Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 6687:2013 - ISO 8381:2008 trình bày nội dung về thực phẩm từ sữa dành cho trẻ sơ sinh - xác định hàm lượng chất béo - phương pháp khối lượng (phương pháp chuẩn). Mời các bạn cùng tham khảo để nắm bắt nội dung cụ thể.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6687:2013 ISO 8381:2008 THỰC PHẨM TỪ SỮA DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG (PHƯƠNG PHÁP CHUẨN) Milk-based infant foods - Determination of fat content - Gravimetric method (Reference method) Lời nói đầu TCVN 6687:2013 thay 6687:2007; TCVN 6687:2013 hoàn toàn tương đương với ISO 8381:2008; TCVN 6687:2013 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố THỰC PHẨM TỪ SỮA DÀNH CHO TRẺ SƠ SINH - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT BÉO PHƯƠNG PHÁP KHỐI LƯỢNG (PHƯƠNG PHÁP CHUẨN) Milk-based infant foods - Determination of fat content - Gravimetric method (Reference method) CẢNH BÁO - Khi áp dụng tiêu chuẩn liên quan liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn đề an toàn liên quan đến sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an toàn thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp chuẩn để xác định hàm lượng chất béo thực phẩm từ sữa dành cho trẻ sơ sinh Phương pháp áp dụng cho thực phẩm từ sữa dành cho trẻ sơ sinh dạng lỏng, dạng cô đặc dạng bột, không chứa không chứa nhiều % khối lượng (tính theo chất khơ) chất bổ sung tinh bột, dextrin, rau, thịt CHÚ THÍCH 1: Các malto-dextrin khơng chứa dextrin có phân tử lượng cao thường có mặt thực phẩm dành cho trẻ sơ sinh, malto-dextrin có mặt với lượng lớn khơng cản trở việc chiết quy trình Rose-Gottlieb (RG) Phương pháp không áp dụng cho sản phẩm khơng hòa tan hồn tồn amoniac có mặt vài phần trăm tinh bột dextrin, sản phẩm dạng miếng Tiêu chuẩn không áp dụng cho sản phẩm có chứa lượng đáng kể axit béo tự Các kết xác định thu loại sản phẩm thấp CHÚ THÍCH 2: Đối với loại sản phẩm thế, nên sử dụng phương pháp theo nguyên tắc Weibull-Berntrop (WB) [xem TCVN 6688-1 (ISO 8262-1)] [3] Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 7150 (ISO 835), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Pipet chia độ TCVN 7153 (ISO 1042), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Bình định mức TCVN 8488 (ISO 4788), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Ống đong chia độ ISO 3889, Milk and milk products - Determination of fat content - Mojonnier-type fat extraction flasks (Sữa sản phẩm sữa - Xác định hàm lượng chất béo - Bình chiết chất béo kiểu Mojonnier) Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: 3.1 Hàm lượng chất béo sữa (fat content of milk) Phần khối lượng chất xác định quy trình quy định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH: Hàm lượng chất béo biểu thị phần trăm khối lượng Nguyên tắc Chiết dung dịch etanol amoniac phần mẫu thử dietyl ete dầu nhẹ Sau chưng cất làm bay để loại bỏ dung môi Xác định khối lượng chất chiết CHÚ THÍCH: Điều thường gọi nguyên tắc Rose - Gottlieb Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước cất nước loại khống nước có chất lượng tương đương, trừ có quy định khác Tất thuốc thử sử dụng không để lại lượng cặn đáng kể xác định phương pháp quy định (xem 9.2.2) 5.1 Dung dịch amoniac, chứa NH3 khoảng 25 % phần khối lượng (ρ20 = 910 g/l) CHÚ THÍCH: Nếu khơng có sẵn dung dịch amoniac nồng độ sử dụng dung dịch có nồng độ cao biết (xem 9.4.2) 5.2 Etanol (C2H5OH), etanol bị metanol làm biến tính, có độ tinh khiết tối thiểu 94 % thể tích (xem A.5) 5.3 Dung dịch đỏ Congo Hòa tan g đỏ Congo (C32H22N6Na2O6S2) vào nước đựng bình định mức vạch 100 ml (6.14) Thêm nước đến vạch CHÚ THÍCH: Dung dịch cho phép phân biệt rõ lớp phân cách dung môi lớp chất lỏng việc sử dụng dung dịch tùy chọn (xem 9.4.4) Có thể sử dụng dung dịch thị dạng lỏng khác với điều kiện không ảnh hưởng đến kết xác định 5.4 Dietyl ete (C2H5OC2H5), không chứa peroxit (xem A.3), chứa không mg/kg chất chống oxi hóa phù hợp với yêu cầu phép thử trắng (xem 9.2.2, A.1 A.4) CẢNH BÁO - Việc sử dụng dietyl ete dẫn đến độc hại Cần tuân thủ cảnh báo an toàn xử lý, sử dụng loại bỏ chúng 5.5 Dầu nhẹ, có dải nhiệt độ sôi khoảng từ 30oC đến 60oC, tương đương pentan (CH3[CH2]3CH3) có điểm sơi 36 oC phù hợp với yêu cầu phép thử trắng (xem 9.2.2, A.1 A.4) Nên sử dụng pentan pentan có độ tinh khiết cao có chất lượng ổn định 5.6 Dung mơi hỗn hợp Ngay trước sử dụng, trộn thể tích dietyl ete (5.4) dầu nhẹ (5.5) Thiết bị, dụng cụ CẢNH BÁO - Vì việc xác định cần phải sử dụng dung môi bay dễ cháy, nên thiết bị điện dùng phải tuân theo quy định an toàn sử dụng dung môi Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 6.1 Cân phân tích, cân xác đến mg, đọc đến 0,1 mg 6.2 Máy li tâm, giữ bình có ống chiết chất béo (6.6) quay với tốc độ từ 500 r/min đến 600 r/min để tạo gia tốc hướng tâm từ 80 g đến 90 g miệng bình ống Việc sử dụng máy li tâm tùy chọn, khuyến cáo sử dụng loại thiết bị (xem 9.4.7) 6.3 Thiết bị chưng cất làm bay hơi, để chưng cất dung mơi etanol khỏi bình đun sơi bình nón, làm bay từ cốc có mỏ đĩa (xem 9.4.14) nhiệt độ khơng q 100oC 6.4 Tủ sấy, đốt nóng điện, có cửa thơng gió mở hồn tồn, trì nhiệt độ 102oC ± 2oC tồn khoang sấy Tủ có gắn nhiệt kế thích hợp 6.5 Nồi cách thủy, trì nhiệt độ từ 30 oC đến 40oC, từ 40oC đến 60oC từ 60oC đến 70oC 6.6 Bình chiết chất béo kiểu Mojonnier, quy định ISO 3889 CHÚ THÍCH: Cũng dùng ống chiết chất béo, gắn với xi phông nối với chai rửa, quy trình có khác Quy trình thay nêu Phụ lục B Các bình chiết chất béo phải, đậy nút bần chất lượng tốt, đậy nắp làm vật liệu khác [ví dụ cao su silicon polytetrafluoroetylen (PTFE)] không bị ảnh hưởng thuốc thử sử dụng Nút bần phải chiết dietyl ete (5.4), ngâm 15 nước nhiệt độ lớn 60 oC sau làm nguội nước cho bão hòa nước sử dụng 6.7 Giá đỡ, để giữ bình (hoặc ống) chiết chất béo (6.6) 6.8 Chai rửa, thích hợp để dùng với dung môi hỗn hợp (5.6) Không dùng chai rửa chất dẻo 6.9 Bình thu nhận chất béo, ví dụ bình đun sơi (đáy phẳng), dung tích từ 125 ml đến 250 ml, bình nón dung tích 250 ml đĩa kim loại Nếu sử dụng đĩa kim loại tốt đĩa thép khơng gỉ, đáy phẳng, đường kính từ 80 mm đến 100 mm cao khoảng 50 mm 6.10 Chất trợ sôi, không chứa chất béo, sứ không xốp silic cacbua (tùy chọn trường hợp dùng đĩa kim loại) 6.11 ỐNg đong, dung tích ml 25 ml, phù hợp với yêu cầu loại A nêu TCVN 8488 (ISO 4788) dụng cụ khác thích hợp với sản phẩm liên quan 6.12 Pipet, chia độ, dung tích 10 ml, phù hợp với yêu cầu loại A nêu TCVN 7150 (ISO 835) 6.13 Bộ kẹp, kim loại thích hợp để giữ bình, cốc có mỏ đĩa 6.14 Bình định mức, vạch, dung tích 100 ml, phù hợp với yêu cầu loại A nêu TCVN 7153 (ISO 1042) Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện không bị hư hỏng thay đổi suốt trình bảo quản vận chuyển Việc lấy mẫu khơng quy định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) [1] Bảo quản tất mẫu phòng thử nghiệm dạng lỏng, dạng sánh nhão nhiệt độ từ oC đến 6oC từ thời điểm lấy mẫu tiến hành thử nghiệm Trong trường hợp mẫu đựng chai hộp gắn kín giữ mẫu chai hộp nguyên không mở bảo quản nhiệt độ 20oC tiến hành thử nghiệm Chuẩn bị mẫu thử 8.1 Sản phẩm dạng lỏng Lắc đảo chiều hộp chứa mẫu Mở nắp hộp, rót từ từ sản phẩm sang hộp chứa mẫu thứ hai có nắp đậy kín khí Trộn mẫu cách chuyển lại, cẩn thận tránh để chất béo thành phần khác mẫu sót lại thành đáy hộp thứ Cuối cùng, chuyển hết mẫu thử sang hộp chứa mẫu thứ hai Đậy nắp hộp Nếu cần, bảo ơn hộp chứa mẫu đậy kín vào nồi cách thủy (6.5) nhiệt độ từ 40 oC đến 60oC Cứ 15 lại lấy hộp chứa lắc mạnh Sau h, lấy hộp ra, dùng khăn để lau khơ mặt ngồi để nguội đến nhiệt độ phòng Mở hẳn nắp trộn kỹ lượng chứa thìa dao trộn (Nếu chất béo tách lớp khơng thử mẫu) Chuyển hết mẫu thử sang hộp chứa mẫu thứ hai có nắp đậy kín khí Đậy nắp hộp 8.2 Sản phẩm dạng sánh nhão Mở nắp hộp chứa mẫu trộn kỹ lượng chứa bên thìa dao trộn Nếu có thể, sử dụng máy quay để trộn từ lên cho lớp với phần góc hộp trộn với Cẩn thận, tránh để chất béo thành phần khác mẫu sót lại thành đáy hộp chứa Chuyển hết mẫu thử sang hộp chứa thứ hai có nắp đậy kín khí Đậy nắp hộp Nếu cần, bảo ôn hộp chứa mẫu đậy kín vào nồi cách thủy (6.5) nhiệt độ từ 30 oC đến 40oC Lấy hộp ra, dùng khăn để lau khơ mặt ngồi mở nắp hộp Vét tất mẫu thử phía hộp Chuyển mẫu thử vào đĩa đủ rộng để trộn kỹ thu mẫu đồng Chuyển hết mẫu thử sang hộp chứa mẫu thứ hai có nắp đậy kín khí Đậy nắp hộp 8.3 Sản phẩm dạng bột Trộn kỹ cách quay đảo chiều hộp đựng mẫu Nếu cần, chuyển toàn mẫu thử sang hộp chứa mẫu kín khí thích hợp, có dung tích đủ rộng để thực thao tác Các tiến hành CHÚ THÍCH 1: Nếu cần phải kiểm tra thỏa mãn giới hạn lặp lại (11.2) thực hai phép xác định đơn lẻ theo 9.1 đến 9.4 CHÚ THÍCH 2: Quy trình khác có sử dụng ống chiết chất béo có xi phơng nối với chai rửa (xem thích 6.6) nêu Phụ lục B 9.1 Phần mẫu thử Nếu mẫu thử (Điều 8) có dạng sánh, nhão khơ trộn cách khuấy mẫu thử dạng lỏng trộn cách đảo chiều hộp đựng mẫu nhẹ nhàng ba lần bốn lần Cân từ 1,500 g đến 10,000 g mẫu thử tương ứng với 1,0 g đến 1,5 g chất khơ, xác đến mg, cho vào bình chiết chất béo (6.6) Phần mẫu thử phải chuyển hết sang bầu thấp (bầu nhỏ) bình chiết chất béo 9.2 Phép thử trắng 9.2.1 Phép thử trắng phương pháp Tiến hành phép thử trắng đồng thời với phép xác định, sử dụng quy trình loại thuốc thử, thay phần mẫu thử pha loãng 9.4.1 10 ml nước (xem A.2) Khi sử dụng mẫu thử trắng cho dãy mẫu thử mà mẫu riêng lẻ khơng có điều kiện phải đảm bảo quy trình để thu giá trị mẫu trắng dùng phần tính kết phải xác với quy trình mẫu thử riêng lẻ Nếu giá trị thu phép thử trắng vượt 1,0 mg kiểm tra thuốc thử, trước chưa thực (9.2.2) Các hiệu chỉnh lớn 2,5 mg cần nêu báo cáo thử nghiệm 9.2.2 Phép thử trắng thuốc thử Để kiểm tra chất lượng thuốc thử, tiến hành phép thử trắng quy định 9.2.1 Sử dụng thêm bình thu nhận chất béo rỗng, chuẩn bị theo 9.3 với mục đích kiểm sốt khối lượng Các thuốc thử phải không để lại lượng cặn lớn 1,0 mg (xem A.1) Nếu lượng cặn thu phép thử trắng thuốc thử hoàn chỉnh lớn 1,0 mg xác định lượng cặn dung mơi riêng rẽ cách chưng cất 100 ml dietyl ete (5.4) dầu nhẹ (5.5) Sử dụng bình thu nhận chất béo rỗng, chuẩn bị với mục đích kiểm sốt khối lượng mơ tả trên, để thu khối lượng thực cặn mà không vượt 1,0 mg Rất dung môi chứa chất bay mà bị giữ lại nhiều chất béo Nếu có dấu hiệu cho thấy có mặt chất tiến hành phép thử trắng tất thuốc thử dung môi, sử dụng bình thu nhận chất béo với khoảng g butterfat khan Nếu cần, chưng cất lại dung môi với g butterfat khan 100 ml dung môi Chỉ sử dụng dung môi sau chưng cất lại Thay thuốc thử dung môi không đạt yêu cầu, chưng cất lại dung mơi 9.3 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Sấy khơ bình thu nhận chất béo (6.9) vài hạt trợ sôi (6.10) tủ sấy (6.4) nhiệt độ 102oC vòng h CHÚ THÍCH 1: Chất trợ sôi để giúp cho sôi nhẹ suốt trình loại bỏ dung mơi, đặc biệt trường hợp bình thu nhận chất béo thủy tinh; trường hợp đĩa kim loại tùy chọn Bảo vệ bình thu nhận chất béo tránh bụi để bình nguội đến nhiệt độ phòng cân (bình thu nhận chất béo thủy tinh để 1h, đĩa kim loại 30 min) Để tránh chưa đủ nguội thời gian làm nguội bị kéo dài, không nên đặt bình thu nhận chất béo tù hút ẩm Dùng kẹp (6.13) đặt bình thu nhận chất béo lên bàn cân Cân bình xác đến 1,0 mg CHÚ THÍCH 2: Để tránh làm thay đổi nhiệt độ, dùng kẹp đặt bình lên bàn cân 9.4 Xác định 9.4.1 Tiến hành xác định Nếu cần, cho nước làm ấm trước nhiệt độ 65 oC ± 5oC vào phần mẫu thử đựng bình chiết chất béo (9.1) để có tổng thể tích từ 10 ml đến 11 ml Dùng nước để tráng phần mẫu thử đáy bình Lắc nhẹ với nước ấm nồi cách thủy (6.5), nhiệt độ từ 40 oC đến 60oC phần mẫu thử tan hết 9.4.2 Cho ml dung dịch amoniac (5.1) thể tích tương đương dung dịch amoniac đậm đặc (xem thích 5.1) vào phần mẫu thử đồng bình chiết chất béo (9.4.1) Trộn kỹ với phần mẫu thử bầu nhỏ bình chiết chất béo 9.4.3 Làm nóng bình chiết chất béo nhiệt độ 65oC ± 5oC nồi cách thủy (6.5) từ 15 đến 20 min, lắc bình (đối với sản phẩm dạng lỏng tùy chọn) Làm nguội bình dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng 9.4.4 Thêm 10 ml etanol (5.2) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng, cách cho lượng chứa bình thu nhận chất béo chạy qua chạy lại bầu lớn bầu nhỏ Tránh để chất lỏng chạm đến sát cổ bình Nếu cần, thêm giọt dung dịch đỏ Congo (5.3) Làm nguội bình dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng 9.4.5 Thêm 25 ml diety ete (5.4) Đậy bình chiết nút bần bão hòa nước đậy nút làm chất liệu khác (xem 6.6) làm ướt nước Lắc mạnh bình khơng lắc q mức để tránh tạo nhũ Trong lắc, giữ bình chiết chất béo tư nằm ngang, bầu nhỏ hướng lên trên, cho chất lỏng bầu lớn chảy sang bầu nhỏ cách định kỳ Nếu cần, làm mát bình dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng Mở nút cách cẩn thận, tráng nút cổ bình dung mơi hỗn hợp (5.6) Sử dụng chai rửa (6.8) cho nước tráng chảy vào bình chiết 9.4.6 Thêm 25 ml dầu nhẹ (5.5) Đậy nắp bình chiết chất béo nút bần nút khác làm ướt lại nước (ngâm nước) Trộn nhẹ nhàng lần khoảng 30 s theo 9.4.4 TIến hành lắc bình theo 9.4.5 9.4.7 Li tâm bình chiết chất béo đậy nút từ đến gia tốc 80g đến 90g Nếu sẵn máy li tâm (6.2) đặt bình đậy kín cố định giá đỡ (6.7) 30 thấy rõ lớp bề mặt phân biệt rõ với lớp chất lỏng Nếu cần, làm mát bình dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng 9.4.8 Cẩn thận tháo bỏ nút, tráng nút tráng phía cổ bình chiết chất béo dung mơi hỗn hợp (5.6) Sử dụng chai rửa (6.8) cho nước rửa chảy vào bình chiết Nếu mặt lớp phân cách thấp chỗ thắt cổ bình nâng lớp phân cách lên cao cách thêm nước nhẹ nhàng dọc theo thành bình (xem Hình 1) để gạn dung mơi dễ dàng CHÚ THÍCH: Hình Hình ví dụ ba loại bình chiết chất béo quy định ISO 3889 chọn, điều khơng có nghĩa ưu tiên loại khác 9.4.9 Giữ bình chiết chất béo bầu nhỏ, cẩn thận gạn nhiều tốt lớp phía bề mặt vào bình thu nhận chất béo chuẩn bị (xem 9.3) có chứa chất trợ sơi (6.10) trường hợp bình đun sơi bình nón (còn đĩa kim loại tùy ý) Khi gạn tránh để chất lỏng vào bình (xem Hình 2) 9.4.10 Tráng phía ngồi cổ bình chiết chất béo dung mơi hỗn hợp (5.6) Thu lấy nước tráng vào bình thu nhận chất béo Cẩn thận khơng để dung mơi hỗn hợp tràn thành ngồi bình chiết chất béo Nếu cần, loại bỏ dung mơi phần dung mơi khỏi bình thu nhận chất béo cách chưng cất làm bay quy định 9.4.14 9.4.11 Thêm ml etanol (5.2) vào lượng chất chứa bình chiết chất béo Dùng etanol để tráng thành cổ bình trộn quy định 9.4.4 9.4.12 Thực chiết lần hai cách lặp lại thao tác 9.4.5 đến hết 9.4.9 Thay cho 25 ml dùng 15 ml dietyl ete (5.4) 15 ml dầu nhẹ (5.5) Sử dụng dietyl ete để tráng thành cổ bình chiết chất béo Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách đến cổ bình cách nhẹ nhàng cho thêm nước theo thành bình (xem Hình 1) để gạn hết dung mơi nhiều tốt (xem Hình 2) CHÚ DẪN Lớp phân cách Dung môi Lớp chất lỏng Lớp phân cách a Tại lần chiết thứ hai thứ ba Lớp chất lỏng b Tại lần chiết thứ a Tại lần chiết thứ hai thứ ba b Tại lần chiết thứ Hình - Trước gạn Hình - Sau gạn 9.4.13 Thực chiết lần ba mà không cho thêm etanol, cách lặp lại thao tác 9.4.5 đến hết 9.4.9 Chỉ dụng 15 ml dietyl ete (5.4) 15 ml dầu nhẹ (5.5) Sử dụng dietyl ete để tráng thành cổ bình chiết chất béo Nếu cần, nâng cao mặt lớp phân cách đến cổ bình cách nhẹ nhàng cho thêm nước theo thành bình (xem Hình 1) để gạn hết dung mơi nhiều tốt (xem Hình 2) CHÚ THÍCH: Việc chiết lần ba bỏ qua mẫu có hàm lượng chất béo nhỏ 5% khối lượng (chất khô) 9.4.14 Loại bỏ dung môi (kể etanol) hết tốt khỏi bình thu nhận chất béo cách chưng cất sử dụng bình đun sơi bình nón, cách cho bay sử dụng cốc cỏ mỏ đĩa (xem 6.3) Tráng thành cổ bình nón dung mơi hỗn hợp (5.6) trước bắt đầu chưng cất 9.4.15 Dun nóng bình thu nhận chất béo tủ sấy (6.4) trì nhiệt độ 102 oC 1h, với bình đun sơi bình nón đặt nghiêng để dung mơi Lấy bình thu nhận chất béo khỏi tủ kiểm tra xem chất béo hay chưa Nếu chất béo không trong, chứng tỏ chất béo có tạp chất phải lặp lại tồn quy trình Nếu chất béo trong, bảo vệ bình thu nhận chất béo khỏi bụi để nguội bình (tốt khơng để bình hút ẩm) đến nhiệt độ phòng cân (đối với bình thu nhận chất béo thủy tinh tối thiểu 1h, đĩa kim loại tối thiểu 30 min) Khơng lau bình thu nhận chất béo trước lúc cân Dùng kẹp (6.13) đặt bình thu nhận chất béo lên cân Cân bình thu nhận chất béo xác đến 1,0 mg 9.4.16 Tiếp tục đun nóng tiếp bình thu nhận chất béo 30 tủ sấy (6.4) trì nhiệt độ 102oC, với bình đun sơi bình nón đặt nghiêng để dung mơi Để nguội cân lại theo 9.4.15 Nếu cần, lặp lại quy trình đun nóng cân chênh lệch khối lượng bình thu nhận chất béo hai lần cân liên tiếp nhỏ 1,0 mg Ghi khối lượng tối thiểu khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết 10 Tính biểu thị kết 10.1 Tính kết Tính hàm lượng chất béo, wf mẫu phần trăm khối lượng, theo công thức (1): wf = (m1 m ) (m m0 m4 ) x100 (1) Trong đó: m0 khối lượng phần mẫu thử (9.1), tính gam (g); m1 khối lượng bình thu nhận chất béo chất chiết, xác định 9.4.16, tính gam (g); m2 khối lượng bình thu nhận chất béo chuẩn bị (9.3), tính gam (g); m3 khối lượng bình thu nhận chất béo sử dụng phép thử trắng (9.2) chất chiết xác định 9.4.16, tính gam (g); m4 khối lượng bình thu nhận chất béo (9.3) sử dụng phép thử trắng (9.2), tính gam (g) 10.2 Biểu thị kết Làm tròn kết đến hai chữ số thập phân 11 Độ chụm 11.1 Phép thử liên phòng thử nghiệm Các chi tiết phép thử liên phòng thử nghiệm theo ISO 5725:1986 1) (xem Tài liệu tham khảo [2]) độ chụm phương pháp nêu Tài liệu tham khảo [4] Các giá trị giới hạn độ lặp lại độ tái lập biểu thị mức xác suất 95 % khơng áp dụng cho dải nồng độ chất khác với giá trị nêu 11.2 Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử độc lập, đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm, người phân tích, sử dụng thiết bị, thực khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn phần khối lượng chất béo sau đây: - 0,05 % sản phẩm dạng lỏng; - 0,1 % sản phẩm có hàm lượng chất béo nhỏ 5% khối lượng; - 0,2 % sản phẩm có hàm lượng chất béo lớn 5% khối lượng 11.3 Độ tái lập Chênh lệch tuyệt đối kết hai phép thử độc lập, đơn lẻ, thu sử dụng phương pháp, vật liệu thử giống hệt nhau, phòng thử nghiệm khác nhau, người phân tích khác thực hiện, sử dụng thiết bị khác nhau, không % trường hợp lớn phần khối lượng chất béo sau đây: - 0,1 % sản phẩm chất lỏng; - 0,2 % sản phẩm có hàm lượng nhỏ % khối lượng; - 0,4 % sản phẩm có hàm lượng chất béo lớn % khối lượng 12 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: 1) ISO 5725:1986, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for a standard test method by inter-laboratory test dùng để thu liệu độ chụm Tiêu chuẩn hủy, thay tiêu chuẩn ISO 5725 (gồm phần) chấp nhận thành TCVN 6910 (ISO 5725) - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; - thao tác chi tiết không quy định tiêu chuẩn này, coi tùy chọn, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết quả; - việc điều chỉnh, giá trị lớn 2,5 mg thu phép thử trắng phương pháp; - kết thử nghiệm thu kiểm tra độ lặp lại nêu kết cuối thu PHỤ LỤC A (Tham khảo) CÁC LƯU Ý VỀ CÁCH TIẾN HÀNH A.1 Phép thử trắng để kiểm tra thuốc thử (xem 9.2.2) Trong phép thử trắng này, bình thu nhận chất béo dùng cho mục đích kiểm sốt khối lượng dùng cho thay đổi điều kiện mơi trường phòng cân ảnh hưởng nhiệt độ bình thu nhận chất béo không làm, ảnh hưởng đến việc xem xét có mặt hay khơng có mặt chất lỏng khơng bay có phần chiết thuốc thử Bình thu nhận chất béo dùng làm bình đối trọng trường hợp cân có hai đĩa cân Mặt khác, chênh lệch khối lượng biểu kiến (m3-m4 cơng thức 10.1) bình thu nhận chất béo dùng cho mục đích kiểm sốt cần xem xét kiểm tra khối lượng bình thu nhận chất béo, điều chỉnh theo thay đổi khối lượng biểu kiến bình thu nhận chất béo dùng cho mục đích kiểm sốt, khối lượng khơng lớn 1,0 mg Rất dung mơi có chứa chất bay bị giữ lại nhiều chất béo Nếu thấy có mặt chất thế, cần tiến hành phép thử trắng tất thuốc thử dung mơi sử dụng bình thu nhận chất béo với khoảng 1g butterfat khan Nếu cần, chưng cất lại dung môi với có mặt g butterfat khan 100 ml dung môi Chỉ dùng dung môi khoảng thời gian ngắn sau chưng cất lại A.2 Tiến hành phép thử trắng đồng thời với phép xác định (xem 9.2.1) Khối lượng biểu kiến chất chiết thu từ phần mẫu thử (m - m2) cần phải hiệu chỉnh giá trị thu phép thử trắng thực đồng thời với phép xác định cho thấy có mặt chất không bay từ thuốc thử có thay đổi điều kiện mơi trường phòng cân vài sai khác nhiệt độ bình thu nhận chất béo phòng cân hai lần cân (9.4.16 9.3) Trong điều kiện thích hợp (giá trị thấp phép thử trắng thuốc thử, nhiệt độ cân phòng cân, thời gian bình thu nhận chất béo đủ nguội), giá trị thường nhỏ 1,0 mg sau bỏ qua phần tính kết trường hợp xác định thông thường Cũng thường gặp giá trị lớn chút lên đến 2,5 mg (dương âm) Sau hiệu chỉnh giá trị kết Khi phải hiệu chỉnh giá trị lớn 2,5 mg phải đề cập Báo cáo thử nghiệm (Điều 12) Nếu giá trị thu phép thử trắng thường xuyên vượt 1,0 mg cần kiểm tra lại thuốc thử trước chưa kiểm tra Thuốc thử có lẫn tạp chất có vết cần phải thay tinh (xem 9.2.2 A.1) A.3 Phép thử peroxit Để thử peroxit, cho ml dung dịch kali iodua 100g/l chuẩn bị vào 10 ml dietyl ete (5.4) đựng ống đong nhỏ thủy tinh có nắp đậy, trước tráng ete Lắc ống đong sau để yên Khơng có màu vàng lớp dietyl ete Có thể sử dụng phương pháp thử thích hợp khác để kiểm tra peroxit Để đảm bảo dietyl ete khơng chứa peroxit, xử lý dietyl ete ba ngày trước sử dụng sau: Cắt kẽm thành dải để chúng chạm đến nửa chai đựng dietyl ete, dùng khoảng 8000 mm2 kẽm cho lít dietyl ete Trước sử dụng, nhúng toàn dải kẽm dung dịch chứa 10 g đồng (II) sulfat ngậm phân tử nước (CuSO4.5H2O) ml axit sulfuric đậm đặc (98% khối lượng) lít Rửa kỹ dải nhẹ nhàng nước, đặt dải mạ đồng ướt vào chai đựng dietyl ete để chúng chai Có thể dùng phương pháp khác với điều kiện không làm ảnh hưởng đến kết xác định A.4 Dietyl ete chứa chất chống oxi hóa Ở số nơi loại diety ete có bán sẵn, chứa khoảng mg chất chống oxi hóa kilogam, đặc biệt dùng để xác định chất béo Hàm lượng khơng dùng cho mục đích đối chứng Cũng có loại dietyl ete bán sẵn có chứa hàm lượng chất chống oxi hóa cao hơn, ví lên đến 7mg/kg Những loại ete nên sử dụng phép xác định thông thường phải tiến hành phép thử trắng đồng thời với phép xác định, để hiệu chỉnh sai số hệ thống lượng dư chất chống oxi hóa gây Đối với mục đích đối chứng, loại dietyl ete ln phải chưng cất trước sử dụng A.5 Etanol Có thể sử dụng etanol biến tính khơng phải metanol với điều kiện chất làm biến tính khơng làm ảnh hưởng đến kết việc xác định PHỤ LỤC B (Tham khảo) QUY TRÌNH THAY THẾ SỬ DỤNG ỐNG CHIẾT CHẤT BÉO CĨ XI PHƠNG HOẶC CĨ NỐI VỚI CHAI RỬA B.1 Yêu cầu chung Nếu sử dụng ống chiết chất béo có xi phơng có nối với chai rửa sử dụng quy trình quy định Phụ lục Các ống phải có nắp nút bần chất lượng tốt quy định bình 6.6 (xem ví dụ Hình B.1) B.2 Cách tiến hành B.2.1 Chuẩn bị mẫu thử Xem Điều B.2.2 Phần mẫu thử Tiến hành theo quy định 9.1 sử dụng ống chiết chất béo (xem thích 6.6 Hình B.1) Cần chuyển hết phần mẫu thử sang đáy ống chiết chất béo B.2.3 Phép thử trắng Xem 9.2 A.2 B.2.4 Chuẩn bị bình thu nhận chất béo Xem 9.3 B.2.5 Xác định B.2.5.1 Tiến hành phép xác định Nếu cần, thêm nước làm ấm trước đến nhiệt độ 65 oC ± 5oC vào phần mẫu thử ống chiết chất béo (B.2.2) để thu tổng thể tích từ 10 ml đến 11 ml Dùng nước để tráng phần mẫu thử đáy ống Lắc nhẹ ống với nước ấm nồi cách thủy (6.5), nhiệt độ từ 40oC đến 60oC phần mẫu thử tan hết B.2.5.2 Cho ml dung dịch amoniac (5.1) thể tích tương ứng dung dịch amoniac đậm đặc (xem thích 5.1) vào phần mẫu thử ống chiết chất béo (B.2.5.1) Trộn kỹ với phần mẫu thử xử lý trước đáy ống chiết chất béo B.2.5.3 Làm nóng ống chiết chất béo nhiệt độ 65oC ± 5oC nồi cách thủy (6.5) từ 15 đến 20 min, lắc ống (đối với sản phẩm dạng lỏng tùy chọn) Làm nguội dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng B.2.5.4 Thêm 10 ml etanol (5.2) Trộn kỹ cách nhẹ nhàng hỗn hợp đáy ống chiết chất béo Tốt thêm giọt dung dịch đỏ Congo (5.3) Kích thước tính milimet a) có gắn ống xi phơng b) có gắn chai rửa CHÚ DẪN Dung tích 105 ml ± ml tháo nút Độ dày thành ống: 1,5 mm ± 0,5 mm Hình B.1 - Các ví dụ ống chiết chất béo B.2.5.5 Cho thêm 25 ml dietyl ete (5.4) Đậy nắp ống chiết chất béo nút bần bão hòa nước nắp làm chất liệu khác làm ướt nước (6.6) Lắc mạnh ống, không mạnh để tránh tạo nhũ cách đảo chiều khoảng Nếu cần, làm mát ống dòng nước chảy Cẩn thận tháo bỏ nút nút bần, tráng nút cổ ống hỗn hợp dung mơi (5.6) Sử dụng chai rửa (6.8) cho nước rửa chảy vào ống B.2.5.6 Cho thêm 25 ml dầu nhẹ (5.5) Đậy ống chiết chất béo nút bần nút khác thấm lại nước (bằng cách ngâm vào nước) Lắc nhẹ ống 30 s B.2.5.5 B.2.5.7 Cho li tâm chiết chất béo đậy nút từ đến gia tốc 80 g đến 90 g Nếu khơng có sẵn máy li tâm (6.2) đặt ống chiết chất béo giá đỡ (6.7) 30 thấy rõ lớp bề mặt phân biệt rõ với lớp chất lỏng Nếu cần, làm mát ống dòng nước chảy đến nhiệt độ phòng B.2.5.8 Cẩn thận tháo bỏ nút nắp, tráng nút cổ ống chiết chất béo hỗn hợp dung mơi (5.6) Sử dụng chai rửa (6.8) cho nước rửa chảy vào ống B.2.5.9 Lắp khớp nối xi phông khớp nối với chai rửa vào ống chiết chất béo Đẩy ống nối bên đến khoảng mm cao mặt phân cách lớp Ống nối phía bên phải song song với trục ống chiết chất béo Cẩn thận chuyển lớp bên khỏi ống chiết chất béo vào bình thu nhận chất béo (xem 9.3) có chứa chất trợ sơi (6.10) trường hợp bình đun sơi bình nón (còn đĩa kim loại tùy chọn) Không để lớp chất lỏng lẫn vào Tráng phía ngồi khớp nối hỗn hợp dung mơi, thu lấy nước tráng vào bình thu nhận chất béo CHÚ THÍCH: Lớp phía chuyển khỏi ống chiết chất béo, ví dụ cách dùng bầu cao su nối với ống ngắn để tạo áp lực B.2.5.10 Tháo khớp nối khỏi cổ ống chiết chất béo Nâng nhẹ ống nối tráng phần phía ống nối hỗn hợp dung mơi (5.6) Hạ thấp, chèn lại ống nối chuyển nước rửa vào bình thu nhận chất béo Tráng rửa đầu khớp nối hỗn hợp dung mơi, cho nước rửa vào bình thu nhận chất béo Tốt loại bỏ dung môi phần dung môi khỏi bình thu nhận cách chưng cất làm bay 9.4.14 B.2.5.11 Tháo khớp nối khỏi cổ ống chiết Nâng nhẹ khớp nối thêm ml etanol vào lượng chứa ống chiết chất béo Dùng etanol để tráng thành khớp nối Trộn B.2.5.4 B.2.5.12 Thực chiết lần hai cách lặp lại thao tác B.2.5.5 đến B.2.5.10 Thay 25 ml cách sử dụng 15 ml dietyl ete (5.4) 15 ml dầu nhẹ (5.5) Dùng dietyl ete để tráng thành khớp nối suốt trình tháo khớp nối khỏi ống sau lần chiết lần trước B.2.5.13 Thực chiết lần ba mà không thêm etanol, cách lặp lại thao tác B.2.5.5 đến B.2.5.10 Chỉ sử dụng 15 ml dietyl ete 15 ml dầu nhẹ Sử dụng dietyl ete để tráng thành khớp nối B.2.5.12 CHÚ THÍCH: Có thể bỏ qua lần chiết thứ ba sản phẩm chứa hàm lượng chất béo với khối lượng nhỏ 5% tính theo chất khơ B.2.5.14 Tiến hành quy định 9.4.14 đến 9.4.16 THƯ MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 6400 (ISO 707), Sữa sản phẩm sữa - Hướng dẫn lấy mẫu [2] ISO 5725:1986, Precision of test methods - Determination of repeatability and reproducibility for standard tests methods by inter - laboratory tests [3] TCVN 6688-1 (ISO 8262-1), Sản phẩm sữa thực phẩm từ sữa - Xác định hàm lượng chất béo phương pháp khối lượng Weibull-Bemtrop (phương pháp chuẩn) - Phần 1: Thực phẩm dành cho trẻ nhỏ [4] International Dairy, Federation, Interlaboratory Collaborative Studies, Second series, Bull Int Dairy Fed, 1988, (235) ... methods by inter - laboratory tests [3] TCVN 668 8-1 (ISO 826 2-1 ), Sản phẩm sữa thực phẩm từ sữa - Xác định hàm lượng chất béo phương pháp khối lượng Weibull-Bemtrop (phương pháp chuẩn) - Phần 1: Thực... chấp nhận thành TCVN 6910 (ISO 5725) - thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; - phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; - phương pháp thử sử dụng viện dẫn tiêu chuẩn này; - thao tác chi.. .TCVN 8488 (ISO 4788), Dụng cụ thí nghiệm thủy tinh - Ống đong chia độ ISO 3889, Milk and milk products - Determination of fat content - Mojonnier-type fat extraction flasks