Đánh giá kết quả nuôi cấy phôi và chuyển phôi ngày 5

Nuôi cấy phôi và chuyển phôi ngày 5 (blastocyst) là xu hướng phát triển chung của các trung tâm hỗ trợ sinh sản trên thế giới vì nó phù hợp sinh lý tự nhiên và giúp lựa chọn theo tự nhiên những phôi có chất lượng tốt để tăng tỷ lệ làm tổ. Vì vậy, nghiên cứu nhằm đánh giá kết quả việc thực hiện nuôi cấy phôi và chuyển phôi ngày 5 (tươi và đông) tại trung tâm IVF – bệnh viện Hùng Vương.

Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 2 * 2013 ĐÁNH GIÁ KẾT QUẢ NI CẤY PHƠI VÀ CHUYỂN PHƠI NGÀY 5  Vũ Đình Tn*, Hồng Thị Bích Tuyền*, Lý Thái Lộc*.  TĨM TẮT   Đặt vấn đề: Ni cấy phơi và chuyển phơi ngày 5 (blastocyst) là xu hướng phát triển chung của các trung  tâm hỗ trợ sinh sản trên thế giới vì nó phù hợp sinh lý tự nhiên và giúp lựa chọn theo tự nhiên những phơi có  chất lượng tốt để tăng tỷ lệ làm tổ.  Mục tiêu nghiên cứu: Đánh giá kết quả việc thực hiện ni cấy phơi và chuyển phơi ngày 5 (tươi và đơng)  tại trung tâm IVF – BV Hùng Vương.  Phương pháp nghiên cứu: mơ tả cắt ngang.  Kết quả: Có 89 cas thỏa điểu kiện thực hiện ni cấy phơi đến ngày 5. Tỷ lệ phơi phát triển khi ni cấy đến  ngày 6 (phơi hữu dụng) có sự khác biệt so với ngày 5 (58,5% vs. 69,0%, p = 0,0039). Có 30 cas đủ điều kiện  chuyển phơi tươi, và có 27 cas chuyển phơi đơng. Tỷ lệ có thai lần lượt là 43,3% vs. 51,9%; và tỷ lệ làm tổ theo  thứ tự là 33,3% vs 37,0%,  Kết luận: Việc thực hiện ni cấy phơi đến giai đoạn phơi nang và chuyển phơi ngày 5 đã giúp cho những  cặp vợ chồng thực hiện ICSI đạt kết quả khả quan với chất lượng phơi tốt và giảm thiểu tỷ lệ đa thai (đặc biệt tam  thai) vì chỉ chuyển tối đa 2 phơi. Đặc biệt, việc ni cấy phơi tiếp tục đến ngày 6 nên được khuyến khích và việc  chuyển phơi đơng ngày 5 là một xu hướng mà hiện nay nhiều trung tâm IVF trên thế giới đang thực hiện và  trung tâm IVF Hùng Vương đang ngày càng khẳng định đi đúng hướng.  Từ khóa: phơi nang, ngày 5, ngày 6, chuyển phơi tươi, chuyển phơi đơng, tỷ lệ có thai, tỷ lệ làm tổ.  ABSTRACT  RESULTS OF EMBRYO CULTURE AND TRANSFER ON DAY 5  Vu Dinh Tuan, Hoang Thi Bich Tuyen, Ly Thai Loc   * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 2 ‐ 2013: 28 ‐ 34  Background: embryo culture and transfer on day 5 (blastocyst) is the general trend of assisted reproduction  centers in the world because it coincides to the natural physiological as well as help the natural selection of good  embryos to increase the implantation rate.  Objectives: Evaluation of the implementation of embryo culture and embryo transfer on day 5 (fresh and  frozen) at IVF center ‐ Hung Vuong Hospital.  Methods: cross‐sectional descriptive.  Results: There are 89 cases eligible for perform embryo culture to day 5. The rate of embryo development to  blastocyst (useful embryos) when cultured continue to day 6 is different compared to day 5 (69.0% vs. 58.5%,  respectively,  p  =  0.0039).  There  are  30  cases  eligible  for  fresh  embryo  transfer  there  are  27  cases  for  frozen  transfer. The pregnancy rate was 43.3% vs. 51.9%, respectively and implantation rates in the order 33.3% vs.  37.0%.  Conclusions: The implementation of embryo culture to the blastocyst stage and embryo transfer day 5 has  helped couples perform ICSI achieved positive results with good quality embryos and reduce the rate of multiple  pregnancies  (especially  triple  pregnant)  because  only  a  maximum  of  two  embryos  transferred.  In  particular,  *: Bệnh viện Hùng Vương  Tác giả liên lạc: BS Vũ Đình Tn  ĐT: 0903199464  Email: drtuanvu1977@gmail.com   28 Hội Nghị Việt Pháp Châu Á Thái Bình Dương lần XII Ngày 16‐17 Tháng 5 Năm 2013  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 2 * 2013  Nghiên cứu Y học embryo culture to day 6 should be encouraged and the transfer of embryos frozen day 5 is a current trend that  many IVF centers around the world are doing and Hung Vuong IVF center is increasingly confirmed the right  direction.  Key  words:  blastocyst,  day  5,  day  6,  fresh  embryo  transfer,  frozen  embryo  transfer,  pregnant  rate,  implantation rate.  mức độ phân mảnh, sự xuất hiện sớm giai đoạn  ĐẶT VẤN ĐỀ  nén của phôi vào ngày 3, độ đồng đều của phôi  Điều  trị  hiếm  muộn  bằng  kỹ  thuật  thụ  tinh  bào, độ mịn của bào tương, thời điểm đánh giá  trong  ống  nghiệm  đã  được  ứng  dụng  rộng  rãi  phôi,  đặc  điểm  phân  mảnh  bào  tương  (phân  trong  nhiều  thập  kỷ  qua  trên  thế  giới.  Phác  đồ  mảnh tập trung, phân mảnh rời rạc), trạng thái  điều  trị  ngày  càng  hiệu  quả  hơn  với  số  lượng  nhân  của  mỗi  phơi  bào,  sự  phân  bố  về  mặt  nang nỗn vừa phải và chất lượng nang tối ưu.  khơng gian của phơi bào, mức độ nén của phơi  Tỷ lệ thụ tinh cao, chất lượng phơi tốt đạt được  bào  Nhưng do hạn chế về thời gian đầu triển  nhiều và đặc biệt là hệ thống ni cấy phơi ngày  khai, nên chúng tơi chỉ mới tập trung căn cứ vào  càng hồn thiện đã cho phép một số trung tâm  các  đặc  điểm  đánh  giá  chất  lượng  phơi  ngày  3  ni cấy phơi tiếp đến ngày 5 thậm chí ngày 6(5).  theo  đánh  giá  đồng  thuận  Alpha,  để  lựa  chọn  Phôi ở giai đoạn này được gọi là phôi nang. Tỷ  phôi sao cho đạt hiệu quả  tối  ưu  nhất  khi  phát  lệ phôi phát triển tiếp đến giai đoạn phôi nang  triển phôi đến ngày 5.  đạt gần 66% với tỷ lệ làm tổ trên 50%(4,5).   Ứng  dụng  hệ  thống  ni  cấy  phơi  nang,  bệnh nhân đạt được những kết quả như:  Phơi được lựa chọn có khả năng làm tổ cao.  Chuyển  ít  phơi  nên  hạn  chế  khả  năng  đa  thai.  Tỷ lệ trẻ sinh sống từ chuyển phôi nang cao  hơn 1,35 lần so với chuyển phôi ở giai đoạn phôi  sớm.  Nhưng  bên  cạnh  đó,  bệnh  nhân  phải  chấp  nhận số phơi dư trữ đơng ít vì một tỷ lệ khá cao  số  phôi  không  thể  tiếp  tục  phát  triển  đến  giai  đoạn phôi nang.   Nghiên  cứu  của  chúng  tôi  đặt  ra  vấn  đề  ở  đây  là  liệu  hệ  thống  nuôi  cấy  phôi  hiện  nay  (ngày  3)  tại  trung  tâm  chúng  tơi  có  thể  vẫn  áp  dụng cho hệ thống nuôi cấy phôi đến giai đoạn  phôi  nang  (ngày  5).  Nếu  như  chúng  ta  có  thể  ni cấy thành cơng và hiệu quả thì sẽ dễ dàng  chọn  lựa  phơi  để  chuyển  vì  những  phơi  phát  triển được đến giai đoạn này thì khả năng làm tổ  cao, giúp tăng tỷ lệ có thai và cũng tránh tỷ lệ đa  thai do g1AB  2BB  2BC  3BB    4AA  4AB  4BB     5AA  6AA  32 Hội Nghị Việt Pháp Châu Á Thái Bình Dương lần XII Ngày 16‐17 Tháng 5 Năm 2013  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 2 * 2013  ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Phương pháp  Mô tả cắt ngang.  Đối tượng  Tất cả những ca thực hiện IVF vào ngày chọc  hút trứng, số lượng trứng thu nhận được từ  10  trứng  trở  lên,  tuổi  người  vợ  (hoặc  Donor)  dưới  40 tuổi, đồng ý tham gia thực hiện và có ít nhất 4  phơi tốt vào ngày 3.  Nghiên cứu Y học Thơng số Tổng số ca nuôi cấy phôi N5 Tổng số ca chuyển phôi N5 Nội mạc tử cung (X ± SD) Tuổi trung bình BN (X ± SD) Số phơi chuyển (X ± SD) Chất lượng phôi chuyển (X ± SD) Tươi 89 30 9,8 ± 1,5 31,1 ± 4,0 1,96 ± 0,50 0,86 ± 0,74 Đông 27 10,2 ± 1,7 31,7 ± 4,2 2,0 ± 0,33 1,0 ± 0,74 * Ghi chú: chất lượng phôi chuyển là tỷ lệ số phôi tốt  ngày 5 trên tổng số phôi chuyển.  Tiêu chuẩn loại trừ  Không  đạt  những  tiêu  chuẩn  trên  hoặc  không đồng ý tham gia.  Thời gian: từ ngày 1/1/2012 đến 31/12/2012.  * Tiến hành  Làm  các  bước  tương  tự  quy  trình  chọc  hút  trứng  (bắt  đầu  lúc  8g  sáng),  ICSI  4‐5g  sau  và  ni cấy trứng sau chích ICSI.  Chuẩn bị đĩa cấy (từ ngày 3 đến ngày 5): Vào  sáng ngày 3 (68g ± 1), tiến hành kiểm tra phơi và  quyết định chuyển phơi hoặc ni cấy tiếp đến  blastocyst. Đối với những cas ni cấy tiếp đến  blastocyst, chúng tơi chia đều 2 nhóm, ½ số phơi  hữu  dụng  được  đơng  vào  ngày  3,  ½  còn  lại  sẽ  được  ni  cấy  tiếp.  Tiến  hành  tạo  đĩa  cấy  với  mơi trường G2 plus (hệ thống giọt ni cấy nhỏ  có phủ dầu). Sau khi để đĩa mơi trường trong tủ  ủ tối thiểu 2 tiếng cho cân bằng trước khi được  sử  dụng  cho  việc  nuôi  cấy  phôi,  tiến  hành  chuyển  phôi  từ  môi  trường  G1  plus  sang  môi  trường G2 plus.   Vào sáng ngày 5 (116g ± 1), tiến hành đánh  giá phơi và quyết định số lượng phơi chuyển và  phơi đơng (nếu có).  Đối  với  những  phơi  khơng/chưa  phát  triển  thành  blastocyst,  chúng  tơi  tiến  hành  chuyển  phơi vào đĩa mơi trường G2 plus mới ni tiếp  đến ngày 6 và tiến hành đánh giá vào sáng ngày  6 (vẫn có thể tiến hành chuyển hoặc đơng phơi  vào ngày này nếu có phơi blastocyst).   KẾT QUẢ  Bảng 1: Đặc điểm bệnh nhân  Chun Đề Sức Khỏe Sinh Sản – Nhi Sơ Sinh   Bảng 2: Bảng kết quả các cas thực hiện ICSI và ni  cấy phơi đến ngày 5. Tỷ lệ làm tổ và tỷ lệ có thai sau  chuyển phơi ngày 5 (tươi và đơng).  Các biến Tươi Đông Số trứng MII thu 16,5 ± 5,1 (trung bình) Số trứng thụ tinh (tỷ lệ %) 13,1± 4,5 (78,5) Số phôi hữu dụng N3 12,1 ± 4,3 (73,5) (tỷ lệ %) Số phôi nuôi cấy N5 (tỷ lệ %) 5,8 ± 2,1 (48,1) Số phôi phát triển đến N5 3,4 ± 1,8 (58,5) (tỷ lệ %) Số phôi tốt N5 (tỷ lệ %) 1,3 ± 1,1 (37,5) Số phôi hữu dụng N6 4,0 ± 1,8 (69,0) p = 0,0039 (tỷ lệ %) Số phôi tốt N6 (tỷ lệ %) 1,8 ± 1,2 (43,7) p = 0,104 Tỷ lệ có thai (%) 43,3 (*) 51,9 (**) Tỷ lệ làm tổ (%) 33,3 37,0 * 2 ca có thai CP tươi được thực hiện khi ni cấy phơi tiếp  tục đến ngày 6 do ngày 5 phơi chưa phát triển đến giai  đoạn blastocyst.  ** 2 ca có thai CP đơng được thực hiện khi đơng phơi N6  và rã phơi trước 2‐3g.  BÀN LUẬN  Trước  hết,  tơi  xin  nhấn  mạnh  rằng  đây  là  một nghiên cứu mơ tả cắt ngang, nên khơng có  so  sánh  giữa  chuyển  phôi  tươi  và  phôi  đông  ngày  5  vì  hai  nhóm  bệnh  nhân  khơng  có  cùng  33 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 2 * 2013 những  vấn  đề  để  so  sánh.  Chúng  tơi  chỉ  muốn  đưa  ra  những  kết  quả  mà  chúng  tôi  ghi  nhận  được khi làm nghiên cứu để có một cái nhìn về  việc  ni  cấy  phơi  đến  giai  đoạn  blastocyst  và  chuyển phơi ngày 5.  Vấn đề ni cấy phơi đến ngày 5 đã và đang  thực hiện ở rất nhiều trung tâm trên thế giới. Ở  trung tâm chúng tơi đã bắt đầu triển khai từ q  4 năm 2011 và hiện đang dần đi vào ổn định về  tỷ  lệ  có  phơi  blastocyst  hình  thành  vào  ngày  5  (58,5%) tương đương với hầu hết các trung tâm  khác  và  có  sự  khác  biệt  nếu  ni  cấy  phơi  tiếp  tục  đến  ngày  6  (69,0%,  p=0,0039).  Mặc  dù  tỷ  lệ  phơi tốt vào ngày 6 khơng có sự khác biệt so với  ngày 5 nhưng nhìn vào bảng kết quả (bảng 2) ta  cũng thấy có tăng về số lượng và tỷ lệ. Do vậy,  việc ni cấy phơi tiếp tục đến ngày 6 cho thấy  có sự khác biệt về số phơi blastocyst hữu dụng  cho chuyển hoặc đơng phơi. Đây là một kết quả  thống kê chúng tơi nhận thấy khi thực hiện. Do  vậy, có nên chăng ni cấy tiếp và chuyển phơi  ngày  6  nếu  như  chưa  có  phơi  hữu  dụng  vào  ngày 5?  Chúng tơi thống kê tỷ lệ có thai chuyển phơi  tươi và chuyển phơi đơng, điều đáng ngạc nhiên  là  tỷ  lệ  có  thai  chuyển  phơi  đơng  cao  hơn  chuyển  phôi  tươi  (bảng  2),  điều  này  cũng  phù  hơp  với  một  nghiên  cứu  mới  đây  của  tác  giả  Bruce và cs (năm 2011). Điều này cho thấy việc  đông phôi hiện nay tại trung tâm chúng tôi đang  rất  ổn  định  và  giúp  chúng  tôi  mạnh  dạn  hơn  trong quy trình đơng và rã phơi ngày 5. Nhưng  do số liệu của chúng tơi còn hơi thấp nên cần có  thời gian để đưa ra một kết luận chính xác.  KẾT LUẬN  Việc  thực  hiện  ni  cấy  phôi  đến  giai  đoạn  blastocyst  và  chuyển  phôi  ngày  5  đã  giúp  cho  những cặp vợ chồng thực hiện ICSI đạt kết quả  khả quan với chất lượng phơi tốt và giảm thiểu  tỷ lệ đa thai (đặc biệt tam thai) vì chỉ chuyển tối  đa  2  phơi.  Đặc  biệt,  việc  nuôi  cấy  phôi  tiếp  tục  đến  ngày  6  nên  được  khuyến  khích  và  việc  chuyển phơi đơng  ngày  5  là  một  xu  hướng  mà  hiện nay nhiều trung tâm IVF trên thế giới đang  thực hiện và trung tâm IVF Hùng Vương đang  ngày  càng  khẳng  định  đi  đúng  theo  xu  hướng  chung.  TÀI LIỆU THAM KHẢO  Alfarawati  S, Fragouli  E, Colls  P, Stevens  J, Gutiérrez‐Mateo  C, Schoolcraft  WB, Katz‐Jaffe  MG, Wells  D.  (2011).  ”The  relationship  between  blastocyst  morphology,  chromosomal  abnormality  and  embryo  gender.”Fertil  Steril 2011  Feb;95(2):520‐4   Bruce  S,  Shapiro  MD,et  al.  (2011).  ”Evidence  of  impaired  endometrial receptivity after ovarian stimulation for  in  vitro  fertilization: a prospective randomized trial comparing fresh  and  frozen–thawed  embryo  transfer  in  normal  responders.”Fertility  and  Sterility_  Vol.  96,  No.  2,  August  2011.  Gardner  DK, Lane  M.  (1998).  ”Culture  of  viable  human  blastocyst in defined sequential serum‐free media.”European  Society  for  Human  Reproduction  and  Embryology  Human  Reproduction;13 Suppl 3:148‐59; discussion 160   Gardner  DK, Surrey  E, Minjarez  D, Leitz  A, Stevens  J, Schoolcraft  WB.  (2004).”Single  blastocyst  transfer:  a  prospective randomized trial.”Fertil Steril; 81(3):551‐555  Glujovsky  D,  Blake  D,  Farquhar  C,  Bardach  A.  (2012).  ”Cleavage  stage  versus  blastocyst  stage  embryo  transfer  in  assisted  reproductive  technology.”Cochrane  Database  Syst  Rev; 11;7:CD002118.  IVF  Blastocyst  Pictures  &  Blastocyst  Stage  Embryo  Grading  Photos  &  Images.  www.advancedfertility.com/blastocystimages   Papanikolaou  EG  and  al.”Live  birth  rate  is  significantly  higher  after  blastocyst  transfer  than  after  cleavage‐stage  embryo transfer when at least four embryos are available on  day  3  of  embryo  culture.  A  randomized  prospective  study.”Hum Reprod. 2005 Nov;20(11):3198‐203.    34 Hội Nghị Việt Pháp Châu Á Thái Bình Dương lần XII Ngày 16‐17 Tháng 5 Năm 2013  ... chuyển phôi vào đĩa môi trường G2 plus mới nuôi tiếp  đến ngày 6 và tiến hành đánh giá vào sáng ngày 6 (vẫn có thể tiến hành chuyển hoặc đơng phơi  vào ngày này nếu có phơi blastocyst).   KẾT QUẢ ... những  kết quả mà  chúng  tơi  ghi  nhận  được khi làm nghiên cứu để có một cái nhìn về  việc  ni  cấy phơi  đến  giai  đoạn  blastocyst  và chuyển phôi ngày 5.   Vấn đề nuôi cấy phôi đến ngày 5 đã và đang ... chuyển phơi ngày 5 (tươi và đơng).  Các biến Tươi Đông Số trứng MII thu 16 ,5 ± 5, 1 (trung bình) Số trứng thụ tinh (tỷ lệ %) 13,1± 4 ,5 (78 ,5) Số phôi hữu dụng N3 12,1 ± 4,3 (73 ,5) (tỷ lệ %) Số phôi nuôi cấy