Khảo sát một số tác dụng dược lý thực nghiệm của viên xương khớp su tong (chế phẩm phối hợp thiên niên kiện, cốt toái bổ, bạch chỉ)

Nghiên cứu được thực hiện để khảo sát một số tác dụng dược lý của viên xương khớp su tong trên thực nghiệm. Qua đó đánh giá hiệu quả và tính an toàn của thuốc, tiến tới mục đích thử nghiệm trên lâm sàng, nhằm bổ sung vào danh mục các thuốc thuộc nhóm cơ xương khớp - một chế phẩm nguồn gốc thảo dược.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 KHẢO SÁT MỘT SỐ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ THỰC NGHIỆM CỦA VIÊN XƯƠNG KHỚP SU TONG (CHẾ PHẨM PHỐI HỢP THIÊN NIÊN KIỆN, CỐT TOÁI BỔ, BẠCH CHỈ) Nguyễn Thị Thu Hương*, Trần Mỹ Tiên*, Nguyễn Lê Việt Hùng** TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Nghiên cứu thực để khảo sát số tác dụng dược lý viên xương khớp Su Tong thực nghiệm Qua đánh giá hiệu tính an tồn thuốc, tiến tới mục đích thử nghiệm lâm sàng, nhằm bổ sung vào danh mục thuốc thuộc nhóm xương khớp - chế phẩm nguồn gốc thảo dược Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu thực nghiệm có so sánh, lựa chọn ngẫu nhiên, thực Trung tâm Sâm Dược liệu Tp HCM, từ tháng 8/2011 đến tháng 5/2012 gồm: Khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn, khảo sát tác dụng kháng viêm cấp chuột bị gây viêm carragenin, khảo sát tác dụng kháng viêm mạn chuột bị gây viêm khớp Freund’s Complete Adjuvant (FCA), khảo sát tác dụng giảm đau cấp chuột bị gây đau xoắn bụng acid acetic, khảo sát tác dụng hạ acid uric máu chuột bị gây tăng acid uric cấp mạn kali oxonat Đối tượng nghiên cứu: 400 chuột nhắt trắng đực, chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng 25 ± g, cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang Chỉ tiêu đánh giá: Nồng độ men ALT, AST, hàm lượng triglycerid, protein, creatinin, urea, số lượng hồng cầu, Hb, Hct, bạch cầu, tiểu cầu, khảo sát đại thể tim, gan, thận chuột, mức độ sưng phù chân chuột, mức độ giảm viêm chân chuột, số lần xoắn bụng đau, nồng độ acid uric máu Kết quả: Viên Xương khớp Su Tong cho chuột uống liều gấp 11 lần liều sử dụng người khơng có biểu độc tính cấp Viên Xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột thử nghiệm (gấp hai lần liều sử dụng hàng ngày người, tính theo hệ số quy đổi) khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn sau thời gian uống liên tục hàng ngày tháng Viên Xương khớp Su Tong liều uống 1-2 viên/kg thể trọng chuột thử nghiệm (tương đương liều sử dụng hàng ngày người, tính theo hệ số quy đổi) có tác dụng kháng viêm cấp mạn, có tác dụng giảm đau tác dụng hạ acid uric máu Kết luận: Những kết thu cho thấy viên xương khớp Su Tong liều 1-2 viên/kg thể trọng có tác dụng kháng viêm cấp, mạn, có tác dụng giảm đau hạ acid uric máu, đồng thời an tồn uống liên tục tháng Từ khóa: Độc tính cấp bán trường diễn, tác dụng kháng viêm-giảm đau, tác dụng hạ acid uric máu, viên xương khớp Su Tong * Trung Tâm Sâm Dược liệu Tp Hồ Chí Minh-Viện Dược liệu ** Khoa Y học Cổ Truyền – Đại học Y Dược Tp HCM Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương ĐT: 38292646 Email: huongsam@hotmail.com 136 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học ABSTRACT SOME EXPERIMENTAL PHARMACOLOGICAL EFFECTS OF ANTI-OSTEOARTHRITIS CAPSULES SU TONG COMBINED FROM HOMALOMENA, DRYNARIA FORTUNEI, ANGELICA DAHURICA Nguyen Thi Thu Huong, Tran My Tien, Nguyen Le Viet Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No - 2014: 136 - 144 Aims: An in vitro study was carried out on some pharmacological effects of Su Tong capsules, an antiosteoarthritis herbal drug product, including its safety and efficacy in order to obtain a pre-clinical profile for further clinical study and introduce a new herbal preparation to the medicinal list for musculoskeletal treatment Study design and setting: A random comparative experimental study had been performed at The Research Center of Ginseng and Medicinal Materials, Ho Chi Minh City, from Aug 2011 to May 2012 including acute and subchronic oral toxicity tests, Carrageenan-induced acute inflammation, Freund's Complete Adjuvant (FCA)-induced chronic arthritis on mice paws, acetic acid-induced acute abdominal writhing pain on mice, potassium oxonate-induced acute and chronic hyperuricemic model in mice Subjects: Swiss albino male mice, to 6-week old, 25 ± g body weight, provided by Institute of Vaccine and Medical Biologicals, Nha Trang city Observed parameters: Complete blood count (RBC, WBC, platelets, hematocrit, hemoglobin), blood biochemical tests (liver transaminase AST/ALT, triglyceride, protein, creatinine, blood urea nitrogen) and macropathological images of mice heart, liver, kidney, inflammatory levels of mice’s paw, number of abdominal writhing pain and uremia level Results: Su Tong capsule did not show any signs of acute toxicity in mice at doses of 11-time higher than the human doses At oral doses of capsules/kg mouse body weight (double high than human daily dose, in conversion coefficient) none of any abnormal changes happened in subchronic oral toxicity tests At doses of 1-2 capsules/kg mouse body weight, the product had shown an anti-inflammatory and analgesic effect Su Tong capsules decreased the experimental acute hyper uremia levels significantly in comparison with control groups In potassium oxonate-induced chronic hyperuremic model, the hypouremic effects of Su Tong capsules after to 14 days treatment were more effective than those of acute hyperuremic model Conclusion: A Su Tong capsule is safe after 2-month administration at daily oral dose of 1-2 capsules/kg mice body weight Su Tong capsule might be useful in combination with treatment of hyperuremia and alleviating inflammation and pain in musculoskeletal diseases Keywords: Acute oral toxicity, subchronic oral toxicity, anti-inflammatory effects, analgesic effects, hypouremic effects, Su Tong capsules đến 30% người tuổi 35 bị thoái hóa khớp ĐẶT VẤN ĐỀ Tỷ lệ 60% người tuổi 65 85% Các bệnh lý xương khớp bệnh lý người tuổi 80 Các bệnh khớp không thường gặp, chiếm tỷ lệ cao nước gây gánh nặng kinh tế - tinh thần cho phát triển phát triển, gây tử thân người bệnh, mà cho gia đình, xã vong song để lại di chứng nặng nề cho hội Điều trị bệnh lý xương khớp dài ngày người bệnh, gây đau đớn kéo dài tàn phế thường gây số biến chứng viêm cho bệnh nhân, người trung loét dày tá tràng, suy gan, thận…Viên niên cao tuổi Nhóm bệnh lý gắn liền xương khớp Su Tong thực phẩm chức với nghỉ việc, giảm suất lao động hạn với thành phần hoàn toàn từ thảo dược chế hoạt động hàng ngày Tại Việt Nam, có Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 137 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 gồm Thiên niên kiện (40%), Cốt toái bổ (30%), Bạch (30%) bào chế dạng viên nang, Bộ Y tế cho lưu hành vài năm gần Sản phẩm qua thời gian sử dụng cho thấy có tác dụng tăng cường sức khỏe, mạnh gân xương, giảm acid uric máu, kháng viêm, giảm đau hỗ trợ điều trị trường hợp phong thấp, đau nhức xương khớp, người bị bệnh gout, tê mỏi chân tay, trường hợp viêm khớp, viêm khớp dạng thấp Để có sở nghiên cứu lâm sàng đánh giá tác dụng thuốc, khuôn khổ nghiên cứu ban đầu này, khảo sát hiệu kháng viêm, giảm đau, hạ acid uric viên xương khớp Su Tong chuột nhắt trắng bị gây viêm, đau, tăng acid uric, đồng thời khảo sát độc tính cấp độc tính bán trường diễn thuốc PHƯƠNG TIỆN -PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phương tiện nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Viên xương khớp Su Tong cung cấp Cơng ty TNHH Giai Cảnh, đóng gói hộp 30 viên nang, lơ sản xuất: 67/2011, ngày sản xuất 31/10/2011 hạn dùng 31/10/2014 Thành phần viên: 500 mg cao khơ gồm Thiên niên kiện (40%), Cốt toái bổ (30%) Bạch (30%) Viên nang tháo bỏ vỏ nang, cân trọng lượng bột viên 10 viên xác định khối lượng trung bình 01 viên 500 mg Động vật thử nghiệm Chuột nhắt trắng đực (chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 25 g ± g) cung cấp Viện Vắc xin Sinh phẩm Y tế Nha Trang, nuôi điều kiện ổn định chế độ dinh dưỡng Hóa chất Carragenin, Freund’s Complete Adjuvant kali oxonat (Sigma-Aldrich, USA), acid acetic (Merck, Germany), kit định lượng sinh hóa (Human Co., Germany) 138 Thuốc đối chiếu Celebrex® (viên nang chứa celexcocib 200 mg, Pfizer), aspirin pH8 (viên bao phim, chứa acid acetylsalicylic 500 mg, Mekophar), allopurinol (viên nén chứa allopurinol 300 mg, Domesco) Thiết bị Thiết bị đo thể tích chân chuột (Plethysmometer UgoBasile, Italy), máy phân tích sinh hóa bán tự động Screen Master 3000 số dụng cụ thí nghiệm Phương pháp Chọn liều thử nghiệm (7) Dựa vào liều dự kiến sử dụng người uống lần/ngày, viên/lần, tổng cộng viên cho 50 kg thể trọng/ngày Quy đổi chuột nhắt trắng 705,6 mg/kg Chọn liều 500 mg/kg (tương đương với viên/kg: liều thử 1); 1000 mg/kg (tương đương với viên/kg: liều thử 2) liều 1500 mg/kg (tương đương với viên/kg: liều thử 3) Thử nghiệm độc tính cấp.(2,7) Chuột nhắt chia thành lơ tương tự, chuột lô nhận liều chất khảo sát Sự đánh giá dựa vào phản ứng toàn ứng hay bất ứng (sống hay chết) nhận thấy chuột nhóm sau 72 Chuột tiếp tục theo dõi sau 14 ngày uống để ghi nhận triệu chứng bất thường (nếu có) Xác định liều thấp có tác dụng mà khơng làm chết chuột liều làm chết 100% chuột Tính LD50 theo công thức Karber Behrens Trường hợp tất liều thử khơng có vật chết, liều lớn thử ký hiệu Dmax Thử nghiệm độc tính bán trường diễn (1,7) Chia ngẫu nhiên chuột nhắt trắng thành lô, lô 12 con: - Lơ bình thường: Uống nước cất, thể tích 0,1 ml/10g thể trọng - Lô thử: Uống viên xương khớp Su Tong, thể tích 0,1 ml/10g thể trọng liều viên/kg Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Thời gian dùng thuốc: 60 ngày liên tục Các tiêu theo dõi: Thể trọng (g), số lượng hồng cầu (triệu/mm3), số lượng bạch cầu (ngàn/mm3), hemoglobin (g/L), hematocrit (%), AST (U/L), ALT (U/L), ure, creatinin (mg/dL), triglycerid, protein, giải phẫu đại thể tim, gan, thận Phương pháp thử nghiệm tác dụng kháng viêm cấp carragenin gây phù (6, 7, 8) Chia ngẫu nhiên chuột nhắt thử nghiệm làm lô, lô 15 chuột Chuột nhắt cho uống nước cất (lô chứng) thuốc thử nghiệm (lô thử, lô thuốc đối chiếu) 30 phút trước tiêm carragenin 1% (50 l) vào gang bàn chân phải chuột Chân Nghiên cứu Y học trái không tiêm sử dụng làm lô đối chứng Thuốc thử nghiệm (viên xương khớp Su Tong, liều uống: - viên/kg thể trọng chuột) tiếp tục cho uống ngày liên tục ngày sau tiêm carragenin trước đo thể tích chân chuột Celebrex® (viên nang chứa celexcocib 200 mg, Pfizer) liều uống 25 mg/kg sử dụng làm thuốc đối chiếu Đánh giá mức độ viêm cách đo thể tích chân chuột thiết bị đo thể tích chân chuột vào thời điểm sau tiêm carragenin giờ, 24 giờ, 48 72 Tiến hành đo lần lấy trị số trung bình Độ sưng phù chân chuột biểu thị mức độ viêm, tính theo cơng thức: Số đo thể tích chân phải – số đo thể tích chân trái %V= Số đo thể tích chân trái x 100 Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lơ chứng tính theo cơng thức: % ức chế = [(X – Y)/X] x 100 X: Mức độ viêm chân chuột lô chứng, Y: Mức độ viêm chân chuột lô đối chiếu hay lô thử nghiệm 2, 4, 9, 14 24 sau tiêm FCA (lần 1) Tính tốn Phương pháp thử nghiệm tác dụng kháng viêm kết tương tự mạn Freund’s Complete Adjuvant (FCA) gây viêm khớp (3) Chia ngẫu nhiên chuột nhắt thử nghiệm làm lô, lô 12 chuột Tiêm da vào vị trí quanh khớp bàn chân phải 50 l FCA Ngày 8, tiêm da gang bàn chân phải nhắc lại (lần II) 50 l FCA Chân trái không tiêm dùng làm lô đối chứng Tất lô chuột thử (viên xương khớp Su Tong, liều uống: 1-2 viên/kg thể trọng chuột) thuốc đối chiếu (điều trị) chứng (không điều trị) bắt đầu cho uống vào ngày thứ điều trị liên tiếp hàng thứ 24 Celebrex® (viên nang chứa celexcocib 200 mg, Pfizer) liều uống 25 mg/kg làm thuốc đối chiếu Để đánh giá mức độ viêm, đo thể tích chân chuột thiết bị đo thể tích chân chuột vào thời điểm: ngày Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Phương pháp thử nghiệm tác dụng giảm đau cấp acid acetic gây đau xoắn bụng(4,7) Chia ngẫu nhiên chuột nhắt thử nghiệm làm lô, lô 10 chuột Chuột nhắt cho uống nước cất (lô chứng) viên xương khớp Su Tong (liều uống: 1-2 viên/kg thể trọng chuột) hàng ngày ngày 60 phút trước tiêm phúc mô acid acetic 0,6% vào ngày Sau 10 phút, ghi nhận số lần xoắn bụng đau súc vật thử thời gian phút kéo dài 30 phút gồm giai đoạn: 0-5 phút, 6-10 phút, 11-15 phút, 16-20 phút, 21-25 phút, 26-30 phút Thuốc đối chiếu Aspirin pH8 (viên bao phim, chứa acid acetylsalicylic 500 mg, Mekophar) uống liều 200 mg/kg, 60 phút trước tiêm phúc mô acid acetic Phương pháp thử nghiệm tác dụng hạ acid 139 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 uric máu kali oxonat gây tăng acid uric cấp.(5) Chia ngẫu nhiên chuột nhắt thử nghiệm làm lô, lô 12 chuột trọng chuột) hàng ngày 7-14 ngày - Lơ bình thường (chứng sinh lý): Uống nước cất ngày Ngày tiêm phúc mô NaCl 0, 9%, uống nước cất Lấy máu đuôi chuột thời điểm ngày 1, 14 để định lượng acid uric huyết tương - Lô chứng bệnh lý: Uống nước cất ngày Ngày tiêm phúc mô kali oxonat 300 mg/kg, sau uống nước cất - Lô thử: Uống viên xương khớp Su Tong (liều uống: 1-2 viên/kg thể trọng chuột) hàng ngày liên tiếp ngày Ngày tiêm phúc mô kali oxonat 300 mg/kg, sau uống viên xương khớp Su Tong - Lô đối chiếu: Uống nước cất ngày Ngày tiêm phúc mô kali oxonat 300 mg/kg, sau uống Allopurinol (viên nén chứa allopurinol 300 mg, Domesco) liều 10 mg/kg Vào ngày thứ 5, sau tiêm kali oxonat tiến hành lấy máu đuôi chuột để định lượng hàm lượng acid uric huyết tương Acid uric định lượng theo kit định lượng acid uric (Acid Uric Liquidcolor kit, Human Co.) thực máy phân tích sinh hóa bán tự động Screen Master 3000 Phương pháp thử nghiệm tác dụng hạ acid uric máu kali oxonat gây tăng acid uric mạn(5) Chia ngẫu nhiên chuột nhắt thử nghiệm làm lơ, lơ 12 chuột - Lơ bình thường (chứng sinh lý): Uống nước cất - 14 ngày - Lô chứng bệnh lý: Tiêm phúc mô kali oxonat cách ngày, liều 300 mg/kg (ngày 1), giảm dần xuống 250 mg/kg (ngày 3), 200 mg/kg (ngày 5) trì liều 150 mg/kg (ngày 7, 9, 11, 13) Chuột cho uống nước cất hàng ngày 7-14 ngày - Lô thử: Gây mơ hình tương tự lơ chứng bệnh lý Chuột cho uống Viên Xương khớp Su Tong (liều uống: 1-2 viên/kg thể 140 - Lô đối chiếu: Gây mô hình tương tự lơ chứng bệnh lý Chuột cho uống allopurinol 10 mg/kg vào ngày ngày 14 Phương pháp xử lý thống kê số liệu thực nghiệm Số liệu thực nghiệm thể số trung bình (M) ± sai số chuẩn giá trị trung bình (SEM) Xử lý số liệu phần mềm MS Excel 2007, xử lý thống kê dựa vào phép kiểm One– Way ANOVA Student-Newman-Keuls test (phần mềm Jandel Scientific SigmaStat-98) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% P < 0,05 so với lô chứng tương ứng KẾT QUẢ-BÀN LUẬN Kết khảo sát độc tính cấp Theo dõi sau 72 thử nghiệm, liều tối đa cho uống viên xương khớp Su Tong chuột nhắt trắng 33g bột viên/kg thể trọng chuột (tương đương với 66 viên/kg thể trọng chuột) có phân suất tử vong 0% xác định LD50 Sau 14 ngày tiếp tục theo dõi không ghi nhận triệu chứng bất thường Cho thấy viên xương khớp Su Tong cho chuột uống liều gấp 11 lần liều sử dụng người khơng có biểu độc tính cấp Từ liều Dmax = 66 viên/kg thể trọng chuột chọn liều viên/kg; viên/kg viên/kg thể trọng chuột để tiến hành khảo sát độc tính bán trường diễn số tác dụng dược lý Kết khảo sát độc tính bán trường diễn Sau tháng thử nghiệm, thể trọng, số lượng hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu, hemoglobin, men gan AST, ALT, triglycerid, protein, ure, creatinin khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê lô uống viên Xương khớp Su Tong với lô chứng uống nước cất (p > 0,05) Riêng số hematocrit sau tháng tăng đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng (Bảng 1) Giải phẫu đại thể tim, gan, thận lô bình thường Như vậy, viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 chuột (khoảng 12 viên/người 50 kg/ngày) sau tháng khơng có biểu bất thường, thể Nghiên cứu Y học tính an tồn sử dụng dài ngày Bảng 1: Kết khảo sát độc tính bán trường diễn viên xương khớp Su Tong Chỉ tiêu khảo sát Hồng cầu (triệu tế bào/µl) Hemoglobin (g/dl) Hematocrit (%) Tiểu cầu (10 tế bào/µl) Trước thử nghiệm Sau tháng Chứng 5,10 ± 0,19 5,61 ± 0,32 Viên Kim sư 5,17 ± 0,14 5,08 ± 0,20 Chứng 7,88 ± 0,78 11,02 ± 0,59 a Viên Kim sư 7,40 ± 0,10 11,65 ± 0,36 a Sau tháng 7,65 ± 0,40 a 8,46 ± 0,20 a a 13,08 ± 0,49 13,05 ± 0,22 a a Chứng 27,90 ± 0,76 30,0 ± 1,24 36,20 ± 1,97 Viên Kim sư 28,65 ± 0,67 29,05 ± 1,20 42,45 ± 0,58 Chứng 533,90 ± 41,42 556,50 ± 37,99 557,20 ± 36,60 Viên Kim sư ab 535,0 ± 30,67 563,0 ± 40,99 554,0 ± 20,93 Bạch cầu (tế bào/µl) Chứng 5050 ± 456,1 5850 ± 563,0 5500 ± 372,7 Viên Kim sư 5500 ± 258,2 6250 ± 416,7 5900 ± 446,0 GOT (IU/l) Chứng 48,6 ± 5,2 44,9 ± 2,2 40,8 ± 3,1 Viên Kim sư 45,1 ± 0,9 50,6 ± 5,0 50,7 ± 3,4 GPT (IU/l) Chứng 45,9 ± 3,4 46,8 ± 3,5 41,9 ± 3,0 Viên Kim sư 45,8 ± 1,6 46,6 ± 4,9 48,2 ± 3,2 Protein toàn phần (g/l) Triglycerid (mg/dl) Creatinin (mg/dl) Urea (mg/dl) Thể trọng (g) Chứng 4,94 ± 0,14 Viên Kim sư 4,55 ± 0,16 5,26 ± 0,13 Chứng 113,8 ± 10,3 Viên Kim sư 106,9 ± 17,5 Chứng 0,50 ± 0,03 5,31 ± 0,23 5,35 ± 0,23 a 119,5 ± 7,2 126,7 ± 9,6 129,5 ± 8,8 0,67 ± 0,05 a a 0,50 ± 0,04 0,72 ± 0,04 Chứng 52,46 ± 3,32 62,60 ± 4,63 a Viên Kim sư 51,34 ± 1,47 63,01 ± 5,05 a Chứng 22,90 ± 0,31 33,50 ± 1,0 23,60 ± 0,25 a 115,3 ± 8,2 Viên Kim sư Viên Kim sư 5,66 ± 0,09 a 33,93 ± 0,70 a 0,52 ± 0,02 0,59 ± 0,06 52,95 ± 3,47 53,27 ± 2,28 34,60 ± 1,14 a 34,71 ± 0,98 a a : P < 0,05 so với trước thử nghiệm; b: P < 0,05 so với lô chứng Kết khảo sát tác dụng kháng viêm cấp viên xương khớp Su Tong Bảng 2: Mức độ viêm chân chuột lô thử nghiệm thực nghiệm carragenin Mức độ viêm chân chuột (%) Lô TN N = 15 Sau Chứng Viên Su Tong viên/kg viên/kg Celebrex 25 mg/kg Sau 24 Sau 48 Sau 72 96,26 ± 5,43 79,27 ± 5,46 47,26 ± 3,09 36,64 ± 3,30 70,92 ± 3,13* 55,97 ± 3,67* 34,38 ± 2,32* 21,11 ± 2,10* 66,35 ± 1,78* 40,54 ± 1,69* 29,83 ± 2,0* 17,60 ± 1,82* 71,67 ± 2,33* 41,82 ± 2,32* 29,47 ± 2,08* 22,36 ± 2,01* * P < 0,05 so với lô chứng Carragenin (viscarin) chất sulfopolygalactocid, chiết xuất từ Chondrus crispus, có tác dụng gây viêm cấp Mức độ viêm tối đa khoảng thời gian - Kết thực nghiệm cho thấy sau độ phù chân chuột tăng đạt 96,3 % giảm dần sau 24 giờ, 48 72 sau tiêm Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Bảng 3: Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lô chứng thực nghiệm carragenin Mức độ giảm viêm chân chuột (%) Sau Sau 24 Sau 48 Sau 72 giờ giờ 29,39 27,26 42,38 Viên Su viên/kg 26,32 Tong viên/kg 31,07 48,86 36,88 51,96 Lô TN N = 15 141 Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học Celebrex 25 mg/kg 25,54 47,24 37,63 38,97 Sau gây viêm carragenin, viên Xương khớp Su Tong hai liều uống viên viên/kg thể trọng chuột thể tác dụng kháng viêm cấp đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng uống nước cất Sau 24 giờ, 48 72 gây viêm carragenin, viên xương khớp Su Tong hai liều uống viên viên/kg thể trọng chuột trì tác dụng kháng viêm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng (Bảng 2) Mức độ giảm viêm lô uống viên Xương khớp Su Tong 26,32 % (liều viên) 31,07 % (liều viên) Tác dụng lô uống viên Xương khớp Su Tong liều viên/kg tương đương với thuốc đối chiếu Celebrex (25 mg/kg) với mức độ giảm viêm 25,54 % Mức độ giảm viêm lô uống viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột thời điểm 24 48 tương đương với thuốc đối chiếu Celebrex (25 mg/kg) Mức độ giảm viêm lô uống viên xương khớp Su Tong hai liều uống viên viên/kg thể trọng chuột thời điểm 72 mạnh thuốc đối chiếu Celebrex (Bảng 3) nghiệm carragenin Sau tiêm FCA nhắc lại lần thời điểm khảo sát vào ngày (với độ viêm chân chuột tối đa) lô uống viên xương khớp Su Tong liều viên/kg thể trọng lô uống thuốc đối chiếu Celebrex (liều 25 mg/kg thể trọng chuột) thể tác dụng kháng viêm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng uống nước cất Sau 14 ngày 24 ngày gây viêm mạn FCA, viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột trì tác dụng kháng viêm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm đo Mức độ giảm viêm lô uống viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột thời điểm đo yếu so với thuốc đối chiếu Celebrex (Bảng 4) Viên Xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột chưa thể tác dụng kháng viêm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm đo vào ngày 4, ngày ngày 14 sau tiêm FCA Tuy nhiên, viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột thể tác dụng kháng viêm mạn đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm Kết khảo sát tác dụng kháng viêm mạn viên xương khớp Su Tong đo vào ngày 24 sau tiêm FCA Dung dịch bổ thể Freund (Freund's complete adjuvant, FCA) thường sử dụng để gây viêm khớp thực nghiệm mạn chuột với biểu lâm sàng mô học tương tự bệnh viêm khớp người Kết thực nghiệm cho thấy sau ngày tiêm FCA mức độ viêm chân chuột tăng đạt 98,2 % giảm dần sau ngày (81,1 %) Vào ngày (24 sau tiêm FCA nhắc lại lần 2), độ viêm chân chuột tăng tối đa đạt 166,2 % trì mức độ viêm > 100 % thời điểm đo vào ngày 14 (127,94 %) ngày 24 (120,75 %) uống nước cất cho thấy có biểu lâm Kết thực nghiệm cho thấy sau ngày tiêm FCA cho uống viên xương khớp Su Tong liều uống 1-2 viên/kg thể trọng chuột làm giảm độ viêm chân chuột, thể tác dụng kháng viêm cấp tương tự thực 142 Quan sát đại thể chân chuột bị tiêm FCA sàng tương tự bệnh viêm khớp người như: sưng phù, bị ửng đỏ quanh vùng khớp cổ chân lan rộng xuống gang bàn chân Các lô uống viên xương khớp Su Tong lô uống thuốc đối chiếu Celebrex có sưng phù ửng đỏ khu trú vùng gang bàn chân (vị trí tiêm FCA lần 2) Bảng 4: Mức độ giảm viêm chân chuột lô thử nghiệm so với lô chứng thực nghiệm gây viêm khớp FCA Lô TN N = 12 Viên viên/kg Su Tong viên/kg Celebrex 25 Mức độ giảm viêm chân chuột (%) Ngày Ngày Ngày Ngày 14 Ngày 24 22,16 9,19 8,64 4,24 23,22 23,09 10,79 16,93 17,39 28,17 46,81 19,29 27,92 17,75 34,19 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 mg/kg Kết khảo sát tác dụng giảm đau viên xương khớp Su Tong Tổng số lần xoắn bụng 30 phút Tác dụng giảm đau Viên SU TONG 60 50 40 Lô chứng Viên SU TONG Aspirin 30 20 10 Biểu đồ 1: Tổng số lần xoắn bụng ghi nhận 30 phút lô thử nghiệm thực nghiệm gây đau xoắn bụng acid acetic (* P < 0,05 so với lô chứng) Khi tiêm acid acetic vào màng bụng chuột gây độc tế bào, phản ứng viêm xảy dịch ngoại bào có diện chất gây đau kinin, prostaglandin chất chuyển hóa acid, histamin (7) Viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột uống ngày làm giảm số lần xoắn bụng gây acid acetic chuột nhắt trắng đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng, gợi ý chế phẩm có tác dụng ức chế chất trung gian hóa học gây đau Kết khảo sát tác dụng hạ acid uric máu cấp Lô tiêm kali oxonat uống thuốc đối chiếu Allopurinol liều 10 mg/kg thể trọng chuột có hàm lượng acid uric máu giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng tiêm kali oxonat uống nước cất so với lơ chứng bình thường Nghiên cứu Y học Lô tiêm kali oxonat cho uống hàng ngày ngày (điều trị dự phòng) viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg viên/kg thể trọng chuột làm giảm hàm lượng acid uric máu đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng bệnh lý tiêm kali oxonat cho uống nước cất (Bảng 5) Tác động viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg viên/kg thể trọng chuột thực nghiệm tăng acid uric máu cấp thấp thuốc đối chiếu Allopurinol Bảng 5: Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm thực nghiệm gây tăng acid uric cấp kali oxonat chuột nhắt trắng % so với Liều TN Hàm lượng acid uric lơ chứng (g/dl) bình thường Chứng bình thường 1,48 ± 0,04 Chứng bệnh lý 2,36± 0,12# Tăng 59,46 viên/kg 1,73 ± 0,12* Tăng 16,89 Viên Su Tong viên/kg 1,65 ± 0,08* Tăng 11,48 Allopurinol 10 mg/kg 1,19 ± 0,10* Giảm 19,59 Lô N =12 # P< 0,001: So với lơ bình thường, * P< 0,05: So với lô chứng bệnh lý Kết khảo sát tác dụng hạ acid uric máu mạn Lô tiêm kali oxonat cho uống hàng ngày 14 ngày viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg viên/kg thể trọng chuột làm giảm hàm lượng acid uric máu đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng tiêm kali oxonat cho uống nước cất thời điểm khảo sát vào ngày 14 Tương tự, Allopurinol thể tác động làm giảm hàm lượng acid uric máu điển hình, đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng tiêm kali oxonat uống nước cất thời điểm khảo sát (Bảng 6) Bảng 6: Hàm lượng acid uric máu lô thử nghiệm thực nghiệm gây tăng acid uric mạn kali oxonat chuột nhắt trắng Lơ N =12 Chứng bình thường Chứng bệnh lý Viên Su Tong Allopurinol Liều TN viên/kg viên/kg 10 mg/kg Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Ngày 1,18 ± 0,06 2,04 ± 0,07# 1,57 ± 0,09* 1,33 ± 0,09* 1,21 ± 0,09* Hàm lượng acid uric (g/dl) Ngày 1,40 ± 0,07 2,15 ± 0,12# 1,88 ± 0,08* 1,63 ± 0,06* 1,41 ± 0,09* Ngày 14 1,38 ± 0,07 2,17 ± 0,11# 1,83 ± 0,07* 1,76 ± 0,11* 1,61 ± 0,06* 143 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 # P< 0,001: So với lơ bình thường, * P< 0,05: So với lơ chứng bệnh lý Tuy tác động hạ acid uric máu viên xương khớp Su Tong liều uống viên/kg viên/kg thể trọng chuột yếu thuốc đối chiếu Allopurinol, có ưu điểm hạn chế tác dụng phụ (gây nhiễm độc gan, giảm bạch cầu hạt) tương tác thuốc với số kháng sinh điều trị Allopurinol Allopurinol làm bùng phát bệnh viêm khớp gout mức acid uric bước đầu điều chỉnh tránh không định Allopurinol bệnh cảnh viêm phát triển thuốc làm nặng kéo dài viêm khớp gout cấp Do đó, viên xương khớp Su Tong sử dụng hỗ trợ điều trị bệnh gout phí cơng ty TNHH Giai Cảnh TÀI LIỆU THAM KHẢO KẾT LUẬN Viên xương khớp Su Tong cho chuột uống liều gấp 11 lần liều sử dụng người khơng có biểu độc tính cấp Viên Xương khớp Su Tong liều uống viên/kg thể trọng chuột thử nghiệm (gấp hai lần liều sử dụng hàng ngày người, tính theo hệ số quy đổi) khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn sau thời gian uống liên tục hàng ngày tháng Viên xương khớp Su Tong liều uống 1-2 viên/kg thể trọng chuột thử nghiệm (tương đương liều sử dụng hàng ngày người) có tác dụng kháng viêm cấp mạn, có tác dụng giảm đau tác dụng hạ acid uric máu Bộ Y tế (1996) Quyết định 371/BYT-QĐ Bộ Y tế ngày 12/3/1996 việc ban hành "Quy chế đánh giá tính an toàn hiệu lực thuốc cổ truyền" Đỗ Trung Đàm (1996) Phương pháp xác xác định độc tính cấp thuốc NXB Y học Hà Nội, tr - 24 Khaled A Khaled, Hatem A Sarhan, Mohamed Abbas Ibrahim, Azza H Ali, Youssef W Naguib, (2010).“Prednisolone-Loaded PLGA Microspheres In Vitro Characterization and In Vivo Application in Adjuvant-Induced Arthritis in Mice” AAPS Pharm.Sci.Tech, 11(2), pp 859 – 869 Koster R., Anderson M., Beer E.J.,(1959) Acetic acid for analgesic screening Fed Proc., 18, pp.412 - 417 Lê Thị Minh Dung, Nguyễn Thị Thu Hương (2012).“Nghiên cứu tác dụng hạ acid uric máu cao chiết từ Đại bi (Blumea balsamifera L (DC), Asteraceae)” Tạp chí Y học TP Hồ Chí Minh, tập 16, Phụ số 1, tr 169 - 174 Lino C.S, Gomes P.B., Lucetti D.L., et al (2005) Evaluation of antinociceptive and antiinflammatory activities of the essential oil (EO) of Ocimum micranthum Willd from Northeastem Brazil Phytother Res., 19, pp 708 - 712 Viện Dược liệu (2006) Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ thảo dược NXB Khoa học kỹ thuật Hà Nội, tr 139 - 143, 313 - 320, 355 - 368, 385 - 386, 377 -387 Winter CA, Risley EA., Nuss GW, (1962) Carrageenininduced oedema in hind paw of the rat as a assay for antiiflammatory drugs Proc Soc Exp Biol Med., 111, pp 543 - 547 Ngày nhận báo: 28/09/2013 Ngày phản biện nhận xét báo: 06/10/2013, 18/10/2013 Ngày báo đăng: 02/01/2014 Đề tài thực với tài trợ kinh 144 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền ... Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 mg/kg Kết khảo sát tác dụng giảm đau viên xương khớp Su Tong Tổng số lần xoắn bụng 30 phút Tác dụng giảm đau Viên SU TONG 60 50 40 Lô chứng Viên SU TONG Aspirin 30 20... nhiên, viên xương khớp Su Tong liều uống viên/ kg thể trọng chuột thể tác dụng kháng viêm mạn đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng thời điểm Kết khảo sát tác dụng kháng viêm mạn viên xương khớp Su Tong. .. Kết khảo sát tác dụng kháng viêm cấp viên xương khớp Su Tong Bảng 2: Mức độ viêm chân chuột lô thử nghiệm thực nghiệm carragenin Mức độ viêm chân chuột (%) Lô TN N = 15 Sau Chứng Viên Su Tong viên/ kg