Mục tiêu của đề tài này là khảo sát tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ của các cao chiết cồn từ thạch tùng răng và râu rồng trên chuột nhắt trắng. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Nghiên cứu Y học NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CẢI THIỆN SUY GIẢM TRÍ NHỚ CỦA CÁC CAO CHIẾT CỒN TỪ HAI LOÀI THẠCH TÙNG THUỘC HỌ LYCOPODIACEAE TRÊN CHUỘT NHẮT TRẮNG Nguyễn Duy Tài, Nguyễn Ngọc Chương**, Nguyễn Thị Sơn**, Trần Công Luận*** TÓM TẮT Mờ đầu: Mục tiêu đề tài khảo sát tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ cao chiết cồn từ Thạch tùng Râu rồng chuột nhắt trắng Phương pháp nghiên cứu: dịch chiết cồn dược liệu đánh giá tác động cải thiện trí nhớ chuột swiss albino gây suy giảm trí nhớ scopolamin với mơ hình Ma trận tám nhánh Mê cung bơi Kết quả: Cao chiết cồn Thạch tùng (liều 0,533 g/kg) Râu rồng (liều 0,171 g/kg) giúp cải thiện tình trạng suy giảm trí nhớ chuột thực nghiệm LD50 cao Thạch tùng 5,33g/kg, cao Râu rồng 1,71 g/kg Kết luận: Cao chiết cồn từ Thạch tùng Râu rồng có tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ chuột nhắt trắng Từ khóa: Thạch tùng răng, Râu rồng, suy giảm trí nhớ ABSTRACT STUDY ON ANTI-AMNESIC EFFECT OF ETHANOL EXTRACT OF HUPERZIA SERRATA AND HUPERZIA SQUARROSA ON INDUCED MEMORY IMPAIRMENT IN MICE Nguyen Duy Tai, Nguyen Ngoc Chuong, Nguyen Thi Son, Tran Cong Luan * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Vol 18 - Supplement of No – 2014: 243 - 248 Background - Objectives: The aim of this work was to study recovery effect on memory and learning of ethanolic extracts of Huperzia serrata and Huperzia squarrosa in mice Methods: Ethanolic extracts of these medicinal plants was evaluated for in vivo anti-amnesic activity in memory indeficient Swiss albino mice induced by scopolamine with Arms radical maze and Morris water maze tests Results: Ethanolic extracts of Huperzia serrata (0.533 g/kg) and Huperzia squarrosa (0.171 g/kg) help to recover cognitive impairment in mice LD50 of oral administration of Huperzia serrata and Huperzia squarrosa was respectively 5.33g/kg and 1.71 g/kg Conclusion: Ethanolic extracts of Huperzia serrata and Huperzia squarrosa exert recovery effects on impairment in mice memory and learning Key words: Huperzia serrata, Huperzia squarrosa, cognitive impairment xuất rối loạn nhớ tăng theo ĐẶT VẤN ĐỀ tuổi: 65-69 tuổi tỷ lệ 1,5%; > 85 tuổi tỷ lệ Thuật ngữ trí nhớ bao gồm hai thể: suy 35% > 95 tuổi tỷ lệ 60% Năm 2010 tỷ lệ giảm trí nhớ trí nhớ Tỷ lệ người dân người bị suy giảm trí nhớ 35,6 triệu dự *Trường Cao Đẳng Y Tế Đồng Nai, **Khoa Y Học Cổ Truyền – ĐH Y Dược Tp.HCM, ***Trung tâm Sâm Dược liệu Tp.HCM Tác giả liên lạc: BS Nguyễn Duy Tài ĐT: 0933100220 Email: duytainguyen84@yahoo.com.vn Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 243 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 đốn đến năm 2050 có 115.400.000 người bị suy giảm trí nhớ(8) Mặt khác, nay, chưa có phương pháp chữa lành suy giảm trí nhớ Tuy nhiên, phát điều trị bệnh sớm thuốc ức chế men acetylcholinesterase donepezil (Aricept), rivastigmin (Exelon), galantamin (Reminyl)…, thuốc chống oxy hóa vitamin E, ginko biloba… làm chậm diễn tiến triệu chứng bệnh(9) Hóa chất Do việc tìm phương thuốc để điều trị bệnh mục tiêu nhiều nhà nghiên cứu Một lĩnh vực thu hút nhà khoa học việc ứng dụng nghiên cứu thảo dược điều trị bệnh Huperzin hợp chất tự nhiên phân lập từ Thạch tùng nhà khoa học Trung Quốc vào năm 1986 có tác dụng ức chế acetylcholinesterase Đến năm 1996, Huperzin A sử dụng thuốc Trung Quốc bán thị trường Mỹ dạng thực phẩm bổ sung vào năm 1999 Độc tính cấp(3) - Chuẩn bị chuột thí nghiệm: Kế thừa kết nghiên cứu trên, với mong muốn tìm kiếm thuốc từ thảo dược Việt Nam có tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ, đề tài nghiên cứu tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ cao chiết cồn từ hai loài Thạch tùng thuộc họ Lycopodiaceae chuột nhắt trắng hình thành Lơ chứng: cho chuột uống nước cất với liều 0,2 ml/ 10 g chuột NGUYÊNLIỆU -PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨU Nguyên liệu Thạch tùng (Huperzia serrata), Râu rồng (Huperzia squarrosa), thu hái tỉnh Lâm Đồng định danh, lưu mẫu Bộ môn Tài nguyên dược liệu thuộc Trung tâm Sâm Dược liệu thành phố Hồ Chí Minh-Viện Dược Liệu Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng, chủng Swiss albino, 5-6 tuần tuổi, trọng lượng trung bình 20 ± g, cung cấp viện Pasteur TP.HCM để ổn định tuần trước thử nghiệm, chuột uống 0,2 ml/10g thể trọng 244 Dung môi chiết: cồn 96% Thuốc làm giảm trí nhớ: scopolamine HBr mua từ hãng Sigma Các hóa chất cần thiết cho tách chiết phân tích mua từ cơng ty Sigma (Mỹ) số công ty khác Phương pháp nghiên cứu + Để chuột nhịn đói 12 trước cho uống thuốc + Cách chia lơ chuột: chia chuột thí nghiệm làm nhiều lô, lô - Đường dùng thuốc, thể tích nước thuốc cho uống: + Đường dùng thuốc: đường uống + Thể tích nước thuốc cho uống: 0,2 ml/10 g chuột, đó: Lơ thử: cho chuột uống thuốc với liều 0,2 ml nước thuốc/10 g chuột - Thử nghiệm thực qua giai đoạn: + Giai đoạn thăm dò: khởi đầu từ liều cao để nước thuốc bơm qua kim cho uống Xác định liều LD0 (liều tối đa không gây chết) liều LD100 (liều tối thiểu gây chết 100%) + Giai đoạn xác định: chuột chia lô cho sử dụng thuốc liều khoảng LD0 LD100, khoảng cách liều lô - Các tiêu đánh giá kết quả: + Theo dõi biểu hành vi chuột vòng 72 đầu sau dùng thuốc tuần Ghi chép biểu thời gian Ghi cho chuột uống thuốc, xuất triệu chứng khác thường Ghi nhận số chuột chết lô Quan sát đại thể (quan sát tim, gan, thận, ruột) sau chết chuột bị chết sau Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 kết thúc thử nghiệm chuột sống + Tính LD50 phương pháp BehrensKarber LD50 = LD100 - ∑ad n Trong đó: LD50 : liều chết 50% số chuột thí nghiệm LD100: liều nhỏ gây chết 100% số chuột thí nghiệm a: số chuột chết trung bình liều d: hiệu hai liều n: số trung bình chuột dùng liều Khảo sát tác dụng cải thiện suy giảm trí nhớ cao Thạch tùng Râu rồng Chuột chia thành hai nhóm: + Nhóm 1: nhóm chuột bị gây suy giảm trí nhớ chia thành lô, lô 15 con: Lô chứng sinh lý: cho uống nước cất Lô bệnh lý: gây bệnh scopolamin cho uống nước cất (15 con) Lô T1-1: uống scopolamin liều mg/kg cao Thạch tùng liều 0,533 g/kg Lô T1-2: uống scopolamin liều mg/kg cao Thạch tùng liều 0,266 g/kg Lô T2-1: uống scopolamin liều mg/kg cao Râu rồng liều 0,171 g/kg Lô T2-2: uống scopolamin liều mg/kg cao Râu rồng liều 0,085 g/kg + Nhóm 2: nhóm chuột khơng bị gây suy giảm trí nhớ chia thành lơ: Lô T1’-1: cho uống cao Thạch tùng liều 0,533 g/kg Lô T2’-1: cho uống cao Râu rồng liều 0,171 g/kg Khảo sát trí nhớ nhận diện khơng gian - Mơ hình mê cung bơi: Đánh giá khả học tập, nhận thức hình thành trí nhớ chuột qua tiêu chí: thời gian tiềm thời chuột tìm đến chân đế, thời gian chuột vùng ¼ diện tích bể bơi nơi đặt Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học chân đế Cấu tạo Mê cung bơi: Đường kính m, chiều cao 60 cm Lượng nước mê cung bơi trì mức 46 cm, nhiệt độ nước khoảng 30 0C suốt q trình thí nghiệm Mê cung bơi đặt phòng có đặt sẵn hình ảnh để định hướng khơng gian cho chuột q trình học tập Vị trí hình ảnh khơng thay đổi suốt trình chuột học tập Một phao có đường kính 10 cm làm nhựa đặt phần tư mê cung bơi Tiến hành thí nghiệm: chuột huấn luyện thử nghiệm ngày Ngày 1: tiến hành với thử nghiệm, thử nghiệm vị trí bắt đầu bơi chuột (thành bể bơi có đánh dấu điểm với khoảng cách điểm nhau, để chuột bắt đầu bơi điểm đánh dấu khơng trùng với diện tích ¼ bể bơi nơi đặt chân đế - vùng có phao) Trong thử nghiệm, cho chuột bơi 120 giây để tìm chân đế mặt nước Sau kết thúc thử nghiệm, chuột lau khơ, sau trả chuồng ni Nếu kết thúc 120 giây mà chuột khơng tìm thấy chân đế hướng dẫn chuột tìm đến chân đế cho phép chuột đứng 15 giây để quan sát xung quanh trước đỡ chuột khỏi bể nước Ngày - 5: ngày tiến hành với thử nghiệm tương tự ngày 1, chân đế bị ẩn mặt nước (mực nước bể cao chân đế 0,5 cm) Kết thúc thử nghiệm ghi lại thời gian tiềm thời chuột tìm đến chân đế Ngày 6: tiến hành thử nghiệm ngày – 5, chân đế lấy khỏi hồ nước Cho chuột bơi hồ với thời gian 60 giây Kết thúc thử nghiệm, ghi lại thời gian chuột bơi diện tích ¼ bể bơi nơi đặt chân đế Khảo sát trí nhớ nhận diện khơng gian – mơ hình ma trận nhánh: Đánh giá khả học tập, nhận thức 245 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 hình thành trí nhớ chuột qua tiêu chí: thời gian tiềm thời chuột vào cửa có đặt mồi, số lần chuột vào cửa có đặt mồi Trước tiến hành thí nghiệm, chuột giảm phần ăn cho trọng lượng 85% - 90% trọng lượng ban đầu Thí nghiệm: chuột huấn luyện thử nghiệm ngày Giai đoạn làm quen: chuột làm quen với ma trận ngày Ngày : chuột đặt vào trụ trung tâm ma trận tám nhánh, mẫu thức ăn đặt tất cánh tay trải đến lối vào ma trận, cho phép chuột khám phá ma trận tám nhánh hết thức ăn 10 phút trôi qua Ngày thứ 2, tiến hành tương tự ngày thức ăn đặt lọ cuối cánh tay - Hàm lượng chất chiết: dùng phương pháp chiết nóng với nước Bảng 1: Hàm lượng chất chiết Thạch tùng Râu rồng Lần Thạch tùng (%) 23,09 Râu rồng (%) 4,95 Lần 23,16 5,00 Lần Trung bình 23,24 23,16 4,96 4,97 + Nhận xét: Hàm lượng chất chiết Thạch tùng cao Râu rồng - Quy liều Dược liệu: + Thạch tùng răng: Hàm lượng chất chiết 23,16%; LD50 5,33 g/kg Lượng dược liệu là: 23,01 g/kg + Râu rồng: Hàm lượng chất chiết 4,97%; LD50 1,71 g/kg Lượng dược liệu là: 34,41 g/kg Mô hình cải thiện suy giảm trí nhớ Giai đoạn huấn luyện: chuột huấn luyện ngày liên tục Trong giai đoạn này, có cánh tay (chọn cánh tay số 1, 3, 5, 7) đặt mồi (như ngày 2) trình tự khơng thay đổi suốt thời gian huấn luyện 01 chuột đặt vào trụ trung tâm, sau 10 giây, tất cửa tự động mở, cho phép chuột tìm đến cánh cửa có thức ăn Thử nghiệm kết thúc chuột tìm cánh tay đặt mồi 10 phút Mơ hình Mê cung bơi: Giai đoạn kiểm tra: ngày thứ 7, tiến hành tương tự giai đoạn huấn luyện Các thông số: thời gian tiềm thời chuột vào cửa có đặt mồi, số lần chuột vào cửa không đặt mồi (*) p< 0,05: khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lơ bình thường (#) p< 0,05: khác biệt có ý nghĩa thống kê so với lô bệnh lý KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN chuột tìm đến chân đế, cao Thạch tùng Độc tính cấp: với liều 0,533 g/kg cao Râu rồng với liều LD50 cao Thạch tùng 5,33 g/kg LD50 cao Râu rồng 1,71 g/kg Biểu chuột chết thử nghiệm độc tính cấp: sau dùng liều thử nghiệm, chuột có biệu hiện: quẫy mạnh đuôi, lắc đầu liên tục, sùi bọt mép, mắt đứng tròng, tứ chi cứng đờ tử vong 246 - Nhóm 1: nhóm chuột bị gây suy giảm trí nhớ + Tiềm thời chuột tìm đến chân đế: Bảng 2: Tiềm thời chuột tìm đến chân đế (giây) Chứng Bệnh lý T1-1 T1-2 T2-1 T2-2 sinh lý 59,1±4,4# 90,1±6,3 28,5±2,69 45,8±5,7 27,6±1,1 41,2±2,5 # 9# *,# *,# + Kết (bảng 2): với mơ hình tiềm thời 0,171 g/kg có tác dụng cải thiện trí nhớ mơ hình chuột bị suy giảm trí nhớ chuột bình thường Tuy nhiên, liều cao Thạch tùng liều 0,266 g/kg Râu rồng liều 0,085 g/kg có tác dụng cải thiện trí nhớ chuột bệnh lý + Thời gian chuột bơi vùng có phao Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 17 * Phụ Số * 2013 Bảng 3: Thời gian chuột bơi vùng có phao (giây) Chứng Bệnh lý T1-1 T1-2 T2-1 T2-2 sinh lý 18±0,83# 41,2±2,8 15,1±0,8 19,42±0,7 14,8±0,6 16,5±0,9 8# 3# 1# 1# (*) p