Nghiên cứu thành phần alkaloid trong tâm sen (nelumbo nucifera gaertn nelumbonaceae)

Bài viết này công bố về thành phần alkaloid của tâm sen và phân lập alkaloid chính trong sen để dùng làm chất chuẩn cho tiêu chuẩn hoá các dược liệu cũng như góp phần bổ sung cơ sở dữ liệu về thành phần hóa học cho cây sen Việt Nam.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN ALKALOID TRONG TÂM SEN (NELUMBO NUCIFERA GAERTN NELUMBONACEAE) Đỗ Châu Minh Vĩnh Thọ*, Nguyễn Đức Tuấn**, Trần Hùng* TÓM TẮT Mở đầu: Sen (Nelumbo nucifera Gaertn.) họ Nelumbonaceae số dược thảo mà tất phận vị thuốc q Việc nghiên cứu thành phần hóa học Sen số tác giả giới thực Tuy nhiên, Việt Nam chưa có nhiều cơng trình nghiên cứu kỹ tồn diện tâm Sen Trong hướng nghiên cứu thành phần tác dụng sinh học Sen tỉnh phía Nam, báo công bố thành phần alkaloid tâm Sen phân lập alkaloid Sen để dùng làm chất chuẩn cho tiêu chuẩn hoá dược liệu góp phần bổ sung sở liệu thành phần hóa học cho Sen Việt Nam Mục tiêu: Chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc alkaloid tâm Sen Phương pháp: Chiết cao chiết toàn phần tách thành phân đoạn đơn giản phân bố nuớc với dung mơi có độ phân cực khác theo pH Phân lập chất tinh khiết sắc ký cột chân không sắc ký cột cổ điển Cấu trúc chất phân lập xác định phổ UV-Vis, MS, NMR Kết quả: Tách phân đoạn đơn giản (P, NP8, NP5) từ cao alkaloid toàn phần theo biến thiên pH Đồng thời phân lập alcaloid EN-1, EN-2 xác định neferin nuciferin Kết luận: Đề tài xác định chất tinh khiết neferin nuciferin tạo sở cho việc định tính điểm định lượng neferin tâm Sen vùng miền mùa thu hái khác hay chế phẩm chứa tâm Sen kỹ thuật HPLC/PDA Từ khóa: Nelumbo nucifera, Nelumbonaceae, Alkaloid, Neferin ABSTRACT STUDY ON ALKALOIDAL CONSTITUENTS OF LOTUS EMBRYO (NELUMBO NUCIFERA GAERTN ) Do Chau Minh Vinh Tho, Nguyen Duc Tuan, Tran Hung * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 15 - Supplement of No - 2011: 606 - 611 Background: Lotus (or Sen in Vietnamese) - Nelumbo nucifera Gaertn., Nelumbonaceae is one of the few herbs that all components are valuable medicines The studies on its chemical constituents have been conducted by numbers of authors in the world However, in Vietnam there have not been many researchs on this plants In the direction of chemical and pharmacological studies on lotus of south Vietnam, this paper will report the alkaloidal constituents and the isolation of the main alkaloid of Loti embryo Objectives: Extraction, isolation and structure elucidation of alkaloids in Loti embryo Methods: Alcoholic extract of embryo was subjected to liquid-liquid distribution based on the solubility of the substances in solution by pH Simple fractions was separated by extraction, fractionation and isolation were carried out as common phytochemical methods Structures of isolated compounds were deduced by means of UV, MS and NMR spectroscopy Results: The content of alkaloid in crude ethanol extraction of Loti embryo was 0.99% The simpler fractions (P, NP8, NP5) obtained by liquid-liquid distribution based gradient pH Two alkaloids EN-1, EN-2 were isolated *Khoa Dược, Trường đại học Y Dược Cần Thơ **Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên hệ: PGS TS Trần Hùng ĐT: 0918057096 Email: tranhung@uphcm.edu.com 606 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học and identified as neferine and nuciferine Conclusion: Two major alkaloids of Loti embryo ie neferine and nuciferine, was isolated and identified These alkaloids could be used as markers for quality control and investigation of there pharmacological activities in further studies Keywords: Nelumbo nucifera, enbryo, alkaloid, neferine, nuciferine, structure ĐẶT VẤN ĐỀ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Trong kho tàng thực vật thuốc Việt Nam, Sen (Nelumbo nucifera Gaertn Nelumbonaceae) mọc ao, hồ có khắp miền đất nước, số dược thảo mà tất phận vị thuốc q, có giá trị sinh học cao(2,5) Tuy nhiên, việc sử dụng chế phẩm bào chế từ tâm, Sen thuốc viên uống, cao thuốc, loại trà dạng cao tồn phần, dịch chiết tồn phần Do nghiên cứu chiết xuất, phân lập tiêu chuẩn hóa thành phần alkaloid có tác dụng sinh học tâm Sen Việt Nam góp phần nâng cao tiêu chuẩn chất lượng dược liệu chế phẩm từ Sen thăm dò tác dụng sinh học chúng việc làm cần thiết Định tính sắc ký lớp mỏng NGUYÊN LIỆUNGHIÊN CỨU PHƯƠNG Qua thăm dò số hệ dung mơi cho sắc ký lớp mỏng, hệ dung mơi DCM-MeOH-NH4OH (90:10:1) có khả tách tốt alkaloid phân cực mạnh trung bình tâm Sen hệ dung môi DCM-MeOH-NH4OH (95:5:1) tách tốt alkaloid phân cực UV365 UV254 Dragendorf f PHÁP Nguyên liệu Tâm Sen (được sấy khô 40 0C bảo quản nhiệt độ thấp) thu mua từ sở “Chế biến sản phẩm từ Sen” Thị Trấn Mỹ Thọ, TP Cao Lãnh Mẫu định danh lưu môn Dược liệu, khoa Dược, Đại học Y Dược TP.HCM Phương pháp nghiên cứu Phân tách phân đoạn chiết phân bố lỏng-lỏng, sắc kí cột chân khơng Phân lập chất sắc kí cột cổ điển, sắc ký rây phân tử kết tinh phân đoạn Hình Sắc ký đồ alkaloid toàn phần tâm sen Hdm: DCM-MeOH-NH4OH (90:10:1) Chiết cao chiết cồn toàn phần Cao cồn toàn phần tâm Sen chiết theo quy trình sau: Xác định phổ UV chất phân lập máy Hitachi L2000 detector DAD phổ MS máy Quatro Micro API (Waters) Chuyên Đề Dược Khoa 607 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Bột tâm sen Cồn 70%, thu hồi cồn áp suất giảm Dịch chiết đậm đ Kết tách phân đoạn từ cao chiết cồn minh hoạ Hình Thêm H2SO4 TP P NP NP5 NP7 Dịch acid Dịch sau loại kết tinh phân đoạn NP5 Tiếp tục kiềm hóa dịch pH=4-5 đến pH=7-8, chiết phân bố với CHCl3 đến khơng alkaloid qua lớp CHCl3 Dịch chiết gộp lại thu phân đoạn NP8 UV365 UV254 Dragendorff Kết tinh thô I NH4OH đến pH=9, chiết với CHCl3 Dịch chiết CHCl3 Dịch kiềm pH=7-8 Chiết với NaOH TP P NP NP5 NP7 Phân đoạn NP Phân đoạn P TP P NP NP5 NP7 TP P NPNP5 NP7 Hình Sắc ký đồ phân đoạn từ cao cồn Hdm: DCM-MeOH-NH4OH (90:10:1) Phân lập EN-1 Dịch chiết pH=5 Phân đoạn NP5 Điều chỉnh đến pH=7-8, Chiết với CHCl3 Dịch kiềm Phân đoạn NP8 Tách phân đoạn P, NP, NP8 Từ phân đoạn NP trên, dịch CHCl3 đến cắn, hòa vào H2SO4 2% điều chỉnh đến pH=5 NH4OH 25%, chiết phân bố với CHCl3 đến không alkaloid qua lớp CHCl3 Dịch chiết gộp lại thu 608 Phần kết tinh thơ I hòa tan lượng vừa đủ H2SO4 loãng, lọc để kết tinh tủ lạnh Tinh thể lọc rửa kỹ nước lạnh đến dịch rửa trung tính, thu tinh thể hình kim, màu trắng (EN-1) Tiến hành sắc ký lớp mỏng cho thấy EN-1 alkaloid phân cực trung bình có hàm lượng cao tâm Sen EN-1 cho vết đèn UV thuốc thử Dragendorff cho thấy kết tinh thô I tinh khiết TLC với EN-1 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Nghiên cứu Y học Hình SKĐ EN-1 ba hệ dung môi khác với λmax neferin mà tài liệu nước Phổ UV EN-1 dung môi nước cho công bố(4) λmax 282nm nằm vùng hấp thu alkaloid có khung bibenzylisoquinolein phù hợp Phổ MS có đỉnh [M-Na]+ có m/z = 647, tương ứng với khối lượng phân tử 624 neferin(4) EN1-20ppm Abs 1.0 0.5 0.0 200 282 300 400 Hình Phổ Uv-vis EN-1 Phân lập EN-2 từ NP8 NP8 cô áp suất giảm để dịch CHCl3 đậm đặc phần kết tủa màu vàng Dịch CHCl3 tới cắn Hòa tan cắn với lượng vừa đủ dung dịch H2SO4 2% Dịch acid loại tạp ether dầu hỏa kiềm hóa amoniac tới pH 8-9 Chiết alkaloid từ dịch kiềm chloroform cô thu hồi dung môi Chuyên Đề Dược Khoa Hình Phổ MS EN-1 thu cắn Hòa tan vào lượng tối thiểu methanol để kết tinh thu hình lăng trụ (EN-2) Tiến hành SKLM cho EN-2 với ba hệ dung môi khác nhau, EN-2 cho vết đèn UV thuốc thử Dragendorff cho thấy EN-2 alkaloid phân cực tinh khiết TLC 609 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 Hình Sắc ký đồ kiểm tra EN-2 huỳnh quang xanh lục sáng đèn UV254 Phổ EN-2 có dạng tinh thể hình lăng trụ, khơng khối ESI – MS positive EN-2 cho mảnh [M màu, không mùi, vị đắng Nhiệt độ nóng chảy +H]+ m/z = 296,01, mảnh [M + Na]+ có m/z = khoảng 163-164 0C, αD27 = -1450C 317,93, mảnh [M – OCH3]+ có m/z = 264,96 = 0.67, EtOH), λmax (log ε EtOH) = 310 nm (3.83), mảnh [M – (OCH3 + CH3)]+ có m/z = 249,91 272 nm (4.32), 230 nm (4.36) (Hình 8) EN-2 có Hình Phổ UV EN-2 Hình Phổ MS nuciferin Phổ 1H-NMR, 13C-NMR EN-2 cho thấy phân tử có 21H, 19C có 3C bậc 1, 3C bậc hai, 6C bậc ba, 7C bậc Chuyển dịch hoá học carbon EN-2 so sánh với nuciferin, alkaloid tâm Sen EN-2 có chuyển dịch hố học hồn tồn phù hợp với chuyển dịch hố học nuciferin KẾT LUẬN tài liệu Thành phần alkaloid tâm Sen khảo sát sắc ký lớp mỏng alkaloid phân lập xác định cấu trúc Qua liệu thu (5,6) kết luận EN-2 nuciferin (C19H21NO2) 610 Chuyên Đề Dược Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ Số * 2011 neferin nuciferin Các alkaloid sử dụng làm chất đánh dấu nghiên cứu tiêu chuẩn hố tâm Sen chế phẩm có tâm Sen để khảo sát tác dụng dược lý TÀI LIỆU THAM KHẢO Chen Yi, Luo Shun-De, (2004), “Quantitative analysis of three main alkaloids in plumula nelumbinis and the study on characteristic chromatogram”, chin hosp pharm J, 24(4), pp 205-208 Đỗ Tất Lợi (2005), “Những thuốc vị thuốc Việt Nam”, Nhà xuất Y học, tr 783- 786 Chuyên Đề Dược Khoa Nghiên cứu Y học Giáo trình phương pháp nghiên cứu dược liệu (2009) Bộ môn Dược liệu, Khoa Dược đại học Y- Dược TP.HCM Hiroshi Furukawa (1966), “On the Alkaloids of Nelumbo Nucifera gaertn XII Alkaloids of Loti Embryo”, Yakugaku Zasshi, 86(1), pp 75-77 Nguyễn Thị Nhung, Phạm Thanh Kỳ (1998), “Nghiên cứu thành phần hóa học Sen”, Tạp chí dược học, tháng nǎm 1998, tr 13 - 18 Trịnh Văn Lẩu, Trần Việt Hùng, Phạm Thanh Kỳ (2009), ‘Nghiên cứu chiết xuất phân lập tinh khiết nuciferine, linarine, chlorogenic acid Myricetine từ thuốc để làm chuẩn”, Pharmaindochina VI năm 2009 Tr 587-592 611 ... chế từ tâm, Sen thuốc viên uống, cao thuốc, loại trà dạng cao toàn phần, dịch chiết tồn phần Do nghiên cứu chiết xuất, phân lập tiêu chuẩn hóa thành phần alkaloid có tác dụng sinh học tâm Sen Việt... Keywords: Nelumbo nucifera, enbryo, alkaloid, neferine, nuciferine, structure ĐẶT VẤN ĐỀ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Trong kho tàng thực vật thuốc Việt Nam, Sen (Nelumbo nucifera Gaertn Nelumbonaceae) mọc... với nuciferin, alkaloid tâm Sen EN-2 có chuyển dịch hố học hồn tồn phù hợp với chuyển dịch hoá học nuciferin KẾT LUẬN tài liệu Thành phần alkaloid tâm Sen khảo sát sắc ký lớp mỏng alkaloid phân