Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8683-6:2011 trình bày nội dung về giống vi sinh vật thú y – Phần 6: Quy trình giữ giống vi khuẩn nhiệt thán vô độc chủng 34 F2. Tiêu chuẩn này áp dụng cho việc giữ giống vi khuẩn Nhiệt thán, chủng 34 F2 được dùng để sản xuất vắc xin nhiệt thán nha bào vô độc.
TCVN TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8683-6:2011 Xuất lần GIỐNG VI SINH VẬT THÚ Y – PHẦN 6: QUY TRÌNH GIỮ GIỐNG VI KHUẨN NHIỆT THÁN VƠ ĐỘC CHỦNG 34 F2 Master seed of microorganisms for veterinary – Part 6: The procedure for preservation of Bacillus anthracis 34 F2 strain, avirulent HÀ NỘI 2011 TCVN 8683-6:2011 Lời nói đầu TCVN 8683-6:2011 chuyển đổi từ 10 TCN 261:1996 thành tiêu chuẩn quốc gia theo quy định khoản Điều 69 Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật điểm a khoản Điều Nghị định số 127/2007/NĐ-CP ngày 01/8/2007 Chính phủ quy định chi tiết thi hành số điều Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật; TCVN 8683-6:2011 Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 8683-6:2011 TIỂU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8683-6:2011 Giống vi sinh vật thú y – Phần 6: Quy trình giữ giống vi khuẩn nhiệt thán vơ độc chủng 34 F2 Master seed of microorganisms for veterinary – Part 6: The procedure for preservation of Bacillus anthracis 34 F2 strain, avirulent CẢNH BÁO – Việc áp dụng tiêu chuẩn liên quan đến vật liệu, thiết bị thao tác gây nguy hiểm Tiêu chuẩn đưa hết tất vấn đề an toàn liên quan đến việc sử dụng chúng Người sử dụng tiêu chuẩn phải tự thiết lập thao tác an tồn sức khỏe thích hợp xác định khả áp dụng giới hạn quy định trước sử dụng tiêu chuẩn Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn áp dụng cho việc giữ giống vi khuẩn Nhiệt thán, chủng 34 F2 dùng để sản xuất vắc xin nhiệt thán nha bào vô độc Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm cơng bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 8684:2011, Vắc xin chế phẩm sinh học dùng thú y – Phép thử độ khiết Yêu cầu giống vi sinh vật 3.1 Nhận dạng Vi khuẩn xác định qua tính chất ni cấy, hình thái, sinh hóa học huyết học 3.2 Nuôi cấy TCVN 8683-6:2011 Mọc tốt mơi trường dinh dưỡng, mơi trường trong, có cụm nhỏ trắng bơng lơ lửng, lắc phân tán làm môi trường đục Không mọc mơi trường nước thịt gan yếm khí Mọc tốt thạch dinh dưỡng thành lớp dầy, trắng đục 3.3 Hình thái vi khuẩn Trong canh khuẩn từ 24 h đến 48 h 37 0C, vi khuẩn có hình gậy mập đầu vng, Gram dương, có nha bào, khơng có giáp mơ, khơng di động Trên thạch dinh dưỡng 24 h, khuẩn lạc dạng R, rìa có nhiều cưa, đường kính khoảng mm đến mm 3.4 Kiểm tra tính khiết Kiểm tra tính khiết theo TCVN 8684:2011 3.5 Kiểm tra tính độc 3.5.1 Chuẩn bị động vật – cừu mẫn cảm, khỏe mạnh, khoảng năm tuổi – dê mẫn cảm, khỏe mạnh, khoảng năm tuổi – thỏ mẫn cảm, khỏe mạnh, có khối lượng từ 1,8 kg đến 2,0 kg – chuột lang khỏe mạnh, có khối lượng từ 300 g đến 350 g 3.4.2 Chuẩn bị giống vi khuẩn Giống đông khô hoàn nguyên nước thịt dinh dưỡng Ria lên thạch dinh dưỡng ủ 37 0C 24 h Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy chuyển vào mơi trường nước thịt dinh dưỡng, ủ 37 0C 24 h Đếm số pha loãng đến nồng độ cần tiêm cho loại động vật 3.4.3 Cách tiến hành Tiêm theo đường da cho cừu với liều x 10 CFU/ml, cho dê với liều 1,5 x 10 CFU/ml, cho thỏ với liều x 107 CFU/ml cho chuột lang với liều x 10 CFU/ml không làm cho động vật phát bệnh nhiệt thán 3.5 Kiểm tra tính gây miễn dịch 3.5.1 Chuẩn bị động vật Chuẩn bị 15 chuột lang khỏe mạnh, có khối lượng từ 300 g đến 350 g TCVN 8683-6:2011 3.5.2 Chuẩn bị giống vi khuẩn Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy vào môi trường nước thịt dinh dưỡng, ủ 37 0C 24 h Đếm số pha loãng canh khuẩn đến nồng độ x 106 CFU/ml 3.5.3 Cách tiến hành Tiêm cho 10 chuột lang, liều x 10 CFU/ml theo đường da chuột lang (không tiêm vắc xin) dùng làm đối chứng Chuột miễn dịch phải sống 90 %, chuột đối chứng chết 100 % thử thách với liều 10 LD50 chủng cường độc nhiệt nhán 17 JB Phương pháp truyền giống 4.1 Chuẩn bị môi trường – Nước thịt dinh dưỡng – Thạch dinh dưỡng – Thuốc nhuộm Gram – Huyết ngựa 4.2 Chuẩn bị giống vi khuẩn Giống hoàn nguyên trở lại dung tích ban đầu mơi trường nước thịt dinh dưỡng, ủ 37 0C 24 h Ria cấy vi khuẩn từ canh khuẩn lên môi trường thạch dinh dưỡng, ủ 37 0C 24 h 4.3 Cách tiến hành Chọn khuẩn lạc điển hình cấy vào nước thịt dinh dưỡng ủ 37 0C 24 h Làm tiêu nhuộm Gram, kiểm tra tạp nhiễm vi khuẩn, nấm mốc kiểm tra di động Ria canh khuẩn kiểm tra lên đĩa thạch dinh dưỡng (hoặc bình Roux), ủ 37 0C 72 h để nhiệt độ phòng 48 h đến 72 h chờ hình thành nha bào Dùng nước sinh lý rửa mặt thạch, thu hoạch huyễn dịch nha bào Kiểm tra khiết huyễn dịch vừa thu hoạch theo TCVN 8684:2011 Trộn huyễn dịch vi khuẩn với huyết ngựa đông khô TCVN 8683-6:2011 Kiểm tra giống sau đông khô 5.1 Tiêu chuẩn vật lý – Chế phẩm đóng thành bánh, xốp, màu đồng nhất, có chân khơng – Độ ẩm: không lớn % – Độ hòa tan: lắc nhẹ nước sinh lý, chế phẩm tan trở lại dung dịch ban đầu vòng đến 5.2 Yêu cầu kỹ thuật Giống đông khô phải đạt yêu cầu Điều Bao gói, ghi nhãn bảo quản 6.1 Bao gói Giống sau đơng khơ bao gói giấy, để túi nhựa 6.2 Ghi nhãn - Nơi sản xuất - Tên giống - Số lô…ngày…tháng…năm… sản xuất - Người thực - Điều kiện bảo quản 6.3 Bảo quản Giống giữ nhiệt độ từ đến 0C năm TCVN 8683-6:2011 Thư mục tài liệu tham khảo [1] FAO: Production of anthrax spore vaccine [2] OIE Manual 2008: Chapter 2.1.1: Anthrax _ .. .TCVN 8683-6:2011 Lời nói đầu TCVN 8683-6:2011 chuyển đổi từ 10 TCN 261:1996 thành tiêu chuẩn quốc gia theo quy định khoản Điều 69 Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật điểm a... chi tiết thi hành số điều Luật Tiêu chuẩn Quy chuẩn kỹ thuật; TCVN 8683-6:2011 Cục Thú y biên soạn, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định,... cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TCVN 8683-6:2011 TIỂU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8683-6:2011 Giống vi sinh vật thú y – Phần 6: Quy trình giữ giống vi khuẩn