Giá trị của đột biến gen BRAF T1799A trong chẩn đoán ung thư tuyến giáp thể nhú

Nội dung nghiên cứu với mục tiêu nhằm so sánh độ nhạy (Se), độ đặc hiệu (Sp) của kỹ thuật ASB realtime PCR phát hiện đột biến T1799A với FNAC trong chẩn đoán ung thư tuyến giáp thể nhú. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.

Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 3 * 2013 GIÁ TRỊ CỦA ĐỘT BIẾN GEN BRAF T1799A   TRONG CHẨN ĐỐN UNG THƯ TUYẾN GIÁP THỂ NHÚ   Hồng Quốc Trường*, Ngơ Minh Hạnh**, Lê Hữu Song*  TĨM TẮT  Đặt vấn đề: Chọc hút tế bào bằng kim nhỏ (FNAC) là xét nghiệm thường quy trong chẩn đốn trước phẫu  thuật đối với các u tuyến giáp. Tuy nhiên, có khoảng 15% các trường hợp khơng kết luận được. Đột biến gen  braf T1799A là một trong các dấu ấn phân tử gần đây được cho là có giá trị trong hỗ trợ chẩn đốn ung thư  tuyến giáp thể nhú (UTTGTN).  Mục  tiêu:  So  sánh  độ  nhạy  (Se),  độ  đặc  hiệu  (Sp)  của  kỹ  thuật  ASB  RealTime  PCR  phát  hiện  đột  biến  T1799A với FNAC trong chẩn đốn UTTGTN.  Đối tượng và phương pháp: 45 mẫu nhân giáp được đưa vào nghiên cứu. Chẩn đốn cuối cùng dựa vào  kết quả mơ bệnh học sau phẫu thuật. Đột biến T1799A được xác định bằng kỹ thuật ASB RealTime PCR. Độ  nhạy, đặc hiệu, chính xác của ASB RealTime PCR được xác định trên các mẫu FNAC có kết quả chẩn đốn mơ  bệnh học.  Kết quả: Độ nhạy, đặc hiệu, chính xác của kỹ thuật ASB RealTime PCR so với FNAC được xác định tương  ứng là 92,3%; 83,3%; 91,1% so với 90,5%; 33,3% và 88,8%.  Kết  luận: Xét nghiệm phát hiện đột biến gen braf T1799A kết hợp với FNAC sẽ làm tăng tính chính xác  của kỹ thuật này trong chẩn đốn ung thư tuyến giáp thể nhú.  Từ khóa: ung thư tuyến giáp thể nhú, FNAC, BRAF  ABSTRACT  THE VALUE OF BRAF T1799A MUTATION ANALYSIS   IN THE DIAGNOSIS OF PAPILLARY THYROID CARCINOMA  Hoang Quoc Truong, Ngo Minh Hanh, Le Huu Song  * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 17 ‐ Supplement of No 3 ‐ 2013: 63 ‐ 67  Background: Fine‐needle aspiration cytology is routinely used before surgery of thyroid nodules. However,  15% of FNAC are diagnosed as suspicious for malignancy and undetermined, so that the proportion of patients  with inconclusive results in diagnosis. Recently, BRAF T1799A mutation is one of a valuable molecular markers  in Papillary thyroid carcinoma.  Aims: To compare sensitivity, specificity and accuracy of ASB RealTime PCR detecting T1799A mutation  assay with that of FNAC in the diagnosis of papillary thyroid carcinoma.  Patients  and  Methods:  A  total  of  45  thyroid  nodules  from  patients  were  prospectively  analyzed  for  cytology. A final diagnosis was confirmed by histology after surgery. BRAF T1799A mutation was analysed by  ASB RealTime PCR. A sensitivity, specificity and accuracy of ASB RealTime PCR assay were determined based  on the results of histopathology.  Results: Sensitivity, specificity and accuracy of ASB RealTime PCR assay was 92.3%; 83.3% and 91.1%  compared with 90.5%; 33.3% and 88.8% which was determined by FNAC.  Conclusions:  BRAF  T1799A  mutation  analysis  when  combined  with  FNAC  can  significantly  improve  *Bệnh viện Trung Ương Quân đội 108  **Viện nghiên cứu Y Dược Lâm sàng 108  Tác giả liên lạc: TS. Hoàng Quốc Trường  ĐT: 0988709667  Email: hqtruong2002@yahoo.com  62 Chun Đề Giải Phẫu Bệnh   Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 3 * 2013  Nghiên cứu Y học FNAC diagnostic accuracy in the diagnosis of thyroid papillary carcinoma.  Key words: papillary Thyroid carcinoma, FNAC, BRAF  69%(3,10)  nhưng  chưa  có  một  cơng  trình  cơng  bố  ĐẶT VẤN ĐỀ  nào cho thấy có sự xuất hiện của đột biến này ở  Kỹ  thuật  chọc  hút  tế  bào  bằng  kim  nhỏ  các  tế  bào  tuyến  giáp  lành  tính(4).  Các  kết  quả  (FNAC)  là  xét  nghiệm  tế  bào  học  thường  quy  công bố  trên thế giới đã khẳng định  giá  trị  của  trong chẩn đoán trước phẫu thuật ung thư tuyến  đột biến này khi kết hợp với FNAC sẽ làm tăng  giáp  thể  nhú  (UTTGTN)  với  độ  nhạy,  độ  đặc  độ  nhạy,  độ  đặc  hiệu  và  tính  chính  xác  của  kỹ  hiệu  kỹ  thuật  tương  ứng  đạt  70−98%  và  thuật chẩn đoán này(8,16). Từ kết quả nghiên cứu  55−100%(5).  Đây  là  kỹ  thuật  đầu  tay  trong  thực  của  đề  tài  tiềm  năng  mã  số  KC.10.TN.14/11‐15,  hành  lâm  sàng,  tuy  nhiên,  có  tới  15−20%  số  chúng  tơi  đã  xây  dựng  thành  cơng  kỹ  thuật  trường hợp khơng xác định được chẩn đốn và  khuếch  đại  gen  đặc  hiệu  alen  kết  hợp  Blocker  có  khoảng  10–40%  số  mẫu  bệnh  phẩm  được  (ASB RealTime PCR) phát hiện đột biến gen braf  chẩn  đoán  nghi  ngờ  hoặc  không  đủ  tiêu  chuẩn  T1799A  trong  UTTGTN(9).  Trong  nghiên  cứu  xét  nghiệm(2,15).  Gần  đây  kết  quả  FNAC  khơng  này, chúng tơi đánh giá độ nhạy, đặc hiệu, tính  xác  định  được  đề  xuất  chia  thành  3  nhóm:  (1)  chính  xác  của  kỹ  thuật  ASB  RealTime  PCR  xác  Tổn  thương  tế  bào  nang  tuyến  giáp  không  xác  định  đột  biến  T1799A  và  so  sánh  với  kỹ  thuật  định  (follicular  lesion  of  undetermined  FNAC trong chẩn đoán UTTGTN.  significance,  FLUS);  (2)  Tế  bào  Hurthle;  và  (3)  ĐỐI TƯỢNG ‐ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU  Nghi  ngờ  ác  tính  (suspicious  for  malignancy),  với tỉ lệ dự đốn ung thư tương ứng 5–10%, 20– Đối tượng nghiên cứu  30%, và 50–75%(17). Việc phân loại  trên  với  mục  Mẫu chứng dương và chứng âm của nghiên cứu  đích trả lời kết quả xét nghiệm tế bào học chính  Dòng  tế  bào  HT‐29  mang  đột  biến  gen  braf  xác  nhất.  Tuy  nhiên,  trong  số  các  trường  hợp  T1799A (ATCC, Mỹ).  phẫu  thuật  loại  bỏ  nhân  giáp  thì  chỉ  có  8–56%  Dòng tế bào HCT‐116 mang gen BRAF kiểu  phát hiện có tế bào ác tính(1), do đó có rất nhiều  dại (ATCC, Mỹ).  bệnh nhân phải chịu cuộc phẫu thuật khơng cần  thiết dẫn đến nguy cơ mắc thêm bệnh và thêm  kinh phí điều trị(11). Những bệnh nhân có kết quả  chẩn  đốn  FNAC  khơng  xác  định  thường  trải  qua một cuộc phẫu thuật hạn chế, cắt một phần  tuyến giáp. Sau khi xác định là ung thư bằng kết  quả giải phẫu bệnh, các bệnh nhân này sẽ phải  chịu cuộc mổ thứ hai để cắt tồn bộ tuyến giáp  nên chi phí điều trị là rất tốn kém. Hơn nữa, có  1–3% số trường hợp chẩn đốn FNAC là âm tính  giả nên bệnh nhân mất cơ hội được điều trị(14). Vì  những  lí  do  trên,  việc  phát  triển  các  phương  pháp chẩn đốn có độ nhạy, độ đặc hiệu cao hỗ  trợ cho kỹ thuật FNAC chính xác hơn là vơ cùng  cấp thiết.  Qua nghiên cứu người ta thấy đột biến gen  braf T1799A là dấu ấn phân tử rất có giá trị trong  chẩn đốn UTTGTN. Đột biến T1799A xuất hiện  trong  UTTGTN  với  tần  suất  giao  động  từ  29– Chun Đề Giải Phẫu Bệnh  45 bệnh nhân được khám và chẩn đốn bệnh  tại phòng xét nghiệm tế bào ‐ Bệnh viện Nội tiết  Trung  Ương  và  Khoa  Giải  phẫu  bệnh  lý,  Bệnh  viện  TƯQĐ  108.  Tất  cả  các  bệnh  nhân  này  vừa  có kết quả tế bào học, vừa có kết quả  mơ  bệnh  học sau phẫu thuật.  Cách lấy bệnh phẩm làm xét nghiệm xác định  đột biến gen braf T1799A  Mỗi  mẫu  bệnh  phẩm  chọc  hút  được  chia  thành  2  phần:  1/2  được  trải  ra  lam  để  chẩn  đốn tế bào, 1/2 được chia sang ống eppendorf  vơ  trùng  để  làm  xét  nghiệm  phát  hiện  đột  biến. Trong các trường hợp chọc hút tế bào mà  lượng  mẫu  bệnh  phẩm  lấy  ít  sẽ  loại  khỏi  nghiên cứu này.  63 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 3 * 2013 Phương pháp nghiên cứu  Phương  pháp  tách  chiết  ADN  tổng  số  từ  các  mẫu FNA  Các  mẫu  chọc  hút  tế  bào  được  rửa  trong  nước muối sinh lý 0,9% và được tiến hành tách  chiết  ADN  tổng  số  theo  quy  trình  của  Hoàng  Quốc Trường và cộng sự(6,7).  Phương  pháp  phát  hiện  đột  biến  gen  BRAF  T1799A  bằng  kỹ  thuật  khuếch  đại  gen  đặc  hiệu alen kết hợp Blocker  Trình  tự  primer  và  Blocker  đặc  hiệu  phát  hiện đột biến gen braf T1799A được thiết kế dựa  trên  các  cơng  trình  đã  cơng  bố(16).  Đột  biến  gen  braf  T1799A  được  xác  định  bằng  kỹ  thuật  RealTime PCR kết hợp Blocker. Phản ứng được  tiến hành với thể tích 20 μL, tỉ lệ các thành phần  như sau: 2X PCR master mix SYBR Green (ABI),  No.1:  5ʹ‐CTGTTTTCCTTTACTTACT  mồi  ACACCTCAGAT‐  3’  (0,375  pM),  mồi  đặc  hiệu  alen No.2: 5’‐CCCACTCCATCGAGATTTCT‐ 3’  (0,375  pM)  và  300  pM  Blocker:  5’‐ CATCGAGATTTCAC  TGTAGCTAGA‐PO4‐3’.  2,5  μL  ADN  tổng  số  và  0,5  μL  nước  cho  phản  ứng  RealTime  PCR.  Phản  ứng  khuếch  đại  gen  đặc  hiệu  alen  kết  hợp  Blocker  được  thực  hiện  trên  máy  RealTime  PCR  7500,  Mỹ  với  chu  kỳ  nhiệt như sau: 50°C/5 phút; 95°C/10 phút, 45 chu  kỳ (95°C/15 giây, 60°C/1 phút). Do việc thiết kế  trình  tự  mồi  đặc  hiệu  alen  kết  hợp  sử  dụng  Blocker, phản ứng khuếch đại gen sẽ chỉ xẩy ra  trên mạch khuôn ADN mang điểm đột biến và  được  hiển  thị  ngay  sau  mỗi  chu  kỳ  nhiệt  của  phản  ứng  qua  việc  ghi  nhận  tín  hiệu  huỳnh  quang  của  SYBR  Green.  Trong  khi,  các  mẫu  khơng có tín hiệu huỳnh quang là các mẫu kiểu  dại khơng chứa đột biến gen braf T1799A(18).  Phương pháp xác định trình tự axit nucleic  Để kiểm định độc lập sự có mặt đột biến gen  braf  T1799A  trong  mẫu  chuẩn  dương  HT‐29  và  các  mẫu  bệnh  phẩm  FNAC  chúng  tơi  tiến  hành  giải trình tự trực tiếp đoạn gen bằng cặp mồi (mồi  No.1:  5ʹ‐ CTGTTTTCCTTTACTTACTACACCTCAGAT‐  64 3’, mồi No.3: 5’‐CAACTGTTCAA ACTGATGGG‐  3’),  trên  hệ  thống  máy  CEQ  8800  sequencer  (Beckman  Coulter,  Mỹ).  Kết  quả  giải  trình  tự  được phân tích bằng phần mềm BioEdit và cơng  cụ  so  sánh  trình  tự  trực  tuyến  Blast  search  (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).  Phương pháp đánh giá độ nhạy,  độ  đặc  hiệu,  chính xác của kỹ thuật ASB RealTime PCR  phát hiện đột biến T1799A  Độ  nhạy  của  kỹ  thuật  được  tính  theo  cơng  thức sau:   Độ nhạy =(TP/(TP + FN)) x 100.  Độ  đặc  hiệu  của  kỹ  thuật  được  tính  theo  cơng thức sau:   Độ đặc hiệu =(TN/(TN + FP)) x 100.  Độ  chính  xác  của  kỹ  thuật  được  tính  theo  cơng thức sau:   Độ  chính  xác  =((TP  +  TN)/(TP  +  TN  +  FP  +  FN)) x 100.  Trong đó: TP: Là các mẫu FNAC phát hiện dương tính  với đột biến T1799A và kết quả chẩn đốn mơ bệnh học  là ung thư tuyến giáp thể nhú; FP: Là các mẫu FNAC  phát hiện dương tính với đột biến T1799A nhưng kết  quả mơ bệnh học là lành tính; TN: Là các mẫu FNAC  âm tính với đột biến T1799A và kết quả chẩn đốn mơ  bệnh học là lành tính; FN: Là các mẫu FNAC âm tính  với đột biến T1799A và kết quả chẩn đốn mơ bệnh học  là ung thư tuyến giáp thể nhú.  Phân tích và xử lý số liệu  Số  liệu  nghiên  cứu  được  tổng  hợp  và  xử  lý  theo phương pháp thống kê y học sử dụng phần  mềm STAT 7.0 và STAVIEW 4.57.  KẾT QUẢ  Kết  quả  chẩn  đoán  tế  bào  bằng  kỹ  thuật  FNAC  Bảng 1. Kết quả chẩn đốn tế bào bằng kỹ thuật  FNAC và mơ bệnh học.  Bướu giáp lành tính Nghi ngờ carcinôm Carcinôm TG Tổng số FNAC 37 45 Mô bệnh học 39 45 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh   Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 3 * 2013  Nhận xét: Sự phù hợp giữa mơ bệnh học và  FNAC  là  40/45  (88,9%),  có  5  bệnh  nhân  được  chẩn đốn là nghi ngờ bằng FNAC, trong 5 BN  này có 3 BN là UTTGTN, còn lại 2 BN là u tuyến  giáp lành tính.  Kết  quả  phát  hiện  đột  biến  gen  braf  T1799A bằng kỹ thuật ASB RealTime PCR  trên các mẫu FNAC  Bảng 2. Kết quả phát hiện đột biến T1799A trên 45  mẫu bệnh phẩm FNAC.  Kết chẩn đoán FNAC Bướu nang tuyến giáp Nghi ngờ carcinôm Carcinôm TG Tổng số (n, %) BRAF T1799A (+) (n, %) (66,6) BRAF T1799A (-) (n, %) (33,3) (60) 32 (86,5) 37 (82,2) (40) (13,5) (17,8) Nhận  xét:  Như  vậy,  trên  45  mẫu  FNAC  chúng tơi phát hiện được 37 mẫu có đột biến gen  braf  T1799A.  Tỷ  lệ  đột  biến  gen  braf  T1799A  ở  nhóm UTTG cao hơn so với 2 nhóm còn lại.  Giá trị của đột biến gen braf T1799A trong  chẩn đốn ung thư tuyến giáp thể nhú  Bảng 3. So sánh độ nhạy, đặc hiệu, chính xác của kỹ  thuật ASB RealTime PCR phát hiện đột biến T1799A  với kỹ thuật FNAC trong chẩn đốn UTTGTN.  Phương pháp chẩn Độ nhạy đoán ASB RealTime PCR 92,3 FNAC 90,5 Độ đặc hiệu 83,3 33,3 Độ xác 91,1 88,8 Nhận xét: Độ chính xác, độ nhạy và độ đặc  hiệu  của  kỹ  thuật  ASB  RealTime  là  cao  hơn  so  với  FNAC  trong  chẩn  đoán  UTTGTN  (91,1%,  92,3% và 83,3% so với 88,8%, 90,5% và 33,3%).  BÀN LUẬN  Đột biến gen braf là một trong những dấu ấn  phân tử giúp chẩn đoán phát hiện UTTGTN với  độ nhạy và độ đặc hiệu tương ứng 80% và 99,7%  khi kết hợp với kỹ thuật chẩn đoán tế bào(13). Xác  định được đột biến gen braf T1799A sẽ giúp hạn  chế  các  trường  hợp  chẩn  đoán  UTTGTN  bị  bỏ  sót  bởi  kỹ  thuật  FNAC,  nâng  cao  chất  lượng  chẩn đốn, theo dõi và quản lý bệnh nhân. Giá  trị chẩn đốn xác định của các dấu ấn SHPT khi  Chun Đề Giải Phẫu Bệnh  Nghiên cứu Y học kết hợp với chẩn đốn tế bào sẽ đem lại lợi ích  cho  bệnh  nhân  trong  các  trường  hợp  bắt  buộc  phải  phẫu  thuật,  phẫu  thuật  triệt  để  phòng  chống ung thư tái phát.  Trong  chẩn  đốn  ban  đầu,  giá  trị  lớn  nhất  của dấu ấn phân tử này được thể hiện trong việc  hỗ trợ kỹ thuật FNAC chẩn đốn chính xác hơn,  đặc  biệt  trong  các  trường  hợp  chẩn  đốn  nghi  ngờ hoặc khơng xác định. Trong cơng trình cơng  bố  bởi  Suk  Kyeong  Kim  và  cộng  sự  năm  2011  cho  thấy,  trong  số  865  trường  hợp  FNAC  u  tuyến giáp, 504, 141, 54, 140, 10 và 16 được chẩn  đốn là bướu nhân, nghi ngờ, nghi ngờ ung thư,  ung thư, nghi ngờ ung thư tuyến giáp thể nang  và khơng đủ tiêu chuẩn. Thì tỉ lệ phát hiện đột  biến  T1799A  trên  các  nhóm  được  chẩn  đốn  FNAC  tương  ứng:  0%  với  nhóm  bướu  nhân,  45/141 (31,9%) với nhóm nghi ngờ, 46/54 (85,2%)  với nhóm nghi ngờ ung thư, 129/140 (92,1%) với  nhóm ung thư và 1/10 (10%) với nhóm nghi ngờ  ung thư tuyến giáp thể nang. Đặc biệt trong số  45  trường  hợp  nghi  ngờ  phát  hiện  có  đột  biến  T1799A, 30 trường hợp được làm xét nghiệm mơ  bệnh học sau mổ xác định 29 ca là UTTGTN và 1  ca  là  hạch  viêm  quá  sản(12).  Trong  nghiên  cứu  của  chúng  tơi  với  45  mẫu  FNAC  thì  có  37,  5,  3  mẫu  được  chẩn  đốn  là  carcinơm  tuyến  giáp,  nghi  ngờ  carcinôm  và  bướu  nang.  Tỷ  lệ  phát  hiện  đột  biến  T1799A  trên  các  mẫu  này  tương  ứng  là  32/37  (86,5%)  carcinôm  tuyến  giáp,  3/5  (60%)  nghi  ngờ  carcinôm  và  2/3  (66,7%)  bướu  nang. Trong khi kết quả hồi cứu mơ bệnh học có  39/45  (86,7%)  carcinơm  thể  nhú  và  6/45  (13,3%)  bướu  tuyến  giáp  lành  tính,  tương  ứng  với  tỉ  lệ  phát  hiện  đột  biến  T1799A  là  36/39  (92,3%)  và  1/6 (16,7%) (Bảng 1, 2 và Phụ lục 1). Trong số 05  mẫu FNAC chẩn đốn nghi ngờ carcinơm có 03  mẫu  phát  hiện  đột  biến  T1799A,  phù  hợp  kết  quả  mô  bệnh  học  carcinôm  thể  nhú.  2/3  mẫu  FNAC  bướu  nang  dương  tính  với  đột  biến  T1799A,  xét  nghiệm  mô  bệnh  học  xác  nhận  01  mẫu  bướu  tuyến  giáp  lành  tính  và  01  mẫu  vi  carcinơm thể nhú. Như vậy, kết quả nghiên cứu  của chúng tơi cũng tương tự như những nghiên  cứu trước đây. Từ những kết quả đó cho thấy độ  65 Nghiên cứu Y học  Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ bản của Số 3 * 2013 nhạy  của  ASB  RealTime  PCR  thấp  hơn  so  với  FNAC (92,1% so với 97,6%), nhưng độ đặc hiệu  thì cao hơn (83,3% so với 33,3%) và độ chính xác  cũng cao hơn (90,9% so với 89,4%).  KẾT LUẬN  Xét  nghiệm  phát  hiện  đột  biến  gen  braf  T1799A nên được kết hợp với FNAC trong thực  hành  lâm  sàng  chẩn  đoán  ung  thư  tuyến  giáp  thể nhú.  10 11 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO  Baloch ZW, LiVolsi VA, Asa SL, Rosai J et al (2008). Diagnostic  terminology  and  morphologic  criteria  for  cytologic  diagnosis  of  thyroid  lesions:  a  synopsis  of  the  National  Carcinôm  Institute  Thyroid  Fine‐Needle  Aspiration  State  of  the  Science  Conference. Diagn Cytopathol, 36:425–437.  Cooper  DS,  Doherty  GM,  Haugen  BR  et  al  (2006).  Management guidelines for patients with thyroid nodules and  differentiated thyroid carcinôm. Thyroid, 16:109–142.  Cooper  DS,  Doherty  GM,  Haugen  BR,  Kloos  RT  et  al  (2006).  Management guidelines for patients with thyroid nodules and  differentiated thyroid carcinôm, Thyroid, 16:109–142.  Fukushima  T,  Suzuki  S,  Mashiko  M,  Ohtake  T  et  al  (2003).  BRAF  mutations  in  papillary  carcinôms  of  the  thyroid.  Oncogen, 22: 6455‐6457.  Gharib H & Goellner JR (1993). Fine‐needle aspiration biopsy  of the thyroid: an appraisal. Annals of Internal Medicine, pp.  282–289.  Hồng Quốc Trường và cs (2011). Chẩn đốn nhanh vi khuẩn  lao  kháng  rifampicin  bằng  kỹ  thuật  khuếch  đại  gene  đa  mồi  đặc hiệu alen. Tạp chí Y dược lâm sàng 108, 6(5):74–79.  Hồng Quốc Trường và cs (2012). Nghiên cứu xây dựng quy  trình phát hiện đột biến gen braf T1799A trong ung thư tuyến  giáp  thể  nhú  bằng  kỹ  thuật  ASB  RealTime  PCR.  Tạp  chí  Y‐ Dược học Quân sự, 37: 20 – 25.  13 14 15 16 17 Kim  SK,  Hwang  TS,  Yoo  YB,  Han  HS,  Kim  DL,  et  al  (2011).  Surgical  Results  of  Thyroid  Nodules  according  to  a  Management  Guideline  Based  on  the  BRAFV600E  Mutation  Status. J Clin Endocrinol Metab, 96(3): 658 – 64.  Lang AH et at (2011). Optimized Allele‐Specific RealTime PCR  assays  for  the  detection  of  common  mutations  in  KRAS  and  BRAF. The Journal of Molecular Diagnostics, 13(1): 23 – 28.  M  Xing  (2005).  BRAF  mutation  in  thyroid  carcinôm.  Endocrine‐Related Carcinôm, 12: 245‐262.  Mazzaferri  EL  (1993).  Management  of  a  solitary  thyroid  nodule. N Engl J Med, 328:553–559.  Nikiforov  YE,  Steward  DL,  Robinson‐Smith  T,  et  al  (2009).  Molecular  testing  for  mutations  in  improving  the  fine  needle  aspiration  diagnosis  of  thyroid  nodules.  Journal  of  Clinical  Endocrinology and Metabolism, 94: 2092–2098.  Pacini  F  et  al  (2010).  Impact  of  Proto‐Oncogene  Mutation  Detection  in  Cytological  Specimens  from  Thyroid  Nodules  Improves  the  Diagnostic  Accuracy  of  Cytology.  J  Clin  Endocrinol Metab, 95(3):1365– 369.  Robertson  ML,  Steward  DL,  Gluckman  JL,  Welge  J  (2004).  Continuous  laryngeal  nerve  integrity  monitoring  during  thyroidectomy:  does  it  reduce  risk  of  injury?  Otolaryngol.  Head Neck Surg, 131:596–600.  Sclabas GM, Staerkel GA, Shapiro SE, Fornage BD, et al (2003).  Fine‐needle  aspiration  of  the  thyroid  and  correlation  with  histopathology in a contemporary series of 240 patients. Am J  Surg, 186: 702–709.  Xing M et al (2005). BRAF mutation predicts a poorer clinical  prognosis  for  papillary  thyroid  carcinôm.  J  Clin  Endocrinol  Metab, 90: 6373‐6379.  Yassa  L,  Cibas  ES,  Benson  CB,  Frates  MC,  Doubilet  PM,Gawande AA, Moore Jr FD, Kim BW, Nose´ V, Marqusee  E, Larsen PR, Alexander EK (2007). Long term assessment of a  multidisciplinary  approach  to  thyroid  nodule  diagnostic  evaluation. Carcinôm, 111:508–516.    Ngày nhận bài báo      Ngày phản biện nhận xét bài báo:  Ngày bài báo được đăng:    18‐06‐2013  20‐06‐2013  15–07‐2013    66 Chuyên Đề Giải Phẫu Bệnh   ... chúng tơi phát hiện được 37 mẫu có đột biến gen braf T1799A.   Tỷ  lệ  đột biến gen braf T1799A ở  nhóm UTTG cao hơn so với 2 nhóm còn lại.  Giá trị của đột biến gen braf T1799A trong chẩn đốn ung thư tuyến giáp thể nhú ... KẾT LUẬN  Xét  nghiệm  phát  hiện  đột biến gen braf T1799A nên được kết hợp với FNAC trong thực  hành  lâm  sàng  chẩn đoán ung thư tuyến giáp thể nhú.   10 11 12 TÀI LIỆU THAM KHẢO ... cơng bố  trên thế giới đã khẳng định  giá trị của trong chẩn đốn trước phẫu thuật ung thư tuyến đột biến này khi kết hợp với FNAC sẽ làm tăng  giáp thể nhú (UTTGTN)  với  độ  nhạy,  độ  đặc