bromide Lời nói đầu TCVN 8425-2:2010 hồn tồn tương đương với EN 13191-2:2000; TCVN 8425-2:2010 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ TCVN 8425 (EN 13191), Thực phẩm không chứa chất béo - Xác định dư lượng bromua gồm phần sau: - TCVN 8425-1:2010 (EN 13191-1:2000) Phần 1: Xác định bromua tổng số theo bromua vô cơ; - TCVN 8425-2:2010 (EN 13191-2:2000) Phần 2: Xác định bromua vô THỰC PHẨM KHÔNG CHỨA CHẤT BÉO - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG BROMUA - PHẦN 2: XÁC ĐỊNH BROMUA VÔ CƠ Non-fatty food - Determination of bromide residues - Part 2: Determination of inorganic bromide Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp sắc ký khí để xác định dư lượng bromua vô loại thực phẩm khơng chứa chất béo Nói chung, mức dư lượng tối đa biểu thị theo giới hạn ion bromua từ tất nguồn khơng bao gồm brom liên kết cộng hóa trị Phương pháp áp dụng cho ngũ cốc, rau khô, nấm khô, rau tươi Phương pháp đánh giá hiệu lực phép thử liên phòng thử nghiệm bột ngơ, cà rốt thái lát, rau diếp, khoai tây, bột ngũ cốc hạt dẻ [1], [2] Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - u cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Phần mẫu thử hòa vào dung dịch lỏng propylen oxit axit hóa axit sulfuric, bromua vơ chiết đồng thời chuyển thành hỗn hợp 1-bromo-2-propanol 2-bromo-1-propanol [3] (dẫn xuất A) Các dẫn xuất chiết phân đoạn vào etyl axetat xác định sắc ký khí với detector bắt giữ electron [4], [5] Cách khác, etylen oxit khó xử lý độc nên thay propylen oxit Trong trường hợp (dẫn xuất B) bromua vô chuyển thành 2-bromoethanol [4], [5] Thuốc thử 4.1 Yêu cầu chung khía cạnh an tồn Tất thuốc thử vật liệu sử dụng phải loại tinh khiết phân tích, tốt dùng cho phân tích thuốc bảo vệ thực vật nước sử dụng phải loại TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có qui định khác Chú ý để tránh chất dẻo vật liệu cao su làm nhiễm bẩn nước, dung môi, muối vô v.v Chỉ sử dụng vật chứa thủy tinh để bảo quản, vận chuyển nước thuốc thử CẢNH BÁO: Etylen oxit propylen oxit khí có khả gây ung thư phản ứng mạnh Luôn làm việc với khí tủ hút thơng gió tốt Xem bảng thơng tin cảnh báo an tồn nhà sản xuất Để phá hủy dung dịch etylen oxit propylen oxit dư, cho thêm dung dịch natri clorua dư, lắc vài lần để yên hỗn hợp vài 4.2 Propyien oxit, (C3H6O) 99,5 % phần thể tích Được bảo quản nhiệt độ khoảng oC 4.3 Dung dịch propylen oxit Rót 95 ml nước đá lạnh vào bình định mức 100 ml, thực tủ hút thơng gió tốt thêm giọt propylen oxit (4.2) đến vạch trộn kỹ Bảo quản tủ lạnh nhiệt độ khoảng °C Chuẩn bị dung dịch ngày sử dụng 4.4 Etylen oxit (tùy chọn), (C2H4O) 99,5 % phần thể tích, đựng bình có van điều áp Được bảo quản nhiệt độ khoảng -20 °C 4.5 Dung dịch etylen oxit (tùy chọn) Rót 96 ml nước đá lạnh vào bình định mức 100 ml, thực tủ hút thơng gió tốt thêm giọt etylen oxit (4.4) đến vạch từ bình đựng có van điều áp làm lạnh đá lạnh đến bình cạn trộn kỹ Bảo quản nhiệt độ khoảng °C Chuẩn bị dung dịch ngày sử dụng 4.6 Axit sulfuric, c(H2SO4) = mol/l 4.7 Etyl axetat Ngay trước sử dụng, kiểm tra chai đựng mở nắp cách bơm thể tích cho vào máy sắc ký khí sử dụng 6.3 Nếu quan sát thấy pic gây nhiễu tinh etyl axetat chưng cất CẢNH BÁO: Etyl axetat chất dễ cháy, gây kích thích mắt đường hơ hấp 4.8 Amoni sulfat 4.9 Natri sulfat, dạng khan Được nung h 500 °C Làm nguội tủ hút ẩm 4.10 Dung dịch chuẩn 2-bromoethanol etyl axetat, (C2H5BrO) = mg/l 4.11 Kali bromua, nung h 130 °C 4.12 Dung dịch gốc bromua, (Br-) = 50 mg/l Hòa tan 149 mg kali bromua (4.11) 100 ml nước, pha loãng ml dung dịch nước đến 100 ml 4.13 Dung dịch chuẩn bromua Chuẩn bị dung dịch pha lỗng dung dịch gốc bromua (4.12) có chứa g, g, 10 g, 25 g 50 g bromua mililit Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường cụ thể thiết bị, dụng cụ sau: 5.1 Bộ đồng hóa máy trộn tốc độ cao, gắn với bình thủy tinh 5.2 Ống nghiệm, ví dụ: dung tích 20 ml có khớp nối thủy tinh mài 5.3 Bình nón, ví dụ: dung tích 200 ml, có khớp nối thủy tinh mài 5.4 Máy sắc ký khí, trang bị detector bắt giữ electron Cách tiến hành 6.1 Chiết mẫu tạo dẫn xuất 6.1.1 Phương pháp sử dụng propylen oxit (Dẫn xuất A) Đối với ngũ cốc vật liệu khô cân 1,0 g bột mịn (phần mẫu thử) cho vào bình nón (5.3), tạo hồ nhão cách thêm 10 ml nước, 10 ml dung dịch propylen oxit (4.3) ml axit sulfuric (4.6) Đối với loại rau tươi, đồng hóa mẫu máy trộn (5.1), cân 10,0 g mẫu đồng (phần mẫu thử) cho vào bình nón thêm 10 ml dung dịch propylen oxit ml axit sulfuric Trong hai trường hợp, đậy nắp bình để yên h nhiệt độ phòng 6.1.2 Phương pháp dùng etylen oxit (Dẫn xuất B) Đối với ngũ cốc vật liệu khô, cân 1,0 g bột mịn (phần mẫu thử) cho vào bình nón (5.3), tạo hồ nhão cách thêm 10 ml dung dịch etylen oxit (4.5) ml axit sulfuric (4.6) Đối với loại rau tươi, đồng hóa mẫu thử máy trộn (5.1), cân 5,0 g mẫu đồng (phần mẫu thử) cho vào bình nón thêm ml dung dịch etylen oxit ml axit sulfuric Trong hai trường hợp, đậy nắp bình để yên 30 nhiệt độ phòng 6.2 Tách phân đoạn Cho 50 ml etyl axetat (4.7) 4,0 g amoni sulfat (4.8) Đậy nắp bình, lắc mạnh min, sau để yên khoảng 20 min, lắc Gạn khoảng 10 ml pha hữu phía vào ống nghiệm (5.2) Thêm 0,5 g natri sulfat (4.9), đậy nắp ống nghiệm lắc mạnh (dung dịch mẫu thử) 6.3 Sắc ký khí Bơm thể tích dung dịch mẫu thử 6.2 dung dịch khác thu 6.5 để đựng đường hiệu chuẩn (dẫn xuất A) dung dịch chuẩn 2-bromoethanol (4.10) pha lỗng (dẫn xuất B) vào máy sắc ký khí (Vi) Đảm bảo điều kiện sắc ký khí (chiều dài cột, kiểu pha tĩnh, nhiệt độ bơm, nhiệt độ detector, nhiệt độ cột, tốc độ dòng khí v.v ) cho tách triệt để tốt dẫn xuất bromua khỏi pic gây nhiễu có nguồn gốc từ mẫu Các điều kiện sắc ký khí điển hình nêu Phụ lục A CHÚ THÍCH 1: Để có hiệu tách cao, nên sử dụng cột mao quản CHÚ THÍCH 2: 2-chloropropanol (dẫn xuất A) 2-chloroetanol (dẫn xuất B), tương ứng, tạo thành từ ion clorua có mặt tự nhiên mẫu ban đầu Tuy nhiên, pic có thời gian lưu ngắn so với dẫn xuất brom tương ứng không gây nhiễu cho phép xác định 6.4 Phép thử chất gây nhiễu kiểm tra độ thu hồi Chuẩn bị phép thử trắng thực phép kiểm tra độ thu hồi mức thích hợp với mức dư lượng tối đa Các sắc đồ phép thử trắng thuốc thử khơng có pic thời gian lưu bromopropanol (dẫn xuất với propylen oxit) 2-bromoethanol (dẫn xuất với etylen oxit), tương ứng CHÚ THÍCH: Đơi có xuất pic với thời gian dài propylene glycol ethylene glycol, tương ứng không gây nhiễu đến phép xác định 6.5 Dung dịch chuẩn Chuẩn bị dung dịch pha lỗng thích hợp dung dịch gốc bromua (4.12) có chứa g, g, 10 g, 25 g 50 g bromua mililit Thêm ml nước, 10 ml dung dịch propylen oxit (4.3) ml axit sulfuric vào 1,00 ml dung dịch chuẩn bromua (4.13) Để yên h nhiệt độ phòng thực theo qui trình 6.2 6.3 Dựng đường chuẩn từ diện tích pic (hoặc chiều cao pic) thu hai pic bromopropanol cao theo khối lượng bromua bổ sung Đánh giá kết 7.1 Tính dẫn xuất A propylen oxit Từ đường chuẩn, đọc khối lượng bromua có mặt thể tích bơm Tính phần khối lượng, w, bromua miligam kilogam, dùng công thức (1): w X (1) ms Trong đó: X khối lượng bromua đọc từ đường chuẩn, tính microgam ( g); ms khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); Nếu kết cho thấy dư lượng vượt mức dư lượng tối đa, kiểm tra thêm hai phần mẫu thử 7.2 Tính dẫn xuất B etylen oxit Đo chiều cao pic (hoặc diện tích pic) thu từ dung dịch mẫu thử so sánh với chiều cao pic (hoặc diện tích pic) thu từ dung dịch chuẩn 2-bromoethanol (4.10) pha lỗng thích hợp Tính phần khối lượng, w, bromua miligam kilogam mẫu, sử dụng công thức (2): w FA Vend mSt FSt Vi ms 0,639 (2) đó: ms khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g); Vend thể tích etyl axetat sử dụng để tách phân đoạn 6.2 (trong trường hợp này: V end 50), tính mililit (ml); Vi thể tích bơm dung dịch mẫu thử, tính microlit ( l); mSt khối lượng 2-bromoethanol bơm với dung dịch chuẩn, tính nanogam (ng); FA diện tích pic chiều cao pic thu dung dịch mẫu thử bơm; FSt diện tích pic chiều cao pic thu mst dung dịch chuẩn bơm; 0,639 hệ số chuyển đổi 2-bromoethanol thành bromua Nếu kết cho thấy dư lượng vượt mức dư lượng tối đa, kiểm tra thêm hai phần mẫu thử Phép thử khẳng định Hàm lượng bromua khẳng định sử dụng phương pháp tách chiết tạo dẫn xuất (6.1.1 1.2) tương ứng Độ chụm 9.1 Yêu cầu chung Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp theo ISO 5725:1986 [4] nêu Phụ lục B Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu Phụ lục B 9.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ thu vật liệu thử giống hệt người thực hiện, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt giới hạn lặp lại r: Các giá trị tạo dẫn xuất với propylen oxit là: rau diếp: x = 49,2mg/kg r = 7,4mg/kg khoai tây: x = 4,3mg/kg r = 0,83mg/kg bột mì: x = 23,5 mg/kg r = 2,83 mg/kg hạt dẻ: x = 120,0 mg/kg r = 16,1mg/kg Các giá trị tạo dẫn xuất với etylen oxit là: bột ngô: x = 42,0 mg/kg r = 4,5mg/kg cà rốt thái lát: x = 26,1 mg/kg r = 3,1 mg/kg 9.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ thu vật liệu thử giống hệt hai phòng thử nghiệm khác thực hiện, không % trường hợp vượt giới hạn tái lập R Các giá trị tạo dẫn xuất với propylen oxit là: rau diếp: x = 49,2 mg/kg R = 19,5 mg/kg khoai tây: x = 4,3 mg/kg R = 1,79 mg/kg bột mì: x = 23,5 mg/kg R = 7,13 mg/kg hạt dẻ: x = 120,0 mg/kg R = 45,9 mg/kg Các giá trị tạo dẫn xuất với etylen oxit là: bột ngô: x = 42,0 mg/kg R = 7,0 mg/kg cà rốt thái lát: x =26,1 mg/kg R = 9,4 mg/kg 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử: - viện dẫn tiêu chuẩn phương pháp sử dụng; - kết thử nghiệm thu đơn vị tính; - ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu sử dụng (nếu biết); - ngày phòng thử nghiệm nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; - chi tiết đặc biệt quan sát thử nghiệm; - chi tiết thao tác khác với quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (Tham khảo) Các ví dụ điều kiện chạy sắc ký khí A.1 Cột nhồi Các điều kiện sắc ký khí sau chứng minh đạt yêu cầu dẫn xuất B Kích thước cột 1,80 m x mm Chất nhồi cột PPG (UCON LB 550-X)®1) 15 % Carbowax 20-M 10 % Chromosorb W-HP, 150 m đến 190 m (80 mesh đến 100 mesh) Nhiệt độ cột 120 °C Nhiệt độ bơm 130 °C Khí mang nitơ hay argon/metan, tốc độ dòng 60 ml/min Kích thước cột 1,80 m x mm Chất nhồi cột Tenax G/c, 190 m đến 250 m (60 mesh đến 80 mesh) Nhiệt độ cột 165 °C Nhiệt độ bơm 175 °C Khí mang nitơ, tốc độ dòng 65 ml/min Kích thước cột 1,80 m x mm Chất nhồi cột OV-330 10 % Chromosorb W-HP, 150 m đến 190 m (80 mesh đến 100 mesh) Nhiệt độ cột 110 °C Nhiệt độ bơm 150 °C Khí mang nitơ hay argon/ metan, tốc độ dòng 30 ml/min Kích thước cột 1,50 m x mm Chất nhồi cột Carbowax 20-M 10 % Chromosorb HP-W, 120 m đến 150 m (100 mesh đến 120 mesh) Nhiệt độ cột 130 °C Nhiệt độ bơm 200 °C Khí mang nitơ, tốc độ dòng 40 ml/min A.2 Cột mao quản (silica nung chảy) Các điều kiện sắc ký khí sau chứng minh đạt yêu cầu dẫn xuất A Kích thước cột 30 m x 0,53 mm Pha tĩnh cột DB-Wax1), màng có độ dày 1,0 m Nhiệt độ cột lập trình để tăng từ 50 °C đến 150 °C với tốc độ tăng PPG (UCON LB 550-X® Restek Rtx-1701® sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn, không ấn định phải sử dụng chúng LB UCON 550-X ® OB-Wax Restek Rtx-1701 ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thông tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn, không ấn định phải sử dụng chúng 1) LB UCON 550-X ® OB-Wax Restek Rtx-1701 ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn, không ấn định phải sử dụng chúng °C/min tăng từ 150°C đến 220 °C với tốc độ tăng 20oC/min, 15 đẳng nhiệt 220°C Nhiệt độ bơm 250 °C Khí mang khí hydro, tốc độ dòng ml/min Kích thước cột 30 m x 0,53 mm Pha tĩnh cột HP-5, màng có độ dày 2,65 m Nhiệt độ cột lập trình để tăng từ 50 °C đến 150 °C với tốc độ tăng o C/min tăng từ 150°C đến 220 °C với tốc độ tăng 20oC/min, 15 đẳng nhiệt 220 oC Nhiệt độ bơm 250 °C Khí mang heli, tốc độ dòng ml/min Các điều kiện sắc ký khí sau chứng minh đạt yêu cầu dẫn xuất B Kích thước cột 60 m x 0, 53 mm Pha tĩnh cột Restek Rtx-17011) màng có độ dày 3,0 m Nhiệt độ cột lập trình để tăng từ 35 °C đến 255 °C với tốc độ tăng c/min Nhiệt độ bơm 250 oC Khí mang khí hydro, tốc độ dòng ml/min Kích thước cột 30 m x 0.53 mm Pha tĩnh cột Restek Stabilwax, màng có độ dày 1,0 m Nhiệt độ cột lập trình để tăng từ 40 °C đến 225 °C với tốc độ tăng °C/min Nhiệt độ bơm 250 °C Khí mang khí hydro, tốc độ dòng ml/min Phụ lục B (Tham khảo) Dữ liệu độ chụm Các thông số sau thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm phù hợp với ISO 5725:1986 [6] Phép thử Arbeitsgruppe “Pestizide”', Lebensmittelchemische Gesellschaft, Cục "Gesellschaft Deutscher Chemiker”, Frankfurt/Main, Đức thực Bảng B.1 – Dẫn xuất với propylen oxit Mẫu Rau diếp Khoai tây Bột mì Hạt dẻ 1995 1995 1995 1995 Số lượng mẫu 1 1 Số lượng phòng thử nghiệm tham gia 18 18 18 18 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 15 15 18 17 Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ 3 - Số lượng kết chấp nhận 75 75 90 85 Giá trị trung bình x , mg/kg 49,2 4,3 23,5 120,0 Độ lệch chuẩn lặp lại, Sr, mg/kg 2,6 0,29 1,0 5,7 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % 5,3 6,7 4,3 4,8 Giới hạn lặp lại, r, mg/kg 7,4 0,83 2,83 16,1 Độ lệch chuẩn tái lập, sR , mg/kg 6,9 0,63 2,5 16,1 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR % 14,0 14,5 10,7 13,5 Năm thực phép thử liên phòng thử nghiệm Giới hạn tái lập, R, mg/kg 19,5 1,79 7,13 45,9 Giá trị Horrat (RSDR quan sát/RSDR dự đoán) 1,6 1,1 1,1 1,7 Bảng B.2 – Dẫn xuất với etylen oxit Mẫu bột ngô cà rốt thái lát 1980 1980 Số lượng mẫu 1 Số lượng phòng thử nghiệm tham gia 12 12 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 12 12 Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ 0 Số lượng kết chấp nhận 42 42 Giá trị trung bình x , mg/kg 42,0 26,1 Độ lệch chuẩn lặp lại, Sr, mg/kg 1,61 1,11 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % 3,8 4,3 Giới hạn lặp lại, r, mg/kg 4,5 3,1 Độ lệch chuẩn tái lập, sR , mg/kg 2,45 3,33 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR % 5,9 12,8 Giới hạn tái lập, R, mg/kg 7,0 9,4 Giá trị Horrat (RSDR quan sát/RSDR dự đoán) 0,7 1,3 Năm thực phép thử liên phòng thử nghiệm THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Arbeitsgruppe "Pestizide": Mitteilung OberprUfung einer gaschromatographischen Analysenmethode for Bromidriickstande Lebensmittelchem gerichtl Chem 35,49(1981) [2] Gilsbach, W., and Diserens, H.: Ringuntersuchungen zurValidierung einer gaschromatographischen Methode zur Bestimmung von BromidruckstSnden in pflanzlichen Lebensmitteln Lebensmittelchem 50, 123-126(1996) [3] Stijve, T.: Inorganic bromide - a simple method for the confirmation of residue identity, Dtsch Lebensm Rundsch 81,321-322 (1985) [4] Stijve T.: Gas chromatographic determination of inorganic bromide residues - a simplified procedure, Dtsch Lebensm Rundsch 77, 99-101 (1981) [5] Stijve, T., and Thier, H.-P.: Bromine containing fumigants (as total inorganic bromide) In: Deutsche Forschungsgemeinschaft, Manual of Pesticide Residue Analysis, VCH Verlagsgesellschaft Weinheim, 1987, Vol I, 377-381, Method S 18 [6] ISO 5726:1986 ), Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests ISO 5725:1986 hủy ... người sử dụng tiêu chuẩn, không ấn định phải sử dụng chúng LB UCON 550-X ® OB-Wax Restek Rtx-1701 ví dụ sản phẩm thích hợp có bán sẵn Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử dụng tiêu chuẩn, không... 23,5 120,0 Độ lệch chuẩn lặp lại, Sr, mg/kg 2,6 0,29 1,0 5,7 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % 5,3 6,7 4,3 4,8 Giới hạn lặp lại, r, mg/kg 7,4 0,83 2,83 16,1 Độ lệch chuẩn tái lập, sR ,... lại, Sr, mg/kg 1,61 1,11 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % 3,8 4,3 Giới hạn lặp lại, r, mg/kg 4,5 3,1 Độ lệch chuẩn tái lập, sR , mg/kg 2,45 3,33 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR %