Nghiên cứu tác dụng kích thích sinh tinh của bài thuốc y học cổ truyền VTT trên thực nghiệm

Mục tiêu nghiên cứu của bài viết nhằm nâng cao tác dụng kích thích sinh tinh của bài thuốc y học cổ truyền VTT trên thực nghiệm. Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết của bài viết.

TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG KÍCH THÍCH SINH TINH CỦA BÀI THUỐC Y HỌC CỔ TRUYỀN VTT TRÊN THỰC NGHIỆM Vũ Văn m* CS TÓM TẮT Mục tiêu: nghiên cứu tác dụng kích thích sinh tinh thuốc y học cổ truyền VTT thực nghiệm Đối tượng phương pháp: 120 chuột đực chia lô sử dụng nhóm thuốc kích thích sinh tinh khác nhau, sau đánh giá so sánh cấu trúc ống sinh tinh chất lượng tinh trùng nhóm nghiên cứu Kết kết luận: thuốc VTT có tác dụng kích thích sinh tinh tương đương với provironum mediphylamin thực nghiệm làm tăng số lượng tinh trùng di động nhanh tỷ lệ sống tinh trùng, giảm số lượng tinh trùng di động chậm có ý nghĩa thống kê * Từ khóa: Bài thuốc VTT; Tác dụng kích thích sinh tinh; Thực nghiệm Study of Effect of Traditional Medicine VTT on Stimulation of Spermatogenesis in Experiment Summary Objectives: To study the effect of stimulation of traditional medicine VTT on spermatogenesis in experiment Materials and methods: 120 male rats were divided into plots group and use different drugs, then be evaluated to compare the structure of seminiferous tubules and quality sperm in each team Results and conclusion: The drug VTT stimulates spermatogenesis equivalent with mediphylamin provironum on experiment and increases the number of mobile sperm and survival of sperm, decreased slow sperm count with significantly statistics * Key words: Traditional medicine VTT; Stimulation of spermatogenesis; Experiment ĐẶT VẤN ĐỀ Theo định nghĩa Tổ chức Y tế Thế giới (WHO): cặp vợ chồng sau 12 tháng chung sống, không sử dụng biện pháp tránh thai mà khơng có con, xếp loại vào nhóm bị mắc bệnh vơ sinh Nhiều cặp vợ chồng khơng có chồng vợ hay hai, có nhiều trường hợp chưa rõ nguyên nhân Theo WHO, tỷ lệ vô sinh chiếm khoảng 10% cặp vợ chồng [9] Tại Việt Nam, theo Nguyễn Viết Tiến CS (2012), tỷ lệ vơ sinh cộng đồng chiếm 7,5% Có nhiều nguyên nhân dẫn đến vô sinh, số nguyên nhân dẫn đến vô sinh như: ô nhiễm môi trường, hóa chất độc hại, bệnh lây truyền qua đường tình dục, dị tật bẩm sinh, yếu tố di truyền, lối sống thiếu lành mạnh người dân… * Bệnh viện Phụ sản Hải Phòng Người phản hồi (Corresponding): Vũ Văn m (drvuvantam@gmail.com) Ngày nhận bài: 20/08/2015; Ngày phản biện đánh giá báo: 12/01/2016 Ngày báo đăng: 20/01/2016 53 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 Việc chữa bệnh vô sinh không mang lại hạnh phúc cho người làm cha, làm mẹ mà mang lại hạnh phúc cho người thân gia đình, bạn bè họ, góp phần làm xã hội ổn định ngày phát triển Vì vậy, vơ sinh bệnh mang tính xã hội Hiện nay, vấn đề vô sinh quan tâm, đặc biệt vô sinh nam giới Nguyên nhân dẫn đến vơ sinh nam khơng có tinh trùng có tinh trùng số lượng tinh trùng ít, yếu dị dạng Có nhiều phương pháp hỗ trợ sinh sản, điều trị vơ sinh, có thuốc kích thích phát triển dòng tinh, ngồi hormon FSH, testosteron, có nhiều thuốc lưu truyền dân gian có hoạt tính kích thích sinh tinh song chưa nghiên cứu cách chưa áp dụng rộng rãi - Lơ 1: nhóm động vật thực nghiệm uống nước cất (nhóm chứng) - Lơ 2: nhóm động vật thực nghiệm uống thuốc provironum - Lơ 3: nhóm động vật thực nghiệm uống thuốc mediphylamin - Lơ 4: nhóm động vật thực nghiệm uống thuốc VTT - Tất chuột nuôi điều kiện môi trường Động vật thực nghiệm uống thuốc với liều lượng cân đối theo cân nặng sử dụng tương đương với liều lượng thuốc sử dụng người Bảng 1: Liều lượng thuốc cho chuột uống Thuốc Provironum ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tƣợng nghiên cứu Chuột nhắt trắng chủng BALB/c có độ tuổi tuần, trọng lượng trung bình 30 ± 0,5 g/con, chia lơ sử dụng nhóm thuốc kích thích sinh tinh khác nhau, sau đánh giá so sánh cấu trúc ống sinh tinh chất lượng tinh trùng nhóm nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Sử dụng nghiên cứu thống kê, mơ tả cắt ngang có đối chứng * Phân lô nghiên cứu: Theo nội dung, mục đích nghiên cứu, 120 chuột chia ngẫu nhiên làm nhóm, nhóm 30 con, đánh số nhóm để tránh nhầm lẫn 54 Cân Liều Lƣợng thuốc Liều ngƣời thuốc/kg nặng chuột cho chuột 50 mg/ngày mg/kg 30 g 0,3 mg Mediphylamin 500 mg/ngày 10 mg/kg 30 g mg Thuốc nam 30 g 0,3 ml 50 ml/ngày ml/kg * Thời gian tiến hành: Sử dụng thuốc kích thích sinh tinh chuột theo đợt kéo dài 15 - 20 ngày * Thu thập số liệu: Hết thời gian sử dụng thuốc, mổ chuột thu thập tinh trùng từ ống dẫn tinh tinh hồn theo lơ nghiên cứu khác Dùng phẫu tích nhỏ cắt lọc lấy ống dẫn tinh chuột 2,5 cm cho chuột nghiên cứu từ sát mào tinh hoàn tới túi tinh Rửa bỏ mỡ, mạch máu ống dẫn tinh nước muối sinh lý, sau nặn ép lấy tinh trùng qua kính hiển vi soi Đánh giá lượng tinh trùng thu theo tiêu nghiên cứu Làm tiêu mô học phần mơ tinh hồn thu TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 để so sánh đánh giá theo tiêu nghiên cứu: cố định tinh hoàn dung dịch Bouin, chuyển đúc tinh hoàn, cắt nhuộm làm ba tiêu HE/1 tinh hoàn * Chỉ tiêu nghiên cứu: - Một số tiêu hình thái cấu trúc tinh hồn: + Thay đổi số lượng TNB/1 thiết diện cắt ngang + Thay đổi số lượng TBI/1 thiết diện cắt ngang + Thay đổi số lượng tế bào Sertoli/ thiết diện cắt ngang + Đánh giá biến đổi đường kính ống sinh tinh + Đánh giá biến đổi độ dày biểu mô ống sinh tinh - Một số tiêu mặt chức tinh hoàn: + Số lượng tinh trùng (triệu/ml) + Tỷ lệ tiến tới nhanh (%) + Tỷ lệ tiến tới chậm (%) + Tỷ lệ di động chỗ (%) + Tỷ lệ bất động (%) + Tỷ lệ sống/chết (%) + Tỷ lệ loại dị dạng (đầu, cổ, đuôi) (%) (theo hướng dẫn WHO, 2010) * Phương pháp xử lý kết quả: Số liệu nghiên cứu thu thập phân tích phần mềm SPSS.13 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN Trên sở đối tượng phương pháp nghiên cứu nêu trên, tiến hành thực nghiệm thu kết sau: Một số tiêu (th y đổi) hình thái, cấu trúc tinh hoàn chuột * Số lượng trung bình tinh nguyên bào: Bảng 2: Số lượng trung bình tinh nguyên bào/1 thiết diện ngang ống sinh tinh Nhóm n X ± SD p Chứng (1) 30 49,50 ± 4,52 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 52,52 ± 4,76 Uống medyphilamin (3) 30 50,35 ± 4,62 Uống VTT (4) 30 51,38 ± 4,55 p2.4 > 0,05 p3.4 > 0,05 p1.4 > 0,05 - Tất chuột uống thuốc tăng số lượng tinh nguyên bào so với nhóm chứng có nghĩa, tăng số lượng tinh nguyên bào tăng số lượng tinh bào số lượng tinh trùng Như vậy, thuốc ảnh hưởng tốt tới số lượng tinh trùng - Số lượng tinh nguyên bào chuột uống VTT tăng so với nhóm chứng nhóm chuột uống mediphylamin (p > 0,05) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê * Số lượng trung bình tinh bào I: Bảng 3: Bảng tính tinh bào I/1 thiết diện ngang ống sinh tinh (quan sát vật kính phóng đại 400 lần) n X ± SD (µm) p Chứng (1) 30 42,34 ± 3,98 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 45,91 ± 4,38 Uống mediphylamin (3) 30 43,59 ± 4,52 Uống VTT (4) 30 44,16 ± 4,50 Nhóm p2.4 > 0,05 p3.4 > 0,05 p1.4 > 0,05 - Tương tự thay đổi số lượng tinh nguyên bào/1 thiết diện ngang ống sinh tinh, số lượng tinh bào I/1 thiết diện ngang ống sinh tinh nhóm uống thuốc lớn nhóm chứng uống nước cất 55 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 - Tương tự, nhóm uống thuốc VTT tăng nhẹ so với nhóm chứng nhóm chuột uống mediphylamin, khơng có ý nghĩa thống kê * Kết số lượng tế bào Sertoli: Bảng 4: Số lượng trung bình tế bào Sertoli/1 thiết diện ngang ống sinh tinh (quan sát vật kính phóng đại 400 lần) Nhóm provironum có kết khả quan nhất, sau đến nhóm uống VTT mediphylamin, khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê * Bề dày biểu mơ ống sinh tinh nhóm (µm) (quan sát vật kính phóng đại 400 lần): Bảng 6: Độ dày lớp biểu mô tinh/1 thiết diện ngang ống sinh tinh n X ± SD p Chứng (1) 30 5,63 ± 0,92 p1.3 < 0,05 Chứng (1) 30 39,98 ± 3,56 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 6,12 ± 0,98 p2.4 > 0,05 Uống provironum (2) 30 65,76 ± 3,85 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 5,83 ± 0,96 p3.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 46,81 ± 3,97 p3.4 > 0,05 Uống VTT (4) 30 5,86 ± 1,10 p1.4 > 0,05 Uống VTT (4) 30 56,78 ± 3,92 p1.4 > 0,05 - Số lượng tế bào Sertoli thay đổi nhóm với nhóm chứng nhóm với Cụ thể, nhóm uống provironum, số lượng tế bào Sertoli nhiều nhất, sau đến nhóm uống VTT nhóm uống mediphylamin - Việc uống VTT có cải thiện số lượng tế bào Sertoli so với nhóm chứng nhóm uống mediphylamin (p > 0,05), khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê * Đường kính ống sinh tinh nhóm (micromet) (quan sát vật kính phóng đại 400 lần): Bảng 5: Đường kính ngang trung bình ống sinh tinh Nhóm n X ± SD p Chứng (1) 30 145,3 ± 7,15 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 148,7 ± 6,98 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 146,3 ± 7,25 p3.4 > 0,05 Uống VTT (4) 30 147,1 ± 7,05 p1.4 > 0,05 Đường kính ngang ống sinh tinh cải thiện sau uống thuốc Cụ thể, nhóm uống 56 Nhóm n X ± SD p - Đo độ dày lớp biểu mơ tinh cho thấy nhóm chuột uống VTT, thành biểu mô tinh bảo vệ đáng kể so với nhóm chứng (46,81 so với 39,98) - So với nhóm chuột uống provironum VTT, độ dày biểu mơ tinh chênh lệch đáng kể so với nhóm uống mediphylamin Một số tiêu chức tinh hoàn * Đánh giá số lượng tinh trùng (triệu/ml): Bảng 7: Kết đếm số lượng tinh trùng nhóm n X ± SD p Chứng (1) 30 84,92 ± 7,50 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 87,35 ± 7,40 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 85,23 ± 7,90 p3.4 > 0,05 Uống VTT (4) 30 86,88 ± 7,60 p1.4 > 0,05 Nhóm Số lượng tinh trùng nhóm uống VTT tương đương với nhóm uống provironum mediphylamin (p > 0,05) khác biệt ý nghĩa thống kê TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 * Tỷ lệ tinh trùng di động nhanh: - Giảm tỷ lệ % tinh trùng chỗ nhóm Bảng 8: Tỷ lệ % tinh trùng tiến tới nhanh Nhóm n p X ± SD Chứng (1) 30 29,86 ± 3,64 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 32,97 ± 4,60 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 30,38 ± 4,60 p3.4 < 0,05 Uống VTT (4) 30 31,68 ± 4,16 p1.4 < 0,01 Tỷ lệ % tinh trùng di động nhanh nhóm uống VTT tăng rõ rệt so với nhóm nước cất nhóm uống mediphylamin có ý nghĩa thống kê, p3.4 < 0,05 p1.4 < 0,01 * Tỷ lệ tinh trùng di động chậm: Bảng 9: Tỷ lệ % tinh trùng tiến tới chậm Nhóm uống TT so với nhóm uống nước cất khơng có ý nghĩa thống kê - Tỷ lệ % tinh trùng chỗ nhóm uống provironum giảm so với nhóm uống VTT khơng có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) * Tỷ lệ tinh trùng bất động: Bảng 11: Tỷ lệ % tinh trùng bất động Nhóm n X ± SD p Chứng (1) 30 36,01 ± 3,29 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 34,68 ± 3,48 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 36,00 ± 3,18 p3.4 > 0,05 Uống VTT (4) 35,72 ± 3,19 p1.4 > 0,05 30 n X ± SD p Chứng (1) 30 21,31 ± 4,10 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 17,34 ± 3,29 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 19,82 ± 3,28 p3.4 < 0,05 - Mức giảm tỷ lệ nhóm uống VTT Uống VTT (4) 18,76 ± 3,56 p1.4 < 0,05 so với nhóm uống mediphylamin khơng có ý 30 - Giảm tỷ lệ % tinh trùng di động chậm nhóm uống VTT so với nhóm uống nước cất mediphylamin có ý nghĩa thống kê, p1.4 < 0,05 p3.4 < 0,05 - Tỷ lệ % tinh trùng di động chậm nhóm uống provironum thấp - Giảm tỷ lệ % tinh trùng bất động nhóm uống provinorum so với nhóm uống VTT khơng có ý nghĩa thống kê nghĩa thống kê (p > 0,05) * Tỷ lệ tinh trùng dị dạng nhóm: Bảng 12: So sánh tỷ lệ % tinh trùng dị dạng nhóm Nhóm n X ± SD p * Tỷ lệ tinh trùng chỗ: Chứng (1) 30 13,36 ± 3,29 p1.3 < 0,05 Bảng 10: Tỷ lệ % tinh trùng chỗ Uống provironum (2) 30 10.,9 ± 4,27 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 12,55 ± 3,92 p3.4 > 0,05 Uống VTT (4) 11,79 ± 3,77 p1.4 > 0,05 Nhóm n X ± SD p Chứng (1) 30 16,80 ± 3,26 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 11,04 ± 2,76 p2.4 > 0,05 Tỷ lệ % tinh trùng dị dạng nhóm Uống mediphylamin (3) 30 14,28 ± 2,98 p3.4 > 0,05 uống VTT giảm đáng kể (p < 0,05) so với Uống VTT (4) 30 14,12 ± 3,01 p1.4 > 0,05 nhóm uống nước cất mediphylamin 30 57 TẠP CHÍ Y - DƢỢC HỌC QUÂN SỰ SỐ 2-2016 * Tỷ lệ tinh trùng sống nhóm: Bảng 13: So sánh tỷ lệ tinh trùng sống nhóm n X ± SD p Chứng (1) Nhóm 30 74,09 ± 4,76 p1.3 < 0,05 Uống provironum (2) 30 80,86 ± 3,98 p2.4 > 0,05 Uống mediphylamin (3) 30 77,64 ± 4,32 p3.4 < 0,05 Uống VTT (4) 30 78,85 ± 3,83 p1.4 < 0,05 - Tỷ lệ % tinh trùng sống nhóm uống VTT so với nhóm uống nước cất tăng đáng kể (p < 0,05) - Tỷ lệ nhóm uống VTT so với nhóm uống mediphylamin tăng lên với p < 0,05 KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu mô hình thực nghiệm, chúng tơi đưa số kết luận: - Thuốc VTT có tác dụng kích thích sinh tinh tương đương với provironum mediphylamin thực nghiệm - Thuốc VTT làm tăng số lượng tinh trùng di động nhanh tỷ lệ sống tinh trùng, giảm số lượng tinh trùng di động chậm có ý nghĩa thống kê Nguyễn Thị Ngọc Phượng CS Báo cáo hoạt động Khoa Hiếm muộn, Bệnh viện Phụ sản Từ Dũ năm 2003 Thành phố Hồ Chí Minh 2004 Trịnh Thế Sơn Nghiên cứu đặc điểm hình thái ống sinh tinh bệnh nhân khơng có tinh trùng tinh dịch, đánh giá hiệu số phương pháp hỗ trợ sinh sản Luận án Tiến sỹ Y học Học viện Quân y 2011 Boekelheide K, Johnson KJ Sertoli cell toxicants Sertoli Cell Biology Elsevier Academic Press 2005, pp.345-382 Brandell RA, Schlegel PN Evaluation of male infertility Handbook of the Assisted Reproduction Laboratory CRC Press New York 2000, pp.77-97 Brehm R, Steger K The Sertoli cell Regulation of Sertoli Cell and Germ Cell Differentation Springer-Verlag Berlin Heidelberg 2005, pp.7-36 Buiatti E, Barchielli A, Geddes M, Nastasi L, Kriebel D, Franchini M, Scarselli G Risk factors in male infertility: a case-control study Arch Environ Health 1984, 39 (4), pp.266-270 TÀI LIỆU THAM KHẢO Camatini M, Faleri M, Franchi E Testicular biopsy of secretory azoospermia: electron and light microscopic analysis Arch Androl 1978, (4), pp.281-289 Tr n Quán nh, Tr n Thị Trung Chiến, Lê Văn Vệ Phẫu thuật ống dẫn tinh Bệnh học giới tính nam Nhà xuất Y học Hà Nội 2002, tr.303-378 WHO WHO laboratory manual for the examination of human semen and spermcervical mucus interaction Fourth edition Cambridge University Press 2010 58 ... Từ kết nghiên cứu mơ hình thực nghiệm, đưa số kết luận: - Thuốc VTT có tác dụng kích thích sinh tinh tương đương với provironum mediphylamin thực nghiệm - Thuốc VTT làm tăng số lượng tinh trùng... chia lơ sử dụng nhóm thuốc kích thích sinh tinh khác nhau, sau đánh giá so sánh cấu trúc ống sinh tinh chất lượng tinh trùng nhóm nghiên cứu Phƣơng pháp nghiên cứu Sử dụng nghiên cứu thống kê,... hoạt tính kích thích sinh tinh song chưa nghiên cứu cách chưa áp dụng rộng rãi - Lơ 1: nhóm động vật thực nghiệm uống nước cất (nhóm chứng) - Lơ 2: nhóm động vật thực nghiệm uống thuốc provironum