Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8683-7:2011 giới thiệu về giống vi sinh vật thú y – Phần 7: Quy trình giữ giống vi khuẩn nhiệt thán cường độc, chủng 17JB. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm bắt nội dung của tiêu chuẩn này.
TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8683-7:2011 Xuất lần GIỐNG VI SINH VẬT THÚ Y – PHẦN 7: QUY TRÌNH GIỮ GIỐNG VI KHUẨN NHIỆT THÁN CƯỜNG ĐỘC, CHỦNG 17JB Master seed of microorganisms for veterinary use – Part 7: The procedure for preservation of Bacillus anthracis 17JB strain, virulent HÀ NỘI 2011 TCVN 8683-7:2011 Lời nói đầu TCVN 8683-7:2011 chuyển đổi từ 10 TCN 262:1996 thành tiêu chuẩn quốc gia theo quy định khoản Điều 69 Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật điểm a khoản Điều Nghị định số 127/2007/NĐ-CP ngày 01/8/2007 Chính phủ quy định chi tiết thi hành số điều Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật; TCVN 8683-7:2011 Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 8683-7:2011 TIỂU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8683-7:2011 Giống vi sinh vật thú y – Phần 7: Quy trình giữ giống vi khuẩn nhiệt thán cường độc, chủng 17JB Master seed of microorganisms for veterinary use – Part 7: The procedure for preservation of Bacillus anthracis 17JB strain, virulent CẢNH BÁO – Việc áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn sức khỏe thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn áp dụng cho việc giữ giống vi khuẩn cường độc nhiệt thán chủng 17JB Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8684:2011, Vắc xin chế phẩm sinh học dùng thú y – Phép thử độ khiết Yêu cầu giống vi sinh vật 3.1 Nhận dạng Vi khuẩn xác định qua tính chất ni cấy, hình thái, sinh hóa học huyết học 3.2 Đặc tính nuôi cấy TCVN 8683-7:2011 Mọc tốt môi trường dinh dưỡng, mơi trường trong, có cụm nhỏ trắng bơng lơ lửng, lắc phân tán làm môi trường đục Không mọc môi trường nước thịt gan yếm khí Mọc tốt thạch dinh dưỡng thành lớp dày, trắng đục 3.3 Hình thái vi khuẩn Trong canh khuẩn 24 h đến 48 h 37 0C, vi khuẩn có hình gậy mập đầu vng, Gram dương, có nha bào, khơng có giáp mơ, không di động Trên thạch dinh dưỡng 24 h, khuẩn lạc dạng R, rìa có nhiều cưa, đường kính từ mm đến mm 3.4 Kiểm tra tính độc 3.4.1 Chuẩn bị động vật – chuột lang khỏe mạnh, có khối lượng từ 300 g đến 350 g – thỏ mẫn cảm, khỏe mạnh, có khối lượng 2,0 kg – dê mẫn cảm, khỏe mạnh, có khối lượng từ 15 kg đến 20 kg 3.4.2 Chuẩn bị giống vi khuẩn Giống đơng khơ hồn ngun nước thịt dinh dưỡng Ria lên thạch dinh dưỡng ủ 37 0C 24 h Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy chuyển vào mơi trường nước thịt dinh dưỡng, ủ 37 0C 24 h Đếm số pha loãng đến nồng độ cần tiêm cho loại động vật 3.4.3 Cách tiến hành Tiêm theo đường da cho dê với liều x 10 CFU/ml cho thỏ với liều x 10 CFU/ml không làm dê thỏ phát bệnh nhiệt thán Tiêm cho chuột lang với liều từ 2,0 x 10 CFU/ml đến 2,5 x 10 CFU/ml theo đường da phải làm chuột lang chết phát bệnh nhiệt thán Phương pháp truyền giống 4.1 Giữ giống qua môi trường 4.1.1 Chuẩn bị môi trường – Nước thịt dinh dưỡng – Thạch dinh dưỡng TCVN 8683-7:2011 – Huyết ngựa – Nước sinh lý 4.1.2 Chuẩn bị giống vi khuẩn Giống đông khô hoàn nguyên nước thịt dinh dưỡng Ria lên thạch dinh dưỡng ủ 37 0C 24 h Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy chuyển vào mơi trường nước thịt dinh dưỡng, ủ 37 0C 24 h Làm tiêu nhuộm Gram, kiểm tra khiết kiểm tra di động 4.1.3 Cách tiến hành Cấy canh khuẩn chuẩn bị theo 4.1.2 (đã kiểm tra khiết theo TCVN 8684:2011) lên đĩa thạch dinh dưỡng bình Roux, ủ 37 0C 72 h để nhiệt độ phòng 48 h đến 72 h chờ hình thành nha bào Dùng nước sinh lý rửa mặt thạch, thu hoạch huyễn dịch nha bào Kiểm tra huyễn dịch vừa thu hoạch theo TCVN 8684:2011 Trộn huyễn dịch vi khuẩn với huyết ngựa theo tỷ lệ 1:1 đông khô 4.2 Giữ giống qua chuột lang 4.2.1 Chuẩn bị động vật – 12 chuột lang khỏe mạnh, có khối lượng từ 300 g đến 350 g – Huyết ngựa – Nước sinh lý 4.2.2 Chuẩn bị giống vi khuẩn Chuẩn bị giống vi khuẩn theo 4.1.2 4.2.3 Cách tiến hành Tiêm cho từ đến chuột lang, liều ml/con canh khuẩn nguyên kiểm tra chuẩn bị theo 4.2.2 theo đường da Thu hoạch máu tim chuột lang sau chết (trong khoảng 72 h từ tiêm) Ria máu tim lên thạch dinh dưỡng, ủ 37 0C 24 h Làm tiếp bước từ 4.2.2.đến 4.2.3 Chọn khuẩn lạc điển hình cấy vào nước thịt dinh dưỡng ủ 37 0C 24 h Làm tiêu nhuộm Gram, kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn, nấm mốc kiểm tra di động TCVN 8683-7:2011 Cấy canh khuẩn kiểm tra lên đĩa thạch dinh dưỡng bình Roux, ủ 37 0C 72 h để nhiệt độ phòng 48 h đến 72 h chờ hình thành nha bào Dùng nước sinh lý rửa mặt thạch, thu hoạch huyễn dịch nha bào Kiểm tra huyễn dịch vừa thu hoạch theo TCVN 8684:2011 Trộn huyễn dịch vi khuẩn với huyết ngựa theo tỷ lệ 1:1 đông khô Kiểm tra giống sau đông khô 5.1 Tiêu chuẩn vật lý – Chế phẩm đóng thành bánh, xốp, màu đồng nhất, có chân khơng – Độ ẩm: khơng lớn % – Độ hòa tan: lắc nhẹ nước sinh lý, chế phẩm tan trở lại dung dịch ban đầu vòng đến 5.2 Yêu cầu kỹ thuật Giống đông khô phải đạt yêu cầu Điều Bao gói, ghi nhãn bảo quản 6.1 Bao gói Giống sau đơng khơ bao gói giấy, để túi nhựa 6.2 Ghi nhãn - Nơi sản xuất - Tên giống - Số lô…ngày…tháng…năm… sản xuất - Người thực - Điều kiện bảo quản 6.3 Bảo quản Giống giữ nhiệt độ từ đến 0C năm TCVN 8683-7:2011 Thư mục tài liệu tham khảo [1] FAO: Production of anthrax spore vaccine [2] OIE Manual 2008: Chapter 2.1.1: Anthrax _ .. .TCVN 8683-7:2011 Lời nói đầu TCVN 8683-7:2011 chuyển đổi từ 10 TCN 262:1996 thành tiêu chuẩn quốc gia theo quy định khoản Điều 69 Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật điểm a... chi tiết thi hành số điều Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật; TCVN 8683-7:2011 Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định,... cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 8683-7:2011 TIỂU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8683-7:2011 Giống vi sinh vật thú y – Phần 7: Quy trình giữ giống vi khuẩn