Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 7807:2013 - ISO 5519-2008. Tiêu chuẩn trình bày về rau, quả và sản phẩm rau quả - xác định hàm lượng axit sorbic. Tiêu chuẩn này quy định phương pháp chiết axit sorbic có trong rau, quả và các sản phẩm rau quả và hai kỹ thuật axit sorbic chiết được.
TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7807:2013 ISO 5519-2008 RAU, QUẢ VÀ SẢN PHẨM RAU QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT SORBIC Fruit, vegetable and derived products - Dertermination of acid sorbic content Lời nói đầu TCVN 7807:2013 thay ISO 7807:2007; TCVN 7807:2013 hoàn toàn tương đương với ISO 5519:2008; TCVN 7807:2013 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F10 Rau sản phẩm rau biên soạn, Tổng cục tiêu chuẩn Đo lượng Chất lượng thẩm định, Bộ khoa học Công nghệ công bố Lời giới thiệu Việc xác định hàm lượng axit sorbic rau, sản phẩm từ rau nghiên cứu nhiều dự án axit sử dụng làm thuốc diệt nấm, đặc biệt rượu vang Vì axit bay mạnh (giống với axit axetic), nên trình chiết đơn giản lơi nước Phương pháp có ưu điểm tạo dung dịch nước axit sorbic gần tinh khiết Trong tiêu chuẩn nêu hai kỹ thuật xác định lượng axit sorbic chứa dung dịch sau: - Kỹ thuật A: đo quang phổ dải UV, thực sau oxy hóa sulfua dioxit, mà gây nhiễu đến phép thử Sự oxy hóa tự xảy vài phút khơng khí, sau thêm lượng vết chất xúc tác đồng Tinh dầu tự nhiên trái giống cam chanh không gây nhiễu đến phép xác định có mặt với lượng nhỏ nước khơng bổ sung tinh dầu Khi nước có lượng tinh dầu đáng kể, loại chúng trước phương pháp áp dụng kỹ thuật B - Kỹ thuật B: kỹ thuật đo màu dựa phản ứng Schmidt's, kỹ thuật cần loại bỏ etanol tinh dầu cách cho bay phần dịch lỏng sản phẩm chưng cất Kỹ thuật không nhanh kỹ thuật A cho kết tương đương, sử dụng kỹ thuật kỹ thuật đo quang phổ dải UV không sử dụng Việc gây nhiễu tinh dầu tỏi, hành tỏi tây loại bỏ kỹ thuật bay phần dịch lỏng sản phẩm chưng cất RAU, QUẢ VÀ SẢN PHẨM RAU QUẢ - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG AXIT SORBIC Fruit, vegetable and derived products - Dertermination of acid sorbic content Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn quy định phương pháp chiết axit sorbic có rau, sản phẩm rau hai kỹ thuật axit sorbic chiết Nguyên tắc Mẫu thử đồng hóa, sau axit sorbic có mẫu thử lơi nước Xác định axit sorbic dịch chưng cất thu được, kỹ thuật đo quang phổ dải cực tím (kỹ thuật A) kỹ thuật đo quang đo quang phổ màu hồng thu sau oxy hóa axit cromic sau xử lý axit thiobabituric (kỹ thuật B) Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử loại tinh khiết phân tích nước cất nước có chất lượng tương đương 3.1 Axit tartaric [COOH (CH OH)2 COOH], dạng tinh thể 3.2 Axit sorbic [CH3(CH:CH)2COOH], dung dịch chuẩn 0,010 g/l, chuẩn bị theo phương pháp sau (3.2.1 3.2.2) 3.2.1 Hòa tan 0,100 g axit sorbic 10 ml đến 12 ml dung dịch natri hydroxit 0,1 N Chuyển định lượng vào bình định mức 1000 ml pha loãng nước đến vạch Cho 100 ml dung dịch thu cho vào bình 000 ml thứ hai pha loãng nước đến vạch 3.2 Hòa tan 0,134 g kali sorbat, CH3(CH:CH)2COOK, (đã kết tinh sấy khô đến khối lượng không đổi 105 oC để bình hút ẩm axit sulfuric đậm đặc) vào nước đựng bình định mức 000 ml pha loãng nước đến vạch Cho 100 ml dung dịch thu vào bình 000 ml thứ hai pha loãng nước đến vạch 3.3 Canxi hydroxit [Ca(OH)2] (nếu cần), dung dịch 0,04 N (1,48 g/l) 3.4 Axit axetic (CH3COOH), dung dịch 0,1 N 3.5 Axit lactic [CH3CH(OH)COOH], dung dịch N 3.6 Đồng, dung dịch xúc tác, dùng cho kỹ thuật A Hòa tan 0,5 g natri hydro cacbonat (NaHCO3) 0,001 g đồng (II) sulfat tinh khiết ngậm năm phân tử nước (CuSO4.5H2O) nước đựng bình định mức 1000 ml Pha loãng nước đến vạch 3.7 Dung dịch axit sulfuric/cromic, dùng cho kỹ thuật B Hòa tan 0,050 g kali dicromat (K2Cr2O7) khoảng 90 ml nước Chuyển định lượng vào bình định mức 200 ml Thêm 100 ml dung dịch axit sulfuric (H2SO4) 0,3 N Pha lỗng nước đến vạch lít dung dịch axit sulfuric 0,3 N chứa 14,7 g axit sulfuric, p20 = 1,84 g/ml 3.8 Dung dịch axit thiobarbituric, dùng cho kỹ thuật B Hòa tan 0,500 g axit thiobarbituric (C4H4N2O2S) 50 ml nước bổ sung 10 ml dung dịch natri hydroxit (NaOH) N Chuyển định lượng vào bình định mức 100 ml thêm 11 ml dung dịch axit clohydric (HCl) N Pha loãng nước đến vạch Dung dịch không ổn định phải sử dụng vòng h sau chuẩn bị Thiết bị, dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thơng thường cụ thể sau: 4.1 Cân phân tích 4.2 Máy đồng hóa cối giã, cần 4.3 Nồi cách thủy đun sôi 4.4 Thiết bị chưng cất nước (xem Hình A.1), bao gồm chi tiết 4.4.1 đến 4.4.5 4.4.1 Bình tạo nước, dung tích 000 ml đến 500 ml 4.4.2 Bình sục khí, gồm có ống hình trụ đường kính 30 mm, cao 270 mm phía có dạng hình cầu đường kính 60 mm Đầu cuối ống cung cấp phải cao đáy thiết bị sục khí 10 mm Phần hình cầu chứa sản phẩm gia nhiệt điện lửa Khi dùng lửa, khí đốt phải lệch qua đĩa kim loại đường kính 150 mm, có lỗ đường kính khoảng 40 mm nơi đáy thiết bị sục khí phình Thiết bị tránh sinh nhiệt chất có từ sản phẩm Việc gia nhiệt bổ sung phải kiểm sốt cho thể tích sản phẩm thiết bị sục khí khơng giảm mà khơng tăng q ml q trình chưng cất 4.4.3 Cột cất phân đoạn, để nước chứa axit dễ bay qua Có thể gồm có: - ống hình trụ đường kính 20 mm, cao 500 mm, có ống xoắn số 100 thép khơng rỉ, ống xoắn có bước cách 15 mm, - cột có đường kính 20 mm, cao 600 mm, có khớp nối bên thủy tinh - số thiết bị khác có hiệu suất cất phân đoạn Việc cất phân đoạn nước cần thiết để thu hydroxymethylfurfural có mặt chất Chất sản phẩm thủy phân hấp thụ xạ tia cực tím bước sóng 256 nm Cột cất phân đoạn giảm chiều cao xuống 20 mm thay Kjeldahl sản phẩm khơng chứa hydroxymethylfurfural 4.4.4 Bình sinh hàn, kiểu West, chiều dài hiệu dụng 400 mm, đặt thẳng đứng để đảm bảo ngưng tụ làm nguội hoàn toàn sản phẩm chưng cất 4.4.5 Bình thu nhận, dung tích 200 ml 500 ml: - sản phẩm dạng lỏng: bình 200 ml có vạch chia 200 ml; - sản phẩm dạng đặc dạng rắn: bình 500 ml 4.4.6 Kiểm tra hiệu thiết bị chưng cất Thiết bị chưng cất phải cho phép chưng cất 300 ml sản phẩm 12 đến 15 phải đáp ứng điều kiện tối thiểu sau: a) điều kiện chưng cất bình thường, 99,5 % khối lượng biết axit axetic thêm vào mẫu phải tìm thấy dung dịch chưng cất, 200 ml Đối với phép thử này, sử dụng 20 ml dung dịch axit axetic 0,1 N (3.4) b) điều kiện chưng cất, không nhiều ‰ khối lượng biết axit lactic thêm vào mẫu phải tìm thấy dịch chưng cất, 200 ml Đối với phép thử này, sử dụng 20 ml dung dịch axit lactic 01 N (3.5) 4.5 Pipet, dung dịch 10 ml, 20 ml 25 ml 4.6 Pipet chia vạch, có dung tích thích hợp 4.7 Đĩa làm bay 4.8 Bình nón, dùng cho kỹ thuật A, dung tích 50 ml 4.9 Máy đo quang phổ, dùng cho kỹ thuật A, cho phép đo bước sóng 256 nm (UV) với cuvet silic oxit có chiều dài đường quang 10 mm 4.10 Bình định mức, dùng cho kỹ thuật B, dung tích 25 ml 4.11 Máy đo quang, lắp lọc màu xanh green máy đo quang phổ cho phép đo bước sóng 532 nm, dùng cho kỹ thuật B Lấy mẫu Điều quan trọng phòng thử nghiệm nhận mẫu phải mẫu đại diện không bị hư hỏng thay đổi suốt trình bảo quản hay vận chuyển Cách tiến hành 6.1 Chuẩn bị mẫu thử 6.1.1 Sản phẩm dạng lỏng (nước quả, sản phẩm dạng lỏng có thịt quả, xiro, v.v ) Trộn kỹ mẫu phòng thử nghiệm 6.1.2 Sản phẩm dạng sệt (mứt quả, mứt nhuyễn, v.v ) Đồng hóa mẫu thử nghiệm sau trộn kỹ mẫu 6.1.3 Sản phẩm dạng rắn (quả, rau) Cắt phần mẫu phòng thử nghiệm thành miếng nhỏ, loại bỏ hạt, phần non, cần đồng hóa cẩn thận khoảng 40 g mẫu 6.1.4 Sản phẩm đông lạnh đông lạnh sâu Sau rã đơng mẫu bình kín, loại bỏ hạt, cuống phần non, cần, trộn nước tan q trình rã đơng với sản phẩm tiến hành theo 6.1.1, 6.1.2 6.1.3 6.2 Phần mẫu thử 6.2.1 Sản phẩm dạng lỏng Dùng pipet (4.5) lấy 10 ml mẫu thử (6.1) cho vào bình sục khí (4.4.2) Cũng lấy phần mẫu thử theo khối lượng cách cân khoảng 10 g mẫu thử, xác đến 0,01 g 6.2.2 Sản phẩm dạng sệt dạng rắn Cân khoảng 10 g mẫu thử (6.1) xác đến 0,01 g cho hết vào bình sục khí (4.4.2), dùng lượng nước tối thiểu cần thiết để lấy hết phần mẫu thử tạo hỗn hợp dịch lỏng hồn tồn CHÚ THÍCH Trong số trường hợp cụ thể, cần để phần mẫu thử ngâm nước h đến h 6.3 Chưng cất 6.3.1 Yêu cầu chung Cho 0,5 g axit tartaric (3.1) vào bình sục khí (4.4.2) có chứa mẫu thử (6.2) Nối bình sục khí với bình tạo nước (4.4.1) với bình sinh hàn (4.4.4) đồng thời gia nhiệt bình tạo nước bình sục khí Sau tiến hành chưng cất, đảm bảo thể tích lượng bình sục khí trì khơng đổi khoảng ml 6.3.2 Trong trường hợp sản phẩm dạng lỏng (6.2.1) Thu lấy dịch chưng cất vào bình thu nhận 200 ml (4.4.5), dừng chưng cất thu dịch cất đến vạch 200 ml 6.3.3 Trong trường hợp sản phẩm dạng sệt dạng rắn (6.2.2) Thu lấy dịch chưng cất lớn gấp 20 lần thể tích lượng chứa bình sục khí vào bình 500 ml (4.4.5) Sử dụng ống đong chia vạch để đo thể tích (V) thu 6.4 Kỹ thuật A: xác định kỹ thuật đo quang phổ dải cực tím (UV) 6.4.1 Phép xác định 6.4.1.1 Nếu sản phẩm ban đầu chứa tinh dầu tỏi, hành tỏi tây, có mặt loại tinh dầu làm hấp thụ đáng kể, đặc biệt trường hợp tinh dầu tỏi Việc làm bay hoàn toàn 1) dịch chưng cất sau kiềm hóa, cho phép loại trừ hấp thụ Do đó, có mặt tinh dầu này, dùng pipet (4.5) lấy 25 ml dịch chưng cất (6.3) chuyển vào đĩa nhỏ làm bay (4.7); sau kiềm hóa 1,5 ml đến 2ml dung dịch canxi hydroxit (3.3), làm bay đến khô nồi cách thủy đun sôi (4.3) hoàn nguyên lại với nước để thể tích ban đầu 6.4.1.2 Khi cần, dùng pipet (4.5) lấy 10 ml (xem CHÚ THÍCH) dịch chưng cất (6.3) dung dịch hồn ngun (6.4.1.1) cho vào bình nón 50 ml (4.8) thêm 10 ml dung dịch xúc tác đồng (3.6) Lắc nhanh để yên khơng khí vài phút 1) Việc làm bay đến khô không phá hủy axit sorbic điều kiện kiềm CHÚ THÍCH Đối với sản phẩm chứa đến 200 mg axit sorbic lít kilogam lấy 10 ml Đối với hàm lượng cao hơn, lấy ml ml pha loãng đến 10 ml nước Đo độ hấp thụ dung dịch sử dụng máy đo quang phổ (4.9) bước sóng 256 nm Từ độ hấp thụ được, trừ độ hấp thụ dung dịch thử trắng (6.4.2) 6.4.2 Phép thử trắng Thực phép thử trắng song song với phép xác định, thay 10 ml dịch chưng cất 10 ml nước 6.4.3 Số phép xác định Thực hai phép xác định mẫu thử (6.1) 6.4.4 Dựng đường chuẩn 6.4.4.1 Dùng pipet chia độ (4.6) lấy tương ứng ml; ml; ml; ml; ml; 10 ml dung dịch axit sorbic chuẩn (3.2) cho vào dãy sáu bình nón 50 ml (4.8); thêm nước đến 10 ml Dung dịch thu chứa tương ứng: mg; mg; mg; mg; mg 10 mg axit sorbic lít 6.4.2 Thêm vào bình 10 ml dung dịch xúc tác đồng (3.6) Đo độ hấp thụ dung dịch sử dụng máy đo quang phổ (4.9) bước sóng 256 nm Từ giá trị thu được, trừ độ hấp thụ dung dịch phép thử trắng (6.4.2) thu độ hấp thụ dung dịch 6.4.4.3 Dựng đường chuẩn, biểu thị độ hấp thụ dung dịch (6.4.4.2) theo nồng độ axit sorbic dung dịch thu 6.4.4.1, biểu thị miligam lít, nghĩa trước thêm dung dịch xúc tác đồng (3.6) 6.5 Kỹ thuật B: xác định đo quang phổ đo quang bước sóng 532 nm 6.5.1 Phép xác định 6.5.1.1 Nếu sản phẩm ban đầu chứa etanol, cần loại etanol khỏi dịch chưng cất phương pháp sau: Dùng pipet (4.5) lấy 25 ml dịch chưng cất (6.3) cho vào đĩa nhỏ làm bay (4.7) kiềm hóa 1,5 ml đến ml dung dịch canxi hydroxit (3.3), đặt đĩa nồi cách thủy đun sôi (4.3) cho bay đến thể tích giảm khoảng nửa, thường khoảng 30 Chuyển định hướng phần lại vào bình định mức 25 ml (4.10) Thêm nước rửa đến vạch lắc 6.5.1.2 Nếu sản phẩm ban đầu chứa tinh dầu (trong trường hợp nước giống cam chanh), loại tinh dầu khỏi dịch chưng cất phương pháp 6.5.1.1 kéo dài thời gian bay lại khoảng ml đến ml 6.5.1.3 Nếu sản phẩm ban đầu chứa tinh dầu tỏi, hành tỏi tây, thực 6.4.1.1 CHÚ THÍCH Trong trường hợp có tinh dầu tỏi, dịch chưng cất bay đến khơ, có độ hấp thụ yếu, tương ứng với 1,5 mg axit sorbic kilogam 6.5.1.4 Khi cần dùng pipet (4.5) lấy 10 ml (xem đoạn tiếp theo) dịch chưng cất dung dịch hoàn nguyên thu sau xử lý (6.5.1.1, 6.5.1.2 6.5.1.3) cho vào bình định mức 25 ml (4.10) Đối với sản phẩm chứa đến 200 mg axit sorbic lít kilogam lấy 10 ml Đối với hàm lượng cao hơn, lấy ml ml pha loãng nước đến 10 ml Thêm ml dung dịch axit sulfuric/cromic (3.7) giữ bình 10 nồi cách thủy đun sôi (4.3) Thêm ml dung dịch axit thiobarbituric (3.8) giữ bình 10 nồi cách thủy đun sôi, giữ thêm 20 xuất màu hồng Làm nguội nước đá thêm nước đến vạch Trong vòng 30 min, đo độ hấp thụ dung dịch sử dụng máy đo quang máy đo quang phổ (4.11) bước sóng 532 nm Từ giá trị thu được, trừ độ hấp thụ dung dịch phép thử trắng (6.5.2) thu độ hấp thụ dung dịch 6.5.2 Phép thử trắng Thực phép thử trắng song song với phép xác định, thay 10 ml dịch chưng cất 10 ml nước 6.5.3 Số phép xác định Thực hai phép xác định mẫu thử (6.1) 6.5.4 Dựng đường chuẩn 6.5.4.1 Chuẩn bị dung dịch axit sorbic chuẩn 2,0 mg/l cách pha lỗng thể tích dung dịch chuẩn (3.2) với thể tích nước 6.5.4.2 Dùng pipet chia vạch (4.6) cho tương ứng: ml; ml; ml; ml; ml 10 ml dung dịch axit sorbic chuẩn pha lỗng (6.5.4.1) vào dãy sáu bình định mức 25 ml (4.10); thêm nước đến có tổng thể tích 10 ml Dung dịch thu chứa tương ứng: mg; 0,4 mg; 0,8 mg; 1,2 mg; 1,6 mg 2,0 mg axit sorbic lít 6.5.4.3 Cho ml dung dịch axit sulfuric/cromic (3.7) vào bình giữ bình 10 nồi cách thủy đun sôi (4.3) Thêm ml dung dịch axit thiobabituric (3.8) giữ bình 10 nồi cách thủy đun sôi, giữ thêm 20 xuất màu hồng Làm nguội nồi cách thủy có đá pha lỗng nước tới vạch Trong vòng 30 min, đo độ hấp thụ dung dịch sử dụng máy đo quang máy đo quang phổ (4.11) bước sóng 532 nm Từ giá trị thu được, trừ độ hấp thụ dung dịch phép thử trắng (6.5.2) thu độ hấp thụ dung dịch Từ giá trị thu được, trừ độ hấp thụ dung dịch phép thử trắng (6.5.2) thu độ hấp thụ dung dịch 6.5.4.4 Dựng đường chuẩn, biểu thị độ hấp thụ dung dịch (6.5.4.3) theo nồng độ tương ứng axit sorbic, biểu thị miligam lít Tính biểu thị kết 2) 7.1 Phần mẫu thử đo thể tích Nồng độ axit sorbic, biểu thị miligam lít sản phẩm, tính cơng thức sau: m1 200 V1 Trong đó: 2) Các sản phẩm rau khác có chứa lượng nhỏ chất dễ bay mà chiết dung môi hữu hấp thụ xạ bước sóng 256 nm cho phản ứng màu sử dụng kỹ thuật B (6.5) Do đó, kết dương tính (ít 10 mg/l 10 mg/kg) cần giải thích cẩn thận so sánh với kết từ sản phẩm không chứa axit sorbic m1 khối lượng axit sorbic lít dung dịch chưng cất (6.5.1), đọc từ đường chuẩn (xem 6.4.4 6.5.4) biểu thị miligam (mg) V1 thể tích 6.4.1.2 6.5.1.4 (thường 10 ml, giảm xuống ml ml) tính mililit (ml) 7.2 Phần mẫu thử tính khối lượng Hàm lượng axit sorbic, biểu thị miligam kilogam sản phẩm, tính cơng thức sau: m1 V 10 m0 V1 Trong đó: m0 khối lượng phần mẫu thử (6.2.2), tính gam (g) m1 khối lượng axit sorbic lít dịch chưng cất (6.3.3), đọc đường chuẩn (xem 6.4.4 6.5.4), tính miligam (mg); V thể tích dịch chưng cất thu (xem 6.3.3), tính mililit (ml); V1 thể tích lấy 6.4.1.2 6.5.1.4 (thường 10 ml, giảm xuống ml ml), tính mililit (ml) Độ lặp lại Chênh lệch tuyệt đối hai kết thử đơn lẻ thu sử dụng phương pháp, tiến hành vật liệu thử giống hệt nhau, người thực hiện, sử dụng thiết bị, khoảng thời gian ngắn, không % trường hợp lớn % lấy trung bình cộng hai kết Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm phải nêu rõ: a) thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu thử; b) phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) điều kiện thao tác không quy định tiêu chuẩn xem tùy chọn, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết quả; e) kết thử nghiệm thu đáp ứng yêu cầu độ lặp lại kết cuối thu PHỤ LỤC A (Quy định) THIẾT BỊ CHƯNG CẤT HƠI NƯỚC CHÚ DẪN Bình tạo nước (4.4.1) Bình sục khí (4.4.2) Cột cất phân đoạn (4.4.3) Bình sinh hàn (4.4.4) Bình thu nhận (4.4.5) Hình A.1 - Sơ đồ thiết bị chưng cất nước (4.4) ... hai phép xác định mẫu thử (6.1) 6.5.4 Dựng đường chuẩn 6.5.4.1 Chuẩn bị dung dịch axit sorbic chuẩn 2,0 mg/l cách pha lỗng thể tích dung dịch chuẩn (3.2) với thể tích nước 6.5.4.2 Dùng pipet... phương pháp lấy mẫu sử dụng, biết; c) phương pháp thử sử dụng, viện dẫn tiêu chuẩn này; d) điều kiện thao tác không quy định tiêu chuẩn xem tùy chọn, với tình bất thường ảnh hưởng đến kết quả; e) kết... có ống xoắn số 100 thép khơng rỉ, ống xoắn có bước cách 15 mm, - cột có đường kính 20 mm, cao 600 mm, có khớp nối bên thủy tinh - số thiết bị khác có hiệu suất cất phân đoạn Việc cất phân đoạn