Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm đánh giá tác dụng điều trị viêm loét dạ dày (VLDD) của cốm dạ dày amiprogast trên động vật thực nghiệm. Đối tượng và phương pháp: đánh giá chế phẩm trên mô hình gây VLDD ở chuột cống trắng bằng indomethacin, có so sánh với thuốc tham chiếu omeprazole.
TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ĐIỀU TRỊ VIÊM LOÉT DẠ DÀY CỦA CỐM DẠ DÀY AMIPROGAST TRÊN CHUỘT CỐNG TRẮNG Vũ Bình Dương*; Nguyễn Hồng Ngân*; Hồ Bá Ngọc Minh* Nguyễn Trung Hiếu*; Phạm Văn Hiển* Ngơ Xn Trình*; Ngơ Thị Tuyết Mai* TÓM TẮT Mục tiêu: đánh giá tác dụng điều trị viêm loét dày (VLDD) cốm dày amiprogast động vật thực nghiệm Đối tượng phương pháp: đánh giá chế phẩm mơ hình gây VLDD chuột cống trắng indomethacin, có so sánh với thuốc tham chiếu omeprazole Kết quả: cốm dày liều 20 mg/kg 40 mg/kg có tác dụng làm giảm thể tích dịch vị, độ axít tự độ axít tồn phần dịch vị, làm giảm tổn thương loét chuột cống trắng gây VLDD indomethacin Cốm dày amiprogast thể tác dụng đáp ứng theo liều, liều g/kg có tác dụng tương đương với thuốc tham chiếu omeprazol liều 20 mg/kg Kết luận: cốm dày có tác dụng điều trị VLDD chuột cống trắng * Từ khóa: Cốm dày amiprogast; Viêm loét dày; Chuột cống trắng Research of Anti-Ulcerative Effect of Amiprogast Granula on Indomethacin-Induced Gastric Ulcer in Rats Summary Objectives: Evaluation of anti-ulcerative effect of amiprogast granula on indomethacin-induced gastric ulcer in rats Subjects and methods: Effect of amiprogast granula was evaluated on model of indomethacin-induced gastric ulcer in rats, compare to omeprazole Results: Amiprogast granula in dose of 20 mg/kg and 40 mg/kg showed the effects on reducing gastric volume, total and free acidify, reducing ulcer on indomethacin-induced gastric ulcer in rats Anti-ulcerative effect of amiprogast granula increased follow dose levels, in dose of g/kg showed the effect equally to omeprazole 20 mg/kg Conclusion: Amiprogast granula showed clearly anti-ulcerative effect on indomethacin-induced gastric ulcer in rats * Key words: Amiprogast granula; Gastric ulcer; Rats ĐẶT VẤN ĐỀ Loét dày, hành tá tràng bệnh phổ biến cộng đồng Theo Phạm Khuê, khoảng - 7% có triệu chứng loét dày, tá tràng Bệnh gặp lứa tuổi, thường kéo dài, ảnh hưởng đến chất lượng sống, công việc dễ gây biến chứng nguy hiểm chảy máu hay thủng, ung thư dày… Từ xa xưa có nhiều thuốc, vị thuốc nguồn gốc đông y ứng dụng điều trị cải thiện triệu chứng lâm sàng Học viện Quân y nghiên cứu * Học viện Quân y Người phản hồi (Corresponding): Vũ Bình Dương (vbduong2978@gmail.com) Ngày nhận bài: 29/08/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 27/11/2015 Ngày báo đăng: 02/12/2015 39 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015 bào chế thành công cốm dày từ dược liệu sẵn có nước (Dự án cấp Nhà nước mã số DAĐL 2010/12) Các loại dược liệu sử dụng làm thuốc điều trị VLDD theo kinh nghiệm dân gian Thực tế có nhiều tài liệu ngồi nước cơng bố tác dụng điều trị VLDD Để có sở khoa học tác dụng cốm dày, làm sở đưa vào nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng, tiến hành: Đánh giá tác dụng điều trị VLDD cốm dày amiprogast động vật thực nghiệm ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU * Thiết bị nghiên cứu: - Kính hiển vi soi Luxeo 2S (Labomed, Mỹ) - Bộ dụng cụ mổ động vật cỡ nhỏ, kim cho chuột uống thuốc dụng cụ thí nghiệm khác * Hóa chất nghiên cứu: - Dung dịch chuẩn độ NaOH 0,1N Đối tƣợng, vật liệu nghiên cứu - Các thuốc thử toper phenophtalein * Chế phẩm nghiên cứu: - Một số hóa chất khác - Sản phẩm cốm dày amiprogast gồm: Mai mực, Khương hoàng, Hương phụ, Cam thảo bắc, Hoài sơn, Chỉ xác, Mật ong Trung tâm Nghiên cứu Ứng dụng sản xuất thuốc, Học viện Quân y sản xuất, đạt tiêu chuẩn sở Thuốc pha dung dịch 0,1% Tween 80 cho chuột uống - Thuốc tham chiếu omeprazole, thuốc gây loét indomethacin nghiền nhỏ hòa tan dung dịch 0,1% Tween 80 cho chuột uống * Động vật nghiên cứu: - Chuột cống trắng tuần tuổi, dòng Wistar, khơng phân biệt giống, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm, cân nặng thời điểm bắt đầu thí nghiệm 200 ± 20 g Động vật thí nghiệm Ban Cung cấp Động vật thí nghiệm, Học viện Quân y 40 cung cấp, nuôi dưỡng phòng ni động vật thí nghiệm tuần trước tiến hành thí nghiệm Động vật ăn thức ăn theo tiêu chuẩn thức ăn cho động vật nghiên cứu, nước đun sôi để nguội uống tự Hàng ngày theo dõi ghi chép diễn biến kết thí nghiệm Phƣơng pháp nghiên cứu Theo phương pháp nghiên cứu Kim CS (2011) [3], có sửa đổi cho phù hợp với mục tiêu nghiên cứu Chuột cống trắng dòng Wistar, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm, chia ngẫu nhiên thành lô (mỗi lô 10 con) Cho chuột nhịn đói 24 giờ, nước uống tự Chuột lô uống dung môi (dung dịch 0,1% Tween 80), chuột từ lô đến lô gây loét cách cho uống indomethacin liều 25 mg/kg thuốc (hòa tan dung dịch 0,1% Tween 80) Thể tích cho uống ml/kg cân nặng Sau 30 phút, cho chuột uống thuốc (omeprezole, cốm dày) dung mơi (dung dịch 0,1% Tween 80) với thể tích uống ml/kg cân nặng Cụ thể: TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015 + Lô (chứng sinh lý): uống dung dịch 0,1% Tween 80 độ axít tồn phần xác định + Lơ (chứng gây loét): uống dung dịch phương pháp chuẩn độ axít - base, 0,1% Tween 80 + Lơ (thuốc tham chiếu): uống omeprazole liều 20 mg/kg (hòa tan dung dịch 0,1% Tween 80) + Lô (amiprogast liều 1): uống cốm dày liều g/kg (hòa tan dung dịch 0,1% Tween 80) + Lô (amiprogast liều 2): uống cốm dày liều g/kg (hòa tan dung dịch 0,1% Tween 80) Tiếp tục chờ sau tiếng, gây mê ether giết chuột Bộc lộ thắt đoạn cuối thực quản, sau lập dày khỏi thể chuột Cắt mở dày dọc theo bờ cong lớn Lấy lượng dịch chứa bên dày vào ống ly tâm có chia độ để đo thể tích, pH, axít tự axít tồn phần dịch vị Rửa bề mặt dày dung dịch nước muối lạnh để đánh giá mức độ loét - Xác định độ axít dịch vị: độ axít tự dùng dung dịch NaOH 0,01N Xác định độ axít tự chuẩn độ NaOH thuốc thử toper chuyển màu cam Tiếp tục chuẩn độ thuốc thử phenolphthalein chuyển màu hồng Tổng lượng NaOH dùng chuẩn độ dùng để tính độ axít tồn phần * Chỉ tiêu đánh giá tổn thương loét: - Tính số loét: phương pháp cho điểm Kulkarni mô tả (2002) Cụ thể: niêm mạc dày màu sắc bình thường: điểm; niêm mạc dày xung huyết đỏ: 0,5 điểm; chấm loét nhỏ (< mm): điểm; 1,5 điểm cho vệt xuất huyết; vết loét kích thước từ - mm: điểm; cho vết loét kích thước > mm: điểm Trị số trung bình số điểm đánh giá loét chuột lơ tính số lt lơ nghiên cứu - Tỷ lệ giảm lt: tính theo công thức: I (%) = (AC - AT) * Chỉ tiêu đánh giá chức tiết dịch vị dày: Ly tâm dịch chứa bên dày, thu lấy phần dịch để xác định thể tích, pH độ axít dịch vị - Thể tích dịch vị tính theo 100 g cân nặng: đo thể tích dịch vị chuột cống trắng, tính theo 100 g cân nặng Lấy trị số trung bình lô để so sánh - pH dịch vị: đo máy đo pH x 100 (%) AC Trong đó, I (%) phần trăm giảm loét; Ac: trị số trung bình diện tích lt niêm mạc dày chuột lô chứng; AT: trị số trung bình diện tích lt niêm mạc dày chuột lô thuốc * Xử lý số liệu: Xử lý số liệu theo phương pháp thống kê y sinh học, sử dụng phần mềm SPSS 16.0 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 41 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Ảnh hƣởng thuốc nghiên cứu lên tiêu đánh giá chức tiết dịch vị Bảng 1: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu lên thể tích, pH, độ axít tự độ axít tồn phần dịch vị (X ± SD; n = 10) Lơ nghiên cứu Thể tích dịch vị (ml/100 g) Chứng sinh lý 1,71 ± 0,07 Chứng gây loét 2,15 ± 0,31 Thuốc tham chiếu 1,59 ± 0,19 Amiprogast liều 1,80 ± 0,14 Amiprogast liều 1,68 ± 0,08 * Δ Δ Δ pH dịch vị 3,38 ± 0,28 1,47 ± 0,33 4,46 ± 0,31 3,64 ± 0,29 ** ΔΔ ΔΔ Độ axít tồn phần (Meq/l/100 g) (Meq/l/100 g) 9,65 ± 1,01 21,97 ± 1,40 14,35 ± 1,92 6,17 ± 0,95 ΔΔ¥ 4,15 ± 0,37 Độ axít tự 9,45 ± 1,18 7,07 ± 0,85 ** ΔΔ ΔΔ¥ ΔΔΩ 33,41 ± 1,99 12,80 ± 1,60 18,88 ± 1,95 16,03 ± 1,99 ** ΔΔ ΔΔ¥ ΔΔΩ (- Khác biệt so với lô chứng sinh lý (lô 1) *: p ≤ 0,05; **: p ≤ 0,01 - Khác biệt so với lô chứng gây loét (lô 2) Δ: p ≤ 0,05; ΔΔ: p ≤ 0,01 - Khác biệt so với lơ thuốc tham chiếu (lơ 3) ¥: p ≤ 0,05; ¥¥: p ≤ 0,01 - Khác biệt so với lô amiprogast liều (lô 4)Ω: p ≤ 0,05) - So với lô chứng sinh lý, số thể tích dịch vị, độ axít tự độ axít tồn phần dịch vị lơ chứng gây loét tăng cao có ý nghĩa thống kê; pH dịch vị giảm có ý nghĩa thống kê Thuốc indomethacin gây tăng tiết dịch vị axít dịch vị - So với lơ chứng gây lt, số thể tích dịch vị, độ axít tự độ axít tồn phần dịch vị lô dùng omeprazole lô dùng cốm dàyđều giảm có ý nghĩa thống kê; pH dịch vị tăng có ý nghĩa thống kê Omeprazole cốm dày mức liều dùng có tác dụng làm giảm tăng thể tích axít dịch vị gây indomethacin - So với lô thuốc tham chiếu, tiêu đánh giá chức tiết dịch vị lô 42 cốm dày amiprogast liều khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Cốm dày amiprogast mức liều (4 g/kg cân nặng) có tác dụng tương đương so với lô thuốc tham chiếu omeprazole liều 20 mg/kg cân nặng chức tiết dịch vị - Tác dụng làm giảm tăng tiết dịch vị axít dịch vị gây indomethacin lơ amiprogast liều (2 g/kg cân nặng) thấp so với lô cốm dày liều (4 g/kg cân nặng) lô thuốc tham chiếu omeprazole liều 20 mg/kg cân nặng (p < 0,05) Kết chứng tỏ amiprogast thể mức độ tác dụng phụ thuộc vào liều dùng TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015 Ảnh hƣởng thuốc nghiên cứu dùng thuốc tham chiếu cốm dày lên tiêu đánh giá tổn thƣơng loét amiprogast giảm có ý nghĩa thống kê Bảng 2: Ảnh hưởng thuốc nghiên cứu lên tổn thương loét niêm mạc dày (p < 0,01) Tỷ lệ giảm loét lô đạt từ 48,82% (lô amiprogast liều 1) đến 64,49% (lô thuốc tham chiếu) Chỉ số Lô nghiên cứu loét Chứng sinh lý Chứng gây loét Thuốc tham chiếu bình (mm ) 5,12 ± 16,30 ± 1,64 1,97 1,32 ± 5,79 ± ΔΔ ΔΔ 2,39 ± 0,80 ΔΔ¥ 1,72 ± Amiprogast liều loét trung 0,88 Amiprogast liều Diện tích ổ 0,64 ΔΔΩ loét - 1,73 8,34 ± 2,69 ΔΔ¥ 6,96 ± 2,86 % giảm ΔΔΩ - - So với lô thuốc tham chiếu, số loét diện tích ổ lt trung bình lơ cốm dày liều khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) Cốm dày amiprogast mức liều (4 g/kg cân nặng) 64,49 có tác dụng giảm loét indomethacin % gây tương đương so với lô thuốc tham 48,82% chiếu omeprazole liều 20 mg/kg cân nặng - Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê 57,30% (p < 0,05) so sánh số lt diện tích ổ lt trung bình lô, thuốc B (- Khác biệt so với lô chứng gây loét (lô 2) Δ: p ≤ 0,05; ΔΔ: p ≤ 0,01 - Khác biệt so với lô thuốc tham chiếu ¥ liều 1, liều so với thuốc tham chiếu Kết chứng tỏ tác dụng làm giảm loét indomethacin gây lô cốm dày ¥¥ (lơ 3) : p ≤ 0,05; : p ≤ 0,01 - Khác biệt so với lô amiprogast liều (lô 4)Ω: p ≤ 0,05) - Lô chứng sinh lý khơng thấy có tổn thương lt, số lt diện tích ổ lt trung bình amiprogast liều (2 g/kg cân nặng), lô thuốc B liều (2 g/kg cân nặng) liều (4 g/kg cân nặng) thấp so với lô thuốc tham chiếu omeprazole liều 20 mg/kg cân nặng - Chỉ số loét diện tích ổ loét trung - Indomethacin gây loét rõ niêm mạc bình lơ cốm dày amiprogast liều dày chuột Chỉ số loét lô chứng gây cao có ý nghĩa thống kê so với lơ lt 5,12 mm ; diện tích ổ loét trung bình 16,30 mm - So với lô chứng gây loét, số loét diện tích ổ lt trung bình lơ cốm dày amiprogast liều lô thuốc tham chiếu (p < 0,05) Tác dụng làm giảm loét cốm dày thể đáp ứng theo mức liều 43 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 9-2015 Một số hình ảnh niêm mạc dày lơ nghiên cứu thể hình Niêm mạc dày chuột bình thường (lơ chứng sinh lý) Tổn thương loét niêm mạc dày chuột (lô chứng gây loét) Tổn thương xuất huyết niêm mạc dày chuột (lô amiprogast) Hình 1: Ảnh niêm mạc dày lô nghiên cứu KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO Trên mơ hình gây VLDD chuột cống trắng indomethacin, kết cho thấy: Bệnh loét dày tá tràng Cẩm nang điều trị nội khoa 2000, tr.507-513 - Cốm dày amiprogast thể rõ tác dụng điều trị VLDD thông qua tiêu chức tiết dịch vị tiêu đánh giá tổn thương loét Tác dụng cốm dày amiprogast liều g/kg cân nặng tương đương với tác dụng thuốc tham chiếu ameprazole liều 20 mg/kg cân nặng Michele Woodleys, Alison Whelan GS Phạm Khuê chủ biên - Cốm dày thể tác dụng đáp ứng theo liều Lô dùng cốm dày amiprogast mức liều g/kg cân nặng thể tác dụng thấp lô dùng cốm dày amiprogast liều g/kg cân nặng 44 Kim, Jeong-Hwan, Byung-Woo Kim, Hyun-Ju Kwon, Soo-Wan Nam Curative effect of selenium against indomethacin-induced gastric Ulcersin Rats J Microbiol Biotechnol 2011, 21 (4), pp.400-404 H Gerhard Vogel Drug discovery and evaluation: Pharmacological Assays Springer 2008 WHO Research guidelines for evaluating the safety and efficacy of Herbal medicines ROWP Manila, Philippines 1993 ... ngồi nước cơng bố tác dụng điều trị VLDD Để có sở khoa học tác dụng cốm dày, làm sở đưa vào nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng, tiến hành: Đánh giá tác dụng điều trị VLDD cốm dày amiprogast động vật... dày lô nghiên cứu KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO Trên mơ hình gây VLDD chuột cống trắng indomethacin, kết cho thấy: Bệnh loét dày tá tràng Cẩm nang điều trị nội khoa 2000, tr.507-513 - Cốm dày amiprogast. .. niêm mạc dày lơ nghiên cứu thể hình Niêm mạc dày chuột bình thường (lơ chứng sinh lý) Tổn thương loét niêm mạc dày chuột (lô chứng gây loét) Tổn thương xuất huyết niêm mạc dày chuột (lô amiprogast)