Đề tài này được thực hiện với mục tiêu đánh giá tác dụng điều hòa sự tăng lipid máu và tác dụng bảo vệ gan của viên xích linh chi Nhật Bản trên mô hình tăng lipid máu nội sinh bằng tyloxapol. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 TÁC DỤNG HẠ LIPID MÁU CỦA CHẾ PHẨM XÍCH LINH CHI TRÊN MƠ HÌNH GÂY TĂNG LIPID MÁU NỘI SINH BẰNG TYLOXAPOL (TRITON WR-1339) Chung Thị Mỹ Duyên*, Nguyễn Thị Thu Hương TÓM TẮT Mục tiêu nghiên cứu: Nấm linh chi đỏ sử dụng hàng trăm năm chiến lược điều trị để nâng cao sức khỏe Hiện có nhiều cơng trình nghiên cứu cơng bố dựa mơ hình động vật thử nghiệm in vitro nhằm đánh giá tác động loài nấm đến sức khỏe người liên quan đến số bệnh ung thư, tiểu đường, tổn thương gan, rối loạn lipid máu, phòng chống lão hóa, điều trị suy nhược thần kinh, giảm huyết áp… Đề tài thực với mục tiêu đánh giá tác dụng điều hòa tăng lipid máu tác dụng bảo vệ gan viên Xích linh chi Nhật Bản mơ hình tăng lipid máu nội sinh tyloxapol Đối tượng - Phương pháp nghiên cứu: Chế phẩm viên Xích linh chi cơng ty MIKEI Nhật Bản cung cấp Mơ hình tăng lipid máu nội sinh tyloxapol (triton WR-1339): chuột thử nghiệm cho nhịn đói 16 trước gây tăng lipid máu, sau tiêm phúc mạc tyloxapol liều 400 mg/kg thể trọng Chuột cho uống nước cất (lơ chứng), viên Xích linh chi (lô thử) hay fenofibrate (lô thuốc đối chiếu) theo hai phác đồ điều trị dự phòng Lấy máu chuột sau 24 48 tiêm tyloxapol để định lượng số sinh hóa lipid máu (triglycerid, cholesterol, HDL-cholesterol LDL-cholesterol) tách gan định lượng malondialdehyd (MDA) glutathione (GSH) Kết quả: Kết nghiên cứu cho thấy tyloxapol làm tăng hàm lượng triglycerid, cholesterol, LDLcholesterol giảm HDL-cholesterol lô chứng uống nước cất Viên Xích linh chi liều viên/kg thể trọng theo hai phác đồ điều trị dự phòng làm giảm tăng trị số triglycerid thời điểm 48 sau tiêm tyloxapol giảm tăng trị số cholesterol thời điểm 24 sau tiêm tyloxapol Viên Xích linh chi thể tác dụng làm giảm tăng trị số LDL-cholesterol, cholesterol xấu, thời điểm 48 sau tiêm tyloxapol Viên Xích linh chi làm tăng trị số HDL-cholesterol, cholesterol tốt, thời điểm 48 sau tiêm tyloxapol Ngồi ra, viên Xích linh chi làm giảm tăng MDA gan mơ hình gây tăng lipid máu, chứng tỏ viên Xích linh chi có tác dụng bảo vệ gan trước tổn thương oxy hóa Kết luận: Viên Xích linh chi có tác dụng điều hòa tăng lipid máu có tác dụng bảo vệ gan trước tổn thương oxy hóa gây tyloxapol Từ khóa: Viên Xích linh chi, tyloxapol (triton WR-1339), tác dụng điều hòa tăng lipid máu, tác dụng bảo vệ gan ABSTRACT HYPOLIPIDEMIC EFFECT OF “MIKEI RED REISHI ESSENCE” CAPSULE ON TYLOXAPOL (TRITON WR-1339)-INDUCED HYPERLIPIDEMIA Chung Thi My Duyen, Nguyen Thi Thu Huong * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No – 2014: 62 - 68 Aims: Ganoderma lucidum (known as Lingzhi in China and Reishi in Japan) has become one of the natural sources in the treatment of leukemia, carcinoma, hepatitis, lipid metabolism disorders, and diabetes This ∗ Trung Tâm Sâm Dược liệu Tp Hồ Chí Minh-Viện Dược liệu Tác giả liên lạc: PGS.TS Nguyễn Thị Thu Hương ĐT:38292646 Email: huongsam@hotmail.com 62 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Nghiên cứu Y học mushroom is now being used to complement or sometimes substitute in modern medicine The present study was carried out to evaluate the hypolipidemic effect and hepatoprotective effect of “Mikei Red Reishi Essence” capsule Materials and Methods: Materials: “Mikei Red Reishi Essence” capsules (in abbreviated: Red Reishi capsule) were manufactured by NIKKEI Co Ltd., Japan and distributed by the TMDVSX Tu Tam Co Ltd Animals: 5-6 weeks old Swiss albino male mice, weighing 25 ± g, were purchased from Institute of Vaccines and Biomedicines, Nha Trang City Tyloxapol (triton WR-1339) at the dose of 400 mg/kg body weight was used to induce endogenous hyperlipidemic model in mice Red Reishi capsule or fenofibrate was orally administered according to treatment therapy or preventive therapy After 24 hrs and 48 hrs of tyloxapol administration, plasma triglyceride, cholesterol, HDL-cholesterol, and LDL-cholesterol were determined to evaluate hypolipidemic effect of Red Reishi capsule Hepatic malondialdehyd (MDA) and glutathione (GSH) contents were used to determine hepatoprotective effect Results: Control lot injected by tyloxapol showed the significant increases of plasma triglyceride, cholesterol, and LDL-cholesterol levels as compared with normal control lot indicating the endogenous hyperlipidemia model was good Otherwise, HDL-cholesterol level was decreased in tyloxapol-injected groups Red Reishi capsule at the dose of capsules/kg body weight significantly decreased cholesterol levels at the time of 24 hrs after tyloxapol injection and induced the decrease of triglyceride and LDL-cholesterol levels at the time of 48 hrs after tyloxapol injection Red Reishi capsule showed the effect of increasing HDL-cholesterol values, good cholesterol, at 48 hours after tyloxapol injection In hyperlipidemic group, Red Reishi capsule lot showed reduced levels of hepatic MDA which were statistically significant compared with control lot Conclusion: The Red Reishi capsule at the dose of capsules/kg body weight was effective in increasing HDL-cholesterol value and reduced the increase of triglyceride, cholesterol, and LDL-cholesterol proving regulating effect of this drug on lipid metabolism disorders, similar to its references fenofibrate In addition, Red Reishi capsule also expressed hepatoprotective effect prior to liver oxidative damage caused by experimental hyperlipidemia model Keywords: “Mikei Red Reishi Essence” capsules, tyloxapol (triton WR-1339), hypolipidemic effect, hepatoprotective effect 5/4/2013, Cục Quản lý Dược có công văn ĐẶT VẤN ĐỀ hướng dẫn đơn vị chức thuộc Bộ Y tế, Theo tài liệu tổ chức Y tế giới dự báo đơn vị kinh doanh sản xuất thuốc thay đổi đến năm 2020, bệnh tim mạch, bệnh động mạch nhãn thuốc tờ hướng dẫn sử dụng với thuốc vành, đột quỵ với nguyên từ xơ vữa động nhóm statin, bổ sung số tác dụng mạch nguyên nhân gây tử vong tàn phế không mong muốn suy giảm nhận thức hàng đầu giới Trong đó, tử vong (như trí nhớ, lú lẫn…), tăng đường huyết, bệnh tim mạch tăng lên 20 triệu người Ở nước tăng HbA1c, tăng nguy tổn thương sử ta, xơ vữa động mạch với biểu lâm sàng dụng statin đồng thời với thuốc gemfibrozil, suy mạch vành, đột tử, nhồi máu tim, thuốc hạ cholesterol máu nhóm fibrat khác, nhồi máu não trước gặp, có xu niacin liều cao (> 1g/ngày), colchicin Việc sử hướng tăng nhanh theo nhịp độ phát triển dụng đồng thời thuốc hạ lipid máu nhóm xã hội Nguyên nhân bệnh xơ vữa động statin với thuốc điều trị HIV, viêm gan siêu mạch chủ yếu rối loạn lipid máu(6) vi C (HCV) làm tăng nguy gây tổn Thuốc điều trị tăng lipid máu an toàn hiệu thương cơ, nghiêm trọng tiêu vân, nhóm statin vừa qua ngày thận hư dẫn đến suy thận gây tử vong Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 63 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Với lovastatin simvastatin, bổ sung thông tin chống định mới, tránh sử dụng đồng thời giới hạn liều dùng sử dụng đồng thời với số thuốc đồ uống có khả làm tăng nguy mắc bệnh và/hoặc tiêu vân Với tiêu chí đảm bảo an tồn điều trị, nhiều nhà khoa học giới có xu hướng quay thuốc có nguồn gốc tự nhiên hay thuốc y học cổ truyền việc hỗ trợ điều trị bệnh lý Nhiều cơng trình nghiên cứu chứng minh nấm linh chi đỏ (Ganoderma lucidum) có tác dụng điều hòa rối loạn lipid máu (3) Các nhà nghiên cứu Nhật Bản chứng minh acid ganoderic có tác dụng ức chế Angiotensine Conversion enzym (ACE), ức chế sinh tổng hợp cholesterol, hạ huyết áp, hạ lipid máu Linh chi chống ngưng tập tiểu cầu, ngăn ngừa tạo huyết khối tắc mạch máu (3) Chế phẩm viên Xích linh chi Cơng ty NIKEINhật Bản chọn để nghiên cứu tác dụng linh chi thực nghiệm gây tăng lipid máu nội sinh tyloxapol nhằm mục đích cung cấp liệu khoa học cho ứng dụng chế phẩm hỗ trợ điều trị tăng lipid máu bệnh lý liên quan ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Viên Xích linh chi-Mikei Red Reishi Essence (gọi tắt viên Xích linh chi) sản xuất Cơng ty NIKKEI, Nhật Bản Viên Xích linh chi đóng gói 2,5 g/gói, 250 mg/1 viên x 10 viên Tất mẫu thử lô sản xuất với số lô 1140 hạn dùng 10/4//2015 Thành phần viên gồm: Chất chiết Xích linh chi (80%) Dextrin (20%) Viên tháo bỏ vỏ nang, cân trọng lượng bột viên 10 viên lấy khối lượng trung bình 01 viên Khối lượng trung bình 01 viên 250 ± 10 mg Bột viên hòa nước cất cho uống hàng ngày vào thời điểm 8-9 sáng Các liều thử nghiệm quy theo số lượng viên uống/kg thể trọng chuột Động vật nghiên cứu 64 Chuột nhắt trắng đực cái, chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 25 ± 2g cung cấp Viện Vacxin Sinh phẩm Y tế-TP Nha Trang Viện Pasteur TP Hồ Chí Minh Chuột ni ổn định khoảng tuần thực phẩm viên (được cung cấp Viện Vacxin Sinh phẩm Y tế -TP Nha Trang) nước uống đầy đủ Thể tích cho uống tiêm 10ml/kg thể trọng chuột Thuốc thử nghiệm Tyloxapol (triton WR-1339), acid thiobarbituric thuốc thử Ellman (SigmaAldrich, USA), Fenofibrate (viên nén 200 mg Công ty cổ phần xuất nhập Domesco) Mơ hình gây tăng lipid máu tyloxapol(2, 4) Phác đồ điều trị Chuột cho nhịn đói 16 trước gây tăng lipid máu, sau tiêm phúc mạc tyloxapol liều 400 mg/kg thể trọng Sau tiêm tyloxapol, chuột điều trị viên Xích Linh chi (lơ thử, liều viên/kg uống lần, lúc sáng, chiều 24 sau) fenofibrate (lô đối chiếu, liều 100 mg/kg uống lần ngày, lúc sáng chiều 24 sau) Lấy máu chuột sau 24 sau 48 tiêm tyloxapol để định lượng triglycerid, cholesterol, HDL, LDL huyết tương tách gan định lượng malondialdehyd (MDA) glutathion (GSH) Phác đồ dự phòng Chuột cho uống viên Xích Linh chi hay fenofibrate liên tục ngày Một sau lần uống thứ 7, gây tăng lipid máu tiêm phúc mạc tyloxapol liều 400 mg/kg thể trọng Lấy máu chuột sau 24 sau 48 tiêm tyloxapol để định lượng triglycerid, cholesterol, HDL, LDL huyết tương tách gan định lượng MDA GSH Phương pháp định lượng số sinh hóa Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 18 * Phụ Số * 2014 Theo hướng dẫn Bộ kit định lượng Nghiên cứu Y học cho phản ứng với 0,2 ml thuốc thử Ellman Human Co., Germany thêm đệm EDTA phosphat vđ ml Để phút Phương pháp xác định hàm lượng malondialdehyd (MDA) glutathion (GSH) gan chuột (5) nhiệt độ phòng sau tiến hành đo Tách gan chuột nghiền đồng thể dung dịch đệm KCl 1,15 % Lấy 1-2 ml dịch đồng quang bước sóng λ = 412 nm Hàm lượng GSH (nM/g protid) tính theo phương trình hồi quy tuyến tính chất chuẩn GSH Đánh giá kết thể, thêm dung dịch đệm Tris (pH = 7,4) vđ ml Các số liệu biểu thị trị số trung Ủ hỗn hợp phản ứng 37oC 60 phút bình: M ± SEM (Standard error of the mean – sai dừng phản ứng ml acid tricloacetic 10% số chuẩn giá trị trung bình) xử lý thống kê MDA: Sau ly tâm lấy ml dịch cho phản ứng với ml acid thiobarbituric 0,8 % 100oC 15 phút đo quang λ = 532 nm Hàm lượng MDA (nM/ml) tính theo phương trình hồi quy tuyến tính chất chuẩn MDA dựa vào phép kiểm One–Way ANOVA Student-Newman-Keuls test (phần mềm Jandel Scientific SigmaStat 3.5) Kết thử nghiệm đạt ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% P < 0,05 so với lô chứng GSH: Sau ly tâm lấy ml dịch KẾT QUẢ - BÀN LUẬN Bảng 1: Hàm lượng triglycerid huyết tương chuột sau tiêm tyloxapol 24 48 Nhóm Tyloxapol (-) Tyloxapol (+) sau 24 Tyloxapol (+) sau 48 Lô chuột Chứng Viên Xích linh chi viên/kg Chứng Viên Xích linh chi viên/kg Fenofibrate 100 mg/kg Chứng Viên Xích linh chi viên/kg Fenofibrate 100 mg/kg N (con) 10 10 10 10 10 10 Triglycerid (mg/dL) Điều trị Dự phòng 116,90 ± 10,13 101,80 ± 11,24 115,56 ± 10,87 113,30 ±12,33 ## ## 703,40 ± 33,98 813,20 ± 12,69 ## ## 714,30 ± 44,41 717,50 ± 29,02 ## *## 754,20 ± 29,92 439,90 ± 90,54 ## # 246,17 ± 42,52 210,20 ±30,95 * * 156,20 ± 20,40 125,50 ± 8,27 * *# 131,10 ± 17,12 53,0 ± 4,22 *: Khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng nhóm (P < 0,05) #: khác biệt đạt ý nghĩa thống kê so với lơ chứng bình thường (P