Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8155:2009 - ISO 13559:2002

Tiêu chuẩn Quốc gia TCVN 8155:2009 - ISO 13559:2002 trình bày nội dung về bơ, sữa lên men và phomat tươi- định lượng các vi sinh vật nhiễm bẩn - kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở 300C. Mời các bạn cùng tham khảo để nắm bắt nội dung của tiêu chuẩn này.

TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8155 : 2009 ISO 13559 : 2002 BƠ, SỮA LÊN MEN VÀ PHOMAT TƯƠI- ĐỊNH LƯỢNG CÁC VI SINH VẬT NHIỄM BẨNKỸ THUẬT ĐẾM KHUẨN LẠC Ở 300C Butter, fermented milks and fresh cheese – Enumeration of contaminating microorganismsColony-count technique at 300C Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp định lượng vi sinh vật nhiễm bẩn kỹ thuật đếm khuẩn lạc 300C Phương pháp áp dụng cho bơ, sữa lên men phomat tươi Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn khơng ghi năm cơng bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) TCVN 6263 (ISO 8261), Sữa sản phẩm sữa – Hướng dẫn chung chuẩn bị mẫu thử huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật TCVN 6404 (ISO 7218), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Yêu cầu chung hướng dẫn kiểm tra vi sinh vật TCVN 6507-1 (ISO 6887-1), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Chuẩn bị mẫu thử, dung dịch huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân để kiểm tra vi sinh vật – Phần 1: Các nguyên tắc chung để chuẩn bị huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thập phân TCVN 8128-1 : 2009 (ISO/TS 11133-1 : 2009), Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi – Hướng dẫn chuẩn bị sản xuất môi trường nuôi cấy – Phần 1: Hướng dẫn chung đảm bảo chất lượng việc chuẩn bị môi trường ni cấy phòng thử nghiệm Thuật ngữ định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: Vi sinh vật nhiễm bẩn (contaminating microorganisms) Vi khuẩn không sinh axit lactic, nấm men, nấm mốc tạo khuẩn lạc đếm điều kiện qui định tiêu chuẩn CHÚ THÍCH 1: Vi khuẩn lactic sản phẩm đặc thù không phát phương pháp CHÚ THÍCH 2: Trong số loại sữa lên men cụ thể, vi khuẩn khơng sinh axit lactic, nấm men nấm mốc phần hệ vi sinh vật tạo nên đặc trưng sản phẩm Khi đó, cần thận trọng áp dụng phương pháp Nguyên tắc 4.1 Chuẩn bị đĩa rót sử dụng mơi trường ni cấy qui định, sau cấy lên bề mặt mơi trường lượng huyền phù ban đầu sản phẩm Trong điều kiện, chuẩn bị đĩa rót cấy lên bề mặt đĩa lượng qui định dung dịch pha loãng thập phân huyền phù ban đầu 4.2 Ủ đĩa điều kiện hiếu khí 300C ± 10C 72h 4.3 Tính số lượng vi sinh vật gam mẫu thử từ số lượng khuẩn lạc thu đĩa độ pha loãng chọn cho thu kết có ý nghĩa Thuốc thử, dịch pha lỗng mơi trường cấy 5.1 u cầu chung Xem TCVN 6404 (ISO 7218) thực hành phòng thử nghiệm 5.2 Vật liệu Xem 5.1 TCVN 6263 (ISO 8261) 5.3 Dịch pha lỗng dùng cho mục đích chung Xem 5.2 TCVN 6263 (ISO 8261) 5.4 Dịch pha lỗng dùng cho mục đích cụ thể Xem 5.3 TCVN 6263 (ISO 8261) 5.5 Phân phối, khử trùng bảo quản dịch pha loãng Xem 5.4 TCVN 6263 (ISO 8261) 5.6 Môi trường nuôi cấy 5.6.1 Yêu cầu chung Tất thành phần môi trường nuôi cấy không chứa cacbohydrat Điều quan trọng phương pháp khơng có mặt cacbohydrat mơi trường nuôi cấy Chất lượng môi trường không chứa cacbohydrat sử dụng phải đảm bảo theo TCVN 8128-1-1 : 2009 (ISO 11133-1 : 2009) 5.6.2 Thành phần Pepton từ casein 7,5 g Pepton từ gelatin 7,5 g Natri clorua (Nacl) 5,0 g Thạch 10 g đến 15 g 1) Nước 1000 ml 1) Tùy thuộc vào sức đông thạch 5.6.3 Chuẩn bị 5.6.3.1 Chuẩn bị từ môi trường hồn chỉnh khơ bán sẵn Thực theo hướng dẫn nhà sản xuất Chỉnh pH để sau khử trùng pH 7,5 ± 0,1 250C, cần Đối với sữa lên men, chỉnh pH để sau khử trùng pH 8,0 ± 0,1 25 0C, cần 5.6.3.2 Chuẩn bị từ thành phần khơ Hòa tan thành phần nước cách đun nóng, theo thứ tự: pepton từ casein, pepton từ gelatin, natri clorua Thêm thạch đun đến sôi khuấy thạch tan hết làm nóng nước 30 Lọc qua giấy lọc, cần Chỉnh pH để sau khử trùng pH 7,5 ± 0,1 250C, cần Đối với sữa lên men, chỉnh pH để sau khử trùng pH 8,0 ± 0,1 250C, cần 5.6.3.3 Phân phối, khử trùng bảo quản Phân phối vào ống nghiệm (6.8), lượng từ 12 ml đến 15 ml môi trường ống, vào bình cấy vào chai (6.9) lượng từ 100 ml đến 150 ml Khử trùng hấp áp lực 15 1210C ± 10C Nếu môi trường sử dụng làm nguội mơi trường đến khoảng từ 44 0C đến 470C nồi cách thủy (6.5) Còn mơi trường chưa sử dụng bảo quản nơi tối từ 10C đến 50C không tháng Để tránh bị chậm trễ rót mơi trường bắt đầu kiểm tra vi sinh vật làm tan chảy hồn tồn mơi trường nồi cách thủy sôi, làm nguội nồi cách thủy khác 440C đến 470C trước sử dụng Thiết bị, dụng cụ Dụng cụ sử dụng lần dùng để thay cho dụng cụ thủy tinh sử dụng nhiều lần có qui định phù hợp Các dụng cụ thủy tinh sử dụng nhiều lần phải bền với việc khử trùng lặp lại trơ hóa học Khử trùng tất dụng cụ tiếp xúc với mẫu thử, với dịch pha lỗng mơi trường ni cấy phù hợp với yêu cầu TCVN 6263 (ISO 8261) Sử dụng thiết bị thơng thường phòng thử nghiệm vi sinh [xem TCVN 6404 (ISO 7218) TCVN 6263 (ISO 8261)] cụ thể sau: 6.1 Tủ ấm, có khả trì nhiệt độ 300C ± 10C 6.2 Tủ sấy tủ ấm, tuần hồn khơng khí, có khả trì nhiệt độ 50 0C ± 10C tủ ấm thông gió đối lưu 6.3 Đĩa Petri, thủy tinh chất dẻo, đường kính từ 90 mm đến 100 mm, nhiều 0,1 ml dịch cấy sử dụng đĩa đường kính 140 mm 6.4 Pipet chia độ, dung dịch danh nghĩa ml ± 0,02 ml 10 ml ± 0,2 ml 6.5 Nồi cách thủy, có khả trì nhiệt độ 44 0C đến 470C có khả đun sơi 6.6 Dụng cụ đếm khuẩn lạc, rọi sáng đen, có thấu kính khuếch đại với độ phóng đại 1,5 lần có đếm điện tử 6.7 Máy đo pH, có độ xác ± 0,1 đơn vị pH 250C đọc đến 0,01 đơn vị 6.8 Ống nghiệm, có nắp nút, có dung tích khoảng 20 ml 6.9 Bình chai, có nắp nút, dung tích danh nghĩa từ 150 ml đến 250ml Có thể sử dụng bình chai có nắp vặn kim loại khơng độc 6.10 Bộ dàn mẫu vơ trùng, có đường kính khoảng 3,5 mm, dài 20 cm, uốn vng góc đầu dài cm Đầu cuối làm nhẵn cách nung Lấy mẫu Mẫu gửi đến phòng thử nghiệm phải mẫu đại diện không hư hỏng thay đổi trình bảo quản vận chuyển Việc lấy mẫu không qui định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị phần mẫu thử huyền phù ban đầu 8.1.1 Yêu cầu chung Xem TCVN 6507-1 (ISO 6887-1) yêu cầu chung TCVN 6263 (ISO 8261) yêu cầu cụ thể Chú ý vô trùng Các thao tác 8.1 8.2 không thực ánh sáng trực tiếp mặt trời 8.1.2 Bơ Xem 8.2.6 TCVN 6263 (ISO 8261) 8.1.3 Phomat tươi Xem 8.2.4 TCVN 6263 (ISO 8261) 8.1.4 Sữa lên men Xem 8.2.9 TCVN 6263 (ISO 8261) 8.2 Các dung dịch pha loãng thập phân Xem TCVN 6263 (ISO 8261) 8.3 Chuẩn bị đĩa Rót từ 12 ml đến 15 ml mơi trường chuẩn bị (5.6) vào đĩa Petri (6.3) đông đặc Làm khô đĩa, tốt mở nắp bề mặt thạch xuống dưới, để tủ sấy tủ ấm (6.2) 500C 30 Xem thêm TCVN 6404 (ISO 7218) Cách khác, sử dụng đĩa Petri đường kính 140 mm (6.3) sử dụng dịch cấy > 0,1 ml Có thể làm khơ đĩa tủ ấm thơng gió đối lưu (6.2) 30 thay cho làm khơ tủ ấm 8.4 Cấy ủ 8.4.1 Dùng pipet vô trùng (6.4) cho vào hai đĩa chuẩn bị (8.3), đĩa 0,1 ml huyền phù ban đầu sản phẩm 8.4.2 Lặp lại thao tác sử dụng dung dịch pha loãng thập phân 8.4.3 Dùng dàn mẫu vô trùng (6.10) để dàn nhanh dịch cấy cách cẩn thận lên bề mặt đĩa, ý không chạm vào thành đĩa Sử dụng dàn mẫu vô trùng cho đĩa Để yên đĩa có nắp đậy khoảng 15 bàn dịch cấy hấp thụ vào đĩa 8.4.4 Lật úp đĩa chuẩn bị đặt vào tủ ấm (6.1) 30 0C 72 h ± h Không chồng cao sáu đĩa Các chồng đĩa để tách riêng, cách trần thành tủ [xem TCVN 6404 (ISO 7218)] 8.5 Đếm khuẩn lạc Sau ủ (8.4.4), sử dụng dụng cụ đếm khuẩn lạc (6.6) để đếm khuẩn lạc Đếm khuẩn lạc đặc trưng vi sinh vật nhiễm bẩn đĩa chứa không nhiều 150 khuẩn lạc Khơng đếm khuẩn lạc nhỏ chúng khơng điển hình cho vi sinh vật nhiễm bẩn Thơng tin nguồn gốc nhiễm bẩn thu cách kiểm tra khuẩn lạc có mặt Điều giá trị cần ghi lại loại khuẩn lạc có mặt (ví dụ: nấm men, mốc, Bacillus sp, vv…thuần khiết hay hỗn tạp) Tính biểu thị kết 9.1 Tính kết Giữ lại đĩa có nhiều 10 khuẩn lạc 150 khuẩn đặc trưng hai độ pha lỗng liên tiếp Tính số lượng, N, vi sinh vật nhiễm bẩn gam mẫu thử, theo công thức sau: Trong C tổng số khuẩn lạc đặc trưng đếm tất đĩa giữ lại; n1 số đĩa độ pha loãng thứ giữ lại; n2 số đĩa độ pha loãng thứ hai giữ lại; d hệ số pha loãng tương ứng với độ pha loãng thứ 9.2 Biểu thị kết 9.2.1 Làm tròn kết thu 9.1 đến hai chữ số có nghĩa Đối với chữ số thứ ba, làm tròn chữ số thứ ba đến zero gần Nếu chữ số thứ ba làm tròn đến số thấp chữ số thứ hai chẵn làm tròn đến số cao số thứ hai số lẻ VÍ DỤ Làm tròn 234 thành 230 235 thành 240 225 thành 220 245 thành 240 9.2.2 Nếu có số đếm nhỏ 10, báo cáo số lượng vi sinh vật gam “ít 10 x 1/d” (trong d giá trị tương ứng với độ pha loãng thấp nhất) 9.2.3 Nếu có số đếm lớn 150, tính số đếm ước lượng từ đĩa có số đếm gần 150 khuẩn lạc nhân với số nghịch đảo giá trị ứng với độ pha loãng cao Báo cáo kết “Số lượng vi sinh vật ước tính gam sản phẩm” 9.2.4 Kết biểu thị số từ 1,0 đến 9,9 nhân với lũy thừa tương ứng 10 VÍ DỤ: Ở độ pha loãng thứ (10-2): 83 khuẩn lạc 97 khuẩn lạc Ở độ pha loãng thứ hai (10-3): 13 khuẩn lạc 10 khuẩn lạc Tính kết theo công thức sau: N= n1 C 0,1n d 83 97 13 10 0,1 10 9227 Làm tròn kết đến hai chữ số có nghĩa 9200 9,2 x 10 vi sinh vật nhiễm bẩn gam mẫu thử 10 Độ chụm 10.1 Yêu cầu chung Xem TCVN 6404 (ISO 7218) thông tin giới hạn tin cậy để ước tính số lượng nhỏ vi sinh vật CHÚ THÍCH: Hiện chưa có số liệu chi tiết độ chụm từ nghiên cứu cộng tác Tuy nhiên, tính đa dạng vi sinh vật nhiễm bẩn lớn phụ thuộc vào loại sản phẩm, nguồn gốc địa lý nơi sản xuất, nên việc đưa số liệu độ chụm nghiên cứu cộng tác dựa chủng cụ thể chưa thích hợp 10.2 Độ lặp lại Kinh nghiệm cho thấy hai phòng thử nghiệm độc lập mẫu thử thường cho kết cao 30% so với kết thấp cần kiểm tra lại qui trình để tìm sai lỗi  ... định tiêu chuẩn Nên lấy mẫu theo TCVN 6400 (ISO 707) Cách tiến hành 8.1 Chuẩn bị phần mẫu thử huyền phù ban đầu 8.1.1 Yêu cầu chung Xem TCVN 650 7-1 (ISO 688 7-1 ) yêu cầu chung TCVN 6263 (ISO 8261)... 8.2.6 TCVN 6263 (ISO 8261) 8.1.3 Phomat tươi Xem 8.2.4 TCVN 6263 (ISO 8261) 8.1.4 Sữa lên men Xem 8.2.9 TCVN 6263 (ISO 8261) 8.2 Các dung dịch pha loãng thập phân Xem TCVN 6263 (ISO 8261) 8.3 Chuẩn. .. 5.1 u cầu chung Xem TCVN 6404 (ISO 7218) thực hành phòng thử nghiệm 5.2 Vật liệu Xem 5.1 TCVN 6263 (ISO 8261) 5.3 Dịch pha loãng dùng cho mục đích chung Xem 5.2 TCVN 6263 (ISO 8261) 5.4 Dịch pha