Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8425-1:2010 qui định phương pháp sắc ký khí (GC) để xác định các dư lượng bromua (gồm cả một số bromua hữu cơ có mặt) theo bromua vô cơ trong các loại thực phẩm không chứa chất béo. Mời các bạn cùng tham khảo.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8425-1:2010 EN 13191-1:2000 THỰC PHẨM KHÔNG CHỨA CHẤT BÉO - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG BROMUA – PHẦN 1: XÁC ĐỊNH BROMUA TỔNG SỐ THEO BROMUA VÔ CƠ Non-fatty food - Determination of bromide residues - Part 1: Determination of total bromide as inorganic bromide Lời nói đầu TCVN 8425-1:2010 hồn tồn tương đương với EN 13191-1:2000; TCVN 8425-1:2010 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F13 Phương pháp phân tích lấy mẫu biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố Bộ TCVN 8425 (EN 13191), Thực phẩm không chứa chất béo - Xác định dư lượng bromua gồm phần sau: - TCVN 8425-1:2010 (EN 13191-1:2000) Phần 1: Xác định bromua tổng số theo bromua vô cơ; - TCVN 8425-2:2010 (EN 13191-2:2000) Phần 2: Xác định bromua vô THỰC PHẨM KHÔNG CHỨA CHẤT BÉO - XÁC ĐỊNH DƯ LƯỢNG BROMUA – PHẦN 1: XÁC ĐỊNH BROMUA TỔNG SỐ THEO BROMUA VÔ CƠ Non-fatty food - Determination of bromide residues - Part 1: Determination of total bromide as inorganic bromide Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp sắc ký khí (GC) để xác định dư lượng bromua (gồm số bromua hữu có mặt) theo bromua vô loại thực phẩm khơng chứa chất béo Nói chung, mức dư lượng tối đa biểu thị theo giới hạn ion bromua từ tất nguồn không bao gồm brom liên kết cộng hóa trị Phương pháp áp dụng cho củ cải đường, cà rốt, rau xà lách, hạt ngũ cốc, rau diếp, khoai tây, rau chân vịt, dâu tây cà chua Phương pháp đánh giá hiệu lực phép thử liên phòng thử nghiệm rau diếp [1] Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 4851 (ISO 3696), Nước dùng để phân tích phòng thí nghiệm - u cầu kỹ thuật phương pháp thử Nguyên tắc Phần dịch chiết lỏng etanol phần mẫu thử làm bay đến khơ phần cặn tro hóa với có mặt natri hydroxit Phần tro hòa axit sulfuric dung dịch xử lý với oxit etylen ete di-isopropyl Bromua vô chuyển thành 2-bromoethanol, phân tích sắc ký khí có detector bắt giữ electron [2] Thuốc thử 4.1 u cầu chung khía cạnh an tồn Tất thuốc thử vật liệu sử dụng phải loại tinh khiết phân tích, loại dùng cho phân tích thuốc bảo vệ thực vật nước sử dụng phải loại TCVN 4851 (ISO 3696), trừ có qui định khác Chú ý để tránh chất dẻo vật liệu cao su làm nhiễm bẩn nước, dung môi, muối vô v.v Chỉ sử dụng vật chứa thủy tinh để bảo quản vận chuyển nước thuốc thử 4.2 Ethanol, (C2H5OH) = 96 % (phần thể tích) 4.3 Dung dịch natri hydroxit, c(NaOH) = 0,2 mol/l 4.4 Axit sulfuric, c(H2SO4) = 0,6 mol/l 4.5 Axeton 4.6 Ete di-isopropyl, không chứa peroxit Trước sử dụng, kiểm tra lọ mở cách bơm thể tích, ví dụ: l vào máy sắc ký khí sử dụng 6.3 Nếu quan sát thấy pic gây nhiễu phải chưng cất kali hydroxit CẢNH BÁO: Ete di-isopropyl dễ cháy Cần bảo quản dung dịch tránh ánh sáng Khi chai đựng dung dịch bảo quản thời gian dài tiếp xúc với ánh sáng mặt trời hình thành peroxit khơng ổn định gây nổ Luôn làm việc với ete di-isopropyl tủ hút thông gió tốt 4.7 Etylen oxit, (C2H4O) 99,5% phần thể tích, đựng bình có van điều áp Được bảo quản nhiệt độ khoảng -20 °C CẢNH BÁO: Etylen oxit khí có khả gây ung thư phản ứng mạnh Ln làm việc với khí tủ hút thơng gió tốt tốt Xem bảng thơng tin cảnh báo an tồn nhà sản xuất Để phá hủy dung dịch etylen oxit dư, cần cho thêm dung dịch natri clorua dư, lắc vài lần để yên vài 4.8 Dung dịch etylen oxit Rót 96 ml ete di-isopropyl làm lạnh đá lạnh (4.6) vào bình định mức 100 ml, thực tủ hút thơng gió tốt thêm giọt etylen oxit (4.7) đến vạch từ bình đựng có van điều áp, làm lạnh đá lạnh trộn kỹ Bảo quản dung dịch nhiệt độ khoảng °C Chuẩn bị dung dịch ngày sử dụng 4.9 Amoni sulfat 4.10 Natri sulfat, dạng khan Được nung h nhiệt độ 500 °C 4.11 Dung dịch chuẩn 2-Bromoethanol, axeton, (C2H5BrO) = mg/l Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể thiết bị, dụng cụ sau: 5.1 Máy thái mẫu 5.2 Bộ đồng hóa máy trộn tốc độ cao, gắn với bình thủy tinh 5.3 Máy ly tâm, gắn ống thủy tinh dung tích 100 ml có khả tạo gia tốc ly tâm 000 g đáy ống ly tâm 5.4 Chén nung niken, ví dụ: đường kính cm, cao khoảng 5,5 cm 5.5 Nồi cách thủy, có khả trì nhiệt độ 100 °C 5.6 Tủ sấy phòng thử nghiệm, có khả trì nhiệt độ khoảng 80 °C, thơng gió tốt 5.7 Lò nung, có khả trì nhiệt độ 500 °C 5.8 Bình nón, dung tích 250 ml, có khớp nối thủy tinh mài 5.9 Ống nghiệm, dung tích 10 ml 25 ml, có khớp nối thủy tinh mài 5.10 Máy sắc ký khí, trang bị detector bắt giữ electron Cách tiến hành 6.1 Tro hóa Thái mẫu thử máy thái (5.1), tránh khơng làm nước mẫu Chuyển 50 g phần mẫu thử vào cốc trộn máy trộn (5.2) thêm 50 ml nước 50 ml etanol (4.2) Trộn đến ly tâm 000 g Tính tổng thể tích phần phía vào hàm lượng nước mẫu Chuyển lượng phần phía tương ứng với 15 g phần mẫu thử sang chén nung niken (5.4) thêm ml dung dịch natri hydroxit (4.3) Đặt chén nung niken (khơng có nắp) vào nồi cách thủy (5.5) chất lỏng bay Đặt chén nung niken qua đêm tủ sấy thơng gió tốt (5.6) khoảng 80 °C sau để lò nung (5.7) 500 °C 15 CẢNH BÁO: Tủ sấy cần thơng gió tốt, cần, không hỗn hợp dễ cháy etanol không khí hình thành gây nổ Trong q trình tro hóa, phải để khơng khí tiếp xúc với dư lượng bay hơi, khơng việc khống hóa khơng hồn tồn Màu tro phải xám đến màu xám-đen CHÚ THÍCH 1: Đơi khi, ví dụ trường hợp mẫu củ cải đường, lò nung tìm thấy dư lượng bay đốt cháy truyền nhiệt không đủ Việc đốt cháy làm thất thoát bromua đáng kể Trong trường hợp này, nên sử dụng phần mẫu thử nhỏ CHÚ THÍCH 2: Việc giảm phần phía tương ứng khoảng g phần mẫu thử cần thiết mẫu cần phân tích có hàm lượng chất hữu cao, khơng việc tro hóa khơng hoàn toàn 6.2 Tạo dẫn xuất Làm nguội tro thêm ml axit sulfuric (4.4) Trộn kỹ tro với chất lỏng chuyển định lượng vào bình nón (5.8), dùng 20 ml axeton (4.5) để tráng rửa Thêm ml dung dịch etylen oxit (4.8) Đậy nắp bình, lắc để trộn kỹ lượng chứa bên để yên h nhiệt độ phòng Chuyển khoảng 10 ml pha hữu phía vào ống nghiệm 25 ml (5.9) thêm g amoni sulfat (4.9) Đậy nắp ống lắc mạnh Để lắng chuyển khoảng ml phần phía sang ống nghiệm 10 ml Thêm g natri sulfat (4.10), đậy nắp ống, lắc để yên 30 nhiệt độ phòng (dung dịch mẫu thử) 6.3 Sắc ký khí Bơm thể tích (B) dung dịch mẫu thử thu từ 6.2 dung dịch pha loãng dung dịch chuẩn 2-bromoethanol (4.11) vào máy sắc ký khí Đảm bảo điều kiện sắc ký khí (chiều dài cột, kiểu pha tĩnh, bơm tiêm, nhiệt độ detector, nhiệt độ cột, tốc độ dòng khí, v.v ) cho tách 2-bromoethanol triệt để tốt khỏi pic có khả gây nhiễu có nguồn gốc từ mẫu Các điều kiện sắc ký khí điển hình nêu Phụ lục A CHÚ THÍCH 1: Để có hiệu tách cao, nên sử dụng cột mao quản CHÚ THÍCH 2: 2-chloroethanol tạo thành từ ion clorua có mặt tự nhiên mẫu ban đầu Tuy nhiên, pic có thời gian lưu ngắn không gây nhiễu cho phép xác định 6.4 Phép thử chất gây nhiễu kiểm tra độ thu hồi Chuẩn bị phép thử trắng thực phép kiểm tra độ thu hồi mức thích hợp với mức dư lượng tối đa Các sắc đồ phép thử trắng thuốc thử không cho thấy pic thời gian lưu 2bromoethanol CHÚ THÍCH: Đơi có xuất pic với thời gian dài etylen glycol không gây nhiễu đến phép xác định Đánh giá kết Đo chiều cao pic (hoặc diện tích pic) thu từ dung dịch mẫu thử so sánh với chiều cao pic (hoặc diện tích pic) thu dung dịch chuẩn 2-bromoethanol pha lỗng thích hợp (4.11) Căn vào tỷ lệ này, tính khối lượng (A) 2-bromoethanol nanogam, có mặt dung dịch mẫu thử bơm Tính phần khối lượng, w, bromua, miligam kilogam mẫu, sử dụng công thức (1): w A 25 0,639 B 15 (1) Trong đó: A khối lượng 2-bromoethanol thể tích dung dịch mẫu thử bơm, tính nanogam (ng); B thể tích bơm, tính microlit ( l); 0,639 hệ số chuyển đổi 2-bromoethanol bromua; 25 thể tích dung mơi hữu bổ sung 6.2 tính mililit (ml) (trong trường hợp 20 ml axeton ml dung dịch etylen oxit); 15 khối lượng phần mẫu thử dạng lỏng tro hóa chén nung niken, tính gam (g) Nếu kết cho thấy dư lượng thu vượt q mức dư lượng tối đa, kiểm tra hai phần thử nghiệm tiếp Phép thử khẳng định Hàm lượng bromua khẳng định phương pháp nêu TCVN 8425-2:2010 (EN 13191-2:2000) [3] sử dụng propylenoxit làm thuốc thử Độ chụm 9.1 Yêu cầu chung Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm độ chụm phương pháp theo ISO 5725:1986 [4] nêu Phụ lục B Các giá trị thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu Phụ lục B 9.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ thu vật liệu thử giống hệt người thực hiện, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp vượt giới hạn lặp lại r: Các giá trị là: rau diếp từ đất trồng chưa xử lý: x = 13,3 mg/kg r = 3,6 mg/kg rau diếp từ đất trồng xử lý: x = 209 mg/kg r = 35,0 mg/kg 9.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử đơn lẻ thu vật liệu thử giống hệt hai phòng thử nghiệm khác thực hiện, khơng % trường hợp vượt giới hạn tái lập R: rau diếp từ đất trồng chưa xử lý: x = 13,3 mg/kg R = 6,9 mg/kg rau diếp từ đất trồng xử lý: x = 209 mg/kg R = 75,0 mg/kg 10 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - viện dẫn tiêu chuẩn phương pháp sử dụng; - kết thử nghiệm thu đơn vị tính; - ngày lấy mẫu phương pháp lấy mẫu sử dụng (nếu biết); - ngày phòng thử nghiệm nhận mẫu; - ngày thử nghiệm; - chi tiết đặc biệt quan sát thử nghiệm; - chi tiết thao tác khác với quy định tiêu chuẩn điều coi tùy ý cố mà ảnh hưởng đến kết Phụ lục A (Tham khảo) Các ví dụ điều kiện chạy sắc ký khí A.1 Các điều kiện sắc ký khí sau chứng minh đạt yêu cầu A.2 Cột thủy tinh nhồi Kích thước cột 1,80 m x mm Chất nhồi cột PPG (UCON LB 550-X)®1) 15 % Carbowax 20-M 10 % Chromosorb W-HP, 150 m đến 190 m (80 mesh đến 100 mesh) Nhiệt độ cột 120 °C Nhiệt độ bơm 130 °C Khí mang nitơ hay argon/metan, tốc độ dòng 60 ml/min Kích thước cột 1,80 m x mm Chất nhồi cột Tenax G/c, 190 m đến 250 m (60 mesh đến 80 mesh) Nhiệt độ cột 165 °C PPG (UCON LB 550-X® Restek Rt-1701® sản phẩm thích hợp có bán sẵn thị trường Thơng tin đưa tạo thuận tiện cho người sử đụng tiêu chuẩn, không ấn định phải sử dụng chúng 1) Nhiệt độ bơm 175 °C Khí mang nitơ, tốc độ dòng 65 ml/min Kích thước cột 1,80 m x mm Chất nhồi cột OV-330 10 % Chromosorb W-HP, từ 150 m đến 190 m (80 mesh đến 100 mesh) Nhiệt độ cột 110°C Nhiệt độ bơm 150°C Khí mang nitơ hay argon/metan, tốc độ dòng 30 ml/min Kích thước cột 1,50 m x mm Chất nhồi cột Carbowax 20-M 10 % Chromosorb HP-W, từ 120 m đến 150 m (100 mesh đến 120 mesh) Nhiệt độ cột 130 °C Nhiệt độ bơm 200 °C Khí mang nitơ, tốc độ dòng 40 ml/min A.3 Cột mao quản (silica nung chảy) Kích thước cột 60 m x 0,53 mm Pha tĩnh cột Restek Rt-1701 ®1), màng có độ dày 3,0 m Nhiệt độ cột lập trình để tăng từ 35 °C đến 225 °C với tốc độ tăng °C/min Nhiệt độ bơm 250 °C Khí mang khí hydro, tốc độ dòng ml/min Kích thước cột 30 m x 0,53 mm Pha tĩnh cột Restek Stabilwax, màng có độ dày 1,0 m Nhiệt độ cột lập trình để tăng từ 40 °C đến 225 °C với tốc độ tăng °C/min Nhiệt độ bơm 250 °C Khí mang hydro, tốc độ dòng ml/min Phụ lục B (Tham khảo) Dữ liệu độ chụm Các thông số sau thu từ phép thử liên phòng thử nghiệm phù hợp với ISO 5725:1986 [4] Phép thử nhóm cơng tác “Xây dựng cải tiến phương pháp phân tích dư lượng” Hà Lan thực Bảng B.1 - Dữ liệu độ chụm Mẫu Rau diếp (từ đất chưa xử lý) Rau diếp (từ đất xử lý) 1975 1975 Số lượng mẫu 8 Số lượng phòng thử nghiệm tham gia 8 Số lượng phòng thử nghiệm lại sau trừ ngoại lệ 0 Số lượng phòng thử nghiệm ngoại lệ 1 Số lượng kết chấp nhận 64 64 13,3 209 Năm thực phép thử liên phòng thử nghiệm Giá trị trung bình, x , mg/kg Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, mg/kg 1,28 12,5 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % 9,6 6,0 Giới hạn lặp lại, r, mg/kg 3,6 35,0 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, mg/kg 2,46 26,8 Độ lệch chuẩn tương đối tái lập, RSDR, % 18,4 12,8 Giới hạn tái lập, R, mg/kg 6,9 75,0 Giá trị Horrat (RSDR quan sát/RSDR dự đoán) 1,7 1,8 THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Greve, P.A., and Grevenstuk, W.B.F: Gas-liquid chromatographic determination of bromide ion in lettuce: Interlaboratory Studies J Assoc Off Anal Chem 62,1155-1159 (1979) [2] Greve, P.A., and Grevenstuk, W.B.F: Optimisation studies on the determination of bromide residues in lettuce Meded Fac Landbouww Rijksuniv Gent 41,1371-1381 (1976) [3] TCVN 8425-2:2010 (EN 13191-2:2000), Thực phẩm không chứa chất béo - Xác định dư lượng bromua - Phần 2: Xác định bromua vô [4] ISO 5726:1986*, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory tests * ISO 5725:1986 hủy ... mg/kg Độ lệch chuẩn lặp lại, sr, mg/kg 1,28 12,5 Độ lệch chuẩn tương đối lặp lại RSDr, % 9,6 6,0 Giới hạn lặp lại, r, mg/kg 3,6 35,0 Độ lệch chuẩn tái lập, sR, mg/kg 2,46 26,8 Độ lệch chuẩn tương... mặt tự nhiên mẫu ban đầu Tuy nhiên, pic có thời gian lưu ngắn không gây nhiễu cho phép xác định 6.4 Phép thử chất gây nhiễu kiểm tra độ thu hồi Chuẩn bị phép thử trắng thực phép kiểm tra độ thu... tối đa Các sắc đồ phép thử trắng thuốc thử không cho thấy pic thời gian lưu 2bromoethanol CHÚ THÍCH: Đơi có xuất pic với thời gian dài etylen glycol không gây nhiễu đến phép xác định Đánh giá