Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ FULL (DL và DLS) khảo sát một số tác dụng dược lý của công thức phối hợp dược liệu thiên niên kiện và bách bệnh trên chuột nhắt trắng

Khóa luận tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn thầy PGS.TS Phan Phước Hiền người tạo điều kiện để em thực đề tài nghiên cứu, tiếp thu nhiều kiến thức liên quan đến thực tiễn Em xin chân thành cảm ơn cô PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương tận tình giúp đỡ em suốt trình thực đề tài Cảm ơn cô tạo môi trường cho em học tập, vận dụng kiến thức học để áp dụng thực tế, giúp em hiểu rõ ngành học có thêm nhiều định hướng sau Trong suốt q trình làm thí nghiệm giúp em có thêm nhiều kỹ nghiên cứu, đặc biệt học từ nhiệt tình, niềm đam mê công việc Em xin chân thành cảm ơn thầy cô trường đại học Khoa Học Tự Nhiên tạo tảng kiến thức cho em Các buổi thực tập lớn chuyên ngành Sinh lý động giúp em học hỏi nhanh trình chuẩn bị để thực đề tài cho công việc sau Em xin chân thành cảm ơn đến anh chị khóa 2006, 2007 bạn lớp 08sh trường đại học Khoa Học Tự Nhiên tạo điều kiện cho em tiếp cận phương pháp học tập, kỹ để em học tốt dễ dàng hòa nhập môi trường làm việc Em xin chân thành cảm ơn chị ThS Trần Thị Mỹ Tiên, chị Chung Thị Mỹ Duyên, chị Đỗ Minh Anh, chị Huỳnh Nhã Vân, bạn Huỳnh Thanh Hằng, bạn Nguyễn Hoàng Minh, anh chị bạn trung tâm Sâm dược liệu thành phố Hồ Chí Minh giúp đỡ em hoàn thành đề tài nghiên cứu Em xin đặc biệt gởi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến gia đình, người bạn ln động viên em suốt trình học tập thực đề tài Sinh viên thực i Khóa luận tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT .v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC CÁC HÌNH viii DANH MỤC BIỂU ĐỔ .ix Chương mở đầu: ĐẶT VẤN ĐỀ Chương 1: TỔNG QUAN .3 1.1 Tổng quan Thiên niên kiện 1.1.1 Phân loại khoa học .3 1.1.2 Mô tả thực vật 1.1.3 Phân bố sinh thái 1.1.4 Bộ phận dùng .5 1.1.5 Thành phần hóa học .5 1.1.6 Công dụng 1.1.7 Tình hình nghiên cứu nước nước 1.1.7.1 Các nghiên cứu nước 1.1.7.2 Các nghiên cứu nước 1.2 Tổng quan Bách bệnh 1.2.1 Phân loại khoa học .8 1.2.2 Mô tả thực vật 1.2.3 Phân bố sinh thái 1.2.4 Bộ phận dùng .9 1.2.5 Thành phần hóa học .9 1.2.6 Công dụng 10 1.2.7 Tình hình nghiên cứu nước ngồi nước 10 ii Khóa luận tốt nghiệp 1.2.7.1 Nghiên cứu nước 10 1.2.7.2 Nghiên cứu nước 12 Chương 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .13 2.1 Nguyên liệu, hóa chất, trang thiết bị, đối tượng nghiên cứu 13 2.1.1 Nguyên liệu 13 2.1.2 Hóa chất .13 2.1.3 Máy móc thiết bị 13 2.1.4 Đối tượng nghiên cứu 14 2.2 Các phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý .14 2.2.1 Khảo sát độc tính cấp đường uống 14 2.2.1.1 Nguyên tắc 15 2.2.1.2 Tiến hành thí nghiệm 15 2.2.2 Khảo sát độc tính bán trường diễn .16 2.2.2.1 Mục đích 16 2.2.2.2 Tiến hành thí nghiệm 16 2.2.2.3 Các thông số theo dõi 16 2.2.2.4 Các kỹ thuật thao tác nghiên cứu 21 2.2.3 Khảo sát tác dụng tăng lực nghiệm pháp chuột bơi Brekhman có cải tiến 26 2.2.3.1 Mục đích 26 2.2.3.2 Tiến hành thí nghiệm 26 2.2.3.3 Đánh giá tác dụng tăng lực 28 2.2.4 Khảo sát tác dụng giảm đau cấp 28 2.2.4.1 Nguyên tắc 28 2.2.4.2 Tiến hành thí nghiệm 28 2.2.5 Khảo sát tác dụng kháng viêm cấp .29 2.2.5.1 Nguyên tắc 29 2.2.5.2 Tiến hành thí nghiệm 30 iii Khóa luận tốt nghiệp 2.2.6 Phương pháp xác định hoạt tính chống oxy hóa in vitro thực nghiệm Malonyl dialdehyde 31 2.2.6.1 Nguyên tắc 32 2.2.6.2 Tiến hành thí nghiệm 32 Chương 3: KẾT QUẢ - BIỆN LUẬN 34 3.1 Độc tính cấp 34 3.2 Độc tính bán trường diễn 36 3.2.1 Trọng lượng thể chuột 36 3.2.2 Các thông số huyết học .37 3.2.3 Thông số thuộc chức gan 41 3.2.4 Thông số thuộc chức thận 43 3.2.5 Triglyceride 44 3.2.6 Trọng lượng gan, tim, thận 44 3.3 Khảo sát tác dụng tăng lực .46 3.4 Khảo sát tác dụng giảm đau cấp .49 3.5.1 So sánh độ sưng phù chân chuột sau giờ, 24 giờ, 48 giờ, 72 lô thử, lô đối chiếu với lô đối chứng 52 3.5.2 So sánh độ giảm phù chân chuột lô thử lô đối chiếu 54 3.6 Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa in vitro thực nghiệm Malonyl dialdehyd 56 Chương 4: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 59 4.1 Kết luận 59 4.2 Đề nghị 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO 60 iv Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT D ( dose): Liều dùng Ds (standard deviation): độ lệch chuẩn số trung bình ED (effective dose): liều hữu hiệu GOT: Glutamat Oxaloacetat Transaminase GPT: Glutamat Pyruvat Transaminase OD: mật độ quang HTCO: hoạt tính chống oxy hóa LD (lethal dose): liều chết LD0 (infralethal dose): liều liều chết LD50 (lethal dose 50%): liều làm chết 50% vật thí nghiệm MDA: Malonyl dialdehyd PBS: Phosphate buffer saline T (time): thời gian TCA: Acid tricloacetic TBA: Acid thiobarbituric PBS: Phosphate buffer saline TCA: Acid tricloacetic TBA: Acid thiobarbituric v Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Quy trình định lượng GOT 22 Bảng 2.2 Quy trình định lượng GPT .23 Bảng 2.3 Quy trình định lượng protein 23 Bảng 2.4 Quy trình định lượng creatinin .24 Bảng 2.5 Quy trình định lượng urea 25 Bảng 2.6 Quy trình định lượng triglyceride 26 Bảng 2.7 Pha mẫu thử với dung dịch đồng thể não 32 Bảng 2.8 Hỗn hợp phản ứng phương pháp định lượng MDA 33 Bảng 3.1 Kết khảo sát độc tính cấp đường uống 34 Bảng 3.2 Trọng lượng thể chuột trước thử nghiệm, sau ngày, sau 14 ngày 36 Bảng 3.3 Trọng lượng chuột trước thử nghiệm, sau tháng, sau tháng 36 Bảng 3.4 Số lượng hồng cầu 37 Bảng 3.5 Hàm lượng Hemoglobin 38 Bảng 3.6 Hàm lượng Hematocrit 38 Bảng 3.7 Số lượng tiểu cầu 39 Bảng 3.8 Số lượng bạch cầu 40 Bảng 3.9 Hàm lượng GOT 40 Bảng 3.10 Hàm lượng GPT 41 Bảng 3.11 Hàm lượng protein toàn phần .42 Bảng 3.12 Hàm lượng creatinin .42 vi Khóa luận tốt nghiệp Bảng 3.13 Hàm lượng urea 43 Bảng 3.14 Hàm lượng triglyceride 44 Bảng 3.15 Trọng lượng tương đối gan, tim, thận sau tháng 44 Bảng 3.16 Thời gian bơi chuột thời điểm lô .46 Bảng 3.17 Tỉ lệ % thời gian bơi thời điểm T 60 phút, T ngày, T 14 ngày so với T0 lô 46 Bảng 3.18 Số lần xoắn bụng ghi nhận 10 phút 30 phút lô thử nghiệm 48 Bảng 3.19 Tổng số lần xoắn bụng 30 phút lô thử nghiệm Bảng 3.20 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm thực nghiệm carragenin 52 Bảng 3.21 Độ giảm phù chân chuột lô uống cao lơ uống celebrex® 54 Bảng 3.22 Hoạt tính chống oxy hóa cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh 56 vii Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cây Thiên niên kiện .3 Hình 1.2 Cây Bách bệnh .8 Hình 2.1 Chuột chủng Swiss albino 14 Hình 2.2 Chuột bơi .27 Hình 2.3 Chuột bị xoắn bụng 28 Hình 2.4 Tiêm Carragenin vào chân chuột 30 viii Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC BIỂU ĐỒ Trang .Biểu đồ 3.1 Tỉ lệ % thời gian bơi thời điểm T 60 phút, T ngày, T 14 ngày so với T0 lô thử nghiệm .46 Biểu đồ 3.2 Số lần xoắn bụng chuột thời điểm ghi nhận 10 phút 30 phút lô thử nghiệm sau tiêm 49 Biểu đồ 3.3 Tổng số lần xoắn bụng chuột 30 phút lô thử nghiệm 50 Biểu đồ 3.4 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm thực nghiệm carragenin 52 Biểu đồ 3.5 Độ giảm phù chân chuột lô uống cao thuốc lô uống celebrex® thực nghiệm carragenin 54 Biểu đồ 3.6 Hoạt tính chống oxy hóa cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh 57 ix Khóa luận tốt nghiệp x Khóa luận tốt nghiệp hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg tác dụng tăng lực sau ngày uống Thời điểm T14ngày/T0: tỉ lệ % thời gian bơi lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg 2,15g/kg tăng so với lô chứng chưa đạt ý nghĩa thống kê Như cao phối hợp Thiên Niên Kiện Bách Bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg tác dụng tăng lực sau 14 ngày Bàn luận tác dụng tăng lực Thời gian bơi chuột cịn phụ thuộc vào tính hưng phấn chuột, nhiệt độ môi trường nên lần chuột bơi với thời gian dài bơi lần 2, lần chuột bơi nhiều (thời gian bơi chênh lệch nhiều chuột thời điểm khảo sát) Ở thí nghiệm thời gian bơi chuột lô chênh lệch không đạt ý nghĩa thống kê sinh học Vì chúng tơi đánh giá thuốc có chiều hướng tác dụng tăng lực hay không Ở lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg tỉ lệ % thời gian bơi trung bình cao nhiều so với lơ chứng nên có chiều hướng biểu tác dụng tăng lực Nhận định chung tác dụng tăng lực Ở lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075g/kg có chiều hướng biểu tác dụng tăng lực (sau ngày có thời gian bơi tăng 83,4% sau 14 ngày tăng 128,6% so với chứng) 3.4 Khảo sát tác dụng giảm đau cấp Bảng 3.18 Số lần xoắn bụng ghi nhận 10 phút 30 phút lô thử nghiệm Lô thử nghiệm N = 12 Chứng Cao 1,075 g/kg 2,15 g/kg TN Aspirin 200 mg/kg 0-10 phút Số lần xoắn bụng 11-20 phút 21-30 phút 24,50  2,66 17,67  1,15* 20,25  1,72 8,92  1,32* 13,50  1,51 4,20  1,04* 19,08  2,58 16,42  1,62* 15,08  1,54* 6,00  1,23* 11,25  2,20 1,17  0,41* 47 Khóa luận tốt nghiệp * P < 0,05 so với lô chứng Biểu đồ 3.2: Số lần xoắn bụng chuột thời điểm ghi nhận 10 phút 30 phút lô thử nghiệm sau tiêm Bảng 3.19 Tổng số lần xoắn bụng 30 phút lô thử nghiệm Lô thử nghiệm Liều N = 12 Tổng số lần xoắn bụng % giảm đau 30 phút so với chứng Chứng - 58,25 ± 2,76 Cao phối hợp 1,075 g/kg 30,08 ± 2,00* 2,15 g/kg 45,42 ± 3,92* 23,58 ± 2,86* Aspirin 200 mg/kg * P < 0,05 so với lô chứng 48 48,35 22,03 59,51 Khóa luận tốt nghiệp Biểu đồ 3.3 Tổng số lần xoắn bụng chuột 30 phút lô thử nghiệm Nhận xét Thời điểm từ đến phút thứ 10: Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 g/kg giảm chưa đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg có tác dụng giảm đau phút thứ – 10 sau gây đau xoắn bụng acid acetic Tác dụng giảm đau liều 1,075 g/kg tương đương với thuốc đối chiếu aspirin liều 200 mg/kg Thời điểm từ phút thứ 11 đến phút 20: Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075g/kg liều 2,15 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau phút thứ 11 – 20 sau gây đau xoắn bụng acid acetic Tác dụng giảm đau liều 1,075 g/kg tương đương với thuốc đối chiếu aspirin liều 200 mg/kg Thời điểm từ phút thứ 20 đến phút thứ 30: Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê 49 Khóa luận tốt nghiệp so với lô chứng với Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 2,15 g/kg giảm chưa đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng So sánh tổng số lần xoắn bụng 30 phút sau tiêm: Số lần xoắn bụng lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều liều 1,075g/kg liều 2,15 g/kg giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Bàn luận khảo sát tác dụng giảm đau cấp Khi tiêm acid acetic vào phúc mô chuột gây độc tế bào, phản ứng viêm xảy Nhiều chất gây viêm giải phóng dịch ngoại bào có chất gây đau kinin, prostaglandin, chất chuyển hóa acid, histamin [6] Khi neuron cảm giác nhận tín hiệu gây đau vị trí tiêm acid acetic chúng chuyển trạng thái tĩnh sang trạng thái điện hoạt động dẫn truyền theo sợi trục dạng xung thần kinh Neuron trung gian nhận thông tin từ neuron cảm giác, chế biến thông tin chuyển mệnh lệnh đến neuron đáp ứng Neuron đáp ứng truyền thông tin tới dẫn đến tượng gây đau xoắn bụng chuột [6] Lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075g/kg liều 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau cấp 30 phút sau tiêm acid acetic chứng tỏ cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có tác dụng ức chế chất trung gian hóa học gây đau Nhận định chung tác dụng giảm đau Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có tác dụng giảm đau thực nghiệm gây đau xoắn bụng acid acetic Mức độ giảm đau 48,35% liều 1,075 g/kg 22,03% liều 2,15 g/kg so với lô chứng uống nước cất Tác dụng giảm đau cao thử nghiệm yếu thuốc đối chiếu Aspirin (liều uống 200 mg/kg) Mức độ giảm đau Aspirin 59,51% so với lô chứng uống nước cất Mức độ giảm đau xoắn bụng lơ uống cao thử nghiệm liều 1,075g/kg điển hình liều 2,15g/kg ghi nhận chi tiết giai đoạn 10 phút 30 phút 3.5 Khảo sát tác dụng kháng viêm 50 Khóa luận tốt nghiệp 3.5.1 So sánh độ sưng phù chân chuột sau giờ, 24 giờ, 48 giờ, 72 lô thử, lô đối chiếu với lô đối chứng Bảng 3.20 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm thực nghiệm carragenin Lô TN Sau 119,94  8,12 1,075 g/kg 87,22  5,21* Chứng Cao 2,15 g/kg phối 93,11  5,88* Mức độ viêm chân chuột (%) Sau 24 Sau 48 72,47  6,55 64,02  4,80 73,44  4,73 60,71  4,59 65,93  7,72 Sau 72 65,53  7,69 39,73  6,07* 54,89  8,66 40,90  6,54* 29,47  2,08* 22,36  2,01* hợp Celebrex 25 mg/kg 71,67  2,33* 41,82  2,32* *P < 0,05 so với lô chứng Biểu đồ 3.4: Độ viêm chân chuột lô thử nghiệm thực nghiệm carragenin Nhận xét Carragenin (viscarin) chất sulfopolygalactocid, chiết xuất từ Chondrus crispus, có tác dụng gây viêm cấp Mức độ viêm tối đa khoảng thời gian 3-4 Kết thực nghiệm cho thấy độ sưng phù chân chuột tăng tối đa sau 51 Khóa luận tốt nghiệp tiêm carragenin (đạt 119,9 %) giảm dần sau 24 giờ, 48 72 sau tiêm Độ sưng phù chân chuột sau tiêm carragenin: độ sưng phù chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg, liều 2,15 g/kg, lô đối chiếu uống Celebrex® (celexcocib liều 25 mg/kg) giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/Kg có tác dụng kháng viêm cấp sau gây phù chân chuột carragenin Độ sưng phù chân chuột sau 24 tiêm carragenin: độ sưng phù chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg khơng có khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Độ sưng phù chân chuột lô uống Celebrex® (celexcocib liều 25 mg/kg) giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng (P < 0,05) Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg khơng có tác dụng kháng viêm so với lô đối chứng sau 24 gây phù chân chuột carragenin Độ sưng phù chân chuột sau 48 tiêm carragenin: độ sưng phù chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg giảm so với lô đối chứng chưa đạt ý nghĩa thống kê Độ sưng phù chân chuột lơ uống Celebrex® (celexcocib liều 25 mg/kg) giảm so với lô chứng đạt ý nghĩa thống kê Như cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg khơng có tác dụng kháng viêm so với lô đối chứng sau 48 gây phù chân chuột carragenin Độ sưng phù chân chuột sau 72 tiêm carragenin: độ sưng phù chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg, liều 2,15 g/kg, lơ đối chiếu uống Celebrex® (celexcocib liều 25 mg/kg) giảm đạt ý nghĩa thống kê so với lô chứng Như cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg liều 2,15 g/kg có tác dụng kháng viêm sau 72 gây phù chân chuột carragenin 52 Khóa luận tốt nghiệp 3.5.2 So sánh độ giảm phù chân chuột lô thử lô đối chiếu Bảng 3.21 Độ giảm phù chân chuột lơ uống cao lơ uống celebrex® Lơ TN Cao 1,075 g/kg 2,15 g/kg phối Sau 27,28 Mức độ giảm viêm chân chuột (%) Sau 24 Sau 48 Sau 72 -1,34 5,17 39,37 22,37 9,02 14,27 37,59 40,25 42,29 53,97 65,88 hợp Celebrex 25 mg/kg Biểu đồ 3.5 Độ giảm viêm chân chuột lơ uống cao thuốc lơ uống celebrex® Nhận xét Độ giảm phù chân chuột lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075 g/kg, liều 2,15 g/kg thể rõ sau giờ, sau 72 đo thấp so với lơ uống Celebrex® (celexcocib liều 25 mg/kg) Bàn luận tác dụng kháng viêm cấp [2], [6] 53 Khóa luận tốt nghiệp Ở thời điểm sau tiến hành gây viêm độ sưng phù chân chuột lơ uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075g/kg, 2,15g/kg giảm rõ rệt so với lô chứng (liều 1,075 g/kg giảm 32,72%, liều 2,15g/kg giảm 18,83 % so với lơ chứng) Chứng tỏ cao phối hợp có tác dụng gây ức chế thành phần gây viêm histamin, kinin, prostaglandin, chất bổ trợ, lymphokin đồng thời làm tĩnh mạch giãn hơn, làm giảm tính thấm mao mạch (hiện tượng thoát dịch – chất dịch chứa protein yếu tố đông máu kháng thể thấm từ mạch máu vào khoảng ngoại bào) kết cao phối hợp làm giảm độ sưng phù chân chuột với lô chứng uống nước cất Sau 24 giờ, sau 48 độ sưng phù lô uống cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 1,075g/kg, 2,15g/kg tương đương so với lô chứng sau phản ứng viêm cấp giai đoạn đáp ứng miễn dịch có nhiệm vụ phá hủy tế bào chết Các chất hóa học gọi yếu tố gây tăng bạch cầu tiết tế bào bị tổn thương, làm giải phóng nhanh neutrophil từ tủy xương tăng nhiều máu thời gian ngắn Các hóa chất gây viêm tác nhân hóa ứng động lôi kéo neutrophil bạch cầu khác tới nơi bị tổn thương Do vùng tổn thương tập trung nhiều thực bào neutrophil đại thực bào (macrophage) Vì chất dịch máu chảy tràn vào vùng tổn thương nên dòng máu vùng chảy chậm neutrophil bắt đầu bám vào vách mao mạch Tín hiệu hóa học tiếp tục làm neutrophil xuyên mạch đến vùng bị viêm nuốt tế bào chết Sau neutrophil thay bạch cầu đơn nhân (monocyte) từ máu vào vùng bị tổn thương Monocyte thực bào yếu sau tới mô chúng phát triển thành đại thực bào với chức “dọn dẹp” mảnh vụn tế bào chết Sau 72 giờ, lô chuột uống cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 1,075g/kg, 2,15g/kg lại có tác dụng kháng viêm carragenin lại gây viêm tế bào thời điểm sau 72 Điều chứng tỏ cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 1,075g/kg, 2,15g/kg có tác dụng kháng viêm mạn tính Điều cần nghiên cứu tiếp tục số thực nghiệm gây viêm mạn thực 54 Khóa luận tốt nghiệp nghiệm tạo u hạt, thực nghiệm gây viêm khớp collagen, liposaccharide hay bổ thể Freund 3.6 Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa in vitro thực nghiệm Malonyl dialdehyd Bảng 3.22 Hoạt tính chống oxy hóa cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh Nồng độ Mẫu Chứng Cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh (µg/ml) 2000 1000 500 250 125 62,5 OD1 OD2 ODtb 0,421 0,099 0,167 0,312 0,347 0,412 0,457 0,557 0,107 0,208 0,303 0,341 0,399 0,413 0,4890 ± 0,0680 0,1030 ± 0,0040 0,1875 ± 0,0205 0,3075 ± 0,0045 0,3440 ± 0,0030 0,4055 ± 0,0065 0,4350 ± 0,0220 Biểu đồ 3.6: Hoạt tính chống oxy hóa cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh Nhận xét 55 HTCO (%) 78,94 61,66 37,12 29,65 17,08 11,04 Khóa luận tốt nghiệp Từ phương trình hồi quy tuyến tính y = 0.0513x + 11.448, xác định IC 50 cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh 751,5 µg/ml Trolox chất đối chiếu thử nghiệm MDA não Giá trị IC50 Trolox thử nghiệm 562,7 μg/ml Trong thử nghiệm MDA, MDA chất sinh q trình peroxy hóa lipid màng tế bào, phản ứng với thuốc thử acid thiobarbituric tạo phức hợp có màu hồng Hoạt tính chống oxy hóa chất thử thể qua việc làm giảm màu phức hợp làm giảm lượng MDA có mẫu Do đó, mẫu cao thử làm giảm màu phức hợp MDA acid thiobarbituric, chứng tỏ cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có hoạt tính ức chế q trình peroxy hóa lipid tế bào nên làm giảm hàm lượng MDA dịch não chuột, dẫn đến tượng giảm màu phức hợp Tuy nhiên, so sánh với chất đối chiếu Trolox (dựa vào giá trị IC50), hoạt tính cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh thấp Chương 4: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có biểu độc tính cấp, đường uống với liều LD0 21,5 g/kg Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh liều 2,15 56 Khóa luận tốt nghiệp g/kg (liều = 1/10 LD0) sau tháng uống khơng có biểu bất thường độc tính bán trường diễn chuột nhắt trắng Các thơng số huyết học, số sinh hóa thuộc chức gan - thận nằm giới hạn bình thường Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh tác dụng tăng lựchồi phục sức, nhiên liều uống 1,075g/kg có chiều hướng biểu tác dụng tăng lực Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh hai liều uống 1,075 g/kg 2,15 g/kg có tác dụng giảm đau, kháng viêm Cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh có hoạt tính ức chế q trình peroxy hóa lipid tế bào nên làm giảm hàm lượng MDA dịch não chuột 4.2 Đề nghị Tiếp tục khảo sát tác dụng kháng viêm mạn cao phối hợp Thiên niên kiện - Bách bệnh Cao thuốc Thiên niên kiện - Bách bệnh định hướng nghiên cứu dạng chế phẩm phù hợp (viên nang rượu thuốc) hỗ trợ điều trị loại bệnh mạn tính đau nhức xương khớp tăng cường thể trạng tổng quát TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt [1] Viện Dược liệu (2007), Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, tập I, tập II, trang 116 – 118, 868 57 Khóa luận tốt nghiệp [2] Viện Dược Liệu (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ thảo dược, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, trang 57 – 63, 140 – 141, 279 – 284, 295,311 – 320 [3] Đỗ Trung Đàm (1996), Phương pháp xác định độc tính cấp thuốc, Nhà xuất Y học Hà Nội, trang - 22 [4] Bộ môn Miễn dịch – Sinh lý bệnh đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh (2006), Miễn dịch – Sinh lý bệnh, Nhà xuất Y Học chi nhánh Thành phố Hồ Chí Minh [5] Lê Thị Luyến (2010), Bệnh học, Nhà xuất Y Học [6] Nguyễn Đình Giậu, Nguyễn Chi Mai, Trần Thị Việt Hồng (2000), Sinh lý học người động vật, Nhà xuất Đại Học Quốc Gia Thành phố Hồ Chí Minh, trang – 91, 187 – 188, 235 – 237 [7] Nguyễn Tiến Thắng, Nguyễn Đình Hun (1998), Giáo trình sinh hóa đại, Nhà xuất giáo dục, trang 255 – 261 [8] Bộ Y tế, Quy chế đánh giá tính an toàn hiệu lực thuốc cổ truyền, Quyết định 371/BYT – QĐ, 12-3-1996 [9] Nguyễn Phương Dung (2007), Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan chế phẩm Bảo Kiện, Y học TP Hồ Chí Minh, tập 11, phụ số 2, 112-116 [10] Lê Thị Hồng Vân, Nguyễn Ngọc Khơi, Nguyễn Minh Đức (2010), Y học TP Hồ Chí Minh (2010), nghiên cứu ảnh hưởng trình chế biến lên thay đổi thành phần hóa học saponin tác dụng tăng lực sâm Việt Nam, Y học Tp Hồ Chí Minh, tập 14, phụ số 1, 145-150 [11] Nguyễn Thị Thu Giang, Đỗ Tường Hạ, Thái Khắc Minh, Võ Phùng Nguyên, Trần Thành Đạo (2010), Tổng hợp đánh giá tác dụng kháng viêm in vivo dẫn chất polyoxychalcon, Y học Tp Hồ Chí Minh, tập 14, phụ số 1, 9399 Tài liệu nước ngồi 58 Khóa luận tốt nghiệp [12] Byeong-Cheol Kang, Kyung-Sun Kang, Yong-Soon Lee (2005), Biocompatibility and long-term toxicity of Innopol imlant, a Biodegradable polymer Sacffold, Exp.Anim,54(1), 37-52 [13] Erik Walum (1998), Acute oral toxicity, Environmental heath perspect, 106(2): 497-503 [14] George J Amabeoku and Joseh Kabatende (2012), Antinociceptive and anti-inflammatory activities of leaf methanol extract of Cotyledon orbiculata L (Crassulaceae), Hindawi publishing corporation, Advances in Pharmacological Sicences, volume 2012, article ID 862625 [15] Hu YM, Liu C, Cheng KW, Sung HH, Williamsm LD, Yang ZL, Ye WC (2008) Sesquiterpenoids from Homalomena occlulta affect osteoblast proliferation, differentiation and mineralization in vitro, Phytochemistry, 69(12):2367-2373 [16] Hu YM, Yang ZL, Wang H, Ye WC (2009) Nat Prod Res, 23(14):127983 [17] Low BS, Teh CH, Yuen KH, Chan KL (2011), Physico-chemical effects of the major quassinoids in a standardized Eurycoma longifolia extract (Fr2) on the bioavailability and pharmacokinetic properties, and their implications for oral antimalarial activity, Nad Prod Commun, 6(3):337-341 [18] Mark A Suckow, Peggy Danneman, Cory Brayton (2001), The laboratory mouse, CRC Press, 18 – 21 [19] Miyake K, Li F, Tezuka Y, Awale S, Kadota S (2010), Cytotoxic activity of quassinoids Eurycoma longifolia, Nat Prod Commun, 5(7):1009-1012 [20] Orish Ebere Orisakwe, Onyenmechi Johnson Afonne, Mary Adaora Chude, Ejeatuluchukwu Obi, and Chudi Emma Dika (2003), Sub-chronic toxicity studies of the aqueouse extract of Boerhavia diffusa leaves, Journal of Health science, 49(6) 444-447 [21] Pena, et al (2006), Anti-inflammatory and anti-diarrheic activity of Isocarpha cubana Blanke, Pharmacology online 3: 744-749 59 Khóa luận tốt nghiệp [22] S.D.S Banjarnahor, Risna T Dewi, Indah D Dewijanti, M.Angelina (2008), Acute toxicity study and LD50 determination of MTC fraction from Aspergillus terreus Koji, Proceeding of the International seminar on Chemistry 2008 (pp 676-678) Jatinangor [23] Shuid AN, Abu Bakar MF, Abdul Shukor TA, Muhammad N, Mohamed N, Soelaiman IN (2011), The anti-osteoporotic effect of Eurycoma longifolia in aged orchidectomised rat model, Aging Male, 14(3):150-154 [24] Tambi MI, Imran MK, Henkel RR (2012), Standardised water – soluble extract of Eurycoma longifolia, Tongkat ali, as testosterone booster for managing men with late-onset hypogonadism, Andrologia, 44 Suppl 1:226-30, doi: 10.1111/j.1439-0272.2011.01168.x [25] Tambi MI, Imran MK 2010, Eurycoma longifolia Jack in managing idiopathic male infertility, Asian J Androl, 12(3):376-380 [26] Wang YF, Wang XY, Lai GF, Lu CH, Luo SD (2007), Tree new sesquiterpenoids from aerial parts of Homalomena occulta, Chem Biodivers, 4(5):925-931 [27] Wong KC, Hamid A, Eldeen IM, Asmawi MZ, Baharuddin S, Abdillahi HS, Van Staden J (2012), A new sesquiterpenoid from the rhizomes of Homalomena sagittifolia, Nat Prod Res, 26(9):850-858 60 Khóa luận tốt nghiệp ii ... hành phối hợp hai dược liệu Thiên niên kiện Bách bệnh dựa vào liều Dmax , hiệu suất chiết, độ ẩm loại cao Sau tiến hành khảo sát tác dụng dược lý chuột nhắt để tìm hiểu rõ hướng tác dụng công thức. .. 26 Khóa luận tốt nghiệp Lơ chứng: uống nước cất Lô thử 1: uống cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 1,075 g/kg Lô thử 2: uống cao phối hợp Thiên niên kiện Bách bệnh liều 2,15 g/kg Một. .. dụng hai thuốc việc bảo vệ sức khỏe nâng cao chất lượng sống cho đối tượng người cao tuổi, tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Khảo sát số tác dụng dược lý công thức phối hợp dược liệu Thiên niên kiện