Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6470:1998

Tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 6470:1998. Tiêu chuẩn trình bày nội dung về phụ gia thực phẩm - phương pháp xác định cho phẩm màu thực phẩm. Mời các bạn cùng tham khảo.

tCvn Tiªu chn ViƯt Nam TCVN 6470 : 1998 Phơ gia thực phẩm phơng pháp xác định cho phẩm mµu thùc phÈm Food additives − Methods for food colours Hµ Néi – 1998 tcvn 6470 : 1998 Lêi nãi đầu TCVN 6470 : 1998 hoàn toàn phù hợp với phần IV sách Hớng dẫn yêu cầu kỹ thuật cho ý chung, thử nhận biết, dung dịch thử tài liệu tham khảo khác JECFA (Guide to specifications, general notices, general analytical techniques, identification tests, test solutions and other reference materials − JECFA − FAO FOOD and nutrition paper − rev 2) TCVN 6470 : 1998 ban kü tht tiªu chn TCVN/TC/F4 Phơ gia thực phẩm biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn - Đo lờng - Chất lợng đề nghị, Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng ban hành tcvn 6470 : 1998 TIªuchn vIƯt nam tcvn 6470 : 1998 Phơ gia thực phẩm Phơng pháp xác định cho phẩm mµu thùc phÈm Food additives − Methods for food colours Tiêu chuẩn qui định phơng pháp xác định cho phẩm màu thực phẩm Xác định clorua theo natri clorua 1.1 Thiết bị Thiết bị chuẩn độ điện thế, với điện cực định bạc, điện cực so sánh calomel, cầu nối la dung dịch kali sunfat bão hoà 1.2 Cách tiến hành Cân 0,5 1,0 g mÉu phÈm mµu, hoµ tan 100 ml n−íc, vµ axit hãa b»ng ml dung dÞch axit nitric 1,5 N Đặt điện cực bạc vào dung dịch màu nối điện cực calomel với dung dịch cầu nối kali sunfat bão hoà Có thể loại bỏ cầu nối kali sunfat bão hoà cách dùng điện cực thuỷ tinh làm điện cực so sánh Điều đơn giản thiết bị cách đáng kể điện cực thuỷ tinh đủ ổn định để đợc sử dụng nh điện cực so sánh cho kiểu chuẩn độ Xác định hàm lợng clorua dung dịch chuẩn độ với dung dịch bạc nitrat 0,1 N, tính toán kết theo natri clorua, ml dung dịch bạc nitrat 0,1 N = 0,00585 g natri clorua Biểu thị kết phần trăm lợng mẫu lấy Chú thích Nhiệt độ qui định tiêu chuẩn độ C (0C) tcvn 6470 : 1998 Các chất không tan clorofooc 2.1 Thiết bị tủ sấy, dải nhiệt độ: 00 2000; bếp điện, đun sôi đợc tetraclorua cacbon (CCl4) (điểm sôi 76,80); chén nung, có lớp lọc thuỷ tinh; bình hút chân không; máy hút chân không; bình hút ẩm 2.2 Thuốc thư − tetraclorua cacbon, lo¹i thc thư, hay; − clorofooc, loại thuốc thử; (Các loại thuốc thử đợc gọi "dung môi" phần "cách tiến hành") 2.3 Cách tiến hành Tiến hành thử theo cách sau: Trộn lợng mẫu cân theo yêu cầu (W1) với 100 ml dung m«i cèc cã má dung tÝch 250 ml, khuÊy đều, đun đến sôi bếp điện tủ hút (fume hood) Lọc dung dịch nóng vào chén nung cân trớc (W2) Chuyển cặn cốc có mỏ vào chén nung dung môi Rửa cặn chén nung với phần 10 ml dung môi nớc rửa không màu Đặt chén nung vµo tđ sÊy vµ sÊy ë 1000 − 1500 Để nguội chén nung bình hút ẩm Cân chén nung nguội (W3) 2.4 Tính toán Tính phần trăm chất không hoà tan tetraclorua cacbon hay clorofooc (PIM) mÉu, theo c«ng thøc sau: W3 − W2 PIM (%) = x 100 W1 TÝnh kÕt qu¶ phần trăm chất không tan tetraclorua cacbon (CCl4) hay clorofooc có mẫu phân tích Các chất mµu thùc phÈm 3.1 NhËn biÕt NhiỊu chÊt mµu thùc phẩm đợc sử dụng công nghiệp chế biến thực phẩm dạng hỗn hợp chất màu thực phẩm nh mô tả chuyên luận, hỗn hợp có thêm chất làm loãng tcvn 6470 : 1998 Tiến hành phép thử đơn giản để xem liệu mẫu bột chất màu đơn, mét khèi trén vËt lý cđa mét sè phÈm mµu Rải lợng bột màu nhỏ vào cốc, mét cèc chøa n−íc, mét cèc kh¸c chøa axit sunfuric đặc Dới điều kiện hạt nhỏ li ti chất màu riêng rẽ nhìn thấy dƠ dµng chóng hoµ tan vµ, phÐp thư nµy có độ nhậy bất ngờ Việc xác định có mặt chất màu thực phẩm riêng biệt thờng khó khăn Một số lợng lớn muối natri sunfonic kết chúng điểm chảy điểm sôi xác Thêm vào chất màu tổng hợp thờng có chứa chất màu phụ chất màu đợc chiết xuất từ nguồn thiên nhiên nhìn chung có chứa số màu khác Do việc nhận biết thành công cách so sánh tính chất quan sát đợc với đặc tính mẫu thơng phẩm thật Các kĩ thuật đợc sử dụng sắc kí quang phổ, kết hợp phơng pháp Ví dụ có mặt chất màu phụ ảnh hởng tới phổ quan sát việc xác định có mặt thành phần thực đợc Vì lý đó, nên tách chất màu s¾c kÝ cét, s¾c kÝ giÊy hay s¾c kÝ líp mỏng trớc định dùng phơng pháp nhận biết khác Sắc kí giấy sắc kí lớp mỏng thờng hữu ích việc nhận biết chất màu, mà không cần đến thiết bị đắt tiền Nhng phải nhớ giá trị R4 chất khẳng định lý thuyết Trong thực tế hầu hết đợc dựa trình kiểm tra Có nhiều yếu tố ảnh hởng, làm cho giá trị Rf trở nên không ổn định Các yếu tố bao gồm: thành phần thời hạn (tuổi) dung môi, nồng độ dung môi bốc không khí, chất lợng giấy, máy móc dụng cụ, loại chất lợng chất phụ, nồng độ, giá trị pH dung dịch nhiệt độ Vì lý đó, sắc kí so sánh luôn cần sử dụng Bằng cách cho chạy đồng thời vài chất với nồng độ nh nhau, số yếu tố ảnh hởng bị loại bỏ Sự trùng hợp khoảng di chuyển với hệ dung môi đơn phải đợc coi nh tiêu nhận biết phép thử khác phải đợc tiến hành để khẳng định chắn Bảng sau cho thí dụ giá trị Rf dung dịch % chất màu nớc, triển khai sắc kí lớp mỏng silicagel G 10 hệ dung môi khác Thành phần hệ thống dung môi này, (tất phải đợc chuẩn bị mới) - là: Dung môi No: lso - Propanol: amonac (tû träng 0,880): n−íc (7 : : 1) lso - Butanol: etanol: n−íc: amoniac (tû träng 0,880) (10 : 20 : 10 : 1) Dung dịch kali nitrat bão hoà nớc Phenol: n−íc (4 : 1, W/v) Axit clohydric (tû träng 1,180): n−íc (23: 77) Trinatrixitrat: amoniac (tû träng 0,880): n−íc (2 g : 15 ml : 85 ml) Axeton: etylmetyl ketone: amoniac (tû träng 0,880): n−íc (60 : 140 : : 60) tcvn 6470 : 1998 n - Butanol: etanol: pyridin: n−íc (2 : : : 2) lso - propanol: amoniac (tû träng 0,880) (4 : 1) 10 n - Butanol: axetic axit (băng): nớc (10 : : 6) Việc đánh giá vết màu cần làm sắc đồ ẩm dung môi, sau sấy khô Các vết màu đợc xem xét dới tia sáng trắng tới xuyên qua, tốt nh ánh sáng tử ngoại Dới ánh sáng tử ngoại (UV) nhiều chất màu có đặc tính thay đổi màu Hơn điều thờng có vết tạp chất huỳnh quang không màu Nếu có thể, sử dụng hai xạ UV với chiều dài sóng hiệu xuất khác nhau; đèn phát xạ xung quanh 250 nm Nên tiến hành phép thử axit, kiềm thuốc thử thích hợp khác, để đảm bảo kết Tất phép thử đợc tiến hành với pipet mao quản vết màu Các yêu cầu sau phải đạt đợc xác định chất màu: khoảng di chuyển ngang vài dung môi; vết ngang dới ánh sáng thờng ánh sáng tử ngoại; thay đổi màu tơng đơng với thuốc thử Việc kiểm tra phơng pháp quang phổ phơng pháp tốt để xác định chất màu Các vùng tử ngoại, hồng ngoại ánh sáng nhìn thấy đợc đợc áp dụng Vùng nhìn thấy đợc quang phổ nhìn thấy đợc thông thờng phép kiểm tra bớc việc thử nhận biết chất màu cha biết Có nhiều chất màu cho độ hấp thụ đặc trng vùng nhìn thấy đợc, chất màu khác không Phổ vùng tử ngoại đợc sử dụng, nên thu nhận kết này, đợc Phổ hấp thụ hồng ngoại thờng cách tốt để xác định hợp chất khác nhau, nhng có số khó khăn trình sử dụng phơng pháp Trong việc áp dụng phép đo quang phổ nhìn thấy đợc tử ngoại, phổ cần phải thu nhận đợc vài dung môi, hay dung môi riêng lẻ, phải dới điều kiện khác Phổ dung dịch nớc cần thu đợc ®iỊu kiƯn trung tÝnh (®Ưm b»ng amoni axetat), axit (axit clohidric 0,1 N), vµ kiỊm (natri hydroxit 0,1 N) E 110 E 102 18050 16230 15970 15985 19140 18965 47005 Red G Mµu vµng cam Orange G Orange R.N Sunset yellow FCF hay Orange yellow S Mµu vµng Tatrazine Yellow G Quinoline Yellow Fast yellow AB Mµu xanh Green S hay axit Brillant green BS hay Lissamine green Indigo Carmine hay Indigotin Indanthrene Blue hay Solanthrene Blue RS hay Anthragen Blue E 127 45430 E 105 E 142 E 132 E 130 13015 44090 73015 69800 E 104 E 122 Erythrosine Rs EEC Seral N0 E 124 E 123 C N0 Màu đỏ 16255 Ponceau R hay cochineal Red A Carmoisine 14720 hay Azorubine Amaranth 16185 Tên phẩm màu 0,75 0,66 0,88 0,03 0,95 1,00 0,60 0,88 (0,78) 0,82 (0,74) 0,77 0,80 0,88 (0,82) 0,81 0,61 (0,67-0,750,81-0,84) 0,50-0,76 (0,78) 0,00 0,83 (0,62) 0,75 (0,68) 0,66 0,63 0,83-0,88 0,44 (0,52-0,68 0,74) 0,56 (0,70) 0,00 0,77 0,80 (0,75) 0,71 (0,67-0,88) 0,08 0,21 0,65 (0,21) 0,14 0,52 (0,05-0,36 1,00) 0,00 0,09-0,18 (0,05-0,90 (0,52) 1,00) 0,00 0,00 0,49 (0,24) 1,00 0,46-1,00 0,77 0,00-1,00 0,00 0,42 (0,00-0,42) (0,13) 1,00 0,17-0,03 (0,00-1,00) 0,64 0,23-0,15 (1,00-0,35) 0,04 0,00 0,92 0,29 (0,43) 1,00 0,74 0,26-1,00 0,00-0,38 0,97 0,13 (0,38) 1,00 0,73 0,00 40,94 1,00 1,00 1,00 0,95 (0,35) 1,00 0,76 (1,00) 1,00 1,00 0,93 0,93 0,92 0,88 0,90 0,92 0,91 0,90 0,89 0,90 0,88 0,90 0,52 10 0,07 0,14 0,21 0,00-0,31 0,64 0,36 0,55 0,50 0,75 0,11-0,75 (0,83) 0,66 0,64 0,82-0,71 (0,29) 0,34 0,67 (0,10-0,22) (0,46) 0,36 0,69 (0,32-0,17) (0,46-0,82) (0,00-057 0,34 0,63 (0,46) (0,11-0.70) 0,10 0,39-0,67 (0,41) 0,66 1,00 (0,57-0,43) 0,36 0,68 0,11 0,00 0,00 0,00 0,00 0,66 0,89-0,84 0,37 0,00-0,63 (0,71-0,73) (0,00-0,34) 0,46 0,75 (0,56-0,71) (0,89-0,92) 0,52 0,62 0,54 (0,68) 0,56 0,64 (0,62-0,500,67) 0,68 (0,65) 0,65 (0,48) (0,85) 0,65 0,81 0,00-0,42 0,16 0,00 1,00 0,65 (0,77) (0,00-0,32) 0,62 0,75 1,00 0,04 1,00 1,00 0,40 (0,48-0,76) (0,83) (0,00-1,00) (0,16) (0,64-0,66) 0,85 0,91 0,00-0,10 0,00-0,90 0,00 0,00-0,95 0,64-0,66 (0,68-0,79) (0,86-0,74-0,81) (0,41) (0,58) 0,68 0,80 0,37 0,12 0,00-0,71 1,00 0,64 Dung m«i sè (xem mơc 3-1.) Những giá trị Rf số phẩm màu đợc phép không đợc phép tan nớc tcvn 6470 : 1998 42090 42051 42640 42535 Beillant blue FCF Patent Blue V Violet 6B Methyl Violet E151 E152 28440 27755 Black PN hay Brillant - Black BN Black 7984 0,75 0,75 0,74 0,00-0,75 0,79-0,86 0,80 (0,72) 0,56-0,81 0,90 0,68 0,78 0,45 (0,68) 0,55 0,15 0,10 0,61 (0,68) 0,69 (0,72) 0,67 0,85 0,85 0,88 0,87 0,93 0,84 (0,92) 0,89 (0,62) 0,11 (0,90) 0,88 0,09 0,05 0,00-0,32 0,34 (0,26-0,53) 0,00-0,38 0,37-0,45 0,70-0,76 0,94-0,87 (0,00-0,83) 0,30 (0,49-0,00-0,23) 0,00-0,10 A30 tài liệu môi trờng chung môi trờng công nghiệp (ấn phẩm IARC số 40) chi nhánh quốc tế nghiên cứu ung th, Lyon, 1981 chän, tËp - Mét chÊt Amin th¬m vµ thuèc nhuém Theo Pearson, D (1973), J.ASSOC Public Anal, 11, 137-138 tái theo chất sinh từ ung th môi trờng Phơng pháp phân tích tuyển O.x O y: kẻ vạch vết 0,95 0,00-1,00 0,00 0,62 0,00-0,37 0,00-1,00 (0,00-0,46) (0,51-1,00) 0,00 0,79-1,00 0,00-0,80 0,00 0,00-0,68 (0,00-0,34) (0,00-0,53) (0,11-0,28 0,53-1,00) 1,00 0,69-0,27 0,00-0,77 1,00 0,59-0,64 (0,00-1,00) 0,15-0,00 0,53 (0,37) 0,00-0,82 0,00 0,00-1,00 0,00-1,00 0,36-0,51 (0,00-0,23) 0,62 0,00-1,00 0,00 0,00-1,00 0,00-1,00 0,34-0,43 (0,00-0,16) 0,62 1,00 0,00 1,00 1,00 0,38 (0,00-1,00) (0,61) 1,00 0,00 1,00 1,00 0,38 (0,61) 0,05 0,05 Dung m«i sè (xem mơc 3-1.) Cl No: sè chØ sè phÈm mµu " "; số ngoặc vết phụ cờng độ thấp 0,66 (0,47) 0,62 0,00-0,63 20285 Chocolate Brown HT 0,73 (0,67-0,91) 0,91 (0,80) 0,64 (0,73) 0,34-0,60 Chocolate Brown FB E131 EEC Seral N0 0,78-0,71 0,66 0,00-0,69 Màu nâu, đen Brown FK C N0 Tên phẩm mµu 0,00-0,45 0,00-0,43 0,00-0,73 0,00-0,75 0,00-0,73 0,64 (0,71 0,75-0,79) (0,00-0,70) 0,53 (0,64) 0,59 10 tcvn 6470 : 1998 tcvn 6470 : 1998 Phổ hấp thụ đợc dựng thành đồ thị cho thấy độ hấp thụ bớc sóng Việc kiểm tra đờng cong kết bao gồm nhiỊu vïng cđa b−íc sãng cã ®é hÊp thơ cùc đại Toàn đờng cong cần đợc xem xét cận thẩn để xác định dạng riêng biệt đờng cong từ "các gờ" hay điểm uốn nét đặc trng hữu ích phổ hấp thụ Những nét đặc trng thờng phân biệt đợc hai nhiều chất màu cã ®é hÊp thơ tèi ®a ë cïng b−íc sãng Nhiều chất màu xác định việc quan sát phạm vi mà độ hấp thụ cực đại nét đặc trng khác đờng cong hấp thụ bị thay đổi điều kiện pH khác có thay đổi khác dung môi Phổ hồng ngoại thu nhận đợc vài cách; cách thông dụng là: phổ dung dịch chất thử dung môi thích hợp; − phỉ cđa chÊt hun phï chÊt láng thích hợp kĩ thuật tạo viên kali bromua (một lợng nhỏ chất màu, thờng từ - mg đợc trộn đều, kĩ với kali bromua khô, tinh khiết, hỗn hợp đợc chuyển thành viên nh hạt lựu thích hợp đợc ép thành dạng cứng cách dùng áp suất nén từ 700 đến 1400 kg/cm2) Dựng đồ thị phổ thu đợc theo cách thông thờng Những nét đặc trng bật đờng cong kết bớc sóng đỉnh (Pic) hấp thụ dạng đờng cong gần kề Pic Việc thảo luận chi tiết để giải thích phổ hồng ngoại phạm vi tiêu chuẩn Tuy nhiên, cần phải thận trọng để đảm bảo chắn Pic hấp thụ chất tạp nhiễm vô không đợc coi chất màu Cấu trúc tinh thể trạng thái vật lí khác mẫu thử ảnh hởng đến phổ thu đợc từ huyền phù hay viên kali bromua Cần đảm bảo chắn chất cha biết đợc xử lý xác theo cách thức nh chất chuẩn hay mẫu biết Các chất màu tan nớc, thờng đợc xử lý cách hoà tan chúng nớc, thêm axit axetic, cho bốc (cô) đến gần khô, sau sấy khô khoảng 1000 để loại hết nớc d Tất chất màu đợc kiểm tra phải không nớc dung môi khác trớc thu nhận phổ hồng ngoại Nớc dung môi hữu hấp thụ xạ hồng ngoại Một thí dơ vỊ viƯc sư dơng hång ngo¹i, cã hai chÊt màu, chất có liệt kê tiêu chuẩn này, đợc để cập đến Phẩm màu Sunset yellow phÈm mµu Orange GGN cã phỉ hÊp thơ vïng nhìn thấy đợc vùng tử ngoại gần giống mà chúng phân biệt đợc qua việc kiểm tra vùng Tuy nhiên, phổ hồng ngoại chúng, hoàn toàn khác vùng phổ mà nhóm axit sunfonic hấp thu mạnh tcvn 6470 : 1998 Trong vài trờng hợp, quy trình sắc kí, qui trình quang phổ, kết hợp hai quy trình không cho kết Trong trờng hợp nh vậy, vấn đề thờng đợc giải cách giảm bớt chất màu cách khác giảm hợp chất xác định sản phẩm tạo Kỹ thuật đặc biệt đợc áp dụng cho chất màu azot Các hợp chất amin tạo từ phân giảm xác định kĩ thuật sắc kí đo quang phổ Nhiều kĩ thuật khác đợc áp dụng để nhận biết chất màu Việc mô tả chúng không đợc ®Ị cËp, nh−ng mét vÝ dơ sÏ ®−ỵc trÝch dÉn Nhiều sắc tố có cấu trúc tinh thể định đợc nhận biết hình nhiễu xạ X quang, hay b»ng quang häc tinh thĨ Mét vµi chất màu đợc chuyển thành dạng dẫn xuất tinh thể đợc nhận biết theo cách tơng tự 3.2 Xác định hàm lợng tổng số (tổng hàm lợng) Có hai phơng pháp thờng dùng để xác định tổng hàm lợng chất màu: Quang phổ so sánh Sự phân giảm clorua titan Khi sử dụng phơng pháp đo quang phổ cần nhớ nhiều nhà sản xuất quang phổ kế không đảm bảo độ xác lớn % Tất chất màu có mặt mÉu, mµ chóng cã Pic hÊp thơ n»m vùng chất màu chính, góp phần vào số hấp thụ để tính toán kết Các chất màu phụ nhiều màu sắc khác không đợc tính đến kĩ thuật Trong điều kiện lí tởng, quang phổ kế đợc sử dụng để tiến hành phép so sánh mẫu thử chất chuẩn có hàm lợng chất màu biết Việc sử dụng số hấp thụ nói chung đợc chấp nhận thay cho thân chất chuẩn, chừng mực ®ã ®−ỵc coi nh− Ýt thÝch hỵp, nh−ng tr−êng hợp số chất màu, đợc ghi nhận không thay đợc Trong phơng pháp titan clorua, giả định đồng phân chất phụ có giá trị đơng lợng titan clorua nh chất màu 3.3 Xác định hàm lợng tổng số phơng pháp quang phổ Có hai qui trình thực nghiệm đợc mô tả, chúng khác chi tiết hai ®Ịu sư dơng sè phỉ hÊp thơ ®−ỵc trÝch dÉn đặc tính chất màu để tính toán kết Qui trình thứ điển hình cho dạng sử dụng chất màu tan nớc; Qui trình thứ hai thích hợp cho chất màu tan dung môi, đặc biệt với carotenoit tổng hợp (Dung dịch đợc chuẩn bị cho trờng hợp thứ hai đợc dùng phép thử nhận biết carotenoit) 10 tcvn 6470 : 1998 3.3.10.2 Thiết bị: Bình sắc ký thiết bị phụ trợ Hình cho thấy thiết bị phù hợp gồm có: bình thuỷ tinh (A) nắp đậy (B); khung đỡ (C) cho tờ giấy sắc ký; khay (D) cho dung môi khai triển; khung thứ (E) để đỡ "tấm mành" giấy lọc; tờ giấy sắc ký, kích thớc không nhỏ 20 cm x 20 cm (Giấy sắc ký Whatman No.1 phù hợp) Micrô xơ - ranh, dung tích phân phối 0,1 ml, cã sai sè chÊp nhËn lµ ± 0,002 ml Máy đo quang phổ Hình Bộ phận thiết bị sắc ký 17 tcvn 6470 : 1998 Hình Các chi tiết Hình Phơng pháp vẽ lên thiết bị sắc ký giấy sắc ký 3.3.10.3 Cách tiến hành (h) trớc tiến hành phép thử, đặt giấy lọc vào bình khai triển; rót lên lớp giấy rót vào đáy bình khai triển lợng dung môi đủ để phủ lên đáy bình lớp dày khoảng cm Đặt khay dung môi (D) vào vị trí đậy nắp bình lại Đánh dấu lên tờ giấy sắc kí nh hình ChÊm 0,10 ml dung dÞch mÉu 1,0 % n−íc, xơ- ranh tốt phạm vi giới hạn hình chữ nhật kích thớc 18 x mm, giữ chắn đầu micro xơ ranh (xơ - ranh vi lợng) chạm vào giấy Để cho giấy khô nhiệt độ phòng h − h, hc ë 500C phót, sau thêm 15 phút nhiệt độ phòng Gắn tờ sắc ký này, với tờ giấy sắc ký không chấm để làm màu trắng vào khung (C) Rót lợng vừa đủ dung môi sắc ký vào khay (D), cho bề mặt lớp dung môi thấp đờng giấy sắc ký khoảng cm Thể tích dung môi cần dùng tuỳ thuộc vào kích thớc bình khia triển phải đợc xác định trớc Đặt khung (C) vào vị trí đậy lại nắp Để cho dung môi chạy lên phía trớc đến khoảng cách định phía đờng nền, sau ®ã nhÊc khung (C) vµ ®−a nã vµo buång sÊy kh« ë 500 − 600 10 − 15 phút Lấy giấy chạy sắc ký khỏi khung (C) (Có thể cho khai triển vài sắc tố ®å ®ång thêi, nÕu thÊy cÇn thiÕt) 18 tcvn 6470 : 1998 Cắt từ giấy sắc kí thành dải băng màu phụ, cắt lấy dải giấy tơng đơng từ vị trí tơng ứng giấy đối chứng Đặt dải, chia thành số phần phù hợp, xấp xỉ nhau, đặt vào ống nghiệm riêng Thêm 5,0 ml hỗn hợp nớc: axeton (1 : theo thể tích) vào ống nghiệm, lắc tròn phút thêm 15,0 ml dung dịch natri hidro cacbonat 0,05 N lắc ống nghiệm để trộn Lọc dịch chiết có màu mẫu trắng qua giấy lọc đờng kính cm loại đính tính (giấy tha) xác định độ hấp phụ dịch chiết màu bớc sóng hấp thơ tèi ®a cđa chóng, sư dơng cuvet 40 mm đậy kín, so sánh với hỗn hợp lọc gồm 5,0 ml n−íc: axeton (1 : theo thĨ tÝch) 15,0 ml dung dịch natri hidro cacbonat 0,05 N Đo độ hấp thụ dịch chiết từ dải mầu trắng bớc sóng đo dịch chiết màu hiệu độ hấp thụ dịch chiết màu với giá trị đo mẫu trắng Để chuẩn bị vết "chuẩn", tiến hành nh sau: Từ dung dịch % mẫu thử, chuẩn bị dung dịch tơng ứng với L/100%, L giới hạn chất màu phụ Chấm 0,10 ml dung dịch lên giấy sắc kí kĩ thuật mô tả trên, cho chạy sắc đồ, sau làm kh« nã ë 500 - 600 10 − 15 phút Cắt băng giấy từ giấy thành dải cắt dải tơng tự từ giấy trắng nhng có đánh dấu Tiến hành bớc nh xác định độ hấp phụ thực (As) chất chuẩn 3.3.10.4 Tính toán phần trăm chất mµu phơ theo: Aa + Ab + Ac + … An ì L ì D/100 % chất màu phụ = As ®ã Aa + Ab + Ac + An tổng độ hấp thụ chất màu phụ đợc hiệu chỉnh theo giá trị mẫu trắng; D tổng hàm tổng chất mẫu thử 3.3.10.5 Các dung môi chạy sắc kí: Nớc: amoniac (tØ träng 0,880): trinatrixitrat (95 ml : ml : g) n-Butanol: n−íc: etanol: amoniac (tØ träng 0,880) (600 : 264 : 135 : 6) Butan - - one: axeton: n−íc (7 : : 3) Butan - - one: axeton: n−íc: amoniac (tØ träng 0,880) (700 : 300 : 300 : 2) Butan - - one: axeton: n−íc: amoniac (tØ träng 0,880) (700 : 160 : 300 : 2) n- Butanol: axit axetic băng: nớc (4 : : 5) Lắc phút để yên cho lớp tách Sử dụng lớp bên làm dung môi s¾c kÝ 19 tcvn 6470 : 1998 3.3.11 PhÐp thư nhận biết giới hạn nhanh sắc kí lớp mỏng (dự kiến)*) 3.3.11.1 Nguyên tắc Các tạp chất màu đợc xác định sắc kí lớp mỏng (T L C) mỏng silicagen 3.3.11.2 Chuẩn bị dung dịch: Dung dịch 1: Hoà tan 40 mg chất màu thực phẩm cần thử hỗn hợp metanol/ nớc (50/50) pha loãng đến 10 ml dung môi Dung dịch 2: Pha loãng 0,1 - 0,5 ml **) dung dịch thành 10 ml hỗn hợp metanol/ nớc (50/50) Dung dịch (dung dịch chuẩn): Hoà tan 40 mg phẩm màu chuẩn tơng ứng hỗn hợp metanol/ nớc (50/50) pha loãng đến 10 ml dung môi 3.3.11.3 Cách tiến hành Chấm àl từ dung dịch 1; dung dịch dung dịch chuẩn Đặt mỏng vào buông khai triĨn cã chøa n- butanol/ etanol/ n−íc/ dung dÞch amoniac (50 / 25 / 25 / 10) dung môi chạy tới điểm phía cách vết chấm mẫu 15 cm Các vết chấm xuất sắc đồ dịch chuyển gần tới giá trị Rf Bất kỳ vết khác xuất sắc đồ không lớn vết xuất sắc đồ Chú thích Đôi rửa (tẩy) vết chấm sắc đồ thực phép thử gần Trong trờng hợp này, cách tiến hành đợc mô tả tài liệu FNP 31/ (1984), trang A 10 đợc cải tiến nh sau: "Cạo điểm phụ khỏi mỏng cạo điểm tơng đơng vị trí tơng ứng trắng Đặt từng" 3.4 Chất chiết đợc ête 3.4.1 Phơng pháp I 3.4.1.1 Thiết bị *) **) Việc sử dụng phơng pháp thay đổi Tuỳ theo giới hạn tạp chất màu màu phụ đợc phép có chất màu kiĨm tra (1 ®Õn %) 20 tcvn 6470 : 1998 Bé chiÕt chÊt láng / chÊt láng kiĨu h−íng lên trên, có phận phân phối thuỷ tinh xèp, dung tÝch lµm viƯc lµ 200 ml Mét mÈu dây đồng thau đợc treo lơ lửng qua ngng miếng dây đồng nhỏ, tròn (0,5 g) đợc cho vào bình cất 3.4.1.2 Ête : Dietyl ête diisopropyl ête Ngay trớc sử dụng, cần phải cho ête chng cất qua cột oxit nhôm - loại dành cho sắc kí - cao 30 cm, để loại bỏ peroxit chất cản Thử để đảm bảo hết peroxit theo cách sau: Pha dung dịch sắt thioxyanat không màu cách trộn lợng dung dịch sắt sunfat 0,1 N với lợng tơng đơng amoni thioxyanat loại bỏ hết vết màu đỏ - ion sắt titan clorua Thêm 10 ml ête vào 50 ml dung dịch lắc hỗn hợp thật mạnh phút Không có màu đỏ xuất 3.4.1.3 Cách tiến hành a) Chiết ête tính kiềm: cân xác khoảng 5,0 g mẫu phẩm màu, hoà tan 150 ml nớc, thêm 2,5 ml dung dịch NaOH N chuyển dung dịch vào dụng chiÕt, pha lo·ng b»ng n−íc tíi 200 ml Thªm 200 ml ête vào bình cất chiết hai với tốc độ hồi lu khoảng 15 ml/phút Giữ lại dung dịch màu Chuyển dịch chiết ête vào phễu chiết rửa dịch chiết ête với lợng (lần) ì 25 ml NaOH 0,1 N sau rửa nớc Cho chng cất ête phần từ bình dung tích 150 ml, cân khối lợng trớc, có chứa miếng đồng tròn, sạch, cho giảm thể tích tới khoảng ml b) Chiết ête tính axit: thêm vào dung dịch màu đợc giữ lại tõ (a) - ml axit HCl N, trén đem chiết lợng ête nh mục (a) Rửa dịch chiết ête lần ì 25 ml axit HCl 0,1 N sau rửa nớc Chuyển phần vào bình chứa chất chiết kiềm tính bốc hơi, cẩn thận làm bay toàn ête Sấy khô hoàn toàn tủ sấy 850 20 phút, sau bình thí nghiệm nguội bình hút ẩm 30 phút, đem cân Lặp lại trình sấy khô làm nguội có khối lợng không đổi Độ tăng khối lợng bình thử nghiệm biết trớc khối lợng, đợc biểu diễn phần trăm khối lợng mẫu thử, "chất chiết đợc ête" 3.4.2 Phơng pháp ll 3.4.2.1 Thiết bị: Bộ chiết soclet Một mẩu dây đồng thau đợc treo lơ lửng qua phần ngng dây đồng nhỏ (0,5 g) đợc cho vào bình chng cất 3.4.2.2 Ête: Dietyl ête diisopropyl ête Tinh chế ête nh dẫn phơng pháp l 21 tcvn 6470 : 1998 3.4.2.3 Cách tiến hành Cân xác khoảng g mÉu phÈm mµu Chun vµo èng chiÕt soclet (thimble) chiết với 150 ml ête Đem cô đặc dịch chiết ête thiết bị cách nớc khoảng ml Làm khô phần cặn "đĩa bốc hơi" biết khối lợng, bếp cách thuỷ, sau sấy khô 1050 đến có khối lợng không đổi Độ tăng khối lợng "đĩa bay hơi", đợc biểu thị phần trăm khối lợng mẫu thử, "chất chiết ête" 3.5 Các chất có phẩm màu đỏ tía (lakes) không tan axit clohydric 3.5.1 Thuốc thử Axit clohydric đậm đặc; Axit clohydric nồng độ 0,5 % V/V 3.5.2 Cách tiến hành Cân xác khoảng g phẩm màu đỏ tÝa cho vµo mét cèc cã má dung tÝch 500 ml Thêm 200 ml nớc 60 ml axit clohydric đậm đặc Đun sôi đến hoà tan toàn mµu vµ alumin Läc qua phƠu läc xèp sè biết khối lợng Rửa phễu lọc axit clohydric HCl 0,5 % nãng cho ®Õn n−íc rưa không màu Sấy khô phễu đến khối lợng không đổi 1350C Biểu thị khối lợng cặn phần trăm khối lợng lấy 3.6 Nền trắng chất màu triarylmetan đợc sunfonat hoá 3.6.1 Nguyên tắc Không khí đợc thổi qua dung dịch nớc có chứa clorua dimetylformamit Trong điều kiện này, chất trắng đợc oxi hoá thành chất màu độ tăng khả hấp thụ số đo lợng chất nỊn tr¾ng vèn cã (trong mÉu) 3.6.2 Thc thư * Dimetylformamit (DMF) Dung dịch A: Cân 10,0 g CuCl2 2H2O vµ hoµ tan 200 ml DMF Chun vào bình định mức dung tích L thêm DMF làm đầy đến vạch mức 22 tcvn 6470 : 1998 Dung dịch B: Cân xác khối lợng mẫu thử định Hoà tan khoảng 100 ml nớc, chuyển lợng vào bình định mức dung tích L thêm nớc tới vạch mức 3.6.3 Cách tiến hành Chuẩn bị dung dịch sau: − Dung dÞch a: Dïng pipet cho 50 ml DMF dung dịch A vào bình định mức dung tích 250 ml Đậy màng "parafilm" đặt vào chỗ tối Dung dịch b: Dùng pipet cho xác 10 ml dung dịch B vào bình định mức dung tích 250 ml Thêm 50 ml DMF Đậy màng "parafilm" đặt vào chỗ tối Dung dịch c: Dùng pipet hút 50 ml DMF vào bình ®Þnh møc dung tÝch 250 ml Cho sơc khÝ qua dung dịch 30 phút theo cách dới đây: Luồn pipet ml vào hộp có gắn với nguồn dạng uốn cong để thổi không khí Cho khí thổi qua cách từ từ Nhng đầu pipet vào dung dịch chứa bình điều chỉnh dòng khí với tốc độ nhanh nhng kiểm soát đợc Sau 30 phút, kéo pipet khỏi dung dịch tráng, rửa thành pipet nớc, cho vào bình, sử dụng bình tia Sau đó, tắt dòng không khí Các dung dịch d1 d2: Dùng pipet hút xác 10 ml dung dịch B cho vào hai bình định mức riêng rẽ, dung tích 250 ml, theo cách nh làm với dung dịch b Thêm 50 ml dung dịch A vào bình Cho sục không khí qua dung dịch 30 phút, sử dụng phơng pháp nêu Sau sục không khí nhanh qua dung dịch trên, cho thêm nớc vào tất bình gần tới vạch mức Khi DMF nớc trộn với có phát nhiệt, đặt bình vào thùng nớc (nớc lấy từ vòi nớc) chúng nguội xuống nhiệt độ phòng Đừng giữ bình lâu mức cần thiết; thông thờng 10 phút đủ Đổ thêm nớc xác đến vạch mức Đo dung dịch máy quang phổ Toàn tiến trình đợc thực nhanh tốt 3.6.4 Xác định quang phổ Vẽ đờng cong dới từ bớc sóng 700 - 500 nm, sử dụng dải hấp thụ cuvet 0,1 cm Cho chạy tất đờng cong đồ thị phổ, (để xác tối đa) bỏ số đọc hình số bớc sóng tối đa 620 nm 635 nm cách quay ngợc lại sau đờng cong đợc dựng lên 23 tcvn 6470 : 1998 3.6.5 Mẫu so sánh Đờng cong Cuvet Cuvet Nhận xét a a Đặt điểm 700 nm, cho chạy; ghi lại độ hấp thụ Abs chuẩn chất màu a b Cho chạy đờng cong mà không đặt điểm hiệu chỉnh Ghi lại độ hấp thụ tối đa c c Đặt ®iĨm ë 700 nm; ghi ®é hÊp thơ Abs chuẩn chất màu 4a c d1 Chạy đờng cong không đặt điểm hiệu chỉnh Ghi lại độ hấp thụ tối đa 4b c d2 Chạy đờng cong không đặt điểm hiệu chỉnh; ghi độ hấp thụ tối đa (d1 d2 lần đo song hành) Chú thích Các cu vét cần phải tráng rửa kỹ trớc lần đo Để rửa theo dọc cuvet, sử dụng lần tráng riêng rẽ với Ýt nhÊt 40 ml dung dÞch mÉu thư 3.6.6 TÝnh toán [(4 3) (2 1)] ì 25 × 100% = % chÊt nỊn tr¾ng a × cm ì mg mẫu ì tỷ số a khả hấp thụ 100% chất màu; mg mẫu lợng mẫu thử đợc cân, tính mg; MW chất màu tỷ số = (đợc cho tài liệu riêng); MW chất trắng 1, 2, độ hấp thụ tối đa cuvet 1, 2, 24 tcvn 6470 : 1998 3.7 Các hợp chất hữu khác chất màu 3.7.1 Chú thích chung Để tách xác định hợp chất không màu, sắc kí lỏng (HPLC) có vài u kỹ thuật sắc kí khác, là: cải thiện đợc trình tách, tốc độ, (có thể tự động hoá), độ xác Khi xác định tên hợp chất hữu cơ, cần đến mẫu thử từ nguyên liệu bắt gặp, trớc phân tích màu cụ thể (đặc biệt) Thông thờng phơng pháp HPLC đợc phác thảo mô tả chi tiết Nên nhớ sắc kí lỏng thời kì phát triển đáng kể Các nguyên liệu nhồi cột, cột mao dẫn, kiểu độ nhậy detectoz vài khía cạnh tiếp tục thu hút ý nhà sản xuất thế, phát triển chúng dẫn đến việc tách đợc tạp chất, chất thờng xuyên đợc kể đến mô tả phẩm màu thực phẩm Phơng pháp ®−ỵc chän sư dơng mét cét trao ®ỉi anion, nh−ng cột pha ngợc dùng cách rộng rãi cho độ tách lý tởng Phơng pháp khác (truyền thống) dùng sắc kí cột, kĩ thuật nhằm thu thập phần rửa giải phân đoạn, sử dụng phổ hấp thụ tử ngoại chúng để nhận biết hợp chất có mặt, để tính toán nồng độ chất 3.7.2 Xác định sắc kí lỏng Các hợp chất hữu - chất màu - đợc tách sắc kí lỏng, có sử dụng gradien rửa giải đợc định lợng cách so sánh khoảng "pic" chúng với "pic" thu đợc từ (dung dịch) chuẩn biết Các điều kiện mô tả cần xử lý nh hớng dẫn mà thôi, cần đến sửa đổi thêm để đạt đợc độ tách tốt Các điều kiện để tiến hành sắc kí đợc cho dới đây: 1) Thiết bị (Instrument) sắc kí lỏng cao áp, có lắp phận phù trợ: gradien rửa giải 2) Detector Detector UV (tử ngoại) ghi độ hấp thơ ë b−íc sãng 254 nm 3) Cét − b»ng thép không rỉ, m x 2,1 mm (đờng kính trong) 4) ChÊt nhåi cét − chÊt trao ®ỉi anion mạnh màng mỏng (SAX) Ví dụ: phần t amon ®−ỵc thay thÕ líp phđ polime metacrylat % theo khối lợng 5) Nồng độ mẫu thử: % (khối lợng / khối lợng) dung dịch natri tetraborat 0,01 M 6) Thể tích bơm 10 àl 25 tcvn 6470 : 1998 7) Hệ dung môi thø nhÊt: natri tetraborat 0,01 M • thø hai: natri tetraborat 0,01 M natri peclorat 0,1 M 8) Gradient − xem theo chuyên luận 9) Tốc độ dòng 1,0 ml/phút 10) Nhiệt độ phòng Các điều kiện thực nghiệm khác nh: chiều dài cột, loại chất nhồi cột hệ dung môi, cách thức sử dụng cặp ion cho sai lệch (biến thiên) đặc tính rửa giải nh trật tự độ chuyển đổi 3.7.3 Xác định sắc kí cột 3.7.3.1 Thiết bị (ống) Cột sắc kí (xem hình dới) Máy đo quang phổ phù hợp cho sử dụng vùng ngoại Đơn vị: cm 3.7.3.2 Chuẩn bị cột sắc kí Chuẩn bị khối bột xenluloza nhuyễn loại Whatma, dung dịch amoni sunfat 25% Nếu dùng loại xenluloza khác, cần phải loại có hàm lợng sắt (Fe) rÊt thÊp 26 tcvn 6470 : 1998 Thư nghiƯm: Chn bị cột nh dẫn cho 200 ml dung dịch amoni sunfat 25% chảy qua cột Độ hấp thụ tử ngoại dung dịch phải đủ thấp để tránh gây nhiễu cho chất định phân tích Dùng khoảng 75 g xenluloza cho 500 ml chất lỏng Đặt đĩa nhỏ vào lới thép không rỉ vào chỗ thắt phía vòi phễu ống sắc kí Rót lợng vừa đủ bột nhào vào ống (sắc kí) để có cột với độ cao cách miệng ống khoảng cm Thỉnh thoảng vỗ nhẹ vào ống để đảm bảo cột đợc nhồi chặt Rửa cột 200 ml chất rửa trôi 3.7.3.3 Cách tiến hành Cho 0,200 g mẫu phẩm màu vào cốc có mỏ thích hợp, hoà tan 20 ml nớc Thêm khoảng g bột xenluloza Thêm 50 g amoni sunfat để muối hoá phẩm màu Chuyển hỗn hợp vào ống sắc kí, tráng cốc dung dịch amoni sunfat 25% cho nớc tráng vào ống sắc kí Để cho cột rút nớc ngừng chảy, gần nh ngừng chảy Thêm dung dịch amoni sunfat vào cột tốc độ tơng đơng với tốc độ dòng chảy qua cột Thu vào ống 100 ml dung dịch chảy theo phân đoạn Tiếp tục thu đợc 12 phần tách nh Giữ lại cột chất cột kiểm tra xong phần dịch tách cuối Lắc trộn kĩ phần dịch tách đợc, đo phổ hấp thụ tử ngoại dung dịch bớc sóng từ 220 nm − 400 nm NÕu phỉ hÊp thơ cđa phần dịch thứ 12 cho thấy có mặt hợp chất nào, tiếp tục thu phần tách từ cột hợp chất có đợc rửa trôi hết Thờng thờng gặp hợp chất Việc nhận biết định lợng đợc hoàn tất cách so sánh phổ hấp thụ chất đợc rửa trôi với phổ hấp thụ dung dịch hợp chất tinh khiết loại dung môi Khi có mặt nhiều hợp chất, với lợng đáng kể phần dịch tách phân đoạn nào, số liệu ®o quang phỉ sÏ chØ cho thÊy ®iỊu ®ã Trong trờng hợp này, khối lợng hợp chất khác cần phải xác định trình sử dụng phân tích quang phổ cuả hỗn hợp chất hấp thụ Một vài mẫu thử có chứa lợng nhỏ chất khác nhau, đặc biệt muối vô cơ, cho "độ hấp thụ nền" Hiệu chỉnh điều nh sau: Xác định lợng chất hấp thụ phần dịch thu từ cột trớc, liền sau phần dịch tách phân đoạn mà ta bắt gặp hợp chất Lấy độ hấp thụ quan sát đợc phần dịch tách có chứa hợp chÊt ®ã tõ ®i mét nưa (1/2) cđa tỉng hai lần xác định Phần lại (hiệu) đợc lấy làm độ hấp thụ có hợp chất 27 tcvn 6470 : 1998 3.8 Gèc sunfat, tÝnh theo natri sunfat 3.8.1 Cân 5,0 g mẫu phẩm màu, cho vào bình nón dung tích 250 ml hoà tan khoảng 100 ml nớc cách hâm nóng bình cách thuỷ Thêm 35 g natri clorua không chứa sunfat Đậy nút bình, lắc tròn định kì vòng Làm nguội, chuyển dung dịch natri clorua bão hoà, vào bình định mức dung tích 250 ml, pha loãng tới vạch mức 200 Lắc bình, đem lọc dung dịch qua giấy lọc khô Dùng pipet hút 100 ml dịch lọc cho vµo mét cèc thủ tinh 500 ml, pha lo·ng tới 300 ml nớc axit hoá axit clohydric, thêm ml d Đun dung dịch tới sôi, thêm lợng d dung dịch bari clorua 0,25 N, giọt, vừa thêm vừa khuấy Để yên hỗn hợp bếp điện h, để qua đêm nhiệt độ phòng sau gia nhiệt tới khoảng 800 tủa lắng xuống Läc bá tđa bari sunfat, rưa b»ng n−íc nãng vµ ®èt ë ®é nãng mµu ®á ®Ëm, mét chÐn nung biết khối lợng, thu đợc khối lợng không đổi 3.8.1 Tiến hành xác định mẫu trắng, áp dụng hiệu chỉnh cần thiết khối lợng bari sunfat tìm thấy phép thử (nếu có), tính toán kết theo natri sunfat Khối lợng natri sunfat mÉu thư = 2,5 x khèi l−ỵng hiệu chỉnh bari sunfat x 0,6086 Trình bày kết dới dạng phần trăm khối lợng mẫu thử lấy 3.9 Các gốc amin thơm không sunfonat hoá 3.9.1 Nguyên tắc Các gốc amin thơm không sunfonat hoá đợc chiết tách toluen từ dung dịch mẫu thử kiềm tính, đợc chiết lại axit sau đem đo máy quang phổ, sau diazo hoá lần kết hợp lần Chúng đợc trình bày dới dạng anilin, trừ biết trớc chúng dạng amin khác 3.9.2 Thiết bị Máy đo quang phổ đo dải nhìn thấy đợc 3.9.3 Thuốc thử Các thuốc thử phải đợc công nhận có chất lợng thuốc thử phân tích Nớc cất, nớc có độ tinh khiết tơng đơng Toluen; 28 tcvn 6470 : 1998 Axit clohydric, dung dÞch xÊp xØ N; Axit clohydric, dung dÞch xÊp xØ N; Kali bromua, dung dÞch xÊp xØ 50 %; Natri cacbonat, dung dÞch xÊp xØ N; Natri hydroxit, dung dÞch xÊp xØ N; Natri hydroxit, dung dÞch xÊp xØ 0,1 N; Muèi R (muèi - naphtol - 3,6 axit disunphonic, dinatri), dung dÞch xÊp xØ 0,05 N; Natri nitrit, dung dÞch xÊp xØ 0,5 N; 10 Dung dịch anilin chuẩn Cân 0,100 g anilin cất lại vào chén cân nhỏ, sau tráng rửa cho vào bình định mức, dung tích 100 ml, tráng cốc cân vài lần nớc Thêm 30 ml dung dịch axit clohydric xấp xỉ N pha nớc tới vạch, nhiệt độ phòng Gọi dung dịch A Đem pha loãng 10,0 g dung dịch A nớc tới 100 ml bình định mức, trộn kĩ Gọi dung dịch B; ml dung dịch tơng đơng với 0,0001 g anilin (Khi sư dơng míi pha dung dÞch B) 3.9.4 Cách tiến hành 3.9.4.1 Chuẩn bị đồ thị chuẩn Đong vào dãy bình định mức, dung tích 100 ml, lần lợt thể tích anilin chuẩn, (dung dịch B) nh− sau: ml, 10 ml, 15 ml, 20 ml, 25 ml Pha lo·ng tíi 100 ml b»ng dung dịch axit clohydric N trộn kĩ Dùng pipet hút 10 ml từ hỗn hợp cho vào ống nghiệm khô, làm nguội 10 phút cách ngâm vào cốc có chứa hỗn hợp đá/nớc Thêm vào ống nghiệm ml dung dịch kali bromua 0,05 ml dung dịch natri nitrit Trộn để yên 10 phút bồn đá/nớc Lấy bình định mức dung tích 25 ml, cho vào bình ml dung dịch muối R 10 ml dung dịch natri cacbonat Rót dung dịch anilin xử lý vào bình riêng có chứa dung dịch muối R dung dịch natri cacbonat, tráng c¸c èng nghiƯm b»ng mét Ýt n−íc Dïng n−íc pha loãng tới vạch mức Đậy nút bình, trộn kĩ dung dịch bình để yên 15 phút chỗ tối Đo độ hấp thụ dung dịch kết hợp bớc sóng 510 nm cuvet 40 mm, sử dụng mẫu so sánh hỗn hợp gåm 10,0 ml dung dÞch axit clohydric N: 10,0 ml dung dÞch natri cacbonat: 2,0 ml dung dÞch muèi R, pha lo·ng ®Õn 25,0 ml n−íc Dùng mét sè đồ thị tơng quan độ hấp thụ khối lợng anilin phần 100 ml dung dịch anilin 29 tcvn 6470 : 1998 3.9.4.2 Chuẩn bị kiểm tra dung dịch thử Cân khoảng 2,0 g mẫu phẩm màu, xác đến 0,01 g Cho vào phễu chiết có chứa 100 ml nớc Đổ theo thành phễu lợng 50 ml nớc nữa, lắc tròn để hoà tan mẫu thử, thêm ml dung dịch natri hydroxit N Chiết với lợng ì 50 ml toluen rửa dịch chiết toluen kết hợp lợng 10 ml dung dịch natri hydroxit 0,1 N để loại hết vết màu Chiết phần toluen rửa lần ì 10 ml dung dịch axit clohydric N pha loãng phần dịch chết gộp chung nµy tíi 100 ml b»ng n−íc Trén kÜ Gäi dung dịch T Dùng pipet hút 10,0 ml dung dịch T cho vào ống nghiệm khô, làm nguội 10 phút cách ngâm cốc có hỗn hợp đá/nớc, thêm ml dung dịch kali bromua tiến hành tiếp nh mô tả cho việc chuẩn bị đồ thị chuẩn, bắt đầu với việc thêm 0,05 ml dung dịch natri nitrit Sử dụng dung dịch đợc chuẩn bị từ 10,0 ml dung dịch T, 10 ml dung dịch natri cacbonat 2,0 ml dung dÞch R, pha n−íc tíi 25 ml, làm dung dịch so sánh phép đo độ hấp thụ Đọc đồ thị chuẩn khối lợng anilin tơng ứng với độ hấp thụ quan sát đợc từ dung dịch mẫu thử 3.9.5 Tính toán Phần trăm gốc amin thơm không sunfonat hoá (tính theo anilin) có mÉu thư Khèi l−ỵng anilin x 100 = Khèi l−ỵng mẫu thử lấy 3.10 Hàm lợng nớc (hay lợng hao hụt sau sấy khô) 3.10.1 Các chất phẩm màu có chứa nhóm SO3Na hay COONa thờng có tính hút ẩm, lợng nớc chúng giữ lại từ nơi sản xuất (hoặc sau hấp thơ tõ khÝ qun) nãi chung sÏ hiƯn diƯn phẩm màu dạng hydrat Khi phẩm màu đợc sấy khô 1350, độ hao khối lợng tơng đơng với tổng hàm lợng nớc, nhng điều cho trờng hợp Ví dụ, Erytrosin Ponceau R, loại giữ (ngậm) phân tử nớc dạng kết tinh 1350, thông thờng thực tế phải lu ý đến điều tính tổng hàm lợng chất có mặt mẫu thử 3.10.2 Cách tiến hành C©n 2,0 g − 3,0 g mÉu mét chÐn cân biết khối lợng, có nắp tròn Chén cân thuộc dạng lùn, có đờng kính khoảng 50 mm cao 30 mm thích hợp Sấy nóng nhiệt độ mô tả 50 có đợc khối lợng không đổi Biểu thị độ hao hụt khối lợng theo phần trăm khối lợng mẫu ®· lÊy 30 tcvn 6470 : 1998 3.11 ChÊt kh«ng tan n−íc C©n 4,5 − 5,5 g1) mÉu thư vào cốc thuỷ tinh dung tích 250 ml Thêm khoảng 200 ml nớc nóng (800 - 900), khuấy để hoà tan, dung dịch nguội tới nhiệt độ phòng Lọc dung dịch qua phễu lọc thuỷ tinh xốp G 4, biết khối lợng (B.S.1752, phễu lọc đĩa xốp đợc sử dụng phòng thử nghiệm) rửa nớc lạnh dịch rửa không màu Sấy khô phễu lọc cặn 1350 có đợc khối lợng không đổi Biểu thị khối lợng cặn theo phần trăm khối lợng mẫu thử lấy 3.12 Các gốc clorua vµ sunfat tan n−íc cã ë phÈm mµu đỏ tía (lakes) có nguyên tố nhôm Cân xác 10 g mẫu thử Thêm 250 ml nớc Khuấy để mẫu thử hoà vào nớc sau khuấy định kì khuấy, vòng 30 phút Đem lọc dung dịch Đong 50 ml dịch lọc, thêm 50 ml nớc axit hoá ml dung dịch axit nitric 1,5 N Xác định hàm lợng clorua phơng pháp chuẩn độ điện sử dụng cho phẩm màu tan đợc Đong lấy 50 ml dịch lọc, pha loãng tới 300 ml nớc axit hoá axit clohydric, thêm ml d Đun dung dịch tới sôi thêm lợng d dung dịch bari clorua 0,25 N, tõng giät, võa thªm võa khy Thùc hiƯn trình phân tích với công đoạn vô hoá, lọc, nung kết tủa nh mô tả phơng pháp dùng để xác định sunfat phẩm màu tan đợc 1) Chú thích Một vài phẩm màu có tính tan g / 200 ml việc sử dụng lợng cân đợc trình bày chuyên luận, mục "kiểm tra" 31 ... 2) TCVN 6470 : 1998 ban kü tht tiªu chn TCVN/ TC/F4 Phơ gia thùc phÈm biªn soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn - Đo lờng - Chất lợng đề nghị, Bộ Khoa học, Công nghệ Môi trờng ban hành tcvn 6470 : 1998 TIêuchuẩn... hành tcvn 6470 : 1998 TIêuchuẩn vIệt nam tcvn 6470 : 1998 Phô gia thùc phÈm − Phơng pháp xác định cho phẩm màu thực phẩm Food additives Methods for food colours Tiêu chuẩn qui định phơng pháp... 0,00585 g natri clorua BiĨu thÞ kÕt phần trăm lợng mẫu lấy Chú thích Nhiệt độ qui định tiêu chuẩn độ C (0C) tcvn 6470 : 1998 Các chất không tan clorofooc 2.1 Thiết bị tủ sấy, dải nhiệt độ: 00