Nội dung của bài viết trình bày về sốt xuất huyết Dengue và xét nghiệm ELISA phát hiện kháng nguyên NS1 của virút Dengue trong huyết thanh bệnh nhân giúp phát hiện nhiễm virút Dengue trong giai đoạn sớm.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 13 * Phụ Số * 2009 Nghiên cứu Y học XÉT NGHIỆM ELISA PHÁT HIỆN KHÁNG NGUYÊN NS1 TRONG CHẨN ĐOÁN SỐT DENGUE/SỐT XUẤT HUYẾT DENGUE Phan Văn Bé Bảy*, Hồng Tiến Mỹ** TĨM TẮT Đặt vấn đề: Sốt Dengue/sốt xuất huyết Dengue bệnh truyền nhiễm quan trọng Việt Nam Xét nghiệm ELISA phát kháng nguyên NS1 virút Dengue huyết bệnh nhân giúp phát nhiễm virút Dengue giai đoạn sớm Mục tiêu: Xác định độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị tiên đoán dương giá trị tiên đoán âm xét nghiệm ELISA phát kháng nguyên NS1 kít Platelia™ Dengue NS1 Ag Phương pháp: Tiền cứu, mô tả cắt ngang Kết quả: Độ nhạy xét nghiệm ELISA kít Platelia™ Dengue NS1 Ag 94,90%, độ đặc hiệu 100%, giá trị tiên đoán dương 100% giá trị tiên đoán âm 94,44% Kết luận: Xét nghiệm ELISA phát kháng nguyên NS1 virút Dengue ứng dụng rộng rãi để chẩn đoán sớm sốt Dengue/SXH Dengue ABSTRACT ELISA TO DETECT NS1 ANTIGEN FOR THE DIAGNOSIS OF DENGUE FEVER AND DENGUE HAEMORRHAGIC FEVER Phan Văn Bé Bảy, Hoàng Tiến Mỹ * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 13 - Supplement of No - 2009: 249 - 255 Background: Dengue fever/Dengue haemorrhagic fever is one of the most important emerging infectious diseases in Vietnam Recently, detecting NS1 Dengue antigen in patients’ sera has been described as an alternative method for early diagnosis Objectives: Evaluating the sensitivity, the specificity, the positive predictive value and the negative predictive value of the Platelia™ Dengue NS1 Ag Method: Prospective, description, cross-sectional study Results: The sensitivity, the specificity, the positive predictive value and the negative predictive value are 94.9%, 100%, 100%, 94.44%, respectively Conclusion: Detecting NS1 Dengue antigen can be used in early Dengue fever and Dengue haemorrhagic fever diagnosis vùng Đông Nam Á Tây Thái Bình Dương ĐẶT VẤNĐỀ Có khoảng 2,5-3,0 tỉ người sống vùng có Sốt Dengue (SD)/sốt xuất huyết (SXH) nguy bị nhiễm bệnh, ước tính số trường Dengue bệnh nhiễm virút cấp tính gây hợp mắc hàng năm khoảng 50-100 triệu người, týp virút Dengue: DEN-1, DEN-2, DEN-3 90% trường hợp trẻ em DEN-4 Bệnh truyền từ người sang 15 tuổi(3,8,23,32,33) Sốt Dengue/SXH Dengue người qua trung gian muỗi Aedes aegypti Bệnh thách thức cho nhà dịch tể học lẫn lưu hành 100 quốc gia thuộc khu thầy thuốc lâm sàng chưa có vắcxin vực có khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới phòng bệnh(17) * Khoa Vi Sinh, Bệnh viện Đồng Tháp ** Bộ môn Vi Sinh, Đại Học Y Dược TP HCM Chuyên Đề Nội Khoa Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 13 * Phụ Số * 2009 Nghiên cứu Y học Tại Việt Nam, sốt Dengue/ SXH Dengue bệnh truyền nhiễm có tỉ lệ mắc chết cao trẻ em bệnh trở thành vấn đề y tế nghiêm trọng Trong năm 2007, 20 tỉnh thành khu vực phía Nam ghi nhận có 87.950 trường hợp mắc có 81 trường hợp chết Đồng Tháp tỉnh có số mắc chết cao khu vực với số mắc 13.012 có trường hợp tử vong(4,5,6,11) xét nghiệm người Việt Nam chưa ghi nhận đầy đủ NS1 virus Dengue glycoprotein, trọng lượng phân tử 46-50 kD, thể dạng: dạng kết hợp màng (mNS1) dạng tiết (sNS1) định tính đặc hiệu nhóm lồi Chức NS1 đến chưa xác định đầy đủ người ta nhận thấy tham gia vào trình chép RNA virút, cần thiết cho tồn virút (20,33) Lượng NS1 dạng tiết (sNS1) có nồng độ cao huyết bệnh nhân nhiễm virút Dengue giai đoạn sớm có biểu lâm sàng có liên quan với mức độ virút máu(22) ĐỐI TƯỢNG-PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Nhiễm virút Dengue phát nhiều xét nghiệm như: phân lập virút, phản ứng chuỗi polymerase chép ngược (RT-PCR), ELISA phát kháng nguyên, phản ứng ngăn ngưng kết hồng cầu (HI), phản ứng miễn dịch hấp phụ gắn men (MAC-ELISA, GAC-ELISA), thử nghiệm miễn dịch nhanh (sắc ký miễn dịch) Tuy nhiên số xét nghiệm đòi hỏi nhiều thiết bị đắt tiền, số khơng phát sớm bệnh đáp ứng kháng thể chậm, bệnh nhân qua giai đoạn cấp(1,3,16,23,24,25,28,31,33) Vì vậy, việc phát sớm xác nhu cầu cần thiết cho thầy thuốc lẫn bệnh nhân Gần hãng Bio-Rad cung cấp kit phát kháng nguyên NS1 virút kỹ thuật ELISA Đây hứa hẹn khả quan Việt Nam xét nghiệm phát bệnh sớm giai đoạn bệnh nhân sốt khơng đòi hỏi phương tiện đắt tiền(2,22,28,29,33,34,35) Tuy nhiên, giá trị 2Chuyên Đề Nội Khoa Do đó, thực đề tài “Xét nghiệm ELISA phát kháng nguyên NS1 chẩn đoán sốt Dengue/sốt xuất huyết Dengue” nhằm đạt mục tiêu: xác định độ nhạy, độ đặc hiệu, giá trị tiên đoán dương giá trị tiên đoán âm xét nghiệm ELISA phát kháng nguyên NS1 kít Platelia™ Dengue NS1 Ag Thiết kế nghiên cứu Tiền cứu, mô tả cắt ngang Đối tượng nghiên cứu Nhóm nghiên cứu: 196 mẫu máu xác định nhiễm virút Dengue xét nghiệm MACELISA Dengue (mẫu máu lần 1, bệnh nhân vào viện, âm tính mẫu máu lần 2, từ ngày sốt thứ trở dương tính) Nhóm chứng âm: 170 mẫu máu từ người khỏe mạnh hiến máu tình nguyện, có xét nghiệm MAC-ELISA Dengue âm tính Địa điểm thời gian nghiên cứu Nghiên cứu thực từ 29/09/06 đến 29/08/07 Khoa Nhiễm Khoa Vi sinh-Bệnh viện Đồng Tháp Phương pháp nghiên cứu - Kỹ thuật xét nghiệm: xét nghiệm MACELISA Dengue (bộ kít Labơ Arbovirus Khoa Vi sinh Miễn Dịch - Viện Pasteur Thành phố Hồ Chí Minh sản xuất), xét nghiệm ELISA phát kháng nguyên NS1 (bộ kít Platelia™ Dengue NS1 Ag hãng Bio-Rad Laboratories, Marnes La Coquette, Pháp sản xuất) Xác định týp virút Dengue kỹ thuật TaqMan Real time RT-PCR thực Đơn vị Nghiên cứu Lâm sàng thuộc Đại học Offord - Anh quốc Bệnh viện Bệnh Nhiệt Đới Thành phố Hồ Chí Minh với mẫu máu lấy lần thứ bệnh nhân nhập viện - Nguyên tắc kỹ thuật ELISA phát kháng nguyên NS1: áp dụng nguyên tắc miễn Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 13 * Phụ Số * 2009 dịch men kiểu sandwich bước plaque Bệnh phẩm chứng ủ trực tiếp, lúc với cộng hợp giếng gắn với kháng thể đơn dòng từ chuột (MAb) nhiệt độ 37ºC 90 phút Nếu mẫu có kháng nguyên tạo thành phức hợp MAb-NS1MAb/peroxidase Sau rửa, phức hợp miễn dịch biểu thêm vào giếng dung dịch sinh màu để khởi đầu cho phản ứng tạo màu Sau ủ 30 phút nhiệt độ phòng, ngừng phản ứng dung dịch acid Đọc kết quang phổ kế với bước sóng 450/620 nm Sự diện kháng nguyên NS1 mẫu xác định cách so sánh độ hấp thu mẫu thử (OD) với độ hấp thu ngưỡng phát (CO) - Thu thập liệu từ bệnh nhân kết xét nghiệm - Xử lý số liệu phần mềm Stata 8.0 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Một số đặc điểm chung mẫu nghiên cứu Trong 196 mẫu nghiên cứu, có 102 nam (52,04%) 94 nữ (47,96%) Độ tuổi trung bình 11,18 ± 6,36 (2-35) Số trẻ em